◆重慶市育才中學校 劉桀睿

痤瘡丙酸桿菌（C.acnes）作為誘發(fā)痤瘡的重要因素之一，除了其本身會引發(fā)炎癥外，也可能將葡萄球菌等其他細菌帶入皮膚，造成更復雜的感染。進入青春期，很多同學因為痤瘡而苦惱，但并不清楚選擇何種藥物進行治療。

外用抗生素是治療痤瘡的藥物之一，哪種外用抗生素的抑菌效果最優(yōu)？我對此進行了探究，以期為同學們治療輕中度痤瘡提供參考。

一、實驗準備

（一）菌種選取

北京保藏生物科技有限公司保存的痤瘡丙酸桿菌ATCC11827。

（二）培養(yǎng)基選取

采用FT 液體培養(yǎng)基和CBA 固體培養(yǎng)基進行C.acnes 的活化及擴培，取代強化梭菌培養(yǎng)基。

（三）藥物選取

選擇夫西地酸鈉、克林霉素、鹽酸金霉素進行抑菌實驗。

圖1 作者與指導老師汪海（左）討論

二、實驗過程

我選擇通過高溫滅菌這一方式進行氧氣的去除和儀器的滅菌。在溶液配置方面，由于儀器不夠精確，采用“做減法”的方式進行實驗。創(chuàng)造性地使用厭氧袋加恒溫搖床的方式進行培養(yǎng)，并關閉恒溫搖床的振蕩功能。

（一）菌種活化及傳代培養(yǎng)

1.將凍干粉離心至底部圓球位置，然后用70%的酒精脫脂棉球?qū)龈晒懿粮蓛?，并將凍干管的尖端放在火焰上加熱?/p>

2.迅速滴幾滴蒸餾水至已加熱的凍干管的尖端處，尖端破裂后用鑷子輕輕敲掉凍干管尖端。

3.逐漸敲開凍干管，直至適當位置注入2 mL 無菌水溶解（剩余菌液冷凍備用)。

4.用移液槍吸取0.5 mL 菌液，快速地注射到3 個裝7 mL FT 培養(yǎng)基的試管底層，塞上試管塞，并用牛皮紙包裹，在37 ℃環(huán)境下密封培養(yǎng)48 h。

5.用移液槍吸取剩余的0.5 mL 菌液，在平板上涂布均勻，放入?yún)捬醮?、產(chǎn)氣包和指示劑，在37 ℃環(huán)境下密封培養(yǎng)48 h 備用。

6.48h 后，用移液槍吸取試管底層菌液1 mL（取長勢最好的），注射到2 個裝25 mL FT 培養(yǎng)基的錐形瓶底層、2 個7 mL FT 培養(yǎng)基的試管，用橡膠塞塞緊，在37 ℃環(huán)境下密封傳代培養(yǎng)48 h。

（二）抑菌作用比較

1.配置藥物溶液

用電子天平分別稱量夫西地酸鈉、克林霉素、鹽酸金霉素，用滅菌水配置質(zhì)量分數(shù)為20 mg/L、200 mg/L 的藥物溶液備用，如表1。

表1 藥物溶液及其對應的涂布平板編號

2.抑菌實驗比較

（1）傳代培養(yǎng)完成后，用移液槍吸取1 mL 長勢較好的菌液加入平板中，用涂布器均勻涂布到1 號至13 號平板中。14 號平板不加菌液，作為陰性空白對照。

（2）用移液槍吸取配置好的藥物100 uL 后，在已涂布好的培養(yǎng)基上打孔，之后用無菌針頭將槍頭從培養(yǎng)基中挑出。各孔中心相距25 mm 以上，與培養(yǎng)基邊緣相距15 mm 以上，在每個平板上打3 個孔。每種藥物濃度做2 次平行重復。

（3）接種完成后將所有平板分裝至厭氧培養(yǎng)袋中，迅速加入打開包裝的產(chǎn)氣袋和開口的氧氣指示劑密封，放入37 ℃環(huán)境下正置培養(yǎng)。

（4）48 h 后取出平板，測定各個平板中的抑菌圈的直徑。

3.實驗結(jié)果

（1）1—12 號涂布平板的抑菌圈直徑見表2、表3、表4（其中“＜7”表示無明顯抑菌作用，“無”表示沒有抑菌圈）。

表2 不同質(zhì)量分數(shù)的鹽酸金霉素的抑菌圈直徑

表3 不同質(zhì)量分數(shù)的夫西地酸鈉的抑菌圈直徑

表4 不同質(zhì)量分數(shù)的克林霉素的抑菌圈直徑

（2）13 號平板為陽性空白對照，14 號為陰性空白對照，如圖2。1—12 號平板的抑菌圈如圖3。

圖2 13 號陽性空白對照與14 號陰性空白對照

圖3 1—12 號平板的抑菌圈

三、實驗分析

（一）結(jié)果分析

克林霉素在高濃度環(huán)境中表現(xiàn)出較強的抗菌效果，達到了高敏，抑菌圈平均直徑約為31.14 mm，是同等條件下夫西地酸鈉抑菌圈直徑的兩倍以上。在低濃度環(huán)境中，兩者的抑菌圈直徑差別不明顯。

在低濃度環(huán)境中，鹽酸金霉素的抑菌圈直徑不明顯，而在高濃度環(huán)境中的抑菌圈直徑大于夫西地酸鈉的，但數(shù)值不穩(wěn)定，出現(xiàn)了較多未產(chǎn)生抑菌圈的情況。

綜上所得，在低濃度環(huán)境中，抑菌作用從大到小依次為克林霉素（中敏）、夫西地酸鈉（中敏）、鹽酸金霉素（鈍敏）；在高濃度環(huán)境中，抑菌作用從大到小依次為克林霉素（高敏）、鹽酸金霉素（中敏）、夫西地酸鈉（中敏）。

（二）誤差分析

鹽酸金霉素和夫西地酸鈉的抑菌圈在48 h 后繼續(xù)放置了一段時間，可能導致抑菌圈內(nèi)出現(xiàn)些許菌落生長。取放平板過程中的搖晃導致藥液流動，因此在培養(yǎng)基上出現(xiàn)了少許未生長菌落的不規(guī)則抑菌斑紋。

四、實驗結(jié)論

由C.acnes 侵入皮脂腺引起的痤瘡，通常以局部外用抗生素的方案進行治療。我通過比較鹽酸金霉素、克林霉素、夫西地酸鈉對痤瘡丙酸桿菌ATCC11827 的抑菌作用效果，發(fā)現(xiàn)對于由C.acnes 感染引起的輕中度痤瘡，藥物選擇優(yōu)先級依次為克林霉素、夫西地酸鈉、鹽酸金霉素。建議局部外用克林霉素類和夫西地酸類藥物對尋常性痤瘡進行治療。

專家點評

文章比較了不同抗生素在低濃度和高濃度下的抑菌效果，提供了科學依據(jù)和實驗證據(jù)。這種實驗設計有助于評估抗生素的敏感性和抑菌效果，對研究抗菌治療的有效性具有科學性。文章還提供了對C.acnes 感染引起的痤瘡的治療方案建議，通過比較不同抗生素的抑菌效果，得出局部應用克林霉素、夫西地酸鈉對輕中度痤瘡的治療效果較好的結(jié)論，這為臨床實踐提供了實用的指導。

值得引起重視的是，文章未提及是否進行了重復實驗。為了提高實驗的可靠性，需更加嚴格地控制實驗條件，并充分進行誤差分析和排除。