段云峰，許永劼，楊婷婷，黃昶煜東，朱麗英，李興，潘衛(wèi)△

糖尿病腦?。╠iabetes encephalopathy，DE）是糖尿病的嚴(yán)重慢性并發(fā)癥之一，認(rèn)知功能受損是其主要表現(xiàn)。糖尿病并發(fā)癥和控制試驗（diabetes complications and control trial，DCCT）表明，糖尿病早期的高血糖對患者并發(fā)癥的發(fā)生與進(jìn)展具有持久的影響，高血糖對患者的持久損害未能隨控制血糖而改善，學(xué)者將此現(xiàn)象稱為“代謝記憶”［1-2］。研究發(fā)現(xiàn)，降糖治療的糖尿病患者依舊存在認(rèn)知功能的衰退，可能與“代謝記憶”有關(guān)［3-5］，然而目前關(guān)于DE患者代謝記憶的研究少見。高血糖通過調(diào)節(jié)表觀遺傳修飾來影響基因表達(dá)，持續(xù)的表觀遺傳的改變可能導(dǎo)致代謝記憶的發(fā)生［6］。同時已有研究證實海馬神經(jīng)元凋亡引起的DE 受組蛋白乙?；揎椀恼{(diào)控［7-8］，該過程可通過組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（histone acetyltransferases，HAT）和組蛋白去乙?；福╤istone deacetylases，HDAC）動態(tài)調(diào)節(jié)。課題組前期也發(fā)現(xiàn)高糖通過抑制海馬神經(jīng)元組蛋白乙酰化修飾導(dǎo)致凋亡增加［9-10］。然而，組蛋白乙?；揎棶惓５牟豢赡孓D(zhuǎn)是否為海馬神經(jīng)元“代謝記憶”產(chǎn)生的關(guān)鍵目前尚不清楚。本研究旨在構(gòu)建海馬神經(jīng)元“代謝記憶”細(xì)胞模型，探究“代謝記憶”產(chǎn)生機(jī)制，為后續(xù)研究DE的發(fā)病機(jī)制提供應(yīng)用模型。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 小鼠海馬神經(jīng)元HT-22細(xì)胞購自上海中喬新舟生物科技有限公司；兔源β-肌動蛋白（β-actin）多克隆抗體、兔源HDAC4多克隆抗體、鼠源B淋巴細(xì)胞瘤-2（Bcl-2）單克隆抗體、鼠源Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）單克隆抗體和鼠源胱天蛋白酶3（Caspase-3）多克隆抗體均購于武漢三鷹生物技術(shù)有限公司；辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記羊抗兔二抗及羊抗鼠二抗購于南京巴傲得生物科技有限公司；膜聯(lián)蛋白Ⅴ-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）細(xì)胞凋亡檢測試劑盒購于江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司；增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光（ECL）試劑盒購自大連美侖生物技術(shù)有限公司；HAT和HDAC酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒購自上海酶聯(lián)生物技術(shù)有限公司；CCK-8檢測試劑盒購自日本同仁化學(xué)研究所；乳酸脫氫酶（lacate dehydrogenase，LDH）活性檢測試劑盒、二喹啉甲酸（BCA）試劑盒和RIPA 高效裂解液購自北京索萊寶科技有限公司；流式細(xì)胞儀購于美國貝克曼庫爾特有限公司；倒置顯微鏡購于日本Nikon公司；蛋白免疫印跡電泳儀、IMARK型酶標(biāo)儀、ECL曝光儀購于美國Bio-Rad公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與處理 將HT-22細(xì)胞分為以下各組：常糖組（NG 4、6、8 組，25 mmol/L 葡萄糖分別培養(yǎng)4、6、8 d），高糖組（HG 4、6、8 組，55 mmol/L 葡萄糖培養(yǎng)4、6、8 d），代謝記憶組（HG2NG2、HG2NG4、HG2NG6、HG4NG2、HG4NG4 組，即55 mmol/L 葡萄糖培養(yǎng)2 d 轉(zhuǎn)25 mmol/L 葡萄糖培養(yǎng)2、4 或6 d，55 mmol/L葡萄糖培養(yǎng)4 d轉(zhuǎn)25 mmol/L葡萄糖培養(yǎng)2 d或4 d），每24 h更換1次培養(yǎng)基。

1.2.2 CCK-8 法測定細(xì)胞活力 將HT-22 細(xì)胞以1×105/mL的密度接種在96孔板中，置于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞貼壁后根據(jù)1.2.1所述進(jìn)行分組處理，每組設(shè)置5個復(fù)孔。每孔加入100μL細(xì)胞懸液。待作用時間到達(dá)后，棄去原培養(yǎng)基，加入細(xì)胞活性檢測試劑（10μL CCK-8 檢測試劑，90μL 培養(yǎng)基），避光置于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育2.5 h 后用酶標(biāo)儀在450 nm 波長處測定各組光密度（OD）值。按照以下公式計算細(xì)胞存活率：（實驗組OD均值-空白組OD均值）/（對照組OD均值-空白組OD均值）×100%。

1.2.3 LDH 釋放量檢測 將細(xì)胞以1×105/mL 的密度均勻接種于96孔板中，按照1.2.1所述進(jìn)行分組。每組細(xì)胞設(shè)置5個復(fù)孔，在37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，待相應(yīng)作用時間到達(dá)后，取每孔細(xì)胞上清液20 μL 置于96 孔板中，嚴(yán)格按照LDH 試劑盒說明書操作進(jìn)行，使用酶標(biāo)儀于450 nm 波長處讀取各組細(xì)胞OD值。

1.2.4 光學(xué)顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)差異 將細(xì)胞分為5組：NG4 組、NG8 組、HG4 組、HG4NG4 組和HG8 組。各組細(xì)胞按相應(yīng)條件達(dá)預(yù)定處理時間后，分別從CO2培養(yǎng)箱中取出，于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)、數(shù)量及形態(tài)，并拍攝記錄。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡 流式細(xì)胞儀檢測海馬神經(jīng)元的凋亡情況，將海馬神經(jīng)元接種到96孔板中，按1.2.4分組。待細(xì)胞培養(yǎng)到相應(yīng)時間后用0.125%胰酶進(jìn)行消化，收集細(xì)胞。然后加入500μL結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞，在細(xì)胞懸液中分別加入5 μL Annexin V-FITC 和PI，并在室溫避光5～10 min后用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。每組重復(fù)3次。

1.2.6 ELISA 法檢測HAT 和HDAC 活性 將HT-22 細(xì)胞以1 000個/孔的密度接種于96孔板中，按1.2.4分組。培養(yǎng)48 h后，收集細(xì)胞上清液進(jìn)行ELISA 檢測。孵育和洗滌后，每孔加入100μL 顯色試劑，避光孵育15 min。然后，在每孔中加入50μL 終止液。最后用酶標(biāo)儀在450 nm 波長下測定每個孔的OD值。

1.2.7 Western blot 檢測蛋白表達(dá)水平 將細(xì)胞按1.2.4 分組，使用含有蛋白酶抑制劑的RIPA 裂解試劑來裂解5 組細(xì)胞。采用BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒測量蛋白質(zhì)濃度，通過10%十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳分離待測蛋白質(zhì)，并電轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜。室溫下用5%牛血清白蛋白密封膜2 h，隨后將膜分別放入β-actin（1∶5 000）、Caspase-3（1∶2 000）、Bcl-2（1∶1 000）、Bax（1∶1 000）和HDAC4（1∶1 000）一抗中，并在搖床上4 ℃孵育過夜。TBST 洗膜3 次后，用HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG 二抗（1∶5 000）或羊抗鼠IgG 二抗（1∶2 000）室溫孵育2 h。使用ECL 試劑盒對各組組的蛋白條帶進(jìn)行曝光顯影。最后使用軟件Image J 1.6.0對灰度值進(jìn)行分析和比較，每種蛋白至少重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 21.0 和GraphPad Prism 9.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以表示，每個實驗重復(fù)3次。2組間比較采用t檢驗，多組比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用Tukey檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同高糖作用時間對細(xì)胞存活率的影響 相同干預(yù)時間下，HG4、6、8 組細(xì)胞存活率均較NG 組下降（P＜0.05）；干預(yù)4、6 d 時，HG2NG2、HG2NG4、HG4NG2組細(xì)胞相較于相同作用時間的HG4、6組存活率均升高（P＜0.05）；與HG8 組相比，HG4NG4 組細(xì)胞存活率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可能存在代謝記憶，為理想的高糖“代謝記憶”細(xì)胞模型，見圖1。

Fig.1 Comparison of cell survival rates between three groups圖1 各組細(xì)胞存活率的比較

2.2 不同高糖作用時間對細(xì)胞LDH 釋放量的影響 常糖組（取NG 4、6、8 組平均值）、HG4 組、HG6組、HG8 組、HG2NG2 組、HG2NG4 組、HG2NG6 組、HG4NG2組、HG4NG4組LDH釋放量（OD值）分別為0.321±0.007、 0.350±0.005、 0.373±0.005、 0.380±0.004、 0.331±0.005、 0.323±0.007、 0.321±0.003、0.362±0.005和0.380±0.005，LDH釋放量變化與細(xì)胞存活率一致；相同干預(yù)時間下，HG4、6、8 組LDH 釋放量較NG 組均增加（P＜0.01）；干預(yù)4、6 d 時，HG2NG2、HG2NG4、HG4NG2 組細(xì)胞相較于相同作用時間的HG4、6 組LDH 釋放量降低（P＜0.05）；與HG8組相比，HG4NG4組釋放量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3 各組細(xì)胞顯微鏡下形態(tài)變化 通過對各組細(xì)胞顯微鏡下的形態(tài)學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)NG4、NG8組細(xì)胞交織成致密網(wǎng)狀，生長狀態(tài)良好，細(xì)胞呈梭形，突觸結(jié)構(gòu)明顯。而HG4、HG8組細(xì)胞生長受抑制，突觸結(jié)構(gòu)消失，胞體呈圓形。HG4NG4 組即使在轉(zhuǎn)換為25 mmol/L葡萄糖培養(yǎng)后的細(xì)胞數(shù)量雖有增多，但細(xì)胞形態(tài)依舊未能恢復(fù)，見圖2。

Fig.2 Morphological changes of cells in each group under optical microscope(×200)圖2 光學(xué)顯微鏡下各組細(xì)胞形態(tài)變化（×200）

2.4 各組細(xì)胞凋亡情況比較 NG4組、HG4組、NG8組、HG4NG4 組、HG8 組凋亡率（%）分別為2.43±0.20、24.23±0.9、7.83±0.25、24.90±1.20、27.73±0.93（n=3，F(xiàn)=611.061，P＜0.01）。分別與NG4、NG8 組相比，HG4、HG8組細(xì)胞凋亡率增加（P＜0.05）；與NG8組相比，HG4NG4 組細(xì)胞凋亡率顯著增加（P＜0.05）。見圖3。

Fig.3 Flow cytometry of each group圖3 各組細(xì)胞流式圖

2.5 各組HAT 和HDAC 水平比較 分別與NG4、NG8組相比，HG4、HG8組HAT和HDAC水平均增高（P＜0.05）；與NG8 組相比，HG4NG4 組HAT 和HDAC水平增高（P＜0.05）；與HG8組相比，HG4NG4組細(xì)胞HAT、HDAC水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

Tab.1 Comparison of HAT and HDAC activities of HT-22 cells between five groups表1 各組間HT-22細(xì)胞HAT及HDAC活性比較（n=3，OD450，）

Tab.1 Comparison of HAT and HDAC activities of HT-22 cells between five groups表1 各組間HT-22細(xì)胞HAT及HDAC活性比較（n=3，OD450，）

＊＊P＜0.01；a與NG4組比較，b與NG8組比較，P＜0.05。

組別NG4組NG8組HG4組HG8組HG4NG4組F HAT 0.61±0.03 0.62±0.02 0.80±0.01a 0.87±0.06b 0.87±0.02b 72.467＊＊HDAC 0.61±0.02 0.61±0.03 0.82±0.01a 1.05±0.05b 1.00±0.07b 123.289＊＊

2.6 各組HDAC4、Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表達(dá)水平比較 分別與NG4、NG8 組相比，HG4 組、HG8組的HDAC4、Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)增加，Bcl-2表達(dá)水平降低（P＜0.01）；與NG8 組相比，HG4NG4組HDAC4、Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)增加，Bcl-2表達(dá)水平降低（P＜0.01），而HG4NG4組各蛋白與HG8組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2、圖4。

Tab.2 Expression of HDAC4 and apoptosis related proteins in each group of cells表2 各組細(xì)胞HDAC4及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況（n=3，）

Tab.2 Expression of HDAC4 and apoptosis related proteins in each group of cells表2 各組細(xì)胞HDAC4及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況（n=3，）

＊＊P＜0.01；a與NG4組比較，b與NG8組比較，P＜0.05。

組別NG4組NG8組HG4組HG8組HG4NG4組F HDAC4 0.37±0.01 0.36±0.01 0.54±0.06a 0.77±0.03b 0.77±0.02b 113.820＊＊Bax 0.29±0.01 0.28±0.01 0.53±0.02a 0.60±0.01b 0.61±0.02b 427.796＊＊Bcl-2 0.78±0.02 0.76±0.02 0.66±0.03a 0.47±0.01b 0.49±0.02b 127.964＊＊Caspase-3 0.28±0.01 0.26±0.01 0.63±0.01a 0.74±0.01b 0.75±0.03b 464.712＊＊

Fig.4 HDAC4,Bax,Bcl-2 and Caspase-3 protein expression圖4 HDAC4、Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表達(dá)情況

3 討論

DE 可直接影響患者的認(rèn)知功能［11］。然而，DE的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，至今尚未闡明。臨床上糖尿病患者大多血糖控制良好，但仍有不少患者出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙，DE的發(fā)生發(fā)展是否存在高血糖的代謝記憶效應(yīng)值得探究?；凇按x記憶”效應(yīng)探究糖尿病不同并發(fā)癥發(fā)病機(jī)制的細(xì)胞模型已得到廣泛研究，如血管平滑肌細(xì)胞代謝記憶模型［12］、視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞代謝記憶模型［13］等。海馬體作為大腦中學(xué)習(xí)和記憶的關(guān)鍵區(qū)域，對葡萄糖穩(wěn)態(tài)的變化較為敏感［14］，因此本研究選用海馬神經(jīng)元作為對象。研究表明，DE 與海馬神經(jīng)元凋亡密切相關(guān)［15］。HT-22 細(xì)胞系作為小鼠海馬神經(jīng)元永生化細(xì)胞系，目前廣泛應(yīng)用于阿爾茨海默病以及DE等神經(jīng)退行性疾病的研究，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)相較于原代海馬神經(jīng)元，HT-22小鼠海馬神經(jīng)元受高糖及脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染影響小，細(xì)胞抗性強(qiáng)，有利于后續(xù)利用高糖對其進(jìn)行不同時間干預(yù)［16］，因此本模型構(gòu)建選用HT-22 細(xì)胞系。本研究參考Yao等［17］構(gòu)建內(nèi)皮細(xì)胞“代謝記憶”模型的構(gòu)建方法分別以高糖4 d 干預(yù)細(xì)胞之后再予以正糖培養(yǎng)4 d，由于高糖對細(xì)胞有損傷，因此本研究將各組細(xì)胞最長處理時間定為8 d。通過CCK-8及LDH釋放實驗發(fā)現(xiàn)，相同的干預(yù)時間下，只有HG4NG4組與HG8 組相比存活率和LDH 釋放量均無差異，表明HG4NG4 組更加符合文獻(xiàn)報道的“代謝記憶”現(xiàn)象，因此本研究以HG4NG4 組用于構(gòu)建神經(jīng)元“代謝記憶”模型來進(jìn)行后續(xù)實驗。本研究通過對各組細(xì)胞凋亡水平進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，與NG4 組相比，HG4 組細(xì)胞促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表達(dá)增加，而抗凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2 表達(dá)降低，流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果也表明該組細(xì)胞凋亡率增加。與NG8 組相比，HG4NG4組細(xì)胞的促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表達(dá)增加，而抗凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2 表達(dá)降低；與HG8 組相比，HG4NG4 差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示高糖對HG4NG4組HT-22 小鼠海馬神經(jīng)元的損傷存在“記憶”現(xiàn)象，這與任偉偉等［18］在人牙周膜細(xì)胞所觀察的現(xiàn)象一致，該研究發(fā)現(xiàn)與全程高糖培養(yǎng)的牙周膜細(xì)胞相比，先經(jīng)高糖培養(yǎng)再以正糖培養(yǎng)的細(xì)胞凋亡仍有增強(qiáng)。

組蛋白乙?；揎椏烧{(diào)控凋亡相關(guān)基因表達(dá)，組蛋白乙?；鳛橐环N可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾過程，受HAT 以及HDAC 動態(tài)調(diào)節(jié)，并在真核細(xì)胞的染色質(zhì)調(diào)控與基因表達(dá)中起重要作用［19］。課題組前期對HT-22 小鼠海馬神經(jīng)元的研究發(fā)現(xiàn)，高糖可通過上調(diào)其HAT 與HDAC 活性加劇細(xì)胞凋亡的發(fā)生，而何首烏提取物大黃素通過抑制HAT 與HDAC 的活性減少神經(jīng)元細(xì)胞凋亡［20］。在本研究構(gòu)建的HG4NG4 組神經(jīng)元“代謝記憶”模型中，細(xì)胞凋亡并未因葡萄糖濃度的逆轉(zhuǎn)而改善，同時其HAT 與HDAC活性高于常糖組；相較于HG8組，HG4NG4組HAT、HDAC 水平無顯著差異。Zheng 等［21］研究發(fā)現(xiàn)，沉默信息調(diào)節(jié)因子2 相關(guān)酶1（sirtuin 1，SIRT1）在高糖誘導(dǎo)的“代謝記憶”內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)降低活性減弱，而過表達(dá)的SIRT1終止了內(nèi)皮細(xì)胞的“代謝記憶”現(xiàn)象產(chǎn)生。Zhong 等［22］研究發(fā)現(xiàn)，在代謝記憶視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞中，HDAC1、HDAC2、HDAC8 活性的增高未隨高糖環(huán)境改善而改變，HDAC 持續(xù)增強(qiáng)所致的組蛋白H3 整體乙酰化水平降低的不可逆轉(zhuǎn)是糖尿病視網(wǎng)膜“代謝記憶”現(xiàn)象產(chǎn)生的重要原因。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)高糖通過上調(diào)海馬神經(jīng)元中HDAC4 的表達(dá)導(dǎo)致凋亡增加［9］，在本研究中相較于NG4組，HG4組HDAC4表達(dá)顯著升高。而與HG8組相比，HG4NG4 組細(xì)胞HDAC4 表達(dá)無差異，未因高糖環(huán)境改善而逆轉(zhuǎn)，同樣存在“記憶”現(xiàn)象。曾有學(xué)者提出“巴克假說”，即母體表觀遺傳學(xué)變化，并將這種改變傳遞給胎兒［23］。該現(xiàn)象與高糖損傷所致的“代謝記憶”相似，可見表觀遺傳學(xué)調(diào)控在其中起關(guān)鍵作用。也有研究表明，高脂飲食可致瘦素基因高度甲基化，使得該基因表達(dá)下調(diào)，這種甲基化的異常在其后代可持續(xù)存在，并且即使后代恢復(fù)正常飲食，該狀況依舊不能逆轉(zhuǎn)［24］。結(jié)合本研究結(jié)果，筆者推測構(gòu)建神經(jīng)元模型中HAT、HDAC 活性的持續(xù)改變是代謝記憶效應(yīng)產(chǎn)生的關(guān)鍵“開關(guān)”。Zhao 等［25］通過構(gòu)建人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞代謝記憶模型發(fā)現(xiàn)，高糖對SIRT1 的抑制在恢復(fù)到正常糖濃度后持續(xù)存在，SIRT1 是該細(xì)胞代謝記憶的效應(yīng)因子，同時激活SIRT1的表達(dá)可阻止“記憶”現(xiàn)象的產(chǎn)生。筆者推測神經(jīng)元模型的“代謝記憶”效應(yīng)與組蛋白乙?；揎椕芮邢嚓P(guān)，可能受HDAC4 的調(diào)控。然而，本研究尚未闡明組蛋白乙酰化修飾調(diào)控“代謝記憶”發(fā)生的具體分子機(jī)制，圍繞HDAC4的持續(xù)高表達(dá)并尋找其下游同樣存在“記憶”效應(yīng)的乙?；稽c，這將是本研究圍繞此體外“代謝記憶”模型繼續(xù)深入研究的重點。

阻止“代謝記憶”的發(fā)生是預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的重要策略［26］，DE 起病隱匿，因此單純控制血糖并不能減少糖尿病腦病的發(fā)展。由于本研究構(gòu)建的海馬神經(jīng)元“代謝記憶”模型與HAT、HDAC 活性增高有關(guān)，因此針對海馬神經(jīng)元HAT 與HDAC 的干預(yù)可作為預(yù)防“代謝記憶”產(chǎn)生的有效措施。目前，已有針對HAT、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的抑制劑作為表觀遺傳藥物應(yīng)用于腫瘤的治療［27］。有研究報道CBP/P300 乙酰轉(zhuǎn)移酶激活劑CSP-TTK21 的治療恢復(fù)了阿爾茨海默病（AD）小鼠海馬fos基因啟動子處的H2B乙?；?，上調(diào)了突觸可塑性相關(guān)基因表達(dá)，改善AD小鼠認(rèn)知功能障礙［28］。泛組蛋白去乙酰化酶抑制劑可通過抑制魚藤酮誘導(dǎo)的HT-22神經(jīng)元的HDAC活性升高來緩解炎癥與氧化應(yīng)激［29］。結(jié)合本研究發(fā)現(xiàn)HAT、HDAC 的持續(xù)激活以及HDAC4 表達(dá)增高，再選用相應(yīng)的“阻斷劑”并聯(lián)合控糖治療或許能夠終止代謝記憶的發(fā)生，這也將是本研究后續(xù)研究重點。

綜上所述，HT-22細(xì)胞經(jīng)高糖培養(yǎng)4 d后轉(zhuǎn)常糖培養(yǎng)基培養(yǎng)4 d為理想的“代謝記憶”神經(jīng)元模型，高糖對其損傷存在“記憶”效應(yīng)；神經(jīng)元“代謝記憶”的發(fā)生可能由高糖引起的組蛋白乙?；揎棶惓Ｋ?。