摘要 為確定酵母鉻和二氫吡啶是否能緩解圍產(chǎn)期奶牛熱應(yīng)激，將24 頭體質(zhì)量和胎次相近的圍產(chǎn)期荷斯坦奶牛隨機(jī)分為3 組，飼養(yǎng)于環(huán)境溫濕指數(shù)（THI）高于68 的熱應(yīng)激條件下，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，酵母鉻組和二氫吡啶組飼喂基礎(chǔ)日糧的同時(shí)飼喂8 g/（頭·d）鉻含量為1‰ 的酵母鉻和3 g/（頭·d）的二氫吡啶，試驗(yàn)周期為40 d，觀測(cè)酵母鉻和二氫吡啶對(duì)圍產(chǎn)期奶牛熱應(yīng)激反應(yīng)的影響。結(jié)果顯示：① 酵母鉻組和二氫吡啶組奶牛與對(duì)照組奶牛在呼吸頻率上無顯著差異（Pgt;0.05）。② 各組奶牛血清中血糖和膽固醇含量在產(chǎn)前第7 天與產(chǎn)后第3 天均無顯著差異。二氫吡啶組奶牛產(chǎn)前第7 天血清中甘油三酯含量顯著降低（Plt;0.05）。③ 與對(duì)照組比較，酵母鉻組和二氫吡啶組產(chǎn)前、產(chǎn)后血清中Na+、K+、Cl?的濃度均無顯著差異（Pgt;0.05），各組在產(chǎn)前、產(chǎn)后血清中堿性磷酸酶和肌酸激酶的含量也均未出現(xiàn)顯著變化（Pgt;0.05）。④ 酵母鉻組、二氫吡啶組與對(duì)照組奶牛血清中熱休克蛋白70（heat shock protein 70，HSP70）基因mRNA 表達(dá)量沒有明顯差異（Pgt;0.05）。以上結(jié)果表明，熱應(yīng)激條件下，在圍產(chǎn)期奶牛日糧中添加8 g/（頭·d）鉻含量為1‰ 的酵母鉻和3 g/（頭·d）二氫吡啶對(duì)血液生化指標(biāo)和HSP70 mRNA 表達(dá)量均無顯著影響，說明日糧中添加8 g/（頭·d）鉻含量為1‰ 的酵母鉻和3 g/（頭·d）二氫吡啶對(duì)緩解圍產(chǎn)期荷斯坦奶牛熱應(yīng)激無明顯效果。

關(guān)鍵詞 熱應(yīng)激； 圍產(chǎn)期奶牛； 酵母鉻； 二氫吡啶； 血清生化指標(biāo)

中圖分類號(hào) S858.23 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1000-2421（2024）02-0188-09

奶牛是對(duì)溫度特別敏感的動(dòng)物，尤其是處于泌乳階段的奶牛，在高溫高濕環(huán)境下很容易產(chǎn)生熱應(yīng)激［1］。隨著全球氣候變暖日益加?。?］，我國南方地區(qū)夏季溫度不斷升高，奶牛發(fā)生熱應(yīng)激的情況愈發(fā)頻繁。奶牛產(chǎn)生熱應(yīng)激后表現(xiàn)為體溫升高、呼吸頻率增加以及采食量下降等癥狀，其產(chǎn)奶量、乳品質(zhì)以及養(yǎng)殖效率明顯降低［3］。熱應(yīng)激還會(huì)導(dǎo)致內(nèi)分泌激素的紊亂，從而降低奶牛免疫功能，使得奶牛發(fā)病率上升［4］，嚴(yán)重影響奶牛經(jīng)濟(jì)價(jià)值的發(fā)揮。因此，緩解奶牛熱應(yīng)激已經(jīng)成為奶牛養(yǎng)殖行業(yè)亟需解決的重要問題。

在飼糧中添加鉻等抗應(yīng)激飼料添加劑是緩解奶牛熱應(yīng)激、提高生產(chǎn)性能的有效措施。例如飼糧中添加0.8 mg/kg 酵母鉻可提高熱應(yīng)激牛日增重、顯著降低料肉比，并降低熱應(yīng)激標(biāo)志物熱休克蛋白的含量［5］；在圍產(chǎn)期奶牛日糧中補(bǔ)充0.03、0.06 和0.12 mg/kg 蛋氨酸鉻，產(chǎn)后體況評(píng)分損失隨著蛋氨酸鉻濃度的增加呈線性下降，同時(shí)還使得牛奶產(chǎn)量以及乳中脂肪和乳糖含量增加［6］；另外有研究表明鉻補(bǔ)充劑改善了奶牛葡萄糖代謝并防止了熱應(yīng)激條件下奶牛體溫的升高［7］。以上研究結(jié)果表明在飼糧中添加鉻對(duì)于緩解奶牛熱應(yīng)激有很大的潛力，但其作用機(jī)制并不清楚。

二氫吡啶在動(dòng)物飼料中充當(dāng)一種抗氧化添加劑，可以保護(hù)油脂、維生素A 以及胡蘿卜素免受氧化［8］，在反芻動(dòng)物生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛。熱應(yīng)激環(huán)境下在奶牛日糧中添加二氫吡啶可以提高超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）和總抗氧化（T-AOC）水平，并對(duì)熱應(yīng)激下的瘤胃微生物群落產(chǎn)生有利影響［9］；高景等［10］報(bào)道，飼糧中添加3 g/（頭·d）二氫吡啶可以顯著提高熱應(yīng)激奶牛的干物質(zhì)采食量和粗蛋白消化率；趙新茂等［11］報(bào)道，飼糧中添加3 g/（頭·d）二氫吡啶可以降低瘤胃中氨態(tài)氮的濃度，促進(jìn)瘤胃對(duì)氨態(tài)氮的利用。

當(dāng)前關(guān)于鉻補(bǔ)充劑和二氫吡啶對(duì)熱應(yīng)激圍產(chǎn)期奶牛的研究鮮有報(bào)道，圍產(chǎn)期是奶牛泌乳周期中最為關(guān)鍵的階段，緩解此階段奶牛熱應(yīng)激對(duì)改善奶牛生產(chǎn)性能、延長奶牛利用年限等有重要意義。鑒于此，筆者探究飼糧中添加酵母鉻或二氫吡啶對(duì)熱應(yīng)激圍產(chǎn)期奶牛血液生化指標(biāo)以及熱應(yīng)激標(biāo)志物HSP70 mRNA 表達(dá)量的影響，旨在確定酵母鉻或二氫吡啶作為飼料添加劑是否具有緩解奶牛熱應(yīng)激作用，并為酵母鉻和二氫吡啶在奶牛生產(chǎn)中的合理應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

鉻含量為1‰ 的酵母鉻購自浙江深友生物技術(shù)有限公司，純度為99% 的二氫吡啶購自河北衡水和川生物技術(shù)公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇胎次相近［（2±0.3）胎］，體況、產(chǎn)奶量以及預(yù)產(chǎn)期相似，處于圍產(chǎn)期的荷斯坦奶牛24 頭，按照隨機(jī)分配的原則分為3 組，分別為對(duì)照組、酵母鉻組和二氫吡啶組，每組8 頭牛。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，酵母鉻組和二氫吡啶組分別飼喂基礎(chǔ)日糧的同時(shí)飼喂8 g/（頭·d）鉻含量為1‰ 的酵母鉻和3 g/（頭·d）的二氫吡啶，整個(gè)奶牛試驗(yàn)于8-9 月完成，其中預(yù)試期為10 d，試驗(yàn)期為產(chǎn)前27 d 到產(chǎn)后3 d，共40 d。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期間試驗(yàn)牛產(chǎn)前和產(chǎn)后基礎(chǔ)日糧配方不變，日糧組成如表1 所示。奶牛進(jìn)入干奶期后被轉(zhuǎn)移至單獨(dú)的開放型牛舍中，不同組奶牛單欄飼養(yǎng)，每日3 次（07：00、15：00 和21：40）飼喂全價(jià)日糧，飼喂時(shí)先將每日酵母鉻和二氫吡啶飼喂量分成3 份，分別與300 g 基礎(chǔ)日糧人工攪拌充分混合，待奶牛采食完混合物后再投喂剩余的日糧，自由飲水。奶牛產(chǎn)犢后每天擠奶3 次，操作步驟嚴(yán)格按照奶牛場規(guī)定的流程進(jìn)行，配方主要參照中國乳牛的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。日糧營養(yǎng)水平：粗蛋白（16.21%）、粗脂肪（5.26%）、中性洗滌纖維（36.73%）、酸性洗滌纖維（27.63%）、鈣（0.95%）、總磷（0.46%）、泌乳凈能（6.84 MJ/kg）。

1.4 奶牛干物質(zhì)采食量測(cè)定

在試驗(yàn)后期連續(xù)3 d 測(cè)定奶牛的采食量數(shù)據(jù)，每次飼喂時(shí)都給予奶牛充足的飼料，飼喂前稱量飼料的新鮮質(zhì)量并根據(jù)飼料水分含量計(jì)算出干物質(zhì)含量，于第2 天07：00 再次飼喂前稱量剩余飼料烘干后的質(zhì)量，通過差值法計(jì)算得出奶牛每天的干物質(zhì)采食量，最后根據(jù)3 d 的干物質(zhì)采食量計(jì)算出每組試驗(yàn)牛的平均日干物質(zhì)采食量。

1.5 奶牛呼吸頻率測(cè)定

在試驗(yàn)?zāi)膛．a(chǎn)前1 周左右，分別于06：00、08：00、10：00、12：00、14：00、16：00、18：00 對(duì)每組試驗(yàn)牛用計(jì)數(shù)器和秒表進(jìn)行呼吸頻率測(cè)定。統(tǒng)計(jì)奶牛3 min內(nèi)胸廓和腹部的起伏次數(shù)，奶牛的呼吸頻率為1 d 內(nèi)記錄數(shù)據(jù)的平均值。

1.6 牛舍溫濕指數(shù)測(cè)定

干濕球溫度計(jì)分別懸掛于2 列牛舍的中部，距離地面1.5 m，保證干濕球溫度計(jì)的有效通風(fēng)，防止陽光直射和雨淋，以確保讀數(shù)的準(zhǔn)確性。在每日07：00、13：00、17：00 這3 個(gè)時(shí)間點(diǎn)記錄干球溫度（Td）與濕球溫度（Tw），并通過溫濕指數(shù)（temperature-humidityindex，ITH）公式［ITH=0.72×（Td+Tw）+40.6］計(jì)算出溫濕指數(shù)［12］。

1.7 血液相關(guān)指標(biāo)測(cè)定

在奶牛產(chǎn)前第7 天和產(chǎn)后第3 天的07：00，對(duì)空腹奶牛進(jìn)行尾靜脈采血，部分血液置于10 mL 滅菌離心管中，以3 000 r/min 離心15 min，收集上層血清于1.5 mL 離心管中，待測(cè)。血清中血糖、甘油三酯、總膽固醇、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、肌酸激酶（creatine kinase，CK）、電解離子濃度均參照試劑盒（購自南京建成）說明書進(jìn)行。另一部分血液置于10 mL 抗凝管中，用于測(cè)定血細(xì)胞中HSP70mRNA 表達(dá)量。

1.8 HSP70 mRNA表達(dá)量的測(cè)定

1）裂解紅細(xì)胞，提取總RNA。①取1 mL 全血，3 000 r/min 離心10 min，吸除上清。加入1.5 mL 紅細(xì)胞裂解液，混勻，4 ℃放置15 min。3 000 r/min 離心10 min，吸除上清。重復(fù)以上步驟2 次，直至沉淀中無紅細(xì)胞。②加入1 mL 4 ℃預(yù)冷的PBS 溶液。3 000 r/min 離心10 min，吸除PBS。加入1 mLTrizol Reagent，破碎細(xì)胞。③將液體轉(zhuǎn)移到滅菌后的1.5 mL 離心管，加入250 μL 三氯甲烷，混勻后靜置3 min。4 ℃下12 000 r/min 離心8 min。④將上清移至離心管中，加入0.8 倍體積的異丙醇混勻。-20 ℃放置15 min。4 ℃下12 000 r/min 離心10 min，RNA 沉淀于管底。⑤吸除液體，加入75% 乙醇1.5mL 洗滌沉淀。4 ℃下12 000 r/min 離心5 min。吸除液體，將離心管置于超凈臺(tái)上吹3 min。加入20 μL無RNA 酶的水溶解RNA。

2）逆轉(zhuǎn)錄。在PCR 管中加入含2 μL RNA 的溶液，再加入1 μL oligo（dT）15，用無核糖核酸酶的去離子水補(bǔ)足至12 μL。于PCR 儀上70 ℃保溫5 min 后迅速置冰上冷卻。依次加入4 μL 5×buffer、2 μL10 mmol/L dNTPs、1 μL RNA inhibitor 和1 μL 反轉(zhuǎn)錄酶，混勻。于PCR 儀上42 ℃ 保溫30min，結(jié)束后80 ℃保溫5 min 滅活反轉(zhuǎn)錄酶。

3）PCR 擴(kuò)增。反應(yīng)體系共25 μL，包括12.5 μL2×qPCR 預(yù)混液、2 μL 反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、8.5 μL 雙蒸水、2 μL 2.5 μmol/L 基因引物。上游引物序列為5′-AGAAGAAGGTGCTGGACAAGTGC-3′，下游引物序列為5′-CAGTCTGCTGATGATGGGGTTAC-3′。擴(kuò)增程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性30 s，然后95 ℃變性5 s，在最佳退火溫度下退火20 s，共40個(gè)循環(huán)。

4）結(jié)果處理。HSP70 mRNA 相對(duì)表達(dá)量采用2-ΔΔCt法進(jìn)行計(jì)算。

1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel 2007 進(jìn)行初步數(shù)據(jù)整理，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。采用SAS 9.1.3 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），采用Duncan’s 多重比較進(jìn)行顯著性分析，Plt;0.05 為差異顯著。呼吸頻率使用SAS 9.1.3 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行重復(fù)統(tǒng)計(jì)模型分析，組間進(jìn)行LSD 多重比較。用GraphPad Prism 8.0 對(duì)干物質(zhì)采食量和血液中HSP70 mRNA 相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛舍溫濕指數(shù)及酵母鉻和二氫吡啶對(duì)奶牛呼吸頻率及采食量的影響

在試驗(yàn)正式期的30 d 內(nèi)觀測(cè)白天3 個(gè)時(shí)間點(diǎn)07：00、13：00 和17：00 的THI 指數(shù)，發(fā)現(xiàn)THI 指數(shù)均超過72（圖1），所有THI 值均高于熱應(yīng)激閾值68，說明奶牛處于熱應(yīng)激狀態(tài)。對(duì)照組、酵母鉻組和二氫吡啶組奶牛干物質(zhì)采食量分別為（11.00±0.05）、（11.02±0.39）、（10.81±0.30） kg/d，3 組間無顯著差異（Pgt;0.05）。由表2 可見，3 組奶牛呼吸頻率受測(cè)量時(shí)間影響顯著（Plt;0.05），組間奶牛呼吸頻率無明顯差異（Pgt;0.05）。但與對(duì)照組奶牛相比，酵母鉻組和二氫吡啶組奶牛呼吸頻率有升高的趨勢(shì)。酵母鉻組奶牛在10：00 時(shí)呼吸頻率顯著高于對(duì)照組和二氫吡啶組（Plt;0.05）。

2.2 酵母鉻和二氫吡啶對(duì)奶牛血清生化代謝物質(zhì)濃度的影響

由表3 可見，各組奶牛血清中血糖和總膽固醇在產(chǎn)后與產(chǎn)前相比有降低的趨勢(shì)，血清甘油三酯含量產(chǎn)后與產(chǎn)前相比有升高趨勢(shì)。與對(duì)照組比較，酵母鉻組奶牛產(chǎn)前、產(chǎn)后血清中血糖和膽固醇濃度的變化差異不顯著（Pgt;0.05）。與對(duì)照組比較，二氫吡啶組產(chǎn)前血清中甘油三酯含量顯著降低（Plt;0.05）。二氫吡啶組奶牛血清中膽固醇含量在產(chǎn)后低于對(duì)照組，低22.40%。

2.3 酵母鉻和二氫吡啶對(duì)奶牛血液電解離子濃度的影響

由表4 可見，與對(duì)照組比較，酵母鉻組奶牛產(chǎn)前血清中Cl?濃度均值升高，血清中陰陽離子差（bloodcation-anion difference，BCAD）產(chǎn)前顯著降低（Plt;0.05），而血清中Na+和K+的濃度產(chǎn)前、產(chǎn)后均未出現(xiàn)顯著變化（Pgt;0.05）；二氫吡啶組奶牛血清中Na+、K+、Cl?的濃度和BCAD 在產(chǎn)前、產(chǎn)后均未出現(xiàn)顯著變化（Pgt;0.05）。

2.4 酵母鉻和二氫吡啶對(duì)熱應(yīng)激奶牛堿性磷酸酶和肌酸激酶的影響

由表5 可見，與對(duì)照組比較，酵母鉻組、二氫吡啶組奶牛在產(chǎn)前和產(chǎn)后血清中堿性磷酸酶、肌酸激酶活性無顯著變化（Pgt;0.05），但堿性磷酸酶水平在產(chǎn)后有下降趨勢(shì)，肌酸激酶在產(chǎn)前有下降趨勢(shì)。

2.5 酵母鉻或二氫吡啶對(duì)血液HSP70 mRNA 表達(dá)量的影響

由圖2 可見，與對(duì)照組比較，酵母鉻組和二氫吡啶組血液HSP70 mRNA 表達(dá)量變化無顯著差異（Pgt;0.05）。

3 討論

3.1 酵母鉻和二氫吡啶對(duì)奶牛干物質(zhì)采食量和呼吸頻率的影響

熱應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致奶牛采食量降低［13］，可能是奶牛為加速散熱使流經(jīng)皮膚的血流量增多，消化道供血不足，導(dǎo)致采食的飼糧在體內(nèi)胃腸道蠕動(dòng)減緩、消化吸收速率降低，奶牛因此減少采食。本研究結(jié)果表明在日糧中添加酵母鉻和二氫吡啶后奶牛采食量與對(duì)照組相比無顯著差異，這與前人結(jié)果相似。張會(huì)會(huì)等［14］發(fā)現(xiàn)在夏季補(bǔ)飼煙酸鉻對(duì)奶牛采食量無顯著影響。同時(shí)也有研究發(fā)現(xiàn)對(duì)犢牛飼喂0.5、1.0 和1.5mg/kg 無機(jī)鉻120 d 后，其干物質(zhì)攝入量并無任何影響［15］。

呼吸頻率是反芻動(dòng)物重要的生理指標(biāo)，當(dāng)機(jī)體處于熱應(yīng)激環(huán)境下時(shí)，反芻動(dòng)物首先通過提高自身呼吸頻率來增加機(jī)體的散熱量，進(jìn)而緩解熱應(yīng)激。廖曉霞等［16］報(bào)道，在輕度、中度及嚴(yán)重?zé)釕?yīng)激條件下，奶牛的呼吸頻率分別為50～60、80～120、120～160 次/min，甚至可能更高。本研究中奶牛呼吸頻率結(jié)果表明奶牛均處于輕度至中度熱應(yīng)激，添加酵母鉻后奶牛呼吸頻率與對(duì)照組相比有升高趨勢(shì)。張峰等［17］研究發(fā)現(xiàn)，日糧中分別添加100、150、200mg/kg 的二氫呲啶后奶牛呼吸頻率與對(duì)照組相比有升高趨勢(shì)，本研究結(jié)果與其相似，可能是奶牛通過提高呼吸頻率促進(jìn)體內(nèi)熱量向外界散發(fā)，進(jìn)而達(dá)到緩解熱應(yīng)激的作用。

3.2 酵母鉻和二氫吡啶對(duì)奶牛血清生化代謝物質(zhì)濃度的影響

血糖含量是機(jī)體糖代謝的重要體現(xiàn)，也能反映能量代謝水平。當(dāng)奶牛發(fā)生熱應(yīng)激時(shí)，其采食量和營養(yǎng)物質(zhì)消化率均低于非熱應(yīng)激時(shí)期，機(jī)體攝入的營養(yǎng)物質(zhì)不足，為滿足正常能量需要機(jī)體分泌大量糖皮質(zhì)激素，葡萄糖分解速率加快，血糖濃度下降［18］。本試驗(yàn)結(jié)果表明奶牛在補(bǔ)充酵母鉻后無論是產(chǎn)前還是產(chǎn)后血糖含量并沒有顯著變化。李娜［19］研究報(bào)道在圍產(chǎn)期奶牛飼糧中添加煙酸鉻對(duì)產(chǎn)前7 d和產(chǎn)后56 d 血糖含量無影響。傅傳鞭［20］研究發(fā)現(xiàn)對(duì)圍產(chǎn)期奶牛分別添加劑量為2.5、5 g/d 的丙酸鉻后，奶牛血糖含量無顯著變化。這可能與奶牛所處的時(shí)期有關(guān)，圍產(chǎn)期奶牛對(duì)葡萄糖的需求是未妊娠奶牛的幾倍［21］，補(bǔ)充鉻雖然可提升胰島素活性［22］，但由于葡萄糖需求較大，因此血糖變化不顯著。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在飼糧中添加二氫吡啶后奶牛血糖濃度有升高趨勢(shì)。鄭曉中等［23］研究發(fā)現(xiàn)二氫吡啶能夠提高奶牛血液中血糖含量。曹杰［24］在奶牛日糧中添加0.02% 二氫吡啶提高了血清中葡萄糖的濃度。本研究結(jié)果與鄭曉中等［23］和曹杰［24］的研究結(jié)果相似，但是奶牛血糖濃度提高水平未達(dá)到顯著程度，可能是試驗(yàn)中二氫吡啶劑量低于前人研究中的添加量，同時(shí)本試驗(yàn)?zāi)膛Ｌ幱趪a(chǎn)期這一特殊時(shí)期。

甘油三脂和膽固醇是機(jī)體血脂的組成成分，奶牛在發(fā)生熱應(yīng)激后隨著采食量下降導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)攝入減少，此時(shí)機(jī)體加速脂肪分解來保持能量的供應(yīng)。本研究結(jié)果中酵母鉻組奶牛在產(chǎn)前和產(chǎn)后血清中甘油三脂和膽固醇濃度均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。研究表明在熱應(yīng)激奶牛日糧中添加0.4、0.8、1.2 mg/kg 富鉻酵母可降低血清中膽固醇的含量［25］，添加10、20 g/（頭·d）丙酸鉻后奶牛血漿中膽固醇和甘油三脂含量均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)［26］，本研究結(jié)果與此報(bào)道結(jié)果一致。鉻補(bǔ)充劑對(duì)熱應(yīng)激條件下奶牛機(jī)體脂代謝有調(diào)節(jié)作用，這種調(diào)節(jié)作用可能與鉻能通過協(xié)助葡萄糖耐受因子激活胰島素和胰島素樣生長因子，促進(jìn)肝臟膽固醇合成與清除，進(jìn)而影響脂代謝有關(guān)。圍產(chǎn)期奶牛由于攝入總能量低于機(jī)體所需水平，機(jī)體處于能量負(fù)平衡狀態(tài)，而熱應(yīng)激會(huì)加劇能量負(fù)平衡，導(dǎo)致奶牛代謝紊亂的發(fā)病率明顯提高［27］。奶牛機(jī)體出現(xiàn)能量負(fù)平衡后將動(dòng)用體脂來滿足圍產(chǎn)期對(duì)能量的需求，當(dāng)血液中脂質(zhì)長期保持較高濃度時(shí)會(huì)造成奶牛肝臟脂肪沉積，形成脂肪肝［28］。隋晨［29］發(fā)現(xiàn)在圍產(chǎn)期奶牛日糧中補(bǔ)充二氫吡啶后降低了分娩當(dāng)天和產(chǎn)后21 d血漿中膽固醇含量，本試驗(yàn)結(jié)果表明二氫吡啶組奶牛血清中膽固醇含量在產(chǎn)后與對(duì)照組相比有所降低，這與隋晨所得出的研究結(jié)果相同。同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)二氫吡啶組奶牛血液中甘油三脂含量顯著降低，表明二氫吡啶對(duì)于調(diào)節(jié)圍產(chǎn)期奶牛脂質(zhì)代謝有積極作用，可有效保護(hù)奶牛肝臟健康。

3.3 酵母鉻和二氫吡啶對(duì)奶牛血液電解離子濃度的影響

Na+、K+和Cl?等離子是維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)和物質(zhì)代謝正常運(yùn)轉(zhuǎn)最為重要的離子。熱應(yīng)激在一定程度上會(huì)影響奶牛機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，例如劉慶華等［30］發(fā)現(xiàn)荷斯坦奶牛和娟荷奶牛夏季熱應(yīng)激狀態(tài)下血清中Na+和Ca2+濃度顯著低于冬季非熱應(yīng)激狀態(tài)。在本研究中酵母鉻組和二氫吡啶組奶牛血清中Na+、K+和Cl?離子濃度與對(duì)照組差異不顯著。但無論是產(chǎn)前還是產(chǎn)后，酵母鉻或二氫吡啶均對(duì)血清陰陽離子差有降低趨勢(shì)，說明酵母鉻和二氫吡啶對(duì)于緩解熱應(yīng)激引起的代謝紊亂有一定的作用，可維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。

3.4 酵母鉻和二氫吡啶對(duì)奶牛堿性磷酸酶和肌酸激酶的影響

堿性磷酸酶可以促使磷酸根離子與鈣離子結(jié)合，促進(jìn)體內(nèi)礦物元素的沉積。敖日格樂等［31］發(fā)現(xiàn)夏季熱應(yīng)激條件下奶牛血清中堿性磷酸酶活力顯著下降。本試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示酵母鉻組奶牛和二氫吡啶組奶牛在產(chǎn)后血清堿性磷酸酶活力與對(duì)照組相比有降低趨勢(shì)，表明酵母鉻和二氫吡啶可增強(qiáng)圍產(chǎn)期奶牛熱應(yīng)激后對(duì)鈣和磷的吸收，維持血鈣穩(wěn)定。肌酸激酶是參與能量代謝的關(guān)鍵酶之一，能將肌酸向磷酸肌酸轉(zhuǎn)化進(jìn)而為機(jī)體儲(chǔ)備能量。何欽［32］發(fā)現(xiàn)不同泌乳階段的奶牛血清中肌酸激酶活性均隨著熱應(yīng)激程度的增加而表現(xiàn)出升高趨勢(shì)。在熱應(yīng)激條件下，機(jī)體無法獲得充足的能量，肌酸激酶從肌肉逃逸至血液中，因此肌酸激酶活性可作為判斷熱應(yīng)激的指標(biāo)。從本試驗(yàn)結(jié)果來看，酵母鉻組和二氫吡啶組奶牛產(chǎn)前血清中肌酸激酶表現(xiàn)為下降趨勢(shì)，說明酵母鉻和二氫吡啶對(duì)于緩解奶牛熱應(yīng)激保護(hù)機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)有一定效果。

3.5 酵母鉻或二氫吡啶對(duì)血液HSP70 mRNA 表達(dá)量的影響

熱休克蛋白70 是最保守和重要的一類熱休克蛋白，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和維持細(xì)胞穩(wěn)定的作用［33］，在熱應(yīng)激等有害條件下HSP70 的合成會(huì)顯著升高而提高機(jī)體的抗應(yīng)激能力。而在本試驗(yàn)中，酵母鉻組、二氫吡啶組與對(duì)照組奶牛血液樣本中HSP70 mRNA表達(dá)量無顯著差異。此結(jié)果可能與試驗(yàn)采集血液樣本的時(shí)間有關(guān)，本試驗(yàn)于奶牛產(chǎn)前第7 天和產(chǎn)后第3天分別于空腹（07：00）進(jìn)行尾靜脈采血，在07：00 時(shí)奶牛熱應(yīng)激強(qiáng)度低。高景等［10］和王學(xué)清等［34］的研究均表明，在高熱應(yīng)激條件下給奶牛飼喂含二氫吡啶或酵母鉻的日糧可顯著提高中國荷斯坦奶牛HSP70 的表達(dá)量，而在適溫期時(shí)各組間HSP70 表達(dá)量差異不顯著。本研究中，在輕度熱應(yīng)激條件下HSP70 mRNA 表達(dá)量差異不明顯，這與前人［10，34］結(jié)果是基本一致的。

總之，本研究中在熱應(yīng)激圍產(chǎn)期奶牛日糧中添加劑量為8 g/（頭·d）鉻含量為1‰ 的酵母鉻或3 g/（頭·d）二氫吡啶時(shí)，對(duì)采食量、呼吸頻率、血清代謝物濃度、血清生理生化指標(biāo)以及HSP70 mRNA 表達(dá)量影響不顯著。說明飼喂8 g/（頭·d）鉻含量為1‰ 的酵母鉻或3 g/（頭·d）二氫吡啶對(duì)于緩解圍產(chǎn)期荷斯坦奶牛熱應(yīng)激效果不明顯。

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（責(zé)任編輯：邊書京）