史臘臘 申世紅

(西北大學(xué)化工學(xué)院,西安,710069)

失眠癥是影響人民生命質(zhì)量的高發(fā)病率疾病,全球失眠癥患病率在15%左右。長期失眠會給人的正常生活和工作帶來不良影響,甚至對生命造成危害[1]。臨床常見的失眠形式有睡眠潛伏期延長、睡眠維持障礙、睡眠質(zhì)量下降、睡眠時間縮短、日間殘留效應(yīng)等[2]。

藥物是治療失眠癥的重要方法之一,中藥作為藥物的重要組成部分,治療失眠歷史悠久,不良反應(yīng)小且效果顯著[3]。已有研究表明,絞股藍(lán)、茯苓、酸棗仁、柏子仁、靈芝、五味子、菊花、甘草、龍眼、西番蓮、西紅花、梔子等中藥提取物具有促進(jìn)睡眠的作用[4-6]。絞股藍(lán)[GynostemmaPentaphyllum(Thunb.)Makino]是葫蘆科絞股藍(lán)屬植物之一。其含有皂苷、多糖、黃酮類等化合物及鐵、鋅、銅、錳、硒等20多種微量元素[7],具有滋補(bǔ)保健、抗癌防衰、增強(qiáng)體質(zhì)和改善睡眠等多種功能,是近年來國內(nèi)植物源治療失眠藥物的研究熱點(diǎn)[8]。徐露等[9-10]研究了絞股藍(lán)皂苷對小鼠睡眠的影響,證明絞股藍(lán)皂苷具有催眠、鎮(zhèn)靜作用。李景良等[11]研究了絞股藍(lán)多糖口服液對失眠患者的睡眠影響,驗(yàn)證了絞股藍(lán)多糖的睡眠改善功效。然而,目前關(guān)于絞股藍(lán)改善睡眠的研究主要集中在生藥或某一單一組分的改善睡眠功效,尚無對絞股藍(lán)各活性組分之間藥效比較的研究。

本研究以小鼠為試驗(yàn)對象,對絞股藍(lán)生藥水提物、絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖進(jìn)行改善睡眠功能試驗(yàn),評價不同組分對小鼠睡眠的影響,探究絞股藍(lán)改善睡眠功效的主要來源,為絞股藍(lán)開發(fā)改善睡眠產(chǎn)品提供理論支持?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物 SPF級昆明小鼠(體質(zhì)量18～22 g),雌性,由陜西省西安市西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物中心提供(許可證號:SCXK(陜)2020-001)。動物飼養(yǎng)于屏障級動物房,溫度20～25 ℃,相對濕度50%～60%,12 h照明和12 h黑暗交替,允許動物自由攝食和飲水。

1.2 藥物 絞股藍(lán)水提物(提取得率為18%)、絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖均購自陜西漢中天然谷生物科技股份有限公司。

1.3 儀器與試劑 計時器、玻璃勻漿器、ME104E/02型電子天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司產(chǎn)品;BioTek全波長酶標(biāo)儀,美國伯騰儀器有限公司產(chǎn)品;TGL-20臺式高速離心機(jī),山東百歐醫(yī)療科技有限公司產(chǎn)品。生理鹽水、戊巴比妥鈉,中國醫(yī)藥(集團(tuán))上海化學(xué)試劑公司產(chǎn)品;巴比妥鈉,中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品;五羥色胺(5-HT)、γ-氨基丁酸(GABA)和多巴胺(DA)酶聯(lián)免疫吸附測定(ELSIA)試劑盒,南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。

1.4 方法

1.4.1 動物分組及給藥 將70只小鼠按照體質(zhì)量隨機(jī)分為7個組,即6個觀察組和1個空白對照組,每組10只。以灌胃的方式給予小鼠受試藥物,灌胃量為10 mL/(kg·BW),1次/d,空白對照組給予等量的蒸餾水。設(shè)置絞股藍(lán)水提物低、高劑量組,分別按50、100 mg/(kg·BW)給藥;絞股藍(lán)皂苷低、高劑量組,分別按5、10 mg/(kg·BW),給藥;絞股藍(lán)多糖低、高劑量組,分別按5、10 mg/(kg·BW)給藥。試驗(yàn)期間動物自由攝食飲水,每天觀察小鼠的活動及生長情況。灌胃30 d后,對各組小鼠進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測。

1.4.2 直接睡眠試驗(yàn) 在末次灌胃15 min后觀察小鼠睡眠情況。當(dāng)清醒小鼠置于背臥位時,能夠立即翻正身位。如果超過60 s小鼠不能翻正,說明翻正反射消失,記為小鼠進(jìn)入睡眠,從翻正反射消失到其恢復(fù)的時間為小鼠的睡眠時間。分別觀察并計算各組小鼠的入睡只數(shù)及睡眠時間。

1.4.3 延長戊巴比妥鈉睡眠時間試驗(yàn) 在末次灌胃15 min后,各組小鼠腹腔注射戊巴比妥納45 mg/(kg·BW),分別記錄各組動物的平均睡眠時間。

1.4.4 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn) 在末次灌胃15 min后,各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉27 mg/(kg·BW),分別記錄各組30 min內(nèi)入睡動物只數(shù)。

1.4.5 巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn) 在末次灌胃15 min后,各組小鼠腹腔注射巴比妥鈉230 mg/(kg·BW),觀察受試藥物能否縮短巴比妥鈉睡眠潛伏期。

1.4.6 腦組織5-HT、GABA、DA含量的檢測 各組小鼠連續(xù)灌胃30 d后,禁食12 h,處死小鼠,取出腦組織,用生理鹽水沖洗后稱其質(zhì)量,用勻漿器制備10%的腦組織勻漿,4 ℃條件下8 000 r/min離心10 min后取上清液,按照試劑盒說明書采用ELISA測定各組小鼠腦組織中5-HT、GABA、DA的含量。

2 結(jié)果

2.1 直接睡眠試驗(yàn) 空白對照組、絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖各劑量組的小鼠均未出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象,各組均無直接睡眠效果(均P>0.05)。見表1。

表1 絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷及絞股藍(lán)多糖對小鼠直接睡眠試驗(yàn)的影響(n=10)

2.2 延長戊巴比妥鈉睡眠時間試驗(yàn) 與空白對照組比較,絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖高劑量組小鼠的戊巴比妥鈉睡眠時間與空白對照組比較極顯著延長(P<0.01或P<0.001);且絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷高劑量組與絞股藍(lán)多糖組比較,更能顯著延長小鼠戊巴比妥鈉睡眠時間(P<0.05),但是絞股藍(lán)水提物組與絞股藍(lán)皂苷高劑量組差異不顯著。低劑量組中僅有絞股藍(lán)皂苷組小鼠的戊巴比妥鈉睡眠時間與空白對照組比較顯著延長(P<0.05)。見表2。

表2 絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷及絞股藍(lán)多糖對戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時間的影響(n=10)

2.3 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn) 與空白對照組比較,絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷高劑量組能顯著增加戊巴比妥鈉閾下催眠劑量入睡小鼠只數(shù)(P<0.001),但絞股藍(lán)水提物與絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖組差異不顯著。絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷低劑量組以及絞股藍(lán)多糖高劑量組能顯著增加戊巴比妥鈉閾下催眠劑量入睡小鼠只數(shù)(P<0.05)。見表3。

表3 絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷及絞股藍(lán)多糖對巴比妥鈉閾下劑量催眠作用的影響(n=10)

2.4 巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn) 與空白對照組比較,絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷高劑量組顯著縮短巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠潛伏期的作用(P<0.001)。與絞股藍(lán)多糖組比較,絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷高劑量組更能顯著縮短小鼠睡眠潛伏期(P<0.05),但是絞股藍(lán)水提物與絞股藍(lán)皂苷高劑量組之間差異不顯著。絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷低劑量組與空白對照組比較,小鼠睡眠潛伏期顯著縮短(P<0.05),但是2組組間差異不顯著。見表4。

表4 絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷及絞股藍(lán)多糖對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響(n=10)

2.5 絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖對失眠小鼠腦組織5-HT、GABA、DA含量的影響 與空白對照組比較,絞股藍(lán)水提物高劑量組5-HT、GABA顯著升高(P<0.01),DA含量顯著降低(P<0.01);絞股藍(lán)皂苷高劑量組5-HT、GABA含量顯著升高(P<0.01或P<0.001),DA含量顯著降低(P<0.01);絞股藍(lán)多糖高劑量組GABA含量顯著升高(P<0.01),DA含量顯著降低(P<0.05)。其中,與絞股藍(lán)多糖組比較,絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷高劑量組小鼠的DA含量顯著降低(P<0.05),但是2組之間無顯著性差異。見表5。

表5 各組小鼠腦組織中5-HT、GABA、DA的含量比較

3 討論

本研究為探討絞股藍(lán)改善睡眠的功效成分,采用絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖灌胃小鼠,通過直接睡眠法、延長戊巴比妥鈉睡眠時間、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn)、巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn)比較不同組分對小鼠睡眠的作用,并對小鼠腦組織中的5-HT、GABA、DA含量進(jìn)行了測定,結(jié)果顯示,絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)水提物在10 mg/kg以及100 mg/kg劑量下對小鼠的改善睡眠作用明顯,此時小鼠腦組織的5-HT、GABA含量與空白對照組比較顯著升高(P<0.05或P<0.01或P<0.001),DA水平也顯著低于空白對照組(P<0.05或P<0.001)。但是絞股藍(lán)皂苷與絞股藍(lán)水提物組對小鼠睡眠的改善作用差異不明顯。研究表明,周署[12]等人在臨床上用絞股藍(lán)總皂苷100～200 mg/(kg·d),患者連續(xù)服用1個月,對失眠、精神不安等神經(jīng)官能證均有顯著療效。絞股藍(lán)水提物中含有多糖和皂苷等成分[13-14],但絞股藍(lán)多糖對小鼠的改善睡眠作用并不明顯,這說明絞股藍(lán)對小鼠改善睡眠作用的主要功效成分可能是絞股藍(lán)皂苷。

據(jù)《本草綱目》記載,絞股藍(lán)性寒、味苦,常用絞股藍(lán)泡水飲,可治療咽喉炎及氣管炎、偏頭痛及睡眠不良[15]。皂苷、多糖與黃酮類化合物是其主要活性成分[16]。絞股藍(lán)黃酮類化合物改善睡眠功效未見報道,因此本試驗(yàn)未設(shè)置絞股藍(lán)黃酮組。湯浮康[17]采用絞股藍(lán)復(fù)方中藥治療不寐癥患者93例,治愈38例,有效51例,無效4例,總有效率為95.7%,證明絞股藍(lán)水溶液能夠治療不寐癥。江硯等[18]采用整體動物實(shí)驗(yàn)方法,檢測大鼠下丘腦中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)(L-NE、DA、5-HIAA、5-HT)和小鼠海馬組織中的谷氨酸、γ-氨基丁酸,對給藥后動物腦神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行含量測定,結(jié)果表明絞股藍(lán)總皂苷具有明顯的鎮(zhèn)靜、催眠作用。3種成分均可改善睡眠,這與本試驗(yàn)的結(jié)果一致。絞股藍(lán)水提物與絞股藍(lán)皂苷改善睡眠效果無顯著性差異,這是因?yàn)榻g股藍(lán)皂苷大多溶于水[19]。且水提絞股藍(lán)工藝簡單、成本較低、無溶劑污染,日常生產(chǎn)中廣為使用[20]。

綜上所述,絞股藍(lán)皂苷具有明顯的鎮(zhèn)靜、催眠作用,是絞股藍(lán)改善睡眠主要功效成分,其作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

利益沖突聲明:無。