梁啟權(quán),謝志輝,曾勝宏,鄧文森

(中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院粵東醫(yī)院 1全科醫(yī)學(xué)科,廣東 梅州 514700;2.心血管內(nèi)科;3.重癥醫(yī)學(xué)科)

近年來急性心肌梗死(AMI)發(fā)病率隨社會老齡化步伐推進(jìn)呈遞增趨勢,起病急驟,病情兇險(xiǎn),發(fā)病后患者常需臥床干預(yù),加之咳嗽反射減弱或消失,氣道纖毛清除病原菌能力下降,易引發(fā)肺部感染[1]。AMI伴肺部感染不僅可延長患者住院時(shí)間,亦增加了病死的風(fēng)險(xiǎn),因此早期明確診斷至關(guān)重要。促血管生成素2(Ang-2)在急性肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征患者中表達(dá)均高于健康體檢者,提示與急性呼吸系統(tǒng)疾病密切相關(guān),但在AMI伴肺部感染患者中作用尚不明確[2-3]。微小RNA-302b(miR-302b)是診斷急性心力衰竭的潛在生物標(biāo)志物,并能負(fù)性調(diào)節(jié)白細(xì)胞介素-1(IL-1)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)等炎性因子,參與感染后炎性反應(yīng),故推測與肺部感染有關(guān)[4-5]。本研究探討Ang-2、miR-302b、IL-6在AMI伴肺部感染患者早期診斷及心肌損傷評估中價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2019年1月～2021年12月中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院粵東醫(yī)院AMI伴肺部感染患者49例作為感染組,同期選取62例AMI患者作為未感染組。本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。兩組性別、既往急性AMI發(fā)病史、年齡、體重指數(shù)(BMI)、合并疾病等資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較[n(%)]

1.2納入、排除標(biāo)準(zhǔn):納入標(biāo)準(zhǔn):均符合AMI診斷標(biāo)準(zhǔn)[6];肺部感染的診斷根據(jù)癥狀、肺部影像學(xué)檢查、病原學(xué)培養(yǎng)等確診;肝腎功能無明顯異常。排除標(biāo)準(zhǔn):合并惡性腫瘤者;合并其他感染類疾病者;近期有外傷史者;合并神經(jīng)系統(tǒng)疾病者;先天性心臟病者;嚴(yán)重凝血功能障礙者。

1.3方法

1.3.1血清Ang-2、miR-302b、IL-6檢測:入院時(shí)、入院48 h后、出院時(shí)分別采集肘部靜脈血5 ml,3 000 r/min離心10 min,分離血清。采用上海瑞番生物科技有限公司雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒檢測血清Ang-2水平;采用艾美捷科技有限公司雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒檢測血清IL-6水平;取200 μl外周血標(biāo)本,加入裂解液(德國QIGEN公司)1 000 μl,室溫靜置15 min,應(yīng)用RNA提取試劑盒(德國QIGEN公司)提取總RNA,PrimeScript miRNA cDNA合成試劑盒(日本Takara公司)反轉(zhuǎn)錄為cDNA,應(yīng)用熒光定量PCR儀(美國Applied Biosytem公司,ABI 7500型)擴(kuò)增,試劑均購于日本Takara公司,引物由北京擎科生物科技有限公司合成,均按照試劑盒說明書進(jìn)行操作,反應(yīng)條件95℃ 30 s,90℃ 5 s,65℃ 30 s,共40個(gè)循環(huán)。以U6作為內(nèi)參,用2△t表示miR-302b。

1.3.2心肌酶譜指標(biāo)檢測:采用全自動生化分析儀(美國雅培AEROSET型)及寧波瑞源生物科技有限公司酶偶聯(lián)法試劑盒檢測肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草轉(zhuǎn)氨酸(AST)水平,采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測血清肌鈣蛋白(cTnI)水平,試劑盒購于基蛋生物科技股份有限公司。

1.3.3心肌損傷評估標(biāo)準(zhǔn)[7]:①12導(dǎo)聯(lián)心電圖提示異位心動過度、ST-T改變、竇性心動過緩或過度等心電異?，F(xiàn)象;②超聲心動圖提示心功能下降或心臟增大。以上兩項(xiàng)中若存在1項(xiàng)異常即可判定心肌損傷。

1.4觀察指標(biāo):①比較兩組入院時(shí)、入院48 h、出院時(shí)Ang-2、miR-302b、IL-6水平;②分析Ang-2、miR-302b、IL-6診斷AMI伴肺部感染的截?cái)嘀?、敏感度、特異?③比較輕度、中重度心肌損傷患者入院時(shí)、入院48 h、出院時(shí)Ang-2、miR-302b、IL-6水平;④比較輕度、中重度心肌損傷患者入院時(shí)、入院48 h、出院時(shí)心肌酶譜指標(biāo):CK-MB、cTnI、AST水平;⑤分析Ang-2、miR-302b、IL-6與心肌酶譜指標(biāo)相關(guān)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t及χ2檢驗(yàn),采用受試者工作特征(ROC)曲線及ROC下面積(AUC)分析Ang-2、miR-302b、IL-6診斷AMI伴肺部感染的價(jià)值,采用Pearson分析Ang-2、miR-302b、IL-6與心肌酶譜指標(biāo)的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1不同時(shí)間段Ang-2、miR-302b、IL-6水平:入院48 h后兩組血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平達(dá)到峰值,感染組血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平高于未感染組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同時(shí)間段Ang-2、miR-302b、IL-6水平

2.2血各指標(biāo)單一或聯(lián)合診斷AMI伴肺部感染價(jià)值:ROC顯示聯(lián)合診斷AMI伴肺部感染價(jià)值的AUC>入院48 h后Ang-2>入院48 h后miR-302b>入院48 h后IL-6。見表3,圖1。

圖1 血各指標(biāo)單一與聯(lián)合診斷ROC曲線

表3 血各指標(biāo)單一或聯(lián)合診斷AMI伴肺部感染價(jià)值

2.3輕度、中重度心肌損傷患者不同時(shí)間段血各指標(biāo):入院48 h后中重度心肌損傷及輕度損傷患者血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平達(dá)到峰值,中重度心肌損傷患者血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平高于輕度心肌損傷患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 心肌損傷和輕度心肌損傷患者不同時(shí)間段血清學(xué)指標(biāo)比較

2.4輕度、中重度心肌損傷患者不同時(shí)間段心肌酶譜指標(biāo):入院48 h后中重度心肌損傷及輕度心肌損傷患者血清Ang-2、miR-302b、IL-6水平達(dá)到峰值,中重度心肌損傷患者血清CK-MB、cTnI、AST水平高于輕度心肌損傷患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表5。

表5 心肌損傷和輕度心肌損傷患者不同時(shí)間段心肌酶譜指標(biāo)比較

2.5血各指標(biāo)與心肌酶譜指標(biāo)相關(guān)性比較:Ang-2、miR-302b、IL-6均與CK-MB、cTnI、AST呈正相關(guān)(P<0.05)。見表6。

表6 血各指標(biāo)與心肌酶譜指標(biāo)相關(guān)性

3 討論

約10%的AMI患者可發(fā)生肺部感染,肺部感染與心功能不全互為兇果,是造成AMI患者預(yù)后不良的重要原因,但AMI伴肺部感染時(shí),可表現(xiàn)出與心功能不全的相似特征,臨床診斷困難,易漏診、誤診,因此加強(qiáng)對AMI伴肺部感染、心肌損傷的評估意義重大。

在肺部感染病程中,病原體-宿主相互作用可引起炎性反應(yīng)和肺屏障功能障礙。Ang-2系血管生成素家族成員之一,能通過與酪氨酸激酶受體相互作用調(diào)節(jié)血管生成和血管重構(gòu)[7]。根據(jù)Gutbier等[8]報(bào)道,在體外溶血素能增強(qiáng)內(nèi)皮Ang-2的釋放,并增加內(nèi)皮通透性,而Ang-2基因敲除小鼠的通氣和灌流肺對溶血素刺激的通透性降低,提示Ang-2在肺炎引起的炎性反應(yīng)和通透性中起著重要作用。高水平Ang-2可減少微循環(huán)灌注,且能拮抗內(nèi)皮細(xì)胞酪氨酸激酶受體,抑制促血管生成素與受體的結(jié)合,促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,增強(qiáng)中性粒細(xì)胞黏附,增加內(nèi)皮細(xì)胞通透性,介導(dǎo)并加重肺部炎性反應(yīng),降低肺內(nèi)皮屏障功能,故與AMI伴肺部感染有關(guān)[9-10]。進(jìn)一步的ROC分析顯示,入院48 h后Ang-2診斷AMI伴肺部感染的AUC為0.816,呈現(xiàn)出較高的診斷價(jià)值,可為臨床提供客觀數(shù)據(jù)參考。CK-MB、cTnI、AST是臨床常用的心肌損傷指標(biāo),本研究發(fā)現(xiàn),Ang-2均與CK-MB、cTnI、AST呈正相關(guān),提示檢測Ang-2還能評估患者心肌損傷情況,為臨床決策、干預(yù)提供重要的參考信息。

miR-302b是miR-302/367家族中一個(gè)重要成員,定位于人染色體4q25上,可調(diào)控細(xì)胞損傷、壞死、凋亡,目前關(guān)于其研究多集中于惡性腫瘤領(lǐng)域,在AMI伴肺部感染領(lǐng)域的報(bào)道鮮見[11-12]。本研究結(jié)果提示miR-302b與AMI伴肺部感染有關(guān)。陳雪媛等[13-14]的報(bào)道采用miR-302模擬物上調(diào)miR-302的表達(dá),發(fā)現(xiàn)流感病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制和轉(zhuǎn)錄增多,而轉(zhuǎn)染miR-302抑制劑降低miR-302表達(dá)后,流感病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄被抑制,提示miR-302參與宿主的抗病毒調(diào)控機(jī)制。故推測miR-302b在AMI伴肺部感染患者中呈高表達(dá)可能與病原菌入侵肺部后,激活了機(jī)體抗微生物調(diào)控機(jī)制有關(guān),但由于這一觀點(diǎn)的新穎性,目前尚缺乏更多研究去論證,仍需后續(xù)研究的進(jìn)一步驗(yàn)證。且本研究提示IL-6還與心肌損傷有關(guān),能輔助評估心肌損傷情況。

IL-6是趨化因子家族的細(xì)胞因子。本研究顯示,AMI伴肺部感染患者入院48 h后血清IL-6水平較高,診斷AMI伴肺部感染的AUC為0.706,截?cái)嘀?22.32 pg/ml,可為臨床診斷疾病提供量化參考。IL-6在壓縮性骨折術(shù)后肺部感染、慢性阻塞性肺疾病伴肺部感染患者中表達(dá)顯著高于未感染患者,均提示IL-6與肺部感染有關(guān)[15-16]。Chen等[17]研究指出,肺部感染時(shí),IL-6水平可在早期即表現(xiàn)出顯著升高,本研究觀點(diǎn)與之相似。肺部感染后,在病原菌刺激下,巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等被激活,合成IL-6,并促進(jìn)激活的巨噬細(xì)胞分化,介導(dǎo)黏附分子黏附,因此在AMI伴肺部感染時(shí)呈現(xiàn)出較高水平,有助于疾病的診斷[18-19]。且本研究發(fā)現(xiàn),IL-6均與CK-MB、cTnI、AST呈正相關(guān),說明IL-6還與心肌損傷有關(guān),能輔助評估心肌損傷情況。本研究不足之處在于,未分析血清Ang-2、miR-302b、IL-6鑒別心肌損傷的具體截?cái)嘀?在患者出現(xiàn)肺部感染相關(guān)癥狀時(shí),仍需臨床進(jìn)行?？菩募p傷的評估,以明確鑒別,為臨床提供更準(zhǔn)確的參考信息。