楊華生，龔芬芳，柳 婷，李 婷，吳 璐

（江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004）

玉竹為百合科植物玉竹Polygonatumodoratum（Mill.）Druce 的干燥根莖，主要含有玉竹多糖、黃酮、皂苷等成分，其中玉竹多糖降血糖作用確切，是玉竹研究聚焦的成分，也是評(píng)價(jià)玉竹質(zhì)量的主要指標(biāo)［1］。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，甜味受體與降血糖作用關(guān)系密切［2］。

甜味受體屬于味覺(jué)受體第一家族成員（taste receptor family 1member，T1R）［3］。T1R 由T1R1、T1R2、T1R3 構(gòu)成，T1R2 和T1R3 以二聚體的形式構(gòu)成甜味受體。甜味受體不僅存在于味蕾感知甜味，還存在于腸道介導(dǎo)胃腸激素釋放［4］。甜味劑與T1R2／T1R3 結(jié)合后，α-gustducin 活化，cAMP上升，Ca2＋內(nèi)流，胰高血糖素樣肽-1 （glucagonlikepeptide1，GLP-1）分泌［5］。也有研究表明，甜味劑還可通過(guò)瞬時(shí)受體電位M 亞型5 （TRPM5）途徑促進(jìn)GLP-1 分泌［6］。GLP-1 不僅能促進(jìn)胰島素的分泌［7］，還能影響葡萄糖的腸道吸收。一般認(rèn)為，葡萄糖通過(guò)刷狀緣膜的鈉／葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1 （sodium-glucose cotransporter 1，SGLT-1）吸收進(jìn)入細(xì)胞，然后通過(guò)基底膜的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2 （glucose transporter 2，GLUT-2）進(jìn)入血液。研究發(fā)現(xiàn)，GLP-1 的釋放是由刷狀緣膜上SGLT-1 介導(dǎo)的［8］。因此，本研究采用高脂高糖飲食聯(lián)合鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病模型，研究玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠空腹血糖、血脂、胰臟和肝臟組織形態(tài)、糖耐量、GLP-1、胰島素及甜味受體信號(hào)通路中信號(hào)蛋白T1R2、T1R3、α-gustducin、TRPM5、SGLT-1、GLUT-2 mRNA 表達(dá)的影響，并進(jìn)一步采用細(xì)胞模型驗(yàn)證，從甜味受體的角度闡明玉竹多糖降血糖機(jī)理，為玉竹的應(yīng)用及評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 羅氏LightCycler? 96 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀、羅氏活力型血糖儀（瑞士Roche 公司）；核酸蛋白測(cè)定儀（美國(guó)賽默飛公司）； 激光共聚焦顯微鏡、倒置顯微鏡（德國(guó)徠卡公司）； 生化培養(yǎng)箱（上海博泰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）； 多功能酶標(biāo)儀（瑞士Tecan 公司）； GEL DOC XR＋凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)Bio-Rad 公司）； DYY-7C 型電泳儀（北京六一儀器有限公司）。

1.2 藥物與試劑 玉竹飲片購(gòu)自安徽道源堂中藥飲片有限公司，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)付小梅教授鑒定為百合科植物玉竹Polygonatumodoratum（Mill.）Druce 的干燥根莖。M5 Realtime PCR Super mix（批號(hào)21DB2535，北京聚合美生物科技有限公司）； GLP-1 試劑盒（批號(hào)R0996G011S，武漢菲恩生物科技有限公司）； 胰島素試劑盒 （批號(hào)A322001245，杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司）；膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、cAMP 試劑盒 （ 批號(hào) 20210106、20210107、20210107、20210106、20210611，南京建成生物工程研究所有限公司）； 蘇木素染色液、伊紅染色液、鏈脲佐菌素（STZ）、檸檬酸鈉緩沖液（批號(hào)20210226、20210204、616S0210、A20201109，北京索萊寶科技有限公司）； 鹽酸二甲雙胍（批號(hào)ABS0267，中美上海施貴寶制藥有限公司）； RNA提取試劑盒（批號(hào)20210424，北京聚合美生物科技有限公司）； 透析膜 （ 3 000 Da，批號(hào)SP132680，上海源葉生物科技有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞株 SPF 級(jí)SD 雄性大鼠，體質(zhì)量（180±20）g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司［實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK （湘）2019-0004］，飼養(yǎng)于江西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房，環(huán)境室溫20～25 ℃，相對(duì)濕度40% ～60%，12 h 光照和12 h 黑暗交替，自由進(jìn)食飲水，實(shí)驗(yàn)操作均符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用指導(dǎo)原則，實(shí)驗(yàn)方案取得江西中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn) （倫理號(hào)JZSYDWLL-20201215）。人十二指腸腺癌細(xì)胞HuTu-80 細(xì)胞株，購(gòu)自上海富衡生物科技有限公司。

2 方法

2.1 玉竹多糖的制備及表征 取玉竹飲片，粉碎，加水回流提取2 次，每次2 h，過(guò)濾，合并濾液，濃縮至生藥量0.25 g／mL。取提取液，加適量Sewage 試劑，振蕩搖勻，收集上清液，重復(fù)操作5次； 合并上清液，加入乙醇，冷藏，收集沉淀，干燥，得玉竹粗多糖。取玉竹粗多糖適量，超純水溶解，使用3 500 Da 透析膜去除小分子物質(zhì)，濃縮干燥即得玉竹純化多糖。采用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖的含量，采用考馬斯亮藍(lán)G-250 法測(cè)定蛋白質(zhì)的含量，采用HPLC-ELSD 法測(cè)定低分子糖的含量，采用PMP 柱前衍生-HPLC 法分析玉竹多糖中單糖的組成，采用紅外光譜法分析玉竹多糖中的官能團(tuán)結(jié)構(gòu)，對(duì)玉竹多糖進(jìn)行表征。

2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

2.2.1 模型制備、分組及給藥 將大鼠隨機(jī)分為正常組（8 只）和造模組（40 只），正常組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng)，造模組大鼠給予高脂高糖飼料（66.5%基礎(chǔ)飼料＋10%豬油＋20%蔗糖＋2.5%膽固醇＋1% 膽酸鈉）喂養(yǎng)，飼養(yǎng)4 周后，禁食12 h，腹腔注射2% STZ ［30 mg／kg，溶于0.1 mmol／L 檸檬酸緩沖液（pH 4.5）］，1 周后再次禁食12 h，腹腔注射2% STZ，72 h 后測(cè)定大鼠空腹血糖，空腹血糖值≥11.1 mmol／L，表明造模成功［9］。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、二甲雙胍組（200 mg／kg）和玉竹多糖低、中、高劑量組 （100、200、400 mg／kg，按臨床劑量及純化多糖得率換算），每天灌胃給藥1 次，持續(xù)8 周。

2.2.2 空腹血糖測(cè)定 給藥前及給藥后的第2、4、6、8 周末，禁食12 h 后尾靜脈取血，采用血糖儀測(cè)定大鼠的空腹血糖 （fasting blood glucose，F(xiàn)BG）。

2.2.3 口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)及血清GLP-1、胰島素檢測(cè) 給藥第7 周末，各組大鼠禁食過(guò)夜，然后以2 g／kg 葡萄糖溶液灌胃，分別在灌胃后0、0.5、1、1.5、2 h 這5 個(gè)時(shí)間點(diǎn)，尾靜脈取血，采用血糖儀測(cè)定血糖值，繪制“時(shí)間-血糖” 曲線(xiàn)，并計(jì)算其血糖曲線(xiàn)下面積（AUC）［10］。同時(shí)，在相同的時(shí)間點(diǎn)，分別從眼瞼內(nèi)采集血樣，離心，收集血清，嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)各組大鼠血清GLP-1、胰島素水平。

2.2.4 血脂水平檢測(cè) 給藥結(jié)束后，各組大鼠禁食12 h，腹腔注射10%水合氯醛進(jìn)行麻醉，腹主動(dòng)脈取血，室溫靜置4 h，4 ℃、3 000 r／min 離心10 min，分離血清，按試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)大鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C 水平。

2.2.5 胰臟、肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察 給藥結(jié)束后，麻醉大鼠，取胰臟、肝臟組織于4%多聚甲醛中固定24 h，流水沖洗20 min，梯度乙醇脫水，常規(guī)石蠟包埋、切片，HE 染色，于光學(xué)顯微鏡下觀察胰臟、肝臟組織形態(tài)。

2.2.6 RT-qPCR 法檢測(cè)回腸組織甜味信號(hào)表達(dá)給藥結(jié)束后，麻醉大鼠，取回腸于-80 ℃超低溫冰箱保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，取回腸組織約30 mg 于勻漿器中，按RNA 提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA 后進(jìn)行PCR 反應(yīng)。以β-actin為內(nèi)參，引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，序列見(jiàn)表1。擴(kuò)增反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性60 s，95 ℃變性15 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸45 s，共50 個(gè)循環(huán)，最后另外獲取熔解曲線(xiàn)。每個(gè)樣品設(shè)3 個(gè)平行孔，反應(yīng)結(jié)束后，得到各孔循環(huán)閾值（CT值），采用2-ΔΔCT法計(jì)算各目的基因mRNA 相對(duì)表達(dá)量。

表1 引物序列ⅠTab.1 Primer sequences Ⅰ

2.3 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

2.3.1 細(xì)胞內(nèi)cAMP 水平及細(xì)胞分泌GLP-1 水平檢測(cè) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HuTu-80 細(xì)胞，按每孔4×105個(gè)的密度接種于6 孔板中，細(xì)胞貼壁后吸去培養(yǎng)基，分別加入低、高劑量玉竹多糖溶液（0.1、0.4 mg／mL），正常組加入等體積細(xì)胞培養(yǎng)液，孵育48 h 后吸去培養(yǎng)基，加入無(wú)糖培養(yǎng)基孵育3 h，再加入0.2 mg／mL 葡萄糖溶液孵育15 min，棄培養(yǎng)基，加裂解液，收集細(xì)胞，離心后取上清，按試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)cAMP 水平。另取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HuTu-80 細(xì)胞，分組及操作同上，加入0.2 mg／mL 葡萄糖溶液孵育1 h 后，吸取細(xì)胞培養(yǎng)液于EP 管內(nèi)，離心后取上清液，按試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)細(xì)胞外GLP-1 水平。

2.3.2 激光共聚焦法檢測(cè)鈣離子熒光強(qiáng)度 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HuTu-80 細(xì)胞，以1×106／mL 的密度接種于激光共聚焦培養(yǎng)皿底孔中，靜置，貼壁。按“2.3.1” 項(xiàng)下方法分組及給藥處理，加入無(wú)糖培養(yǎng)基孵育3 h，避光加入150 μL 2 μmol／L Fluo-3／AM，37 ℃孵育10 min，PBS 清洗 2 次，再加入0.2 mg／mL葡萄糖溶液孵育5 min，吸去培養(yǎng)液，PBS 清洗2 次，加入PBS 緩沖液后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)15 min，于激光共聚焦顯微鏡下觀察并拍照，采用Image Pro Plus 軟件對(duì)圖片進(jìn)行分析，測(cè)定每張圖片的熒光強(qiáng)度總和，以單位面積熒光強(qiáng)度為指標(biāo)，分析Ga2＋水平［11］。

2.3.3 RT-qPCR 法檢測(cè)HuTu-80 細(xì)胞甜味受體表達(dá) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HuTu-80 細(xì)胞，以1×106／mL的密度接種于6 孔板中，按“2.3.1” 項(xiàng)下方法分組及給藥處理，孵育48 h 后，利用RNA 提取試劑盒提取HuTu-80 細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行PCR反應(yīng)，操作步驟同“2.2.6” 項(xiàng)。以GAPDH為內(nèi)參，引物序列見(jiàn)表2。

表2 引物序列ⅡTab.2 Primer sequences Ⅱ

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過(guò)SPSS 20.0 軟件進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)以（±s）表示，各組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 玉竹多糖的表征 玉竹經(jīng)過(guò)水提、祛蛋白、醇沉、去小分子物質(zhì)后，得到玉竹純化多糖，其純度為88.29%，雜質(zhì)蛋白質(zhì)含量為0.19%，且不含有葡萄糖、木糖、鼠李糖、果糖、蔗糖等低分子糖，見(jiàn)圖1A ～1B。單糖組成測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1C ～1D，結(jié)果顯示，玉竹多糖由甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖5 種單糖組成，其摩爾比為21.08 ∶2.31 ∶14.13 ∶3.32 ∶0.41。紅外分析圖見(jiàn)圖1E，研究表明，3 364.21 cm-1為羥基的伸縮振動(dòng)峰，2 934.19 cm-1的強(qiáng)肩峰是糖環(huán)中的C-H伸縮振動(dòng)峰，這2 個(gè)是典型的多糖特征峰［12］；1 629 cm-1、1 421.95 cm-1表明多糖中含有糖醛酸［13］； 1 024.14 cm-1處的吸收峰表明了吡喃環(huán)的存在［14］； 930.88 cm-1處出現(xiàn)的強(qiáng)吸收峰，表明玉竹多糖主要由β 型糖苷鍵組成［15］； 816.18 cm-1處的尖峰表明可能存在α 型糖苷鍵［16］。以上結(jié)果表明，玉竹多糖是一種含有羧基、β 型糖苷鍵、吡喃環(huán)，可能含有α 型糖苷鍵的多糖。

圖1 玉竹多糖的純度、單糖組成、官能團(tuán)分析Fig.1 Purity，monosaccharide composition and functional group analysis of P.odoratum polysaccharides

3.2 玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠空腹血糖的影響 如圖2 所示，與正常組比較，模型組大鼠FBG 水平升高（P＜0.05）； 與模型組比較，給藥第2 周起，玉竹多糖中、高劑量組和二甲雙胍組大鼠FBG 水平降低（P＜0.05）。

圖2 給藥期間大鼠FBG 水平變化（x±s，n＝8）Fig.2 Changes of rat FBG level during drug administration （x±s，n＝8）

3.3 玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠口服葡萄糖耐量的影響 如圖3A 所示，正常組大鼠基礎(chǔ)血糖低，口服葡萄糖后，血糖升高，但0.5 h 后逐漸下降； 模型組大鼠基礎(chǔ)血糖高，口服葡萄糖后，血糖持續(xù)升高，1.5 h 后才開(kāi)始逐漸下降，而玉竹多糖高劑量組大鼠1.0 h 后開(kāi)始下降。進(jìn)一步計(jì)算各組AUC值，如圖3B 所示，與正常組比較，模型組大鼠AUC 增加（P＜0.05）； 與模型組比較，玉竹多糖中、高劑量組和二甲雙胍組大鼠AUC 降低（P＜0.05）。

圖3 玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠口服葡萄糖耐量的影響（x±s，n＝8）Fig.3 Effects of P.odoratum polysaccharides on OGTT of diabetic rat （x±s，n＝8）

3.4 玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠血清GLP-1、胰島素分泌的影響 如圖4A 所示，與正常組比較，模型組大鼠血清GLP-1 水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均降低（P＜0.05）； 與模型組比較，玉竹多糖中、高劑量組和二甲雙胍組大鼠血清GLP-1 水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均升高（P＜0.05）。如圖4B 所示，與正常組比較，模型組大鼠血清胰島素水平在0、0.5、1、1.5 h時(shí)均降低（P＜0.05），在2 h 時(shí)升高（P＜0.05）；與模型組比較，玉竹多糖中、高劑量組和二甲雙胍組大鼠血清胰島素水平在各時(shí)間點(diǎn)均升高（P＜0.05），且在1 h 時(shí)出現(xiàn)胰島素分泌高峰。

圖4 玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠血清GLP-1 及胰島素分泌的影響（x±s，n＝8）Fig.4 Effects of P.odoratum polysaccharides on serum levels of GLP-1 and insulin in diabetic rat （x±s，n＝8）

3.5 玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠血脂水平的影響 如表3 所示，與正常組比較，模型組大鼠血清TG、TC、LDL-C 水平升高（P＜0.05），HDL-C 水平降低（P＜0.05）； 與模型組比較，玉竹多糖中、高劑量組和二甲雙胍組大鼠血清TG、TC、LDL-C 水平降低（P＜0.05），玉竹多糖高劑量組大鼠血清HDL-C 水平升高（P＜0.05）。

表3 玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠血脂水平的影響（mmol／L，x±s，n＝8）Tab.3 Effects of P.odoratum polysaccharides on blood lipid level of diabetic rat models （mmol／L，±s，n＝8）

表3 玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠血脂水平的影響（mmol／L，x±s，n＝8）Tab.3 Effects of P.odoratum polysaccharides on blood lipid level of diabetic rat models （mmol／L，±s，n＝8）

注：與正常組比較，＃P＜0.05； 與模型組比較，▲P＜0.05。

組別TCTGLDL-CHDL-C正常組1.18±0.230.63±0.070.39±0.091.32±0.19模型組2.73±0.18＃2.15±0.22＃1.22±0.06＃0.80±0.24＃二甲雙胍組1.60±0.19▲1.04±0.24▲0.68±0.06▲1.20±0.26▲玉竹多糖低劑量組2.72±0.312.01±0.251.17±0.110.88±0.21玉竹多糖中劑量組1.91±0.17▲1.44±0.26▲0.80±0.06▲0.96±0.19玉竹多糖高劑量組1.76±0.22▲1.18±0.21▲0.73±0.07▲1.10±0.18▲

3.6 玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠胰臟、肝臟組織形態(tài)的影響 如圖5 所示，正常組大鼠胰島組織結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞分布均勻； 而模型組大鼠胰島組織萎縮變形，邊界模糊不清，細(xì)胞空泡變性； 與模型組比較，玉竹多糖中、高劑量組大鼠胰島組織損傷得到改善，胰島面積增大，結(jié)構(gòu)趨向完整，邊界清晰，細(xì)胞數(shù)目增多。同時(shí)，正常組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)正常，且沒(méi)有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)； 模型組大鼠肝索紊亂，肝細(xì)胞質(zhì)有一定程度的空泡結(jié)構(gòu)，組織結(jié)構(gòu)紊亂、排列不規(guī)則，細(xì)胞內(nèi)液態(tài)積聚增多； 與模型組比較，玉竹多糖中、高劑量組大鼠肝細(xì)胞損傷得到改善，肝臟細(xì)胞內(nèi)液態(tài)積聚減少，受損細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞形態(tài)、個(gè)體間排列情況均有所改善。

圖5 玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠胰臟、肝臟組織形態(tài)的影響（×100）Fig.5 Effects of P.odoratum polysaccharides on the morphology of pancreas and liver in diabetic rat （×100）

3.7 玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠甜味受體通路相關(guān)蛋白mRNA 表達(dá)的影響 如圖6 所示，與正常組比較，模型組大鼠回腸組織T1R2、T1R3、αgustducin、TRPM5 mRNA 表達(dá)降低（P＜0.05），而SGLT-1、GLUT-2 mRNA 表達(dá)升高（P＜0.05）； 與模型組比較，玉竹多糖高劑量組T1R2、T1R3、αgustducin、TRPM5 mRNA 表達(dá)升高（P＜0.05），中劑量組T1R3、TRPM5 mRNA 表達(dá)升高 （P＜0.05），各劑量組SGLT-1、GLUT-2 mRNA 表達(dá)無(wú)明顯變化（P＞0.05）。

圖6 玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠甜味受體通路相關(guān)蛋白mRNA 表達(dá)的影響（x±s，n＝8）Fig.6 Effects of P.odoratum polysaccharides on mRNA expressions of sweet receptors in diabetic rat （x±s，n＝8）

3.8 玉竹多糖對(duì)HuTu-80 細(xì)胞cAMP、Ca2＋、GLP-1 水平和T1R2、T1R3 mRNA 表達(dá)的影響 如圖7A 所示，與正常組比較，玉竹多糖各劑量組細(xì)胞內(nèi)cAMP、GLP-1 水平均升高（P＜0.05）。如圖7B 所示，與正常組比較，玉竹多糖各劑量組細(xì)胞T1R2、T1R3 mRNA 表達(dá)升高（P＜0.05）。如圖7C所示，與正常組（0.007±0.002）比較，玉竹多糖低、高劑量組細(xì)胞內(nèi)Ca2＋熒光強(qiáng)度 （0.019 ±0.002、0.044±0.008）增強(qiáng)（P＜0.05）。

圖7 玉竹多糖對(duì)HuTu-80 細(xì)胞cAMP、Ca2＋、GLP-1 水平和T1R2、T1R3 mRNA 表達(dá)的影響（±s，n＝6）Fig.7 Effects of P.odoratum polysaccharides on cAMP，Ca2＋，GLP-1 levels and T1R2，T1R3 mRNA expressions in HuTu-80 cells （±s，n＝6）

4 討論

糖尿病是一組由多種病因引起的，胰島素分泌缺陷和（或）作用受損，以慢性高血糖為特征的內(nèi)分泌代謝性疾病。西醫(yī)學(xué)上的“糖尿病” 與中醫(yī)學(xué)的“消渴” 有一定關(guān)聯(lián)，消渴的基本病機(jī)為“陰虛燥熱”。玉竹味甘，甘能補(bǔ)陰。甘味，又可稱(chēng)為“甜味”，激動(dòng)舌頭味蕾上的甜味受體即可感覺(jué)到“甜味”，激動(dòng)胃腸道的甜味受體則可促進(jìn)GLP-1 的分泌，降低血糖，改善 “陰虛” 證／癥狀。因此，“甜味受體” 在一定程度上可把糖尿病、陰虛聯(lián)系起來(lái)。研究表明，糖尿病發(fā)生過(guò)程中，甜味受體及其信號(hào)分子α-gustducin、TRPM5表達(dá)下調(diào)，GLP-1 分泌減少［17］?；诒狙芯縿?dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，結(jié)合文獻(xiàn)［18-20］報(bào)道，推測(cè)玉竹多糖主要通過(guò)促進(jìn)T1R2、T1R3、αgustducin、TRPM5 mRNA 表達(dá)，增強(qiáng)甜味受體信號(hào)通路的強(qiáng)度，在體內(nèi)葡萄糖的參與下，促進(jìn)GLP-1的分泌，從而發(fā)揮降血糖作用。因此，可從“甜味受體” 的角度，同時(shí)闡釋玉竹治療陰虛證、糖尿病的作用機(jī)制，即多糖降血糖作用與甜味受體T1R2、T1R3 及信號(hào)分子α-gustducin、TRPM5 的表達(dá)密切相關(guān)。

SGLT-1、GLUT-2 是腸道吸收葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)體，SGLT-1 與Na＋、葡萄糖結(jié)合成復(fù)合物，以主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的方式將葡萄糖轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)，而GLUT-2 則通過(guò)被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的方式將葡萄糖轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)，二者維持機(jī)體葡萄糖代謝平衡［21］。研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病會(huì)導(dǎo)致SGLT-1 和GLUT-2 在腸道中的表達(dá)量異常增加［22］。本研究發(fā)現(xiàn)，玉竹多糖對(duì)糖尿病大鼠回腸組織SGLT-1、GLUT-2 mRNA 表達(dá)無(wú)明顯影響，提示玉竹多糖降血糖作用與SGLT-1、GLUT-2 無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。

中藥多糖是一種由糖苷鍵構(gòu)成的高分子物質(zhì)。研究表明，多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗凝血、護(hù)肝、降血糖等藥理活性［23］。多糖在臨床上可制備成注射劑，也可開(kāi)發(fā)成口服制劑，且含多糖的中藥，主要給藥方式為口服。有報(bào)道稱(chēng)，多糖是通過(guò)水解為寡糖起作用［24］，但目前多認(rèn)為，多糖起效的部位是在“腸道”，如多糖可通過(guò)腸道菌群［25］、緊密連接蛋白［26］等發(fā)揮藥理作用。進(jìn)一步研究表明，多糖在腸道中可以通過(guò)激活多種核受體調(diào)控相關(guān)蛋白的表達(dá)［27］。因此，本研究從腸道甜味受體的角度闡明玉竹多糖的降血糖機(jī)制，也在一定程度上證實(shí)多糖的作用部位是在“腸道”，但玉竹多糖是通過(guò)何種機(jī)制影響腸道中甜味受體信號(hào)蛋白的表達(dá)，還有待深入研究。