郝文連,吳少華,景 曄,徐和福,王 莉,胡 艷

(1.中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)天津康復(fù)療養(yǎng)中心,天津 300381;2.天津市第一中心醫(yī)院檢驗(yàn)科)

再生障礙性貧血(AA)是多種因素導(dǎo)致的骨髓造血異常性疾病,病理特征為骨髓脂肪化、造血功能降低、全血細(xì)胞水平減少,出血基本位于皮膚黏膜且程度較輕,較少患者出現(xiàn)內(nèi)臟出血,但極易合并感染性疾病,呼吸系統(tǒng)感染為常見合并癥,嚴(yán)重影響患者身體健康,但尚無研究分析其具體發(fā)病機(jī)制[1-2]。有研究提出,機(jī)體淋巴因子介導(dǎo)的造血干細(xì)胞凋亡及免疫異常均可能會(huì)導(dǎo)致骨髓衰竭,造血干細(xì)胞被大脂肪細(xì)胞取代后僅僅剩余少量小淋巴細(xì)胞及纖維黏附顆粒,誘發(fā)骨髓造血障礙[3]。有學(xué)者提出,一旦機(jī)體免疫反應(yīng)被不同刺激物激活后將會(huì)釋放一系列因子,進(jìn)一步阻滯造血干細(xì)胞分裂凋亡,加重病情進(jìn)展[4]。本研究擬分析血清血小板生成素(TPO)、白細(xì)胞介素-17(IL-17)、γ-干擾素(IFN-γ)、促紅細(xì)胞生成素(EPO)在AA早期診斷及預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料:回顧性分析2019年7月～2020年9月在院進(jìn)行治療的259例AA患者一般臨床資料,將AA患者納入試驗(yàn)組,選取同期在我院健康體檢者81例納入對照組。其中試驗(yàn)組男132例,女127例;年齡22～75歲,平均(48.56±4.28)歲;病程1～3年,平均病程(1.26±0.25)年。對照組男41例,女40例;年齡23～74歲,平均年齡(48.57±4.21)歲;病程1～3年,平均病程(1.27±0.24)年。兩組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn):①本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意;②均經(jīng)臨床診斷及骨髓病理活檢確診為AA[5];③均符合手術(shù)指征。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并先天性心臟病者;②合并嚴(yán)重免疫功能障礙者;③一般臨床資料缺乏者。

1.2方法:給予試驗(yàn)組患者Novartis Pharma Schweiz AG公司生產(chǎn)的環(huán)孢素軟膠囊(H20140291,10 mg)飯后30 min服用,3 mg/(kg·d),2次/d;特一藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)的司坦唑醇片(國藥準(zhǔn)字H44021119,2 mg),飯后30 min服用,0.1 mg/(kg·d),3次/d。

1.3觀察指標(biāo):①比較試驗(yàn)組與健康對照組IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平:抽取兩組受試者空腹靜脈血,離心后取上清液保存待檢,采用ELISA法測定IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平。②比較不同分型及不同分類AA患者血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平。③抽取治療前、后試驗(yàn)組患者空腹靜脈血,離心后取上清液采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平,并繪制受試者工作特征(ROC)曲線探討以上指標(biāo)在AA預(yù)后評(píng)估中的效能。④分析IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS20.0軟件進(jìn)行χ2及t檢驗(yàn)。血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO與AA患者預(yù)后相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析;繪制受試者工作特征(ROC)曲線得到曲線下面積(AUC),以評(píng)價(jià)IFN-γ、IL-17、EPO、TPO在AA預(yù)后中的評(píng)估價(jià)值,敏感度及特異性均由ROC曲線得到。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平比較:試驗(yàn)組IFN-γ、IL-17、EPO、TPO均顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO、RORγ1水平比較

2.2試驗(yàn)組不同分型及分類患者血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平分析:極重型患者血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平均顯著高于非重型、重型患者,重型患者血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平高于非重型患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);原發(fā)性、繼發(fā)性兩組血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 試驗(yàn)組不同分型及分類患者血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平分析

2.3試驗(yàn)組治療前后血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平比較:治療后試驗(yàn)組患者血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平明顯低于治療前,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 試驗(yàn)組治療前后血清各指標(biāo)水平比較

2.4Th17 Treg細(xì)胞表達(dá)與血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平相關(guān)性分析:Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)IFN-γ、IL-17、EPO、TPO均與RORγ1呈正相關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 Th17 Treg細(xì)胞表達(dá)與血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平相關(guān)性分析(r值)

2.5血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO在預(yù)后中的評(píng)估價(jià)值:血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO在預(yù)后評(píng)估中均具有一定價(jià)值(P<0.05)。見表5。

表5 血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO在預(yù)后中的評(píng)估價(jià)值

3 討論

AA是造血干細(xì)胞異常導(dǎo)致骨髓造血功能降低引起的全血細(xì)胞減少,同時(shí)患者伴隨出血、感染、發(fā)熱等癥狀,好發(fā)于任何年齡階段,極易繼發(fā)性出現(xiàn)各種免疫系統(tǒng)疾病,臨床對其病理機(jī)制尚無統(tǒng)一定論,多認(rèn)為與骨髓造血環(huán)境異常、免疫機(jī)制損傷及造血干細(xì)胞異常相關(guān)[6-9]。

余艷麗等[10]研究中提出,AA患者體內(nèi)均存在寡克隆擴(kuò)增的細(xì)胞毒T細(xì)胞,其分泌的IFN-γ等1型淋巴因子均會(huì)明顯升高,隨后誘導(dǎo)造血干細(xì)胞表面的Fas抗原表達(dá),與促凋亡因子發(fā)揮協(xié)同作用,誘導(dǎo)骨髓造血干細(xì)胞凋亡。且IFN-γ的增加則明顯破壞了患者骨髓環(huán)境,表現(xiàn)為負(fù)性調(diào)節(jié),最終抑制骨髓造血功能,減少全血細(xì)胞,促進(jìn)AA疾病進(jìn)展[11-12];IL-17在與受體結(jié)合后可促進(jìn)各類趨化因子及黏附因子合成、釋放,進(jìn)一步導(dǎo)致嗜中性粒細(xì)胞大量異常聚集后產(chǎn)生炎性反應(yīng),促進(jìn)疾病進(jìn)展[13];EPO、TPO是評(píng)估骨髓功能狀態(tài)及幼稚紅細(xì)胞的相關(guān)指標(biāo),EPO為重要的造血調(diào)控因子,經(jīng)腎小管周圍毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞合成,EPO受體可與幼紅細(xì)胞表面低親和受體結(jié)合,會(huì)促進(jìn)幼紅細(xì)胞增殖,與高親和性受體結(jié)合后則會(huì)促進(jìn)幼紅細(xì)胞分化、成熟,EPO為紅系造血調(diào)控因子,缺氧及貧血均會(huì)增加EPO水平[14];TPO在產(chǎn)生后釋放進(jìn)入人血,在循環(huán)中保持一定濃度,且TPO可調(diào)節(jié)血小板生成及骨髓巨核細(xì)胞生長,AA患者因骨髓增生不良,導(dǎo)致巨核細(xì)胞數(shù)量絕對不足,明顯減少血小板生成,而被血小板表面吸附的TPO明顯減少,導(dǎo)致循環(huán)中TPO明顯升高[15]。本研究發(fā)現(xiàn)臨床在AA患者在治療中可通過監(jiān)測AA 患者血清IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平變化情況對預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)是維持機(jī)體免疫平衡的重要指標(biāo)[16],有研究提出,Th17 Treg可能與Th1型細(xì)胞一樣,產(chǎn)生間接或直接的抑制骨髓造血作用,Th17 Treg細(xì)胞可產(chǎn)生IL-17,促進(jìn)CD4+細(xì)胞分化并生成Th17 Treg細(xì)胞,聚集大量中性粒細(xì)胞發(fā)揮生理作用,進(jìn)一步促進(jìn)黏附分子及趨化細(xì)胞因子的釋放及合成,影響AA病理發(fā)展[17];Treg細(xì)胞可增強(qiáng)機(jī)體免疫監(jiān)視功能,RORγ1為核激素受體中家族成員之一,為Th17細(xì)胞分化關(guān)鍵因子,另外IL-17還可在一定程度上誘導(dǎo)炎癥因子的表達(dá),介導(dǎo)炎性反應(yīng),加重組織損傷[18]。另外,本研究發(fā)現(xiàn)IFN-γ、IL-17、EPO、TPO水平變化也會(huì)影響AA患者機(jī)體免疫功能,進(jìn)一步影響AA病理進(jìn)展。

綜上所述,IFN-γ、IL-17、EPO、TPO在AA患者血清中呈現(xiàn)明顯高表達(dá),且相互影響,共同參與AA的免疫發(fā)病。