孫 強(qiáng),于 團(tuán),劉 剛
1 青島市即墨區(qū)段泊嵐動(dòng)物衛(wèi)生與產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督站,山東青島 266223
2 青島市即墨區(qū)田橫動(dòng)物衛(wèi)生與產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督站,山東青島 266212
3 青島市即墨區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展服務(wù)中心,山東青島 266200
牛傳染性鼻氣管炎(I n f e c t i o u s B o v i n e Rhinotracheitis,IBR),臨床稱(chēng)“紅鼻病”,是由牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)引起的一種牛呼吸道接觸性傳染病,主要引起奶牛鼻氣管炎、生殖道炎和流產(chǎn)等癥狀,被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(WOAH)列為B類(lèi)傳染性疾病,也是我國(guó)牛及其產(chǎn)品進(jìn)出口的必檢病之一[1~3]。IBR是一種免疫抑制性疾病,牛急性感染后極易引起牛細(xì)菌性肺炎,進(jìn)而降低生產(chǎn)性能。IBR自被發(fā)現(xiàn)以來(lái),在全球范圍內(nèi)的牛群中都有被檢測(cè)到,目前只有瑞士、澳大利亞、丹麥等少數(shù)國(guó)家根除該病[4]。自20世紀(jì)80年代,我國(guó)從新西蘭進(jìn)口牛中檢出IBR,繼而迅速傳播,使我國(guó)成為主要疫區(qū)之一。近幾年流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),該病在我國(guó)農(nóng)牧地區(qū)的發(fā)病率和死亡率呈逐漸上升趨勢(shì)。IBR具有隱性感染、潛伏期長(zhǎng)、難以根除、持續(xù)帶毒等特點(diǎn),進(jìn)而導(dǎo)致防控較為困難。另外,生殖道炎和流產(chǎn)是影響現(xiàn)代奶牛業(yè)發(fā)展的主要因素,給養(yǎng)殖場(chǎng)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。本文綜述了IBR的病原學(xué)、流行特征、臨床癥狀、診斷方法及防控措施等內(nèi)容,以加強(qiáng)對(duì)該病的了解和鑒別,為奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)提供科學(xué)技術(shù)支持。
IBRV屬于牛皰疹病毒I型(BHV-1)病毒科,α-皰疹病毒亞科,水痘病毒屬的一員[5],為有囊膜的DNA病毒,外觀為圓球形,直徑150~220 nm,由囊膜、核心與衣殼3 部分組成病毒粒子,其中衣殼直徑為80~120 nm,形狀為立體正二十面體,在顯微鏡下可看到形狀為六角形[6]。IBRV在外界環(huán)境異常難消滅,可抵抗很多對(duì)它自身的不利因素,在溫暖環(huán)境可存活15 d以上;濕度達(dá)90%時(shí),即使在低溫環(huán)境,也可存活約1 個(gè)月;在液氮中可保存數(shù)年之久。
據(jù)流行病學(xué)調(diào)查,IBR主要經(jīng)過(guò)病牛呼出氣體和精液傳播,通過(guò)空氣中氣溶膠、飛沫吸入、沾有該病毒的物體傳播[7]。不同品種和年齡的奶牛都易感,其中6 月齡以上居多,剛出生犢牛通過(guò)吸食母乳可獲得較高母源抗體而不易感,肉牛感染率大于奶牛[8]。據(jù)最新調(diào)查,牛仍是最主要易感動(dòng)物,水牛、牦牛也易感,公牛感染后精液會(huì)存在病毒,母牛感染后陰道會(huì)排出病毒,經(jīng)過(guò)交配,相互感染。冬季是高發(fā)期,很容易并發(fā)IBR,造成牛群在冬季集中發(fā)病。
調(diào)查表明,該病發(fā)病程度與牛場(chǎng)養(yǎng)殖環(huán)境、飼養(yǎng)管理相關(guān),如牛場(chǎng)環(huán)境較差、飼養(yǎng)密度過(guò)大或沒(méi)有分群混養(yǎng)等,都會(huì)導(dǎo)致該病大范圍流行。此外,攜帶IBRV的牛因受外界因素刺激,體內(nèi)病毒被激活而感染。
IBR臨床常見(jiàn)呼吸道型、生殖道型、神經(jīng)型、結(jié)膜炎型、流產(chǎn)型[9],因感染部位不同,臨床表現(xiàn)也不同。
發(fā)病初期,病牛出現(xiàn)高熱(體溫高達(dá)42 ℃)、精神沉郁,食欲不振,咳嗽、流鼻涕并伴隨流淚和流口水,且有多量黏液膿性鼻漏。有淺潰瘍發(fā)生,鼻腔黏膜發(fā)炎并充血紅腫,顏色為火紅色,又稱(chēng)紅鼻病。
奶牛發(fā)病時(shí),表現(xiàn)為精神不振,食欲喪失,發(fā)熱,產(chǎn)奶量下降;尾巴豎起,尿頻,母牛陰戶發(fā)炎水腫,陰道黏膜水腫,嚴(yán)重者形成膿包,有膿性分泌物從陰道流出,發(fā)生子宮內(nèi)膜炎;公牛表現(xiàn)為包皮發(fā)炎,包皮腫脹疼痛,一般病??僧a(chǎn)生抗體后自行痊愈,死亡率較低。
奶牛感染后還會(huì)表現(xiàn)出腦膜炎癥狀,青年牛和6 月齡以?xún)?nèi)犢牛多發(fā),表現(xiàn)為病牛初期體溫急劇升高,大腦共濟(jì)失調(diào),身體不受控制,極度興奮,感染嚴(yán)重牛只口吐白沫,四肢不?;瑒?dòng)呈游泳狀,接著發(fā)生死亡。死亡率約100%,臨床上發(fā)生此類(lèi)型癥狀,一般放棄治療,直接撲殺。
近日,水利部黨組書(shū)記、部長(zhǎng)陳雷主持召開(kāi)部黨組擴(kuò)大會(huì)議,傳達(dá)學(xué)習(xí)十八屆中央紀(jì)委三次全會(huì)特別是習(xí)近平總書(shū)記重要講話、王岐山同志工作報(bào)告精神,研究部署水利系統(tǒng)黨風(fēng)廉政建設(shè)和反腐敗工作。陳雷強(qiáng)調(diào),要按照十八屆中央紀(jì)委三次全會(huì)的要求部署,著力抓好以下工作。一要把深入學(xué)習(xí)習(xí)近平總書(shū)記重要講話精神作為重要政治任務(wù);二要全面加強(qiáng)黨的紀(jì)律建設(shè);三要著力抓好懲治和預(yù)防腐敗體系建設(shè);四要進(jìn)一步加強(qiáng)和改進(jìn)作風(fēng);五要強(qiáng)化黨風(fēng)廉政建設(shè)責(zé)任制落實(shí);六要加強(qiáng)領(lǐng)導(dǎo)干部廉潔自律。部領(lǐng)導(dǎo)矯勇、董力、胡四一、劉寧、李國(guó)英、蔡其華、周學(xué)文,總工程師汪洪出席會(huì)議。
隨著發(fā)病時(shí)間的推移,感染牛只會(huì)發(fā)生結(jié)膜炎,侵害眼睛。主要癥狀為角膜混濁或結(jié)膜發(fā)炎,如癥狀較輕,僅眼瞼腫脹,流淚等,嚴(yán)重的眼瞼外翻,結(jié)膜膿腫。
母牛感染IBRV,呼吸道、生殖道癥狀發(fā)生后2 個(gè)月內(nèi)可出現(xiàn)流產(chǎn),個(gè)別母牛突發(fā)流產(chǎn)或胎死腹中;在無(wú)任何征兆下產(chǎn)出死胎,之后會(huì)持續(xù)有膿性分泌物從陰道流出。病母牛產(chǎn)出的活犢牛不僅有呼吸道癥狀,還會(huì)發(fā)生嚴(yán)重腹瀉。非妊娠期母牛如高燒和其他癥狀,影響卵巢功能,導(dǎo)致不孕。妊娠母牛感染IBRV后,流產(chǎn)率高達(dá)50%[10]。IBR在潛伏期時(shí)難發(fā)現(xiàn),當(dāng)機(jī)體內(nèi)病毒被激活,會(huì)長(zhǎng)期向外界排毒,因此消除潛伏感染,消滅長(zhǎng)期排毒牛只是關(guān)鍵所在。
由于IBRV在自然環(huán)境下易長(zhǎng)期、隱性潛伏感染,給診斷帶來(lái)困難,因此對(duì)該病的診斷方法需系統(tǒng)化研究。首先應(yīng)結(jié)合臨床癥狀特征、相應(yīng)病理變化和流行病學(xué)進(jìn)行初步診斷,再結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷得出最終結(jié)果。
首先進(jìn)行病毒分離,對(duì)出現(xiàn)癥狀的病牛采集病料,送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病毒分離。呼吸道型牛只:可從奶牛鼻腔采取鼻拭子或淚液等分泌物。生殖道型牛只:采集母牛外陰部黏膜分泌物和公牛龜頭包皮有炎癥地方的病料。神經(jīng)型牛只:可采集病死牛的腦組織。結(jié)膜炎型牛只:可采集病牛的淚液或者眼組織。流產(chǎn)型牛只:母牛流出液體和流產(chǎn)胎兒等病料。
采集病料的過(guò)程中,首先必須保證采集器具無(wú)菌,其次采集的病料要第一時(shí)間送到實(shí)驗(yàn)室處理,即將分離好的病料在MDBK細(xì)胞(牛腎細(xì)胞)上孵育,37 ℃培養(yǎng)箱中孵育1.5 h,每隔半小時(shí)輕輕搖晃一次,時(shí)間到后棄去接種液,用PBS(磷酸緩沖鹽溶液)清洗兩次,加入7 mL含2% FBS的維持液,放到含5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每天觀察,約4 d,細(xì)胞皺縮變圓,出現(xiàn)葡萄樣群落,將病變細(xì)胞進(jìn)行特殊方法染色,可看到該病毒的Cowdry A型核內(nèi)包涵體,即可確診IBR。
病毒分離的同時(shí),進(jìn)行血清學(xué)診斷。目前常用方法有血清中和試驗(yàn)(SN)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、變態(tài)反應(yīng)檢查、間接血凝試驗(yàn)、核酸探針檢測(cè)技術(shù)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)[2,11]。
4.2.1 血清中和試驗(yàn)(SN)
血清中和試驗(yàn)(SN)被認(rèn)為是最經(jīng)典的檢測(cè)方法,靈敏性高,具有很強(qiáng)特異性。缺點(diǎn)是受病毒效價(jià)、血清/病毒孵育時(shí)間等因素的影響,導(dǎo)致費(fèi)力費(fèi)時(shí)、 周期長(zhǎng),結(jié)果易受到其他因素干擾而出現(xiàn)偏差;并且IBRV可潛伏感染,檢測(cè)時(shí)間內(nèi)雖然牛群為陰性,但無(wú)法保證牛群沒(méi)有感染。
4.2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
4.2.3 變態(tài)反應(yīng)檢查
變態(tài)反應(yīng)是把滅活的抗原接種在牛的皮內(nèi),72 h后觀察接種處皮膚是否出現(xiàn)紅斑腫脹,并測(cè)量其大小的一種檢測(cè)方法,如果接種區(qū)紅斑腫脹直徑小于0.5 cm為陰性,大于1 cm為陽(yáng)性,0.5~1 cm為可疑[12]。雖然此方法檢出率較低,大約為血清中和試驗(yàn)的2/3,但在條件不佳的牛場(chǎng)可以作為初步診斷。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)是我國(guó)2012年6月1日實(shí)施的一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法,該方法特異、靈敏、快速,能改善以往檢測(cè)方法結(jié)果不一致、潛伏期難、檢測(cè)抗原靈敏度較低等問(wèn)題,即使對(duì)微量病毒的檢測(cè)靈敏度也非常高。徐娜[13]建立了雙重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)方法--gB和gE基因檢測(cè)方法,與熒光定量PCR方法相比,相符率高達(dá)81.8%。孫志明等建立了IBRV的gE基因SYBR Green I熒光定量PCR檢測(cè)方法,其靈敏度約為70 DNA拷貝/μL[14]。
防治IBR的重要舉措是做好預(yù)防工作。堅(jiān)持自繁自養(yǎng)的養(yǎng)殖模式,培育優(yōu)良品種,嚴(yán)禁從疫區(qū)引入。注重環(huán)境清潔、干燥,使牛只在干凈舒適環(huán)境生長(zhǎng),有利于生長(zhǎng)發(fā)育,減少疾病發(fā)生。臟道和凈道要分開(kāi),無(wú)關(guān)人員不能隨意進(jìn)出養(yǎng)殖區(qū)[15]。日常飼養(yǎng)管理時(shí),保證草料和精料配比得當(dāng),滿足營(yíng)養(yǎng)需要,使牛只健康成長(zhǎng)。為更好滿足養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展,需對(duì)奶牛疫病進(jìn)行科學(xué)免疫防控,平時(shí)有計(jì)劃安排免疫接種。飼養(yǎng)期間進(jìn)行持續(xù)不斷血清監(jiān)測(cè),繁殖公牛和母牛是檢測(cè)重點(diǎn),一經(jīng)發(fā)現(xiàn)立即淘汰。牛舍設(shè)定適宜通風(fēng)時(shí)間,保證空氣循環(huán),定期進(jìn)行養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境消毒。保證奶牛運(yùn)動(dòng)量達(dá)標(biāo),調(diào)動(dòng)全身抵抗力。
5.2.1 產(chǎn)地檢疫
IBRV的傳染源主要是發(fā)病奶牛和帶毒奶牛,它們對(duì)健康牛群產(chǎn)生重要威脅。進(jìn)行牛只或產(chǎn)品進(jìn)出口及出欄、運(yùn)輸?shù)?,?yīng)嚴(yán)格按照《動(dòng)物防疫法》《動(dòng)物檢疫管理辦法》《動(dòng)物防疫條件審查辦法》等法律法規(guī),做好檢驗(yàn)、檢疫和監(jiān)管工作,防止疫病發(fā)生和有害生物在國(guó)際貿(mào)易中傳播,造成不可估量危害。
5.2.2 做好屠宰工作
有些地方牛的專(zhuān)業(yè)屠宰場(chǎng)相對(duì)缺乏,牛只面臨淘汰時(shí),大多直接聯(lián)系就近牛販,運(yùn)輸?shù)奖就烈酝馔涝祝涝缀笈H獗晦D(zhuǎn)賣(mài)到市場(chǎng),所以必須加大對(duì)屠宰和加工環(huán)節(jié)的監(jiān)督檢查,嚴(yán)格實(shí)行牛和牛肉產(chǎn)品準(zhǔn)入制度[2],對(duì)私下進(jìn)行違規(guī)收購(gòu)淘汰牛只的牛販嚴(yán)懲,進(jìn)行疫病傳染的科普[16]。
養(yǎng)殖場(chǎng)需從外地引進(jìn)時(shí)或調(diào)運(yùn)時(shí),進(jìn)入場(chǎng)區(qū)前需在規(guī)定地方隔離檢疫,臨床觀察結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),觀察一個(gè)發(fā)病周期,如引進(jìn)牛群沒(méi)有異常情況,才能與本場(chǎng)牛群合群飼養(yǎng)[17]。如在隔離期間發(fā)現(xiàn)了疑似癥狀,應(yīng)當(dāng)立即將疑似牛只再隔離進(jìn)行及時(shí)檢測(cè),并采取防控措施,禁止合群。國(guó)內(nèi)外有IBR報(bào)道時(shí),必須加強(qiáng)周?chē)h(huán)境消毒和嚴(yán)厲禁止短時(shí)間內(nèi)引進(jìn)場(chǎng)區(qū)。對(duì)IBR的撲滅應(yīng)當(dāng)采取“ 早、快、嚴(yán)、小”原則[18]。
發(fā)生IBR后,環(huán)境中病原數(shù)量大幅度增加,導(dǎo)致疫病傳播流行加速。為控制疫病傳播流行,需更嚴(yán)格消毒,養(yǎng)牛場(chǎng)區(qū)域內(nèi)牛舍、墻面、門(mén)窗等都是消毒重點(diǎn)。室內(nèi)空氣、地面、墻面可進(jìn)行噴霧消毒,金屬器具可用火焰消毒,耐高溫器具也可煮沸消毒,糞便污水應(yīng)單獨(dú)無(wú)害化處理,不得進(jìn)入沼氣池。加強(qiáng)對(duì)牛場(chǎng)全面管理和培訓(xùn),進(jìn)出生產(chǎn)區(qū)都消毒。
對(duì)我國(guó)IBR的診斷和防治研究認(rèn)為,一是感染IBR后,該病無(wú)特異性治療的特效藥;二是該病防控的關(guān)鍵問(wèn)題在于牛只自身免疫形成,自然感染該病毒后,經(jīng)過(guò)自身抵抗和治療的康復(fù)??傻挚箯?qiáng)毒攻擊[19]。因此牛群在飼養(yǎng)過(guò)程中要營(yíng)養(yǎng)全面,平時(shí)注意適當(dāng)運(yùn)動(dòng),從而提高牛自身抗病能力,感染后控制繼發(fā)感染,促進(jìn)牛群盡快恢復(fù)健康。
IBR可隱性感染、潛伏期長(zhǎng),同時(shí)給奶牛引種帶來(lái)威脅。因此,堅(jiān)持以預(yù)防為主,采取全進(jìn)全出、嚴(yán)格檢疫、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理及生物安全等措施進(jìn)行綜合性防控,養(yǎng)殖過(guò)程中盡量減少抗生素和飼料添加劑使用,可適量添加微生態(tài)制劑以提高奶牛抵抗力,滿足人們健康環(huán)保需求,提高奶牛產(chǎn)奶量、乳汁質(zhì)量,使奶牛養(yǎng)殖達(dá)到可觀綜合效益。