劉志彬

香河縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河北廊坊 065400

0 引言

奶牛環(huán)形泰勒焦蟲病是由血液原蟲環(huán)形泰勒焦蟲引起的寄生蟲傳染病，一般流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)，夏季多發(fā)，以發(fā)熱、體表淋巴結(jié)腫大和貧血為特征性臨床癥狀，主要由小亞璃眼蜱、殘緣璃眼蜱等蜱蟲傳播[1～3]。該病原體影響淋巴結(jié)、脾臟、骨髓和肝臟等造血器官[4]，導(dǎo)致奶牛高發(fā)病率和高死亡率，造成嚴重經(jīng)濟損失。2022年7月，香河縣某奶牛養(yǎng)殖場發(fā)生1 起奶牛表現(xiàn)發(fā)熱、消瘦、眼結(jié)膜充血黃染等多種癥狀的疫情，經(jīng)臨床觀察、實驗室診斷確診為環(huán)形泰勒焦蟲病，通過對患病奶牛采取中西藥結(jié)合方法治療，有效控制疫情。

1 材料與方法

1.1 診斷動物

香河縣某奶牛養(yǎng)殖場感染環(huán)形泰勒焦蟲的5 頭奶牛。

1.2 主要試劑和儀器

瑞氏-吉姆薩復(fù)合染色液（由瑞氏粉、吉姆薩粉、甘油、甲醇和緩沖液組成），購自金克?。ū本┥锛夹g(shù)有限公司；全血基因組DNA提取試劑盒，購自邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究（蘇州）有限公司；DL 2000 DNA、2×PCR Premix，購自天根生化科技（北京）有限公司；RCK-40C生物顯微鏡，購自上海蔡康光學(xué)儀器有限公司；梯度PCR擴增儀，購自青島佳鼎分析儀器有限公司；ZF-288凝膠成像儀，購自上海金鵬分析儀器有限公司。

1.3 引物設(shè)計與合成

根據(jù)GenBank（JX845149.1）登錄的環(huán)形泰勒焦蟲表面蛋白P33基因序列設(shè)計特異性引物，上游引物F：5'-GCAACAAAACCCGATGACG-3'，下游引物R：5'-AGAATACAGCGAATGAGGC-3'。預(yù)期擴增長度為750 bp。引物委托上海捷瑞生物工程有限公司合成。

1.4 臨床診斷

對發(fā)病奶牛養(yǎng)殖場進行流行病學(xué)調(diào)查，觀察患病奶牛臨床癥狀，進行初步診斷。

1.5 血液涂片鏡檢

無菌采集患病奶牛耳靜脈血1 滴，滴于載玻片上，參照姚火春[5]的血液涂片制作方法，血液涂片干燥后經(jīng)甲醇固定，用瑞氏—吉姆薩復(fù)合染色液染色，30 min后置于生物顯微鏡下（4×100倍）觀察病原體形態(tài)特性。

1.6 PCR 檢測

采集患病奶牛耳靜脈全血50 μL，按照全血基因組DNA提取試劑盒說明書提取病原體DNA。以DNA為模板，利用特異性引物F/R進行擴增。PCR反應(yīng)體系25 μL：Premix 12.5 μL，DNA模板0.5 μL，上、下游引物各1 μL，加雙蒸水補至25 μL。反應(yīng)條件：94 ℃3 min，94 ℃ 30 s，55 ℃ 1 min，72 ℃ 45 s，運行30 個循環(huán)，最后，72 ℃終末延伸8 min，4 ℃保存。取5 μL PCR產(chǎn)物以1.2%瓊脂糖凝膠進行電泳檢測。

2 結(jié)果

2.1 臨床診斷結(jié)果

對發(fā)病奶牛養(yǎng)殖場進行流行病學(xué)調(diào)查。2022年7月初，香河縣某奶牛養(yǎng)殖場共存欄奶牛16 頭，圈舍飼養(yǎng)，每天飼喂田野收割雜草。初期3 頭奶牛開始發(fā)病，采取健胃消食、抗菌消炎治療3 d后未好轉(zhuǎn)，陸續(xù)有2 頭牛出現(xiàn)同一病狀，期間死亡1 頭犢牛，發(fā)病率31.25%，死亡率20.00%。查看患病奶牛體表，蜱蟲感染較嚴重，1 頭奶牛體表寄生200 余只成蜱。體溫升高達40.9 ℃以上，稽留熱，精神萎靡，食欲、反芻次數(shù)明顯下降，消瘦較快，呼吸急促，心跳加快，心音亢進，眼結(jié)膜初期充血、后期黃染，磨牙，3 頭牛出現(xiàn)血尿，體表淋巴結(jié)（尤其是肩前及股前淋巴結(jié)）明顯腫大，尾根周圍等皮膚上布滿點狀結(jié)節(jié)。初步懷疑為殘緣璃眼蜱蟲傳播引起的環(huán)形泰勒焦蟲病（圖1）。

圖1 殘緣璃眼蜱蟲體視顯微鏡下形態(tài)特征觀察結(jié)果（10×20）

2.2 實驗室診斷結(jié)果

2.2.1 血液涂片鏡檢結(jié)果

血液涂片經(jīng)瑞氏-吉姆薩復(fù)合染色液染色，鏡檢可見紅細胞形態(tài)多樣，大小不一，失去正常圓盤狀形態(tài)，邊緣呈棱角狀，紅細胞內(nèi)充滿寄生蟲體，蟲體多位于邊緣，呈橢圓形、環(huán)形、梨形，偶見部分紅細胞內(nèi)充有氣泡（圖2）。

圖2 血液涂片鏡檢（箭頭所指為紅細胞內(nèi)蟲體，10×40）

2.2.2 PCR檢測結(jié)果

利用特異性引物F/R對提取DNA進行PCR擴增，瓊脂糖凝膠電泳檢測得到長度為750 bp擴增條帶（圖3），基本符合預(yù)期擴增大小。經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查、臨床觀察、血液涂片和PCR檢測結(jié)果分析，判定該奶牛場的患病奶牛感染了由環(huán)形泰勒焦蟲感染所致環(huán)形泰勒焦蟲病。

圖3 病原體PCR 檢測結(jié)果

3 預(yù)防與治療

該病主要由蜱蟲傳播引起，飼喂田間雜草可能是主要原因。因此，要停止飼喂雜草，切斷傳播途徑。首先消滅環(huán)境中傳播媒介蜱蟲，圈舍內(nèi)用石灰或螨凈消毒，牛體用長效伊維菌素類藥物皮下注射滅蜱蟲。

中藥治療：黨參30 g、黃芪60 g、甘草25 g、白術(shù)30 g、升麻25 g、柴胡25 g、陳皮30 g，混勻水煮，開水沖調(diào)，候溫灌服。每天1 劑，連服7 d。

西藥治療：血蟲凈（主要成分為三氮脒、維生素B12、茶多酚、枸杞、紅景天、黃芪、柴胡、常山、青蒿等），全群混飼，血蟲凈250 g拌料250 kg，同時，患病奶牛肌注血蟲凈（使用前將該藥配制成5%的溶液），按0.2 mL/kg深度肌肉注射，1 次/d，連用5 d。同時靜脈注射0.9% NaCl和50% 葡萄糖、樟腦磺酸鈉注射液（10 mL）、維生素C注射液（10 mL）、地塞米松磷酸鈉注射液（1 mL），1 次/d，連用3 d，進行補液、強心、消炎等對癥治療。

采取上述預(yù)防和治療措施后，跟蹤觀察7 d，患病奶牛逐步康復(fù)，未見新發(fā)病牛，10 d后回訪，疫情全部消滅，患病奶牛全部恢復(fù)正常。

4 結(jié)果與討論

牛環(huán)形泰勒焦蟲病是一種通過蜱蟲傳播的寄生性血液原蟲病。病牛初期表現(xiàn)體溫升高、食欲減退、輕微咳嗽，不愿走動。隨著病程延長，病牛很快出現(xiàn)消瘦乏力、體表淋巴結(jié)腫大、貧血等癥狀，機體免疫力下降而繼發(fā)感染其他病原體，嚴重者死亡。該次疫情通過流行病學(xué)調(diào)查、臨床觀察和實驗室診斷確診，采取中西藥結(jié)合方法及時全群治療，有效控制蔓延。

在牛環(huán)形泰勒焦蟲病流行區(qū)接種牛泰勒蟲病裂殖體膠凍細胞苗是預(yù)防該病有效方法之一[6]。目前無特效藥用于牛環(huán)形泰勒焦蟲病臨床治療。防治原則是要早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，一般發(fā)病2～3 d內(nèi)治愈效果明顯，7 d后治愈難度增加。患病奶牛應(yīng)及早使用血蟲凈等抗血液原蟲藥，配合補液、強心、緩瀉、健胃對癥治療，必要時可用抗生素治療以防繼發(fā)感染[7]。血蟲凈中三氮脒對家畜的焦蟲、錐蟲、梨形蟲及邊蟲（無形體）均有作用[8]。用藥后24 h內(nèi)血中濃度峰值最高，但持續(xù)時間較短，主要用于緊急治療，預(yù)防效果較差。其作用機理是與細胞核不可逆結(jié)合，選擇性阻斷錐蟲、焦蟲等動基體的DNA合成或復(fù)制，不能分裂繁殖，促使動基體消失，殺滅血液原蟲，同時增強紅細胞攜氧能力，促進紅細胞再生[9]。

牛環(huán)形泰勒焦蟲病流行與多種因素有關(guān)，如地理環(huán)境、氣候特點、蜱蟲的種類及活動情況、飼養(yǎng)管理等。蜱蟲喜高濕高溫環(huán)境，夏季繁殖速度快[10]，因此，牛環(huán)形泰勒焦蟲病與季節(jié)變換密切相關(guān)，具有明顯季節(jié)性和地域性[11]。據(jù)報道，我國該病主要發(fā)生在寧夏、新疆、內(nèi)蒙古、甘肅等牛羊養(yǎng)殖數(shù)量多、氣候干燥地區(qū)。回顧和分析該次疫情發(fā)生可能的原因有：一是發(fā)病初期恰逢天氣炎熱，多雨潮濕，加上牛圈舍環(huán)境衛(wèi)生條件較差，蚊蠅滋生較多，成為誘發(fā)環(huán)形泰勒焦蟲感染奶牛發(fā)生環(huán)形泰勒焦蟲病的因素。二是飼喂田間雜草，成蟲蜱和蜱蟲卵可能附著雜草上面感染奶牛，臨床觀察患病奶牛體表有蜱蟲分布可佐證。滅蜱蟲是該病治療首要任務(wù)之一，切斷傳播途徑，避免蜱蟲侵襲。根據(jù)該病流行特點、蜱蟲活動時間，有計劃滅蜱蟲，結(jié)合藥物定期驅(qū)蟲治療，可有效預(yù)防。