張明輝，楊 松，郭紅偉，張光輝*

（1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河南鄭州 450000；2.駐馬店華中正大有限公司，河南駐馬店 463000）

丁酸鈉促進(jìn)動(dòng)物腸道益生菌的增殖、增強(qiáng)動(dòng)物免疫力、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、提高動(dòng)物生產(chǎn)性能（侯冬強(qiáng)等，2023；Li等，2022），牛至油具有抗氧化、抑菌、調(diào)節(jié)免疫力、促生長(zhǎng)等作用（韓飛等，2020），兩者聯(lián)用對(duì)防治動(dòng)物體內(nèi)致病菌具有協(xié)同增效作用（張桂枝等，2022）。本試驗(yàn)研究丁酸鈉與牛至油聯(lián)合使用對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能、腹瀉率、腸道微生物菌群和腸道結(jié)構(gòu)的影響，旨在為無(wú)抗養(yǎng)殖模式下研發(fā)新型綠色飼料添加劑提供應(yīng)用依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)將200頭平均日齡（28±2）d、平均體重（8.03±0.5）kg品種相同、胎次相近的斷奶“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交仔豬（公豬去勢(shì)，公母比例1∶1）隨機(jī)分為對(duì)照A組（基礎(chǔ)日糧）、對(duì)照B組（抗生素組，基礎(chǔ)日糧1000 kg+15%金霉素500 g+桿菌肽鋅250 g）、試驗(yàn)C組（基礎(chǔ)日糧1000 kg+2 kg丁酸鈉）、試驗(yàn)D組（基礎(chǔ)日糧1000 kg+1 kg牛至油）、試驗(yàn)E組（基礎(chǔ)日糧1000 kg+1 kg丁酸鈉+0.5 kg牛至油）5個(gè)處理組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭仔豬，每個(gè)重復(fù)單圈飼養(yǎng)。

1.2 日糧配制 基礎(chǔ)日糧按《中華人民共和國(guó)肥育豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）》標(biāo)準(zhǔn)配制，具體見(jiàn)表1。

表1 日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 試驗(yàn)藥物與儀器 藥物：金霉素、桿菌肽鋅、丁酸鈉、牛至油。儀器：乳酸桿菌培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基和甲醛均購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，淀粉酶、蛋白酶試劑盒（南京建成生物工程研究所），分析天平（德國(guó)賽多利斯公司），BXAW-TS-L厭氧培養(yǎng)箱（上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司），CKX53熒光生物顯微鏡（Olympus公司）。

1.4 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)預(yù)飼期7 d，正試期28 d，單圈飼養(yǎng)，自由采食和飲水。免疫程序按豬場(chǎng)常規(guī)程序進(jìn)行。每日于上午9：00和下午17：00各飼喂1次，并觀察試驗(yàn)各組豬的采食、飲水及健康狀況，記錄腹瀉頭數(shù)。

1.5 測(cè)定指標(biāo)

1.5.1 生長(zhǎng)性能 平均日增重：各處理組間初始體重差異不顯著（P＞0.05），試驗(yàn)當(dāng)日8：00和結(jié)束后當(dāng)日8：00稱重和記錄試驗(yàn)各組仔豬體重，計(jì)算各組仔豬平均日增重，具體計(jì)算公式如下：

平均日增重/g=（試驗(yàn)各組末重-試驗(yàn)各組初重）/28。

平均日采食量：每天上午8：00稱重，并記錄試驗(yàn)各組仔豬料槽內(nèi)剩余飼料量和采食量，計(jì)算試驗(yàn)各組平均日采食量，具體計(jì)算公式如下：

平均日采食量/g=總采食量/（28×試驗(yàn)豬頭數(shù)）；

料重比=總飼料消耗量/（末重-初重）×100。

腹瀉率：每天觀察試驗(yàn)各組仔豬肛門的清潔程度，肛門處若存在水樣糞便污染，判定為仔豬腹瀉，并記錄腹瀉仔豬頭數(shù)。

腹瀉率/%=每天記錄的腹瀉頭數(shù)/總頭數(shù)/28×100。

死淘率：仔豬斷奶小腸絨毛嚴(yán)重萎縮變短甚至脫落，吸收能力逐漸下降，造成腸道中的飼料不經(jīng)消化直接排出體外，引發(fā)腹瀉造成死亡。

死淘率/%=死亡頭數(shù)/總頭數(shù)×100

1.5.2 組織取樣 試驗(yàn)結(jié)束稱重后，試驗(yàn)各組隨機(jī)選擇1頭仔豬進(jìn)行屠宰。屠宰前前腔靜脈抽取3 mL血樣，肝素鈉抗凝劑抗凝離心、分離血漿備用。屠宰過(guò)程中嚴(yán)格按照無(wú)菌要求剖開(kāi)腹腔，分離胃、十二指腸、空腸、回腸和盲腸，采集空腸內(nèi)容物2 g，冷凍保存。

截取7 cm空腸中段樣品置于10%甲醛溶液中固定8～24 h待檢。

1.5.3 腸道健康指標(biāo) 將1 g空腸內(nèi)容物放入三角燒瓶中，加入99 mL滅菌生理鹽水振蕩混勻，按照10倍梯度遞進(jìn)稀釋，將稀釋液接種在乳酸桿菌和伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基平板上，每個(gè)樣品3個(gè)重復(fù)，分別在37℃厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h和24 h菌落計(jì)數(shù)。

采集試驗(yàn)各組仔豬1 g空腸內(nèi)容物采用試劑盒測(cè)定淀粉酶、蛋白酶活性（趙偉鑫等，2021）。

1.5.4 空腸組織結(jié)構(gòu) 空腸中段樣品在10%甲醛溶液中固定8～24 h后切片、染色，中性樹(shù)膠封存，在熒光生物顯微鏡下觀察，測(cè)量絨毛高度、隱窩深度。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行方差分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P＜0.05表示組間差異顯著，P＜0.01表示組間差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，與對(duì)照A組相比，試驗(yàn)B、C、D、E組斷奶仔豬試驗(yàn)?zāi)w重分別顯著增加6.61%、5.10%、5.15%、5.54%（P＜0.05），各組之間差異不顯著（P＞0.05）；與對(duì)照A組相比，試驗(yàn)B、C、D、E組斷奶仔豬日增重和日采食量分別顯著增加10.49%、8.27%、8.37%、8.96%和3.63%、4.25%、2.99%、2.20%（P＜0.05），且各組之間差異不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)各組料重比、腹瀉率、死淘率差異不顯著（P＞0.05）。由此表明，斷奶仔豬聯(lián)合牛至油+丁酸鈉使用，其生長(zhǎng)性能與抗生素組無(wú)差異。

表2 對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.2 對(duì)斷奶仔豬腸道健康的影響 由表3可知，腸道菌落總數(shù)E組比A、B、C、D組分別減少2.24%、3.48%、2.24%、3.14%，但差異不顯著（P＞0.05），其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。C、D、E組乳酸菌比A、B組分別顯著增加7.68%、7.95%、7.95%和7.82%、8.09%、8.09%（P＜0.05），三組之間差異不顯著（P＞0.05）；B組比A組減少0.13%，但差異不顯著（P＞0.05）。B、C、D、E組大腸桿菌比A組顯著減少9.56%、9.39%、8.90%、9.39%（P＜0.05），各組之間差異不顯著（P＞0.05）。由此表明，丁酸鈉和牛至油可改善腸道pH，兩者聯(lián)用更有益于乳酸菌繁殖，從而維護(hù)仔豬腸道健康。

表3 不同日糧對(duì)仔豬糞樣中微生物菌群及酶活的影響 lg CFU/g

試驗(yàn)C、D、E組腸道內(nèi)淀粉酶比A組顯著增加106.14%、99.13%、124.55%（P＜0.05），比B組顯著增加40.60%、35.70%、52.%（P＜0.05），各組之間差異不顯著（P＞0.05）。C、E組蛋白酶比A、B組顯著增加7.27%、16.81%和9.21%、16.81%（P＜0.05）；E組比C組增加0.94%（P＞0.05），比D組顯著增加8.89%（P＜0.05），由此表明，丁酸鈉和牛至油均顯著提高兩種消化酶活性，兩者聯(lián)用更有利于促進(jìn)機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，從而提高其生長(zhǎng)性能。

2.3 對(duì)斷奶仔豬空腸組織結(jié)構(gòu)的影響 由表4可知，C、D、E組絨毛高度比A組顯著增加4.56%、2.45%、3.46%（P＜0.05），比B組顯著增加4.29%、2.19%、3.19%（P＜0.05）；D、E組比C組顯著減少2.06%、1.07%（P＜0.05）；E組比D組增加0.98%，差異不顯著（P＞0.05）。D、E組隱窩深度比B組顯著減少0.55%、0.82%（P＜0.05），其他各組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。絨毛高度/隱窩深度值各組無(wú)顯著差異（P＞0.05），在使用牛至油與丁酸鈉后比值有升高趨勢(shì)。由此說(shuō)明，牛至油+丁酸鈉具有改善腸道組織形態(tài)的功能，效果比抗生素更佳。

表4 對(duì)仔豬空腸組織結(jié)構(gòu)的影響

3 討論

在斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中添加丁酸鈉、牛至油和兩者聯(lián)合使用均可顯著提高日采食量、日增重和末體重，不同程度地降低料重比、腹瀉率和死淘率，能更好地提高仔豬生長(zhǎng)性能，減少因疾病造成的仔豬死亡。在斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中添加丁酸鈉、牛至油和兩者聯(lián)合使用，與添加金霉素和桿菌肽鋅相比較，無(wú)論在提高日采食量、日增重和末體重上還是在料重比、腹瀉率和死淘率上均無(wú)顯著差異，同樣具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益。

與飼喂基礎(chǔ)日糧的仔豬相比，在斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中添加丁酸鈉、牛至油和兩者聯(lián)合使用，腸道大腸桿菌數(shù)量和腸道內(nèi)菌落總數(shù)明顯減少，可有效降低腸道菌群感染的機(jī)會(huì)，提高豬群健康水平。顯著增加乳酸菌數(shù)量，提高有益菌數(shù)量，有利于提高仔豬腸道健康。促進(jìn)乳酸菌的生存和繁殖，創(chuàng)造健康的腸道內(nèi)環(huán)境，通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，維護(hù)仔豬腸道內(nèi)環(huán)境（Wu等，2018），從而提高仔豬抵抗力。丁酸鈉、牛至油和兩者聯(lián)合使用與添加抗生素金霉素和桿菌肽鋅的效果一樣，仔豬腸道內(nèi)的大腸桿菌數(shù)量和腸道內(nèi)菌落總數(shù)變化不大，增加了一定量的乳酸菌，顯著增加淀粉酶和蛋白酶數(shù)量，說(shuō)明使用丁酸鈉、牛至油和兩者聯(lián)合比抗生素的效能更好，可完全替代抗生素，保障無(wú)公害食品的安全。

與正常飼喂基礎(chǔ)日糧、添加抗生素的試驗(yàn)組相比，在斷奶仔豬日糧中添加丁酸鈉、牛至油和兩者聯(lián)合使用后，仔豬腸道中的小腸絨毛高度增加，隱窩深度降低，絨毛高度與隱窩深度的比值提高（許璐等，2020；張皓然等，2018），有利于保護(hù)腸道黏膜屏障，維持仔豬腸道內(nèi)微生態(tài)的穩(wěn)定，有利于食物在小腸內(nèi)的消化、吸收和利用，提高食物的消化利用率和仔豬的生產(chǎn)性能。

4 結(jié)論

在基礎(chǔ)日糧中添加丁酸鈉、牛至油及其聯(lián)合使用可調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，改善腸道健康狀況，顯著提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能。