肖海君，梅小偉

[禮藍(lán)(上海)動物保健有限公司，上海 201499]

豬增生性腸病(porcine proliferative enteropathy，PPE)又稱回腸炎，是由胞內(nèi)勞森菌(Lawsoniaintracellularis，LI)引起的一種腸道傳染病。豬回腸炎在全球范圍內(nèi)分布廣泛，且感染率普遍較高，這奠定了其對豬群危害的普遍性[1]；豬感染后，胞內(nèi)勞森菌主要破壞小腸上皮細(xì)胞的完整性，影響腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收；豬從感染到康復(fù)需要經(jīng)歷較長的時(shí)間，造成發(fā)病豬的消化吸收功能受影響的時(shí)間較長。另外，急性回腸炎會造成感染豬出現(xiàn)便血和急性猝死，病死率可達(dá)50%左右[2]。Scholz 等[3]研究表明，發(fā)病豬的平均日增重降低了9%～35%，飼料報(bào)酬降低了6%～20%，經(jīng)常使相同日齡的保育-育肥豬表現(xiàn)出明顯的體重差異。養(yǎng)豬業(yè)應(yīng)重視回腸炎給豬場帶來的嚴(yán)重危害與經(jīng)濟(jì)損失[4]。截止到目前，針對豬回腸炎，生產(chǎn)現(xiàn)場主要還是使用敏感藥物或接種疫苗的方式來進(jìn)行治療和預(yù)防?；啬c炎造成的經(jīng)濟(jì)損失因豬場的飼養(yǎng)規(guī)模以及所采用的生產(chǎn)模式和生物安全等因素的不同而差異巨大。根據(jù)豬的發(fā)病年齡及疾病進(jìn)程，采用科學(xué)的方案組合可有效控制豬群的發(fā)病，及時(shí)止損。對特定豬群進(jìn)行胞內(nèi)勞森菌感染的診斷與評估，以及及時(shí)執(zhí)行藥物或疫苗干預(yù)，對降低豬回腸炎造成的經(jīng)濟(jì)損失有著重要作用。為了高效控制胞內(nèi)勞森菌的感染，我們亟須全面調(diào)查豬回腸炎的流行病學(xué)，探索不同生產(chǎn)模式豬場的感染規(guī)律。

本調(diào)查擬對來自全國主要養(yǎng)豬地區(qū)的母豬與保育-育肥豬的糞便樣本進(jìn)行檢測、分析，理清不同生產(chǎn)階段豬群與不同飼養(yǎng)模式下豬感染胞內(nèi)勞森菌的狀況，了解發(fā)病豬的臨床癥狀(正常糞便、水泥樣糞便、血便)與排菌量的關(guān)系，評估豬在各個(gè)生產(chǎn)階段胞內(nèi)勞森菌的感染壓，為科學(xué)、高效防控回腸炎提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本來源

2022 年9 月至2023 年7 月，我們共收集來自全國26 個(gè)省、市、自治區(qū)169 家豬場的1 667 份糞便樣本。按照糞便的形態(tài)對樣本進(jìn)行分類，其中水泥樣糞便1 099 份，正常糞便452 份，血便67 份，水樣糞便39 份和其他類型糞便10 份(圖1)。豬場規(guī)模主要集中在母豬存欄1 000～5 000 頭，或保育-育肥豬存欄0～5 000 頭。

1.1.2 試劑

胞內(nèi)勞森菌DNA 提取試劑盒(Stool DNA Kit)為OMEGA 公司生產(chǎn)，熒光定量PCR 檢測試劑盒(Thermo VetMax ?Lawsoniaintracellulariskit)由賽默飛公司生產(chǎn)。

1.2 方法

DNA 提取及熒光定量PCR 操作步驟分別按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬場及糞便樣本的胞內(nèi)勞森菌檢出情況

使用針對胞內(nèi)勞森菌的熒光定量PCR 試劑盒對來自全國169 家豬場的1 667 份糞便樣本進(jìn)行檢測，其中陽性糞便樣本為1 433 份，陽性率達(dá)86.0%；在提供糞便樣本的169 家豬場中，糞便中檢測胞內(nèi)勞森菌的豬場有163家，豬場陽性率為96.4%；按月份統(tǒng)計(jì)了糞便樣本的胞內(nèi)勞森菌陽性率，發(fā)現(xiàn)陽性率61.5%～100.0%，其中1～7 月份每月的陽性率均超過了80.0%(表1)。

2.2 全國各區(qū)域胞內(nèi)勞森菌檢出情況

表2 統(tǒng)計(jì)了全國7 大地區(qū)豬糞便中胞內(nèi)勞森菌檢出情況。表2 顯示，華中地區(qū)的感染率稍低，為80.5%；華南、華東地區(qū)的陽性率分別為82.2%和87.2%；其他4 個(gè)區(qū)域的陽性率都超過了90.0%，鑒于這幾個(gè)區(qū)域的總體樣本量偏少，這一結(jié)果可能不具有代表性。

2.3 豬場規(guī)模與胞內(nèi)勞森菌的檢出關(guān)系

不同規(guī)模的豬群胞內(nèi)勞森菌檢出結(jié)果見圖2。由圖2 可知，存欄量為0～5 000 頭的保育-育肥豬的商品豬場，糞便樣本胞內(nèi)勞森菌陽性率為83.1%；存欄量為5 000～10 000 頭及10 000 頭以上的商品豬場，陽性率分別為89.5%和91.7%；另外，三種不同存欄規(guī)模的母豬場，陽性率變化不大，分別為78.8%，80.0%和88.2%(圖2)。

2.4 不同生產(chǎn)階段豬群胞內(nèi)勞森菌的感染情況

我們的調(diào)查結(jié)果顯示，保育豬、育肥豬和母豬的糞便胞內(nèi)勞森菌的陽性率都超過了80.0% (圖3)；后備母豬、妊娠母豬和哺乳母豬的糞便陽性率也普遍偏高，其中后備母豬的糞便CT 值低于妊娠母豬的；各年齡段保育豬和育肥豬的糞便都能檢出，結(jié)合臨床表現(xiàn)及檢測結(jié)果，豬在13 周齡和19 周齡前后對回腸炎的感染壓較高。

2.5 糞便類型與CT 值之間關(guān)系

在1 667 份糞便樣本中，水泥樣糞便居多，為1 099 份，其次是正常糞便452 份，我們也收集了67 份血便樣本?？傮w來看，從正常糞便中檢出胞內(nèi)勞森菌的概率小于水泥樣糞便及血便的概率，其中水泥樣糞便和正常糞便的陽性率分別為97.8%和55.5%(圖4)。從胞內(nèi)勞森菌的CT 值來看，血便的CT 值最低，平均為24.68，其次是水樣糞便，CT 值為28.41，而水泥樣糞便的CT 值則為34.13，正常糞便的CT 值高于以上三種糞便的，為40.99(圖5)。不同類型的糞便對應(yīng)的CT 值區(qū)間范圍也存在一定的差別，在正常糞便中，CT 值大于35 的比例達(dá)到了97%，其中超過40 的為52%；而在水樣糞便中，它們的CT 值都小于35；另外，在水泥樣糞便中，CT 值介于30～35 的比例最高，達(dá)到57%，CT 值介于35～40 的比例則是34%；而血便中，93%樣本的CT 值都低于30(圖6)。

3 結(jié)論

(1) 全國26 個(gè)省、市、自治區(qū)、直轄市169 家豬場的1 667 份糞便樣本進(jìn)行胞內(nèi)勞森菌的檢測，樣本陽性率達(dá)到了86.0%，豬場陽性率為96.4%，與國外主要養(yǎng)豬區(qū)域豬場陽性率基本相符，說明回腸炎已經(jīng)成為影響豬群健康的重要疾病之一，需引起養(yǎng)豬業(yè)的高度重視。

(2)根據(jù)糞便樣本的檢測結(jié)果，不同季節(jié)、不同區(qū)域、不同規(guī)模的豬場胞內(nèi)勞森菌檢出率均達(dá)到80.0%以上；可見氣候、地理環(huán)境與豬場規(guī)模對豬感染回腸炎的影響較小。

(3)母豬在各個(gè)生產(chǎn)階段的陽性率也普遍偏高，結(jié)合臨床表現(xiàn)及檢測結(jié)果，保育-育肥豬群在13 周齡和19 周齡前后對回腸炎的感染壓較高。

(4)后備母豬的糞便樣本胞內(nèi)勞森菌的CT值比妊娠母豬的低；不同類型的糞便對應(yīng)的CT 值也存在差異，血便的CT 值最低，正常糞便的CT 值最高。

4 討論

此次調(diào)查總共收集了來自169 家豬場的1 667 份糞便樣本，基本覆蓋了我國主要養(yǎng)豬生產(chǎn)地區(qū)不同規(guī)模不同飼養(yǎng)模式的豬場，具有一定的代表性。檢測結(jié)果顯示，糞便樣本的胞內(nèi)勞森菌陽性率為86.0%，豬場的陽性率為96.4%。曲向陽等[5]在2009 年12 月至2011 年4 月對華東地區(qū)的21 家規(guī)?；i場進(jìn)行回腸炎流行病學(xué)調(diào)查，豬場陽性率達(dá)到了100%，樣本陽性率為59.81%，樣本陽性率低于本調(diào)查的結(jié)果。楊小燕等[6]也對閩西地區(qū)的回腸炎感染情況進(jìn)行了調(diào)查，豬場陽性率也達(dá)到了100%?？梢姲麅?nèi)勞森菌在全國的流行依然非常普遍，感染率相當(dāng)高。

本次對來自保育豬、育肥豬和母豬的糞便樣本進(jìn)行檢測，均存在胞內(nèi)勞森菌的感染，結(jié)合臨床表現(xiàn)及檢測結(jié)果，保育-育肥豬群在13 周齡和19 周齡前后的回腸炎感染壓較高。楊小燕等[6]的報(bào)告顯示，在6～8 周齡、9～13 周齡、14～20 周齡這幾個(gè)生產(chǎn)階段的陽性率超過了40%，這3 個(gè)生產(chǎn)階段在回腸炎發(fā)病率上無明顯差異，這也給回腸炎的科學(xué)防控提出了更大挑戰(zhàn)。仔豬斷奶后，由于母源抗體水平的下降，加上斷奶、轉(zhuǎn)群、環(huán)境轉(zhuǎn)變等的應(yīng)激，其體內(nèi)胞內(nèi)勞森菌開始增殖，從而表現(xiàn)出感染率隨年齡的增大而上升。我們也從產(chǎn)房發(fā)生腹瀉的10 日齡仔豬的糞便中檢測到了胞內(nèi)勞森菌，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)存在豬流行性腹瀉病毒的感染情況。胞內(nèi)勞森菌主要影響保育期、育肥期的豬，對產(chǎn)房哺乳期仔豬的影響有多大還需要進(jìn)一步研究。

本調(diào)查主要針對保育-育肥豬群在臨床上出現(xiàn)了腹瀉問題，故以采集水泥樣糞便進(jìn)行檢測為主，水泥樣糞便的胞內(nèi)勞森菌陽性率達(dá)到了97.8%，而正常糞便的陽性率為55.5%，樣本的總體陽性率高于其他研究人員的報(bào)道。從正常糞便中也能檢測到胞內(nèi)勞森菌，表明存在亞臨床感染，這值得養(yǎng)豬生產(chǎn)者的警惕。我們在臨床上也遇到了大量的拉血便的問題，以母豬群為主，特別是后備母豬，血便的胞內(nèi)勞森菌檢出率達(dá)到了100%，且CT 值明顯低于其他類型的糞便。我們檢測了其他引起血便的病原，均未測到混合感染的情況，同時(shí)使用藥物及時(shí)得到了控制。針對后備母豬及經(jīng)產(chǎn)母豬出現(xiàn)的急性回腸炎引起的血便問題，提前保健預(yù)防顯得尤為重要。

不同糞便類型對應(yīng)的CT 值區(qū)間范圍也存在一定的差別，在保育-育肥階段最容易出現(xiàn)水泥樣糞便，57%的樣本的CT 值介于30～35，另有34%的樣本的CT 值介于35～40；血便樣本的CT 值幾乎都低于30。有研究報(bào)道，與沒有增生性病變的豬(中值排菌量：＜3.30log10 個(gè)細(xì)菌/g 糞便) 相比，有增生性病變的豬的胞內(nèi)勞森菌排菌量中值極顯著高(中值排菌量：5.92log10 個(gè)細(xì)菌/g糞便)(P＜0.001)[7]。在本調(diào)查中，我們并未對回腸炎臨床表現(xiàn)嚴(yán)重的豬進(jìn)行解剖以觀察其腸道增生情況，但其糞便胞內(nèi)勞森菌的CT值相對較低，說明排菌量大，在一定程度上反映了其感染的嚴(yán)重程度，也可從側(cè)面通過CT值初步判斷增生的嚴(yán)重程度。