蘇可欣，趙玉紅,2,

（1.東北林業(yè)大學生命科學學院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省森林食品資源利用重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040）

榛子（Corylus heterophyllaFisch.）為樺木科榛屬植物的一種樹堅果，平歐雜交榛（Corylus heterophyllaFisch.×Corylus avellanaL.）是我國培育的一種雜交品種，結合了平榛和歐洲榛的特點，抗寒性強且果仁品質高，既解決了歐洲榛在國內(nèi)種植的適應性問題，還改善了平榛利用率低的狀況，利于全國推廣種植[1]。隨著榛子應用量增大，產(chǎn)生了榛子副產(chǎn)物回收利用的問題，有文獻報道稱榛子副產(chǎn)物中含有大量的植物化學物質，其中最主要的是酚類化合物[2]，研究平歐榛子副產(chǎn)物中的多酚類物質有利于促進平歐榛子產(chǎn)業(yè)的多向發(fā)展。

酚類化合物主要分成兩大類，類黃酮（如花青素、黃烷醇、黃烷酮、黃酮醇、二氫黃酮和異黃酮等）和非類黃酮（如酚酸、氧雜蒽酮、二苯乙烯、木脂素和單寧）[3]。食品和農(nóng)業(yè)加工業(yè)的副產(chǎn)物是天然多酚的廉價來源，榛子采集加工過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物以及修剪廢料都是提取多酚的途徑[4]。朱小芳等[5]研究了8 種平歐榛子殼、皮和種仁的活性成分及抗氧化性，本實驗在此基礎上增加對平歐榛子葉、果苞和枝條的比較研究，目前缺少對平歐榛子枝條酚類成分的研究，通過綜合比較分析平歐榛子副產(chǎn)物中的酚類物質和功能活性，可以提高平歐榛子副產(chǎn)物的利用度，減少這些食品工業(yè)廢棄物給環(huán)境帶來的負面影響[6]。

酚類物質是一類植物次級代謝物，大量研究表明酚類化合物具有顯著的生物活性，特別是在抗氧化、抑菌、降血糖、抗炎、預防神經(jīng)退行性疾病、抗癌、調節(jié)腸道菌群等方面取得很大的進展[7-9]。多酚在食品和藥品行業(yè)有很大的潛在價值，而提取方法對多酚的生物活性以及提取出的多酚組成會產(chǎn)生一定的影響，其中超聲技術可以提高多酚的提取率，同時結合不同極性溶劑可提取出種類不同的多酚[10]。超高效液相色譜-質譜（ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry，UPLC-MS）技術具有靈敏度高、速度快、分辨率高的特點，在植物、食品、藥物和環(huán)境分析中被廣泛應用[11]。由于植物本身的化學組成較為復雜，加上單一指標評價生物活性的方式有限，因此采用多種方法比較植物原料的生物活性，建立標準化的評價方法可以更加全面地展現(xiàn)天然活性物質的特性。主成分分析（principal component analysis，PCA）是一種利用降維的原理，把多個變量轉化為少數(shù)幾個不相關的綜合變量的一種多元統(tǒng)計分析方法[12]，適用于對多指標的綜合分析。

榛子副產(chǎn)物中的活性成分對于預防和治療人類疾病具有重要意義，本實驗旨在評估榛子副產(chǎn)物潛在的生物活性，對其中的酚類化合物作定性分析，合理利用食品副產(chǎn)物資源，提高農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)的可持續(xù)性，以期為功能食品和藥物開發(fā)提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

根據(jù)黑龍江省林業(yè)科學院對黑龍江省哈爾濱市尚志市榛子科研基地中的平歐榛子品質評價，采集“遼榛7號”的榛子葉、果苞、殼、枝條和種皮作為實驗原料，烘干后粉碎過40 目篩。

蘆丁、原花青素、2,4,6-三吡啶基三嗪、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-dipheny l-2-trinitrophenylhydrazine，DPPH）、VC、豬胰腺α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、對硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside，pNPG）、阿卡波糖、雙氯芬酸鈉、脂肪氧化酶、二甲酚橙、去甲二氫愈創(chuàng)木酸（nordihydroguaiaretic acid，NDGA）上海源葉生物科技有限公司；2,2’-聯(lián)氮雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)，ABTS）美國Sigma-Aldrich公司；牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、福林-酚 北京索萊寶科技有限公司；甲醇（質譜級）美國Fisher Chemical公司；碘、亞油酸 上海麥克林生化科技有限公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設備

FW177中草藥粉碎機、DK-98-II電熱恒溫水浴鍋天津市泰斯特儀器有限公司；KQ-300DE數(shù)控超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司；722型可見分光光度計 上海光譜儀器有限公司；RE-2000A旋轉蒸發(fā)器 鞏義市予華儀器有限責任公司；全波長酶標儀 BioTek Instrumrents Inc公司；TGL-16C臺式離心機 上海安亭科學儀器廠；超高效液相色譜聯(lián)用Q-ExactiveTMFocus組合型四極桿靜電場軌道阱高分辨質譜儀 賽默飛世爾科技（中國）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品提取

稱取一定量脫脂樣品[13]，按料液比1∶30（g/mL）分別加入水、甲醇、80%乙醇和乙酸乙酯，在45 ℃超聲波裝置（120 W、40 kHz）中振蕩50 min，抽濾，將提取液經(jīng)旋轉蒸發(fā)儀減壓濃縮，將濃縮液置于烘箱干燥至浸膏狀[14]。

1.3.2 總酚含量測定

參照劉春麗等[15]的方法并稍作修改。分別取不同體積的0.1 mg/mL沒食子酸溶液于試管中，加水稀釋至1 mL，然后加入0.5 mL福林-酚試劑，避光室溫反應5 min，再加入1.5 mL 7.5% Na2CO3溶液，最后加入2 mL水稀釋，搖勻，在避光條件下反應1 h，于760 nm波長處測定樣品吸光度，以沒食子酸為標準溶液繪制標準曲線y＝74.924x+0.057（R2＝0.9992），其中x為沒食子酸質量濃度（mg/mL），y為吸光度。取一定量樣品測得樣品吸光度，樣品中總酚含量以提取物干質量中的沒食子酸含量表示（mg/g）。

1.3.3 總黃酮含量測定

參照Moreno等[16]的方法并稍作修改，向樣品溶液中加入0.1 mL的10%硝酸鋁溶液、0.1 mL 1 mol/L的醋酸鉀溶液，再定容至5 mL，混合均勻，于室溫下靜置40 min，測定415 nm波長處的吸光度，采用蘆丁標準液測定并繪制標準曲線y＝19.303x+0.0055（R2＝0.9999），其中x為蘆丁質量濃度（mg/mL），y為吸光度。取一定量的樣品按上述方法計算總黃酮含量，結果以提取物干質量中的蘆丁質量表示（mg/g）。

1.3.4 原花青素含量測定

采用正丁醇-鹽酸法[17]測定樣品中的原花青素含量，得到標準曲線為y＝12.406x+0.0178（R2＝0.9998），其中x為原花青素質量濃度（mg/mL），y為吸光度。結果以提取物干質量中的原花青素質量表示（mg/g）。

1.3.5 體外抗氧化活性測定

1.3.5.1 DPPH自由基清除能力

按照李欣等[18]的方法測定樣品對DPPH自由基的清除率，將2.5 mL的DPPH自由基乙醇溶液（2×10-4mol/L）與1 mL的樣品混合均勻，于室溫避光反應30 min，測定517 nm波長處的吸光度。清除能力大小以半抑制濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）值表示，用VC作陽性對照。DPPH自由基清除率計算公式如下：

式中：Ai為樣品組測定的吸光度；Ab為乙醇與樣品混合溶液的吸光度：Ac為DPPH自由基與樣品溶劑混合溶液的吸光度。

1.3.5.2 ABTS陽離子自由基清除能力

配制ABTS陽離子自由基工作液：將pH 7.4的7 mmol/L ABTS溶液與2.45 mmol/L過硫酸鉀等體積混合，然后在室溫下避光儲存12～16 h，使用前用pH 7.4的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）稀釋至在734 nm波長處的吸光度為0.70±0.02。取一定量樣品，加入ABTS陽離子自由基工作液，暗置反應6 min，734 nm波長處測定吸光度，用IC50值表示抗氧化活性[19]，以VC作為陽性對照。ABTS陽離子自由基清除率計算公式如下：

式中：As為樣品組的吸光度；Ac為PBS代替ABTS陽離子自由基測定的吸光度；A0為空白組的吸光度。

1.3.5.3 羥自由基清除能力

參照玄紅專等[20]的方法稍作修改，將1.4 mL的0.2 mmol/L甲基紫、1 mL的Tris-HCl緩沖液（pH 3.5）、1 mL的5 mmol/L FeSO4溶液和0.5 mL的樣品溶液混合均勻，再加入0.4 mL的1% H2O2溶液，最后定容至10 mL，靜置反應5 min，測定588 nm波長處的吸光度。結果以IC50值表示，VC作陽性對照。羥自由基清除率計算公式如下：

式中：A1為樣品組的吸光度；A2為蒸餾水代替H2O2測定的吸光度；A0為空白組的吸光度。

1.3.5.4 鐵離子還原力（ferric ion reducing antioxidant power，F(xiàn)RAP）

參照賈東升等[21]的方法稍作修改。取一系列濃度的FeSO4溶液各100 μL，分別加入3 mL FRAP試劑，37 ℃水浴10 min，于593 nm波長處測定吸光度，F(xiàn)eSO4濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標制作標準曲線。按標準曲線制作方法，以樣品溶液代替FeSO4測定吸光度。根據(jù)標準曲線計算樣品抗氧化活性（FRAP值），樣品的抗氧化能力單位以mmol/L表示，以VC作陽性對照。

1.3.6 體外降血糖活性測定

1.3.6.1α-淀粉酶抑制活性

參考Pods?dek等[22]的方法，將含有樣品液和α-淀粉酶（0.5 U/mL）的混合液置于37 ℃條件下10 min，再加入0.2%淀粉溶液（PBS溶解），于37 ℃反應10 min，加入1 mol/L的HCl終止反應，加入5 mmol/L的I2-KI溶液顯色，在600 nm波長處測定吸光度，以阿卡波糖作陽性對照。

1.3.6.2α-葡萄糖苷酶抑制活性

根據(jù)王靜等[23]的方法稍作修改。取0.2 U/mL的α-葡萄糖苷酶與不同濃度樣品混合均勻，在37 ℃孵育15 min，再加入5 mmol/L的pNPG溶液，在37 ℃反應10 min，然后加入0.2 mol/L的Na2CO3溶液終止反應，在405 nm波長處測定吸光度，以阿卡波糖作為陽性對照。

1.3.7 體外抗炎活性測定

1.3.7.1 BSA變性抑制率

參考Grant等[24]的方法，取BSA溶液于試管中，再加入相同體積的樣品溶液，先在37 ℃保溫20 min，再于70 ℃水浴10 min，然后靜置冷卻至室溫，測定660 nm波長處的濁度，以蒸餾水代替樣品測定濁度作為空白對照，用雙氯芬酸鈉作陽性對照。BSA變性抑制率計算公式如下：

式中：A1為樣品組的吸光度；A0為空白組的吸光度。

1.3.7.2 脂氧合酶（lipoxygenase，LOX）抑制活性

根據(jù)郭瑞等[25]的方法稍作修改。向樣品溶液中加入0.8 U/mL LOX，在30 ℃反應5 min，然后加入體積分數(shù)0.1%的亞油酸，稀釋到0.5 mL，在30 ℃反應10min，最后加入0.5 m LFOX試劑（甲醇∶水＝9∶1、高氯酸110 m m o l/L、二甲酚橙150 μmol/L、硫酸亞鐵2 mmol/L）終止反應，然后顯色10 min，于560 nm波長處測定吸光度，以去甲二氫愈創(chuàng)木酸為陽性對照。對照組在加完FOX試劑之后再加入亞油酸。

1.3.8 UPLC-MS聯(lián)用分析

樣品液制備：取一定量的濃縮提取液加水分散至一定體積，依次經(jīng)石油醚、氯仿和乙酸乙酯各萃取3 次，最后將乙酸乙酯層進行烘干，用50%甲醇溶解，離心取上清液，再經(jīng)0.22 μm聚四氟乙烯膜過濾。

檢測條件：色譜條件參考Lee等[26]的方法，采用正負離子同時掃描，質譜條件與文獻中負離子檢測模式下的條件一致。本實驗UPLC-MS聯(lián)用的測定，感謝森林植物生態(tài)學教育部重點實驗室液相色譜-質譜平臺提供技術支持。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結果與分析

2.1 平歐榛子副產(chǎn)物的得率及總酚、總黃酮和原花青素含量

如表1所示，提取溶劑和部位對活性成分含量都產(chǎn)生了顯著影響（P＜0.05），其中枝條甲醇提取物的總酚和原花青素含量最高，分別為（37.13±0.22）mg/g和（2.27±0.04）mg/g，葉子的80%乙醇溶液提取物的總黃酮含量最高，為（18.21±1.37）mg/g。從提取物部位來看，平歐榛子副產(chǎn)物總酚含量從高到低依次為枝條、葉、殼、果苞、種皮，葉的總黃酮含量顯著高于果苞、殼、枝條和種皮（P＜0.05），原花青素含量從高到低依次為枝條、葉、果苞、殼、種皮。根據(jù)不同溶劑提取物的得率可知，80%乙醇溶液更利于酚類物質的溶出，殼的水提物的總酚和總黃酮含量在4 種殼提取物中最高，可能是榛子殼提取物中的強極性的酚類物質較多。乙酸乙酯提取物的總酚含量相對較低，但是殼的乙酸乙酯提取物原花青素含量占提取物得率的比例相對較大，可能是因為榛子殼中的原花青素種類比較豐富[27]。平歐榛子副產(chǎn)物中多酚的含量因選取部位和溶劑而異，如Lee等[28]利用甲醇、乙醇和熱水提取裙帶菜不同部位的活性化合物，發(fā)現(xiàn)總酚和總黃酮含量最高的是葉片的甲醇提取物。在利用平歐榛子副產(chǎn)物開發(fā)功能性材料或其他用途時可以根據(jù)應用目的選擇性提取其活性成分。

表1 平歐榛子副產(chǎn)物不同溶劑提取物的得率及總酚、總黃酮和原花青素含量Table 1 Yields and contents of total phenols,total flavonoids and proanthocyanidins in different solvent extracts from hybrid hazelnut by-products

2.2 平歐榛子副產(chǎn)物提取物的體外抗氧化活性

由圖1A、B可知，榛子枝條提取物在相同溶劑下表現(xiàn)出最強的DPPH自由基和ABTS陽離子自由基清除能力，以其甲醇提取物的清除能力為最佳，IC50值分別為（61.922±0.562）μg/mL和（0.117±0.003）mg/mL。酚類化合物可以通過提供氫原子清除自由基[29]，枝條甲醇提取物的總酚含量最高，這可能是其清除DPPH自由基和ABTS陽離子自由基能力強的原因。羥自由基積累過多會對生物機體造成嚴重損害，由圖1C可知，所有提取物均表現(xiàn)出優(yōu)于VC的羥自由基清除能力，并且各組提取物均以80%乙醇提取物的清除能力為最佳。在活性成分含量較低的水提物組中，殼的水提物清除羥自由基能力最強，IC50值為（0.333±0.083）mg/mL，可能是榛子殼水提取物中的酚類物質更利于清除羥自由基，又或者是水提取物中的其他活性物質與酚類物質產(chǎn)生了抗氧化增效作用[30]。由圖1D可知，甲醇和80%乙醇溶液提取物的FRAP較強，其中榛子枝條甲醇提取物的FRAP最強，達到（4.189±0.033）mmol/L。5 組平歐榛子副產(chǎn)物提取物的FRAP與總酚含量趨勢幾乎一致，表明多酚與抗氧化活性之間存在一定的相關性。

圖1 平歐榛子副產(chǎn)物提取物的DPPH自由基（A）、ABTS陽離子自由基（B）、羥自由基（C）清除能力的IC50值及FRAP值（D）Fig.1 IC50 values for DPPH radical (A),ABTS radical cation (B),and hydroxyl radical-scavenging (C) and FRAP values (D) of the extracts from hybrid hazelnut by-products

2.3 平歐榛子副產(chǎn)物提取物的體外降血糖活性

平歐榛子副產(chǎn)物提取物對α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用如表2、3所示。有機溶劑提取物α-淀粉酶抑制活性的IC50值都顯著低于水提取物的IC50值（P＜0.05），其中乙酸乙酯提取物的α-淀粉酶抑制能力相對較強，這與Zengin等[31]的研究結果相似?？傮w來看，甲醇和80%乙醇溶液提取物α-葡萄糖苷酶抑制能力較強，其中甲醇和80%乙醇溶液提取物組中分別以果苞和枝條對α-葡萄糖苷酶的抑制能力為最強。各組提取物α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制活性的IC50值都大于阿卡波糖的IC50值，但是在榛子果苞組中都各有一種提取物分別對這兩種酶的抑制活性最強，表明榛子果苞可能具有顯著的改善高血糖癥的潛力。

表2 平歐榛子副產(chǎn)物提取物α-淀粉酶抑制活性的IC50值Table 2 IC50 values of hybrid hazelnut by-product extracts for inhibition of α-amylase activity mg/mL

表3 平歐榛子副產(chǎn)物提取物α-葡萄糖苷酶抑制活性的IC50值Table 3 IC50 values of hybrid hazelnut by-product extracts for inhibition of α-glucosidase activityμg/mL

2.4 平歐榛子副產(chǎn)物提取物的體外抗炎活性

組織蛋白變性是引起炎癥的重要原因之一，通過測定BSA熱變性的抑制作用可以初步篩選抗炎化合物，是一種不需要動物實驗且方便快速的方法[32]。由表4可知，榛子副產(chǎn)物具有一定的抗炎活性，保護BSA在熱誘導條件下不發(fā)生變性。相同部位的提取物中總酚含量高的樣品抑制效果較好，乙酸乙酯提取物在同一部位中表現(xiàn)出最弱的抑制活性，另外3 種溶劑提取物的抑制活性皆因部位不同而表現(xiàn)出顯著差異，其中比較接近陽性組的分別是果苞的水提物和殼的甲醇提取物。若只考慮部位對抑制BSA變性的影響，榛子果苞提取物抑制BSA熱變性的優(yōu)勢更加明顯，IC50值在1.824～72.313 μg/mL之間。

表4 平歐榛子副產(chǎn)物提取物抑制BSA變性的IC50值Table 4 IC50 values of hybrid hazelnut by-product extracts for inhibition of the denaturation of bovine serum albuminμg/mL

LOX是一種將花生四烯酸轉換成促炎白三烯的關鍵酶，白三烯是過敏反應和炎癥的介質，抑制酶實驗是尋找有效低副作用的抑制劑的常用模型[33]。如圖2所示，與抗氧化結果不同的是，有3 組乙酸乙酯提取物在相同部位提取物中表現(xiàn)出較強的抑制活性，葉、果苞和殼乙酸乙酯提取物的IC50值分別為（0.008±0.003）、（0.199±0.013）mg/mL和（0.070±0.004）mg/mL，其中葉提取物的活性強于NDGA（IC50值為（0.026±0.012）mg/mL）。有研究發(fā)現(xiàn)柑橘副產(chǎn)物的乙酸乙酯組分對LOX的抑制效果最好，組分中所含的單萜和倍半萜含量較高，經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)其倍半萜與LOX抑制能力有關[34]，說明乙酸乙酯有利于提取出抑制LOX活性的重要物質。

圖2 平歐榛子副產(chǎn)物提取物抑制LOX活性的IC50值Fig.2 IC50 values of hybrid hazelnut by-product extracts for inhibition of lipoxygenase activity

2.5 PCA

如圖3 所示，所測數(shù)據(jù)的累計總方差貢獻率為62.8%，其中PC1貢獻方差為42.1%，綜合反映樣品的總酚、總黃酮、原花青素、FRAP、ABTS陽離子自由基清除能力、DPPH自由基清除能力、抑制BSA變性能力、LOX抑制活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的情況，PC2貢獻方差為20.7%，綜合反映了樣品α-淀粉酶抑制活性和羥自由基清除能力的情況。從得分圖（圖3A）來看，各組的樣本點重合部分較多，說明平歐榛子5 組副產(chǎn)物之間可能具有較高的相似度。枝條提取物樣本點與總酚、原花青素和總黃酮距離最近，表示其具有更多的活性成分。以IC50值表示結果的指標與樣本點之間呈負相關性，即在PC1正方向和PC2負方向上樣品的抗氧化、降糖及抗炎效果較好，因此可知枝條的甲醇提取物、枝條的80%乙醇溶液提取物和葉的甲醇提取物都是活性相對較強的提取物。另外，果苞的80%乙醇溶液提取物、殼的甲醇提取物和殼的80%乙醇溶液提取物樣本點都距離中心點較近并位于右邊的象限，表明這些提取物雖然不具有最多的活性成分，但是都具有比較可觀的生物活性，有可能是提取物中的各種活性成分之間產(chǎn)生協(xié)同效應，如Lee等[35]研究發(fā)現(xiàn)用低濃度的ε-聚賴氨酸、栗子提取物和肉桂提取物進行混合比單一提取物抑制金黃色葡萄球菌的效果好，這一現(xiàn)象有利于未來針對抗氧化、降糖或抗炎作用研究開發(fā)新型價廉的有效復合物。

圖3 PCA圖Fig.3 Principal component analysis plots

2.6 相關性分析

平歐榛子副產(chǎn)物活性成分含量與抗氧化、降糖及抗炎活性之間Pearson相關性分析結果如圖4所示。FRAP與總酚、總黃酮和原花青素含量之間呈極顯著正相關（P＜0.01），相關系數(shù)分別為0.93、0.45和0.73。其余以IC50值表示結果的指標與活性成分含量之間呈負相關性?？偡訉寡趸钚缘挠绊懽畲?，其次是原花青素和總黃酮。與降糖及抗炎活性之間的相關性較強的是總酚和原花青素含量，對于LOX抑制活性，原花青素表現(xiàn)出顯著高于總酚和總黃酮的相關性（P＜0.05），其相關系數(shù)為-0.29，由此推測平歐榛子副產(chǎn)物酚類物質中的原花青素在測定的生物活性評價中起到了重要作用。以生物活性作為篩選方向，并根據(jù)總酚和原花青素含量作為參考選擇適宜溶劑提取平歐榛子副產(chǎn)物的活性成分進而作定性分析。此外，α-淀粉酶抑制活性與羥自由基清除能力和α-葡萄糖苷酶抑制活性與抑制BSA變性之間呈較強相關，有研究表明氧化應激可以由高血糖誘導發(fā)生[36]，同時產(chǎn)生炎癥介質，導致自由基的產(chǎn)生進而加速糖尿病并發(fā)癥的發(fā)展，植物抗氧化劑清除自由基的同時還可以有助于治療一些糖尿病的并發(fā)癥。

2.7 平歐榛子副產(chǎn)物提取物的UPLC-MS分析

選擇平歐榛子葉和枝條的甲醇提取物以及果苞、殼和種皮的80%乙醇提取物進行超高液相色譜質譜聯(lián)用分析，各提取物的基峰離子流圖如圖5所示。經(jīng)UPLC-MS分析得到的平歐榛子副產(chǎn)物中主要酚類物質如表5所示。

表5 平歐榛子副產(chǎn)物提取物的UPLC-MS分析Table 5 UPLC-MS analysis of hybrid hazelnut by-product extracts

從表5可明顯看到，平歐榛子副產(chǎn)物提取物中的黃酮類化合物種類較多，如槲皮素、楊梅素和山柰酚等，此外還有酚酸類化合物，萜類化合物以及生物堿、有機酸、二芳基庚烷、木脂素和甾醇等。與先前報道[37-39]的研究結果類似的是，在平歐榛子副產(chǎn)物中也檢測到新綠原酸、楊梅苷、山柰酚、兒茶素、紫云英苷、綠原酸等酚類化合物。平歐榛子葉、果苞和殼中檢測出奎寧酸，它和綠原酸在咖啡豆中的含量豐富，屬于風味酚類物質，賦予咖啡在沖泡后產(chǎn)生的苦味，澀味和酸度。Contini等[40]向濃縮咖啡中添加榛子皮提取物后發(fā)現(xiàn)其沖泡后的抗氧化能力有所提高，可見榛子副產(chǎn)物有作為食品添加劑的潛力并相應地提高食品的功能活性。另外，本實驗在果苞提取物中檢測到三尖杉寧堿，Hoffman等[41]利用LC-MS法也曾在榛子殼和榛子葉中檢測到該物質，這是一種紫杉醇類似物并且具有較強的抗癌作用，也可用于合成紫杉醇，這為利用榛子副產(chǎn)物研發(fā)藥物的功效成分增加了可能性。本實驗基于UPLC-MS技術對平歐榛子副產(chǎn)物多酚類物質的測定結果為榛子副產(chǎn)物研究提供了新的信息，未來可以進一步研究平歐榛子副產(chǎn)物中的活性成分與生物活性之間的聯(lián)系。

3 結論

平歐榛子副產(chǎn)物含有豐富的酚類物質，其不同溶劑提取物具有不同程度的抗氧化、降血糖和抗炎活性，這是由于溶劑和部位不同導致提取物中的化學組成不同從而影響了各提取物生物活性的強弱順序。通過UPLC-MS對平歐榛子副產(chǎn)物化學組成的分析，榛子葉和種皮的酚類物質以類黃酮為主，榛子枝條和殼含有較多的原花青素，榛子果苞中含有三尖杉寧堿等活性成分，平歐榛子副產(chǎn)物有望成為功能性食品或藥品的基料。