摘要：應(yīng)用固相萃取氣相色譜法對(duì)人體尿液中苯酚的含量進(jìn)行測(cè)定的途徑與結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，在穩(wěn)定性試驗(yàn)中，樣品在4 ℃環(huán)境條件下保存的時(shí)間越長(zhǎng)，樣品苯酚的含量越少，但至少可以保存7 d。加標(biāo)回收率比對(duì)試驗(yàn)顯示，本方法的平均回收率優(yōu)于傳統(tǒng)的液晶柱法和FFAP柱法。固相萃取小柱選擇試驗(yàn)表明，500 mg、3 mL規(guī)格的苯乙烯聚乙烯基苯聚合物小柱具有更高的苯酚回收率和穩(wěn)定性。在洗脫液選擇方面，10 mL的乙酸乙酯被證實(shí)能夠有效洗脫待測(cè)物。固相萃取氣相色譜法是人體尿液中苯酚含量測(cè)定的可靠方法。

關(guān)鍵詞：固相萃取；氣相色譜法；苯酚含量測(cè)定苯是一種對(duì)人體有極大危害的化學(xué)物質(zhì)，短期內(nèi)吸入大量苯可能導(dǎo)致急性苯中毒。液晶柱法（WS/T 49—1996）和FFAP柱法（WS/T 50—1996）檢測(cè)苯酚均需要將尿樣加入鹽酸熱水解后，使用乙醚進(jìn)行萃取，然后進(jìn)行氣相色譜儀測(cè)定。這些方法對(duì)于環(huán)境溫度的要求較高，且對(duì)環(huán)境、操作人員健康產(chǎn)生影響。而氣相色譜測(cè)定方法測(cè)定人體尿液中苯酚時(shí)，能夠避免出現(xiàn)液晶柱法和FFAP柱法存在的問(wèn)題。據(jù)此，本文應(yīng)用固相萃取氣相色譜法對(duì)人體尿液中的苯酚進(jìn)行測(cè)定，旨在為優(yōu)化人體尿液中苯酚的含量測(cè)定方法提供借鑒與參考。

1試驗(yàn)

1.1材料

本試驗(yàn)用儀器包括：氣相色譜儀（GC7680深圳德譜儀器有限公司）、氫火焰離子化檢測(cè)器（SKY6000VOCs深圳市元特科技有限公司）、聚乙烯塑料瓶（50 mL，JK04561滄州京科塑料制品有限公司）、尿比重計(jì)（AL672252306087南京康洛達(dá)實(shí)驗(yàn)科技有限公司）、具塞離心管（25 mL，235265深圳市良誼實(shí)驗(yàn)室儀器有限公司）、恒溫水浴箱（HHW常州亞特實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）、固相萃取裝置（YPGC6山東宏科量子科技有限公司）、分析天平（精度0.01 mg，ME204E江蘇雙盈醫(yī)療器械有限公司）、容量瓶（10 mL，BOM深圳市良誼實(shí)驗(yàn)室儀器有限公司）。

本試驗(yàn)用試劑包括：固相萃取小柱（500 mg/3 m，東莞市平根實(shí)驗(yàn)器材有限公司）、鹽酸（P20=1.19 g/mL，廣東翁江化學(xué)試劑有限公司）、0.01 mol/L鹽酸溶液（濟(jì)南蕭試化工有限公司）、乙酸乙酯（山東旭晨化工科技有限公司）、甲醇（濟(jì)南輝騰化工有限公司）、苯酚（色譜純，純度≥99.0%，山東錦禮化工有限公司）。

1.2方法

1.2.1氣相色譜條件

色譜柱：本試驗(yàn)采用了FFAP（長(zhǎng)30 m，直徑0.25 mm，填料粒徑0.25 μm）毛細(xì)管柱，用于分離化合物［1］。將柱溫設(shè)定為170 ℃，以保證樣品在柱中的良好分離和分析；將氣化室溫度和檢測(cè)室溫度均設(shè)定為250 ℃，確保樣品充分揮發(fā)和有效檢測(cè)；載氣流速為1.0 mL/min，通過(guò)色譜柱，將樣品分離并送入檢測(cè)器。輔助氣體包括氫氣40 mL/min和空氣400 mL/min，用于輔助樣品的揮發(fā)和檢測(cè)。進(jìn)樣量為1.0 μL，分流比為20∶1，確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度。

1.2.2標(biāo)準(zhǔn)使用液制備

為確保試驗(yàn)中使用的苯酚標(biāo)準(zhǔn)樣品質(zhì)量濃度準(zhǔn)確穩(wěn)定，首先稱取48.00 mg的苯酚標(biāo)準(zhǔn)樣品，并將其精確地轉(zhuǎn)移至一個(gè)預(yù)先清洗干凈的10 mL容量瓶中。同時(shí)，使用乙酸乙酯將苯酚溶解，并持續(xù)攪拌直至完全溶解。需要注意的是，在攪拌過(guò)程中，應(yīng)適當(dāng)控制溶劑的加入速度，確保苯酚充分溶解。隨后將苯酚溶液稀釋至容量瓶的刻度線處，得到的溶液質(zhì)量濃度為4.80 mg/mL，將其作為備用溶液，用于后續(xù)試驗(yàn)。最后，為保持溶液的穩(wěn)定性和質(zhì)量濃度，將備用溶液存放在-8 ℃的冰箱中，延長(zhǎng)溶液的保存時(shí)間，并避免其受到光照和熱源的影響［2］和出現(xiàn)質(zhì)量濃度變化的問(wèn)題。

1.2.3標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制

（1） 根據(jù)試驗(yàn)的實(shí)際需要，分別將0.0 μL、62.5 μL、125.0 μL、250.0 μL、500.0 μL、1 000.0 μL的標(biāo)準(zhǔn)使用液吸取到不同的10 mL容量瓶中，以用于制備苯酚標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

（2） 使用乙酸乙酯，溶解吸取到的標(biāo)準(zhǔn)使用液，并將溶液定容至容量瓶的刻度線。

（3） 成功制備質(zhì)量濃度分別為0 mg/L、30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L、240 mg/L、480 mg/L的苯酚標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，在后續(xù)試驗(yàn)中用于標(biāo)定儀器和進(jìn)行質(zhì)量控制。

1.2.4樣品前處理

（1） 在一個(gè)帶有塞的比色管中取出5 mL的尿液樣本，并在其中加入1 mL的鹽酸，在徹底混合后，將比色管密封。隨后，將比色管置于90 ℃的水浴中進(jìn)行加熱，加熱的時(shí)間設(shè)定為1 h［3］。加熱完成后，將樣本冷卻至室溫，為后續(xù)試驗(yàn)做好準(zhǔn)備。

（2） 準(zhǔn)備活化處理液，包括3 mL乙酸乙酯、3 mL甲醇和3 mL去離子水。并將活化處理液加入比色管中，混合后將流出液丟棄。

（3） 將經(jīng)過(guò)活化處理的待凈化液加入固相萃取柱中，確保液面不低于固定相高度，并將流出液丟棄。同時(shí)使用3 mL的0.01 M鹽酸溶液淋洗柱，并將流出液丟棄，再利用真空或氮?dú)鈱⑿≈蹈伞?/p>

（4） 繼續(xù)使用10 mL的乙酸乙酯對(duì)柱進(jìn)行洗脫，并收集洗脫液，確保所收集的洗脫液定容至10 mL處，從而得到待測(cè)樣品液。

2結(jié)果與討論

2.1穩(wěn)定性試驗(yàn)

在質(zhì)量濃度9.32 mg/L的尿液樣品中加入苯酚，制備出含有質(zhì)量濃度128.41 mg/L的苯酚尿液樣品。分別于樣本的制備當(dāng)天、第3 d、第5 d、第7 d，對(duì)一組樣品進(jìn)行檢測(cè)，6個(gè)樣本為一組，同時(shí)將樣本放置在4 ℃環(huán)境（冰箱）中。在4 ℃環(huán)境下，存放第3 d，苯酚質(zhì)量濃度127.32 mg/L，下降率0.85%；存放第5 d，苯酚質(zhì)量濃度123.15 mg/L，下降率4.10%；存放第7 d，苯酚質(zhì)量濃度120.74 mg/L，下降率5.97%。結(jié)果表明，樣品在4 ℃環(huán)境條件下保存的時(shí)間越長(zhǎng)，樣品苯酚的質(zhì)量濃度越少，但至少可以保存7 d。

2.2加標(biāo)回收率比對(duì)試驗(yàn)

將尿液樣本分為3組（6個(gè)/組），在每組的樣本中，分別加入低質(zhì)量濃度、中等質(zhì)量濃度和高質(zhì)量濃度的苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別為72.3 mg/L、136.8 mg/L、264.2 mg/L。測(cè)定處理后的樣品，計(jì)算得出3個(gè)加標(biāo)質(zhì)量濃度樣品的平均回收率為86.2%～94.9%。同時(shí)，對(duì)3個(gè)質(zhì)量濃度組的樣品進(jìn)行精密度測(cè)定，結(jié)果顯示，批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.29%～3.53%。其中，136.8 mg/L質(zhì)量濃度組的樣品相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差最高。因此，在加標(biāo)回收率比對(duì)試驗(yàn)中，選擇136.8 mg/L質(zhì)量濃度組進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)，以更精準(zhǔn)地比對(duì)不同方法下的回收率。檢測(cè)方法包括液晶柱法、FFAP柱法和固相萃取氣相色譜法。結(jié)果表明，液晶柱法下，尿液樣品中的苯酚質(zhì)量濃度平均值為99.4 mg/L，平均回收率為72.7%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為10.2%；FFAP柱法下，尿液樣品中的苯酚質(zhì)量濃度平均值為97.7 mg/L，平均回收率為70.8%，標(biāo)準(zhǔn)偏差9.1%；在本方法下，尿液樣品中的苯酚質(zhì)量濃度平均值為124.7 mg/L，平均回收率91.2%，標(biāo)準(zhǔn)偏差3.1%。由此可見(jiàn)，液晶柱法、FFAP柱法的平均回收率低于本方法［4］。

2.3固相萃取小柱選擇

在試驗(yàn)中，選擇應(yīng)用了適用于酚類化合物固相萃取的小柱：苯乙烯聚乙烯基苯聚合物小柱。同時(shí)，試驗(yàn)中選擇了200 mg、3 mL和500 mg、3 mL兩種規(guī)格。每種規(guī)格下，選擇3個(gè)加標(biāo)量，分別為1.00 mg、2.50 mg、5.00 mg。試驗(yàn)結(jié)果顯示，加標(biāo)量越高，測(cè)定均值越高，平均回收率越低［5］。在選擇規(guī)格為200 mg、3 mL的小柱進(jìn)行固相萃取時(shí)，加入1.00 mg苯酚的平均回收率為91.7%；加入2.50 mg苯酚的平均回收率為69.7%；加入5.00 mg苯酚的平均回收率降至53.3%。在選擇規(guī)格為500 mg、3 mL的小柱進(jìn)行固相萃取時(shí)，加入1.00 mg苯酚的平均回收率為92.7%；加入2.50 mg苯酚的平均回收率達(dá)到91.3%；加入5.00 mg苯酚的平均回收率為87.4%。結(jié)果表明小柱規(guī)格對(duì)苯酚回收率有顯著影響。500 mg、3 mL規(guī)格小柱的苯酚回收率更高，且具有較好的穩(wěn)定性。

2.4洗脫液選擇

在固相萃取試驗(yàn)中，選擇合適的洗脫液對(duì)提高分析效率和準(zhǔn)確性至關(guān)重要。基于上述小柱選擇分析，應(yīng)使用較為溫和的洗脫液——乙酸乙酯。本次試驗(yàn)中，應(yīng)用8 mL、10 mL、15 mL的乙酸乙酯進(jìn)行洗脫。洗脫的樣本加標(biāo)量設(shè)定為2.50 mg、5.00 mg。結(jié)果顯示，乙酸乙酯洗脫加標(biāo)量2.50 mg樣品的平均值為2.08～2.38 mg，平均回收率為82.9%～95.8%；乙酸乙酯洗脫加標(biāo)量5.00 mg樣品的平均值為3.32～4.44 mg，平均回收率為66.4%～88.7%。結(jié)果表明，10 mL的乙酸乙酯能夠有效洗脫待測(cè)物。

3結(jié)論

通過(guò)優(yōu)化氣相色譜條件、標(biāo)準(zhǔn)使用液的制備、標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制以及樣品前處理等步驟，提高了固相萃取氣相色譜法的準(zhǔn)確性和靈敏度。試驗(yàn)結(jié)果顯示：（1）樣品在4 ℃環(huán)境條件下保存的時(shí)間越長(zhǎng)，樣品苯酚的含量越少，但至少可以保存7 d。（2）加標(biāo)回收率比對(duì)試驗(yàn)顯示，本文方法的平均回收率優(yōu)于傳統(tǒng)的液晶柱法和FFAP柱法。（3）500 mg、3 mL規(guī)格的苯乙烯聚乙烯基苯聚合物小柱具有更高的苯酚回收率和穩(wěn)定性。（4）在洗脫液選擇方面，10 mL的乙酸乙酯被證實(shí)能夠有效洗脫待測(cè)物。因此，固相萃取氣相色譜法能夠?yàn)槿梭w尿液中苯酚含量的檢測(cè)提供有效手段和方法。

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