張務(wù)平

福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院（蜂學(xué)學(xué)院），福建福州 350002

0 引言

專一性細(xì)胞內(nèi)寄生的新孢子蟲可引起牛、羊、豬和鳥類等多種動(dòng)物發(fā)生新孢子蟲病，犬、狼、狐貍等犬科動(dòng)物是其終末宿主。新孢子蟲病對牛的危害很嚴(yán)重，主要導(dǎo)致母牛懷孕期流產(chǎn)、產(chǎn)死胎以及新生犢牛的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)失調(diào)等，對全世界的養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1，2]。該病呈全世界分布，傳播方式主要包括水平傳播和垂直傳播兩種，動(dòng)物一年四季都可感染?；谛骆咦酉x速殖子全蟲滅活研制的疫苗——Bovilis-Neoguard是默克公司生產(chǎn)的目前用于預(yù)防奶牛流產(chǎn)的全球唯一商品化疫苗，但因保質(zhì)期短、生產(chǎn)成本高、不能切斷垂直傳播等缺點(diǎn)，未被廣泛推廣使用?；前奉愃幬飳?dòng)物新孢子蟲感染急性期的蟲體有一定的治療效果，但對寄生在組織器官中的包囊沒有效果，并且該類藥物具有較大的副作用，臨床使用該類藥物治療新孢子蟲病有一定的局限性。因此，目前尚未有有效的藥物和疫苗來治療和預(yù)防動(dòng)物新孢子蟲病。通過定期的、分群體的對養(yǎng)殖場內(nèi)奶牛進(jìn)行血清學(xué)監(jiān)測，可以準(zhǔn)確掌握奶牛群體的新孢子蟲感染情況，從而制定和采取相應(yīng)的新孢子蟲病防控措施。新孢子蟲抗體檢測可以通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、間接熒光抗體試驗(yàn)（IFAT）、核酸檢測（NAT）等多種血清學(xué)方法來完成，其中ELISA是應(yīng)用最廣泛的血清學(xué)檢測方法[3]。本研究主要是為了解福建省奶牛新孢子蟲病的流行情況，以期為福建省規(guī)?；膛龇揽匦骆咦酉x病提供一定的理論支持，從而降低新孢子蟲病對畜牧業(yè)造成的危害。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品

2021年6月至2022年12月，從福建省漳州市、南平市、三明市和龍巖市4 個(gè)地區(qū)的規(guī)?；膛觯ㄟ^頸靜脈采集健康奶牛全血1 472 份，其中漳州395份，南平410 份，三明351 份，龍巖316 份，詳細(xì)記錄樣品信息，包括地區(qū)、年齡、胎次、奶牛場場內(nèi)或周邊是否存在飼養(yǎng)犬只或流浪犬只等。采集的樣品低溫運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室，使用離心機(jī)3 000 r/min離心，分離收集血清，然后置于-20 ℃冰箱保存待檢。

1.1.2 主要試劑

ID Screen? Neospora caninum Indirect ELISA抗體檢測試劑盒，購自愛德士生物科技有限公司，置于4 ℃冰箱冷藏保存?zhèn)溆?，使用前從冰箱取出恢?fù)至室溫后，試劑盒均在有效期內(nèi)使用。

1.1.3 主要儀器

高速離心機(jī)（Sorvall Legend Micro 17）和全波長掃描式多功能讀數(shù)儀（VARIOSKAN FLASH），均購自賽默飛世爾科技公司（ThermoFisher Scientific）；電熱恒溫培養(yǎng)箱（DHP-9032），購自上海申賢恒溫設(shè)備廠，單道（ACURA 825 autoclavable）和8道（ACURA 855 autoclavable）可調(diào)節(jié)移液器，均購自普邁瑞士索科（SOCOREX）公司。

1.2 檢測方法

對采集的所有奶牛血清樣品檢測新孢子蟲抗體，均嚴(yán)格按照試劑盒說明書步驟操作，根據(jù)臨界值判定結(jié)果。每次試驗(yàn)均設(shè)有陰、陽性對照，若有可疑孔，則進(jìn)行復(fù)檢。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用 SPSS 22.0軟件，對不同地區(qū)、不同年齡階段和不同胎次奶牛的新孢子蟲抗體檢測陽性率情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)方差分析。

2 結(jié)果

2.1 福建省不同地區(qū)的檢測結(jié)果

本研究采用ELISA方法，對采自福建省漳州、南平、三明、龍巖4 個(gè)地區(qū)的規(guī)?；膛? 472份血清樣品進(jìn)行新孢子蟲抗體血清學(xué)檢測。根據(jù)臨界值對樣品檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行陰、陽性判定。結(jié)果表明：共110 份樣品呈新孢子蟲抗體陽性，總陽性率為7.47%；漳州、南平、三明、龍巖4 個(gè)地區(qū)奶牛場的新孢子蟲抗體陽性率分別為5.57%、5.12%、7.41%和12.97%，其中龍巖地區(qū)奶牛的新孢子蟲病流行較嚴(yán)重。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，福建省不同地區(qū)奶牛新孢子蟲抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05），見表1。

表1 福建省不同地區(qū)奶牛新孢子蟲抗體檢測結(jié)果

2.2 不同年齡階段的檢測結(jié)果

不同年齡階段的奶牛血清樣品均檢測到新孢子蟲抗體陽性，陽性率范圍為2.93%～9.56%。其中1～3 歲奶牛血清樣品的新孢子蟲抗體陽性率最高，為9.56%；其次是3～5 歲奶牛血清樣品的陽性率，為8.56%；大于5 歲的陽性率最低，為2.93%（表2）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同年齡階段奶牛血清樣品的新孢子蟲抗體陽性率差異顯著（P＜0.05）。

表2 不同年齡階段奶牛血清樣品新孢子蟲抗體檢測結(jié)果

2.3 不同胎次的檢測結(jié)果

奶牛按照不同生產(chǎn)胎次分組，新孢子蟲抗體陽性率最高的血清樣品來自≥3 胎次的奶牛，為9.50%；未產(chǎn)胎的奶牛血清樣品新孢子蟲抗體陽性率為8.42%，新孢子蟲抗體陽性率最低的血清樣品來自1 胎次的奶牛，為4.83%（表3）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同胎次奶牛血清樣品的新孢子蟲抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05）。

表3 不同胎次奶牛新孢子蟲抗體檢測結(jié)果

3 結(jié)論與討論

新孢子蟲病對牛的危害嚴(yán)重，給全球畜牧業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)估計(jì)，全球每年因新孢子蟲病給養(yǎng)牛業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失為12.89 億美元，最高可達(dá)到23.80 億美元[4]。新孢子蟲病廣泛流行于世界各地，目前新西蘭、澳大利亞、美國、希臘、巴西和日本等50 多個(gè)國家均報(bào)道有新孢子蟲病的發(fā)生[4]。我國于2003年在北京由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院劉群教授團(tuán)隊(duì)首次發(fā)現(xiàn)新孢子蟲病，隨后在新疆、內(nèi)蒙古、甘肅、青海、河北、河南和吉林等多個(gè)省份均報(bào)道新孢子蟲病例[5～10]。2022年，Ying等對國內(nèi)外重要期刊發(fā)表的51 篇關(guān)于中國牛新孢子蟲的相關(guān)研究數(shù)據(jù)和結(jié)果進(jìn)行綜合分析，發(fā)現(xiàn)總計(jì)33 945 頭牛檢測新孢子蟲的感染率平均為13.69%[11]。

本研究結(jié)果顯示，福建省奶牛血清樣品新孢子蟲抗體總陽性率為7.4 7%，低于我國廣西（50.9%）、山西（13.60%）、河南（41.2%）、河北（37.34%）、青藏高原（18.6%）等省份或地區(qū)的感染率[12～16]，在不同地區(qū)或者同一地區(qū)的不同奶牛場新孢子蟲感染率差異很大。造成這種差別的原因可能由于不同區(qū)域之間的飼養(yǎng)條件（放牧或舍飼）、奶牛場的基地建設(shè)和環(huán)境衛(wèi)生狀況、生物安全和奶牛場場內(nèi)或者周邊是否有犬只等情況存在差異，并且各個(gè)研究采用不同檢測方法的敏感性等，都會(huì)影響奶牛新孢子蟲的感染率統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

本研究結(jié)果表明，1～3 歲的奶牛血清樣品新孢子蟲抗體陽性率最高為9.56%，＞5歲的奶牛血清樣品陽性率最低（2.93%）；≥3 胎次的的奶牛血清樣品新孢子蟲抗體陽性率最高（9.50%），產(chǎn)胎1 次的奶牛血清樣品新孢子蟲抗體陽性率最低（4.83%）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同年齡階段奶牛血清樣品新孢子蟲抗體陽性率差異顯著（P＜0.05），表明年齡因素對牛新孢子蟲易感有顯著影響。

感染犬排出新孢子蟲卵囊，一旦污染了食物或水，被不慎食入則是包括奶牛在內(nèi)的中間宿主通過水平傳播的重要感染途徑。因此，本研究在采集樣品過程中，專門對奶牛場場內(nèi)及周邊是否有飼養(yǎng)犬或流浪犬的問題進(jìn)行了詢問，所有奶牛場場內(nèi)均未飼養(yǎng)犬只，這可能是福建省奶牛新孢子蟲感染率低的主要原因之一。有研究顯示，鳥類也可以感染新孢子蟲，福建省奶牛場周邊鳥類較多，因此養(yǎng)殖場應(yīng)加裝防鳥網(wǎng)。垂直傳播被認(rèn)為是牛群中尤其是妊娠母牛最主要的傳播途徑，但有研究認(rèn)為公牛感染新孢子蟲后，可以影響其精子質(zhì)量，包括精液濃度和運(yùn)動(dòng)活力下降，因此牛場也應(yīng)對公牛定期進(jìn)行新孢子蟲的檢測。

綜上所述，福建省不同地區(qū)的規(guī)?；膛銎毡榇嬖谛骆咦酉x感染，牛場應(yīng)建立健全該病的檢疫隔離制度，采取綜合防控策略，制定有效的管理措施，才能較好控制奶牛新孢子蟲病。