趙明明, 杭燕萍, 楊良鳳, 葛林陽(yáng), 鄭海霞, 陳文靜

南京市高淳人民醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科,江蘇南京211300

支氣管哮喘(bronchial asthma,BA)是一種具有家族聚集傾向的氣道慢性炎癥性疾病,以喘息、氣促、咳嗽為主要癥狀。據(jù)調(diào)查,全球約有3億人口患有BA,發(fā)病率為1%～18%,且呈持續(xù)上升趨勢(shì)。其病程長(zhǎng)、易反復(fù),對(duì)患者的身心健康造成嚴(yán)重危害[1-2]。BA發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,臨床研究發(fā)現(xiàn)輔助性T細(xì)胞17(T helper cell 17,Th17)/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell,Treg)失衡及相關(guān)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-17(interleukin,IL)-17、IL-27與BA的發(fā)生存在一定的相關(guān)性,Th17/Treg平衡作用日益受到人們重視[3]。Th17細(xì)胞是T細(xì)胞的特殊譜系,該細(xì)胞在變應(yīng)性疾病中的含量較多。Treg細(xì)胞可控制機(jī)體的免疫反應(yīng)性,誘導(dǎo)免疫耐受。IL-17由Th17細(xì)胞特異性分泌,在固有免疫反應(yīng)、病原體的防御等方面起到了不可忽視的作用。IL-27主要由樹(shù)突狀細(xì)胞分泌,其作為多功能的免疫細(xì)胞因子,在免疫性疾病中至關(guān)重要[4]。目前,采取科學(xué)的手段對(duì)BA患者進(jìn)行治療已成為臨床研究的熱點(diǎn)。舌下脫敏治療(sublingual immunotherapy,SLIT)是針對(duì)免疫系統(tǒng)進(jìn)行變應(yīng)原脫敏,具有便于使用、無(wú)痛安全等優(yōu)點(diǎn)[5-6]。然而,BA患者在進(jìn)行SLIT治療前后血清中IL-17、IL-27水平的變化以及是否可對(duì)Th17/Treg免疫平衡起到調(diào)控作用的研究較少。為了提高BA的診療水平,本文旨在分析SLIT治療BA的療效,及其對(duì)IL-17、IL-27水平和Th17/Treg平衡的影響。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

收集2016年1月—2017年8月于本院診治的124名BA患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合BA診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],均為非急性發(fā)作期的中重度BA患者;②對(duì)塵螨過(guò)敏,皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)結(jié)果顯示螨變應(yīng)原陽(yáng)性。排除標(biāo)準(zhǔn):①伴其他呼吸疾病;②合并免疫功能疾病;③近1個(gè)月內(nèi)服用全身糖皮質(zhì)激素或抗生素;④妊娠或哺乳期婦女。將患者隨機(jī)分為觀察組(n=62)和對(duì)照組(n=62)。治療后通過(guò)電話對(duì)兩組進(jìn)行隨訪,對(duì)照組退出者4例,觀察組退出者6例。兩組的性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)、病程、病情程度、肺功能等臨床資料均衡可比(P>0.05;表1)。本研究已通過(guò)本醫(yī)院倫理委員會(huì)的審核。SLIT的適用人群:①常規(guī)抗過(guò)敏藥治療無(wú)效或造成無(wú)法耐受的不良反應(yīng);②不接受皮下免疫治療;③無(wú)法堅(jiān)持長(zhǎng)期藥物治療。

表1 兩組臨床資料比較

1.2 治療方法

兩組入院后均接受補(bǔ)液、吸氧、糾正酸堿失衡、祛痰止咳等常規(guī)治療。對(duì)照組接受布地奈德福莫特羅粉吸入劑(瑞典AstraZeneca AB公司,160 μg/4.5 μg/吸),1吸/次,2次/天。觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上接受粉塵螨滴劑1～4號(hào)(浙江我武生物科技股份有限公司),舌下含服,1次/天。于1～3周使用1～3號(hào)滴劑(質(zhì)量濃度分別為1、10、100 mg/L),1～7天分別為1、2、3、4、6、8、10滴,舌下含服2 min后口服。第4周至結(jié)束使用4號(hào)滴劑(質(zhì)量濃度為333 mg/L),3滴/天。兩組均連續(xù)治療2年。

1.3 哮喘控制情況的評(píng)估

治療結(jié)束后,采用哮喘控制問(wèn)卷[8]判斷兩組過(guò)去4周內(nèi)哮喘控制情況,共5個(gè)問(wèn)題,每個(gè)問(wèn)題5分,總分25分,25分為完全控制,20～24分為良好控制,<20分為未控制?？偪刂坡?完全控制率+良好控制率。

1.4 日間、夜間的臨床癥狀評(píng)分

日間癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[9]:無(wú)癥狀為0分;輕微癥狀,持續(xù)時(shí)間短暫為1分;≥2次的輕微癥狀,持續(xù)時(shí)間短暫為2分;較多次的輕微癥狀,對(duì)日常生活影響較小為3分;較多次的嚴(yán)重癥狀,對(duì)日常生活產(chǎn)生影響為4分;癥狀嚴(yán)重,無(wú)法正常生活為5分。夜間癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[9]:無(wú)癥狀為0分;1次醒來(lái)為1分;≥2次醒來(lái)為2分;多次醒來(lái)為3分;夜間無(wú)法入睡為4分。

1.5 IL-17、IL-27、Th17和Treg的檢測(cè)

治療前后抽取兩組空腹靜脈血5 mL,離心,分離血清,-80 ℃保存。保留2 mL于4 ℃保存。使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)IL-17和IL-27,IL-17、IL-27試劑盒分別由上海譜振生物科技有限公司和上海滬震實(shí)業(yè)有限公司提供,操作均遵循說(shuō)明書(shū)。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th17和Treg細(xì)胞,無(wú)菌環(huán)境下向測(cè)樣管中加入Th17細(xì)胞(CD4+IL-17+)和Treg細(xì)胞(CD4+CD25+Foxp3+)的特異性標(biāo)記抗體孵育,計(jì)算外周血Th17/CD4+及Treg/CD4+比例,操作均遵循說(shuō)明書(shū)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0軟件處理,計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn),采用Pearson相關(guān)性分析外周血IL-27、IL-27與Th17和Treg細(xì)胞比例的相關(guān)性。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組疾病控制情況比較

觀察組完全控制率和總控制率高于對(duì)照組,差異具有顯著性(P<0.05;表2)。

表2 兩組疾病控制情況比較 例(%)

2.2 兩組臨床癥狀評(píng)分比較

治療后,兩組臨床癥狀評(píng)分均低于治療前,且觀察組均低于對(duì)照組(P<0.05;表3)。

表3 兩組臨床癥狀評(píng)分比較

2.3 兩組外周血IL-17、IL-27水平比較

治療后,觀察組IL-17水平低于治療前,兩組IL-27水平均高于治療前,且觀察組IL-17水平低于對(duì)照組,IL-27水平高于對(duì)照組(P<0.05;表4)。

表4 兩組外周血IL-17、IL-27水平比較 ng/L

2.4 兩組外周血Th17和Treg細(xì)胞比例比較

治療后,兩組Th17/CD4+、Th17/Treg均低于治療前,Treg/CD4+均高于治療前(P<0.05),且觀察組Th17/CD4+、Th17/Treg均低于對(duì)照組,Treg/CD4+高于對(duì)照組(P<0.05;表5)。

表5 兩組外周血Th17和Treg細(xì)胞比例比較 %

2.5 外周血IL-17、IL-27與Th17和Treg細(xì)胞比例的相關(guān)性

IL-17與Th17/CD4+呈正相關(guān)(r=0.623,P<0.001),與Treg/CD4+呈負(fù)相關(guān)(r=-0.664,P<0.001);IL-27與Th17/CD4+呈負(fù)相關(guān)(r=-0.742,P<0.001),與Treg/CD4+呈正相關(guān)(r=0.666,P<0.001;圖1)。

圖1 外周血IL-17、IL-27與Th17和Treg細(xì)胞比例的相關(guān)性

3 討 論

近年來(lái),中國(guó)BA發(fā)病人數(shù)日益增多,BA具有頑固性、易復(fù)發(fā)性,嚴(yán)重影響患者的身心健康。當(dāng)前,臨床上BA的主要治療手段為抗炎、解痙等,具有一定的臨床效果,但其無(wú)法徹底根治,仍未取得理想作用[10]。因此,臨床上有必要尋找有效的方法對(duì)BA患者進(jìn)行治療,以改善患者生活質(zhì)量。

SLIT是一種新型給藥方式,能快速改善BA癥狀,在治療期間及停止治療后的多年內(nèi)仍可維持癥狀穩(wěn)定,具有給藥方便、患者接受度高等特點(diǎn)。目前SLIT已被納入哮喘治療方案中,在過(guò)敏性哮喘、變應(yīng)性鼻炎等疾病治療中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[11]。本研究發(fā)現(xiàn),BA患者應(yīng)用SLIT后,患者的總控制率較高,臨床癥狀評(píng)分較低。結(jié)果表明,SLIT治療BA具有良好的效果,可控制哮喘情況,緩解哮喘癥狀。BA患者的血清、鼻腔和支氣管分泌物中通常有大量的嗜酸性粒細(xì)胞,其活化后能釋放白三烯類物質(zhì),導(dǎo)致氣道黏膜水腫,從而發(fā)生一系列病理生理反應(yīng)[12]。SLIT可減少白三烯類物質(zhì)的產(chǎn)生,抑制免疫球蛋白E介導(dǎo)的超敏反應(yīng)及肥大細(xì)胞脫顆粒,降低支氣管平滑肌對(duì)組胺的反應(yīng)性,減少炎癥因子的釋放,緩解氣道炎癥反應(yīng),進(jìn)而獲得良好的治療效果[13]。SLIT不僅能拮抗Th17細(xì)胞增殖,還能上調(diào)Treg相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá),進(jìn)而調(diào)節(jié)Th17/Treg平衡,這對(duì)抑制呼吸道炎癥反應(yīng)、舒張氣道平滑肌具有有利作用[14-15]。

Th17與Treg細(xì)胞兩者相互拮抗保持免疫系統(tǒng)正常運(yùn)轉(zhuǎn),臨床普遍認(rèn)為BA的發(fā)生與Th17/Treg細(xì)胞失衡存在相關(guān)性[16]。Th17細(xì)胞以分泌IL-17為主要特征,對(duì)炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)有著關(guān)鍵影響。Treg細(xì)胞具有免疫調(diào)節(jié)功能,可誘導(dǎo)免疫耐受。IL-27不僅能促進(jìn)免疫,還能抑制免疫,其參與T細(xì)胞活化狀況的調(diào)節(jié),影響自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展。IL-27可抑制Th17細(xì)胞的分化,減少IL-17的分泌,并能上調(diào)Foxp3的轉(zhuǎn)錄及表達(dá),增強(qiáng)Treg細(xì)胞的免疫抑制功能。SLIT可增加IL-27含量,且其水平與抑制Th17反應(yīng)息息有關(guān)[17]。本研究結(jié)果提示:SLIT可糾正BA所致的Th17/Treg免疫失衡,并且IL-17和IL-27可能參與Th17/Treg免疫調(diào)節(jié),在BA的發(fā)生機(jī)制中具有重要作用。

SLIT治療BA具有良好的效果,可降低外周血IL-17水平,增加外周血IL-27水平,且糾正Th17/Treg免疫失衡。本研究的納入病例數(shù)較少,今后仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量予以證實(shí)。