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        七葉一枝花種子萌發(fā)過程中內(nèi)源激素含量及酶活性變化研究

        2024-01-01 00:00:00康亮盧覃培王德寶朱丹朱凱銘黃雪靜郭宏偉
        廣西植物 2024年6期
        關(guān)鍵詞:內(nèi)源激素抗氧化酶淀粉酶

        DOI: 10.11931/guihaia.gxzw202310013

        康亮, 盧覃培, 王德寶, 等, 2024.

        七葉一枝花種子萌發(fā)過程中內(nèi)源激素含量及酶活性變化研究 [J].

        廣西植物, 44(6): 1118-1128.

        KANG L, LU QP, WANG DB, et al., 2024.

        Changes of endogenous hormone content and enzyme activities during seed germination of Paris polyphylla" [J].

        Guihaia, 44(6): 1118-1128.

        摘" 要:" 為探究七葉一枝花的種子萌發(fā)生理機制,該文從種胚形態(tài)上對七葉一枝花種子萌發(fā)過程的時期進行了劃分,并分析了不同時期種子內(nèi)源激素含量及相關(guān)酶活性的變化規(guī)律。結(jié)果表明:(1)根據(jù)種胚形態(tài)可將種子萌發(fā)過程細分為8個時期,即種胚未萌動時期(S1期)、心形胚時期(S2期)、種胚膨大時期(S3期)、胚根未突破種皮時期(S4期)、子葉柄伸長和胚根突破種皮時期(S5期)、下胚軸突破種皮時期(S6期)、上胚軸伸長時期(S7期)、胚根伸長時期(S8期)。(2)不同萌發(fā)時期種子的α-淀粉酶活性均明顯高于β-淀粉酶。(3)超氧化物歧化酶(SOD)活性在S5期最高,S1期最低;過氧化物酶(POD)和過氧化氫酶(CAT)活性隨種子萌發(fā)進程總體呈上升趨勢,可溶性蛋白含量隨種子萌發(fā)進程先下降后升高。(4)吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3)、脫落酸(ABA)和水楊酸(SA)含量隨種子萌發(fā)進程整體呈下降趨勢;1-氨基環(huán)丙烷羧酸(ACC)、茉莉酸(JA)、油菜素內(nèi)酯(BRs)隨種子萌發(fā)進程整體呈上升趨勢;細胞分裂素類(CTKs)含量無顯著變化;IAA/ABA和GA3/ABA隨種子萌發(fā)進程呈先下降后上升趨勢,而CTKs/ABA則不斷升高。(5)ABA、IAA、GA3含量與胚率呈負相關(guān),而ACC、JA、BRs、POD、CAT、β-淀粉酶活性與胚率呈正相關(guān)。綜上認為,七葉一枝花在不同時期種子內(nèi)源激素含量及相關(guān)酶活性各不相同,其中α-淀粉酶活性、POD活性可能與種胚胚根伸長有關(guān),GA3可能影響種胚形成,而ABA則可能抑制種胚的生長發(fā)育。

        關(guān)鍵詞: 七葉一枝花, 萌發(fā)階段, 內(nèi)源激素, 抗氧化酶, 淀粉酶

        中圖分類號:" Q945.34

        文獻標識碼:" A

        文章編號:" 1000-3142(2024)06-1118-11

        收稿日期: 2024-04-02" 接受日期: 2024-05-21

        基金項目:" 廣西重點研發(fā)計劃項目(桂科AB20238004); 中央引導(dǎo)地方科技發(fā)展資金專項(防科ZY20221502); 廣西壯族自治區(qū)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目(202110598260); 國家青年岐黃學(xué)者培養(yǎng)項目; 廣西醫(yī)科大學(xué)高水平創(chuàng)新團隊及杏湖學(xué)者計劃項目。

        第一作者: 康亮(1986—),博士,講師,研究方向為藥用植物栽培學(xué),(E-mail)55752628@qq.com。

        *通信作者:" 郭宏偉,教授,博士研究生導(dǎo)師,研究方向為中藥民族藥物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機制研究,(E-mail)hongweiguo@gxmu.edu.cn。

        Changes of endogenous hormone content and enzyme

        activities during seed germination of Paris polyphylla

        KANG Liang1, LU Qinpei1, WANG Debao3, ZHU Dan1, ZHU Kaiming1,

        HUANG Xuejing1, GUO Hongwei1,2*

        ( 1. Guangxi Key Laboratory of Bioactive Molecules Research and Evaluation/Pharmaceutical College, Guangxi Medical University, Nanning 530021,

        China; 2. Key Laboratory of Longevity and Aging-Diseases of Chinese Ministry of Education /Center for Translational Medicine, Guangxi

        Medical University, Nanning 530021, China; 3. Guangxi Bolang Health Industry Development Co., Ltd., Nanning 530000, China )

        Abstract:" To investigate the germination physiological mechanism of Paris polyphylla" seeds, different stages of the germination process were divided based on the seed embryo morphology and the changing rules in endogenous hormone content and related enzyme activities were analyzed at different stages. The results were as follows: (1) The germination process of the seeds could be divided into eight stages based on seed embryo morphology: non-germinating embryo stage (S1), heart-shaped embryo stage (S2), embryo swelling stage (S3), radicle not breaking through seed coat stage (S4), cotyledon petiole elongation and radicle breaking through seed coat stages (S5), lower hypocotyl breaking through seed coat stage (S6), upper hypocotyl elongation stage (S7), and radicle elongation stage (S8). (2) The α-amylase activity in the seeds was significantly higher than β-amylase activity at all germination stages. (3) Superoxide dismutase (SOD) activity was the highest at stage S5 and the lowest at stage S1; peroxidase (POD) and catalase (CAT) activities generally increased with seed germination progress; soluble protein content initially decreased and then increased with seed germination progress. (4) The contents of hormones such as indoleacetic acid (IAA), gibberellin (GA3), abscisic acid (ABA), and salicylic acid (SA) decreased overall, while 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid (ACC), jasmonic acid (JA), brassinolides (BRs) increased overall during seed germination. Cytokinins (CTKs) content showed no significant change. The ratios of IAA/ABA and GA3/ABA decreased initially and then increased, while CTKs/ABA continuously increased with seed germination progress. (5) The contents of ABA, IAA, GA3 were negatively correlated with embryo rate, while ACC, JA, BRs, POD, CAT, and β-amylase activity were positively correlated with embryo rate. In conclusion, the germination process of the seeds can be subdivided into eight stages based on seed embryo morphology, with varying endogenous hormone content and related enzyme activities at different stages. The activities of α-amylase and POD may be related to radicle elongation, while GA3 may affect the embryo formation, and ABA may inhibit the growth and development of the embryo.

        Key words: Paris polyphylla, germination stage, endogenous hormone, antioxidant enzymes, amylase

        七葉一枝花(Paris polyphylla)是百合科重樓屬植物,為《中華人民共和國藥典》收載的重樓藥材基原植物,具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚的功效(國家藥典委員會,2020),是云南白藥、宮血寧膠囊、樓蓮膠囊等80多種中成藥產(chǎn)品的主要原料。當前,我國七葉一枝花每年的消耗量遠遠超出了其自然生長量,使其野生藥用資源面臨枯竭的威脅,而人工繁育七葉一枝花是緩解上述矛盾和促進其可持續(xù)發(fā)展的有效途徑。因此,開展七葉一枝花人工繁育技術(shù)研究,指導(dǎo)高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)人工栽培,對保護野生七葉一枝花資源、滿足臨床需求具有重要意義。

        七葉一枝花的繁殖包括根莖切塊繁殖、組織培養(yǎng)和種子繁殖3種方式,其中種子繁殖因其繁殖系數(shù)大、資源消耗少而更有利于規(guī)?;N植(馬傳江等,2016)。然而,目前七葉一枝花的種子繁殖研究仍處于低級階段,種子萌發(fā)過程中生理生化指標方面的研究還較少報道。在種子萌發(fā)過程中,淀粉、蛋白質(zhì)等物質(zhì)通過相關(guān)酶的作用發(fā)生轉(zhuǎn)化,進而為種子發(fā)芽提供營養(yǎng)和能量。淀粉酶主要由α-淀粉酶和β-淀粉酶組成,催化種子內(nèi)淀粉降解。隨著種子的萌發(fā),抗氧化酶開始清除種子休眠期積累的有害物質(zhì)活性氧(Bailly et al., 2008),抗氧化酶系統(tǒng)中主要以超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、過氧化物酶(peroxidase,POD)、過氧化氫酶(catalase,CAT)通過清除細胞內(nèi)的活性氧,從而維持正常的細胞代謝功能。另外,種子萌發(fā)由遺傳和環(huán)境因素共同決定,其萌發(fā)的激素調(diào)控可能是種子植物中一種高度保守的機制。有研究表明,吲哚乙酸(indoleacetic acid,IAA)、脫落酸(abscisic acid,ABA)、赤霉素(gibberellic acid,GA)等(宋松泉等,2020a, b, c)對種子萌發(fā)起著重要的生理作用。

        七葉一枝花的種子萌發(fā)難,在自然條件下需要經(jīng)過2年才能萌發(fā)成苗。本團隊在前期研究發(fā)現(xiàn),七葉一枝花種子在(20±1) ℃下干燥保存4個月可促進七葉一枝花種子萌發(fā),但其在萌發(fā)過程中所參與的多種酶、激素等因子的變化規(guī)律及其與種胚發(fā)育的相關(guān)性研究鮮有報道。因此,本研究以(20±1)℃下干燥保存4個月的七葉一枝花種子為材料,采用顯微法觀察不同萌發(fā)階段七葉一枝花種子的顯微結(jié)構(gòu),并采取生理生化法測定淀粉酶及抗氧化酶,同時采用質(zhì)譜法測定8種植物內(nèi)源激素的含量,分析萌發(fā)過程中胚率與酶活及內(nèi)源激素之間的相關(guān)性,以期探索七葉一枝花種子萌發(fā)的生理機制,為七葉一枝花人工繁育栽培提供理論依據(jù)。

        1" 材料與方法

        1.1 試驗材料

        所用材料于2021年11月中旬采自廣西壯族自治區(qū)百色市羅城縣旦興村上旦屯,經(jīng)廣西藥用植物園余麗瑩研究員鑒定為七葉一枝花(Paris polyphylla)的種子。

        1.2 試驗方法

        1.2.1 種子萌發(fā)處理" 七葉一枝花種子采收后,立即洗去紅色假種皮,陰干7 d,隨后在(

        20±1)℃下干燥保存120 d。于2022年4月開始育苗,育苗采用蛭石+育苗盆法,育苗盆大小為22 cm × 15 cm × 8 cm,盆內(nèi)有小格,育苗時每小格放置1粒種子,每盆40粒,育苗20盆。育苗時,先潤洗蛭石,蛭石以手握不出水為宜,在育苗盆底部鋪墊(2±0.5)cm厚蛭石,放置種子(種子先用自來水浸泡24 h,再用500 mg·L-1 GA3浸泡24 h),上面覆蓋約0.3 cm厚的蛭石。育苗盆置于(20±1)℃的種子發(fā)芽箱中培養(yǎng)110 d,期間不定期補水,補水以保持蛭石表面濕潤為宜。

        根據(jù)七葉一枝花種子的種胚形態(tài)和不同發(fā)育階段,將種子萌發(fā)過程劃分為8個時期,即育苗1 d的種子標記為S1期,育苗15 d的種子標記為S2期,育苗29 d的種子標記為S3期,育苗44 d的種子標記為S4期,育苗58 d的種子標記為S5期,育苗72 d的種子標記為S6期,育苗96 d的種子標記為S7期,育苗110 d的種子標記為S8期。在58 d與72 d時,統(tǒng)計種子萌發(fā)率,以胚根突破種皮且發(fā)芽的種子為萌發(fā)種子,萌發(fā)率(%)=(每個取樣時期的發(fā)芽種子粒數(shù)/取樣的總種子粒數(shù))×100。

        1.2.2 種子顯微結(jié)構(gòu)觀察及形態(tài)測定" 于S1-S6期隨機取10粒大小一致的種子,將種子從中間縱切,使用FAA固定液固定,隨后采用番紅固綠染色法制成永久玻片。將玻片放在OLYMPUS正置熒光顯微鏡BX53下觀察、拍照,利用CellSens Dimension軟件測量種子胚乳橫徑、胚乳縱莖及胚縱徑,并計算胚率(普甜等, 2023),胚率(%)=(胚縱徑/胚乳縱徑)×100。S7-S8期由于胚根過長,因此改在根系掃描儀EPSON 2000上進行圖像采集,之后利用WinRHIZO軟件分析胚乳橫徑、胚乳縱莖和胚縱徑。

        1.2.3 酶活測定" 取1.0 g種子3份,先加入1 mL蒸餾水和少量石英砂,磨成勻漿后轉(zhuǎn)入離心管中,再加入4 mL蒸餾水浸提15 min,期間搖動數(shù)次。于1 200×g下離心10 min,取上清液定容至10 mL,即為α-淀粉酶、β-淀粉酶待測酶液。另取0.5 g種子3份,分別加入5 mL的磷酸鈉緩沖液(pH 7.8),研磨成勻漿后于8 000×g下離心20 min,取上清液用于測定超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)和可溶性蛋白。α-淀粉酶和β-淀粉酶活性參考李小方和張志良(2016)的方法,SOD、POD、CAT、可溶性蛋白測定參考張志良等(2009)的方法。

        1.2.4 內(nèi)源激素的提取和測定" 取大小一致的種子5粒,置于液氮研磨后稱量100 mg,分別加入1 170 μL乙腈-水-甲酸溶液(80∶19∶1,V/V),10 μL ISMix-A(混合內(nèi)標A),20 μL ISMix-B(混合內(nèi)標B),渦旋60 s,低溫避光超聲25 min, -20 ℃靜置過夜,在4 ℃ 14 000×g下離心20 min,先取上清液900 μL至96孔去磷脂板中正壓過濾,再加入200 μL乙腈-水-甲酸溶液(80∶19∶1, V/V)洗脫1次,液氮吹干濾液,-80 ℃保存?zhèn)溆?。測定時用200 μL甲醇∶水(1∶1, V/V)進行復(fù)溶。采用Waters I-Class LC超高效液相色譜系統(tǒng)進行分離。流動相:A液為0.05%甲酸-水溶液,B液為0.05%甲酸-乙腈。樣品置于4 ℃自動進樣器中,柱溫45 ℃,流速為400 μL·min-1;進樣量為2 μL。洗脫梯度: 0~10.0 min,2%~98%B;10.0~10.1 min,98%~2%B;11.1~13.0 min,2%B。采用5500 QTRAP質(zhì)譜儀(AB SCIEX)在正/負離子模式下進行質(zhì)譜分析。5500 QTRAP ESI 源條件: 離子源溫度(Source Temperature)500 ℃,霧化氣壓(Ion Source Gas 1)45 psi,輔助氣壓(Ion Source Gas 2)45 psi,氣簾氣壓(Curtain gas)30 psi,噴霧氣壓(IonSapary Voltage Floating)4 500 V;采用 MRM 模式檢測待測離子對。

        1.2.5 數(shù)據(jù)處理" 利用IBM SPSS Statistics 22.0 和Excel 2019軟件進行數(shù)據(jù)處理及制圖,分析不同階段的差異顯著性;采用Duncan法進行多重比較,差異顯著水平為0.05(Plt;0.05);采用Pearson法進行相關(guān)分析。

        2" 結(jié)果與分析

        2.1 不同時期七葉一枝花種子的形態(tài)解剖特征

        由圖1可知,S1期種子未萌發(fā),視野處無種胚,為種胚未萌動時期(圖1:B,C);S2期可見幼胚心形,為心形胚時期(圖1:D,E);S3期幼胚進一步生長,幼胚細胞核清晰,細胞質(zhì)濃,隱約可見子葉、胚根分化,為種胚膨大時期(圖1:F,G);S4期種胚可見子葉、胚芽、胚根的分化,種子珠孔處膨大,胚根未突破珠孔,為胚根未突破種皮時期(圖1: H,I);S5期子葉柄伸長,胚根突破珠孔,下胚軸進一步伸長,子葉呈卷曲狀,為子葉柄伸長、胚根突破種皮時期(圖1:J,K);S6期種子胚軸突破珠孔,并加粗膨大呈柱形,子葉仍留在種皮內(nèi),呈圓柱形,胚根進一步伸長且在與胚軸連接處縮窄,為下胚軸突破種皮時期(圖1: L,M);S7期種子上胚軸伸長,胚根長為0.3~1 cm,為上胚軸伸長時期(圖1: A);S8期胚軸膨大呈紡錘形,胚根長大于1.0 cm,為胚根伸長時期(圖1 :A)。

        根據(jù)種子的解剖特征,參考蘇海蘭等(2017a)的分類方法,將8個時期的種子歸類為3個不同萌發(fā)階段,分別為打破種胚休眠即將萌動階段,含S1期;種胚生長發(fā)育至上胚軸休眠階段,含S2期至S6期;上胚軸休眠結(jié)束至即將破土出苗階段,含S7期、S8期。

        不同時期七葉一枝花種子胚乳橫徑、胚乳縱徑及胚縱徑測量結(jié)果(表1)表明,在S1期至S4期胚乳縱徑持續(xù)增長,43 d內(nèi)增長率為48.67%,而胚乳橫徑則表現(xiàn)為縮窄,縮窄率為9.75%;在S5期至S7期胚乳橫徑、胚乳縱徑無明顯差異,但胚縱徑均顯著增長;S8期種子胚根進一步伸長,胚縱徑、胚乳縱徑顯著高于其他時期。由七葉一枝花萌發(fā)過程可知,S1期未觀察到種胚;S2期種胚初分化,胚率為1.78%;S3期、S4期種胚持續(xù)增長、胚率持續(xù)增長;S5期、S6期下胚軸突破珠孔且持續(xù)增長膨大,胚率分別為71.57%、87.09%;S7期、S8期,下胚軸增長減緩,而胚根則迅速增長,胚率分別為139.43%、318.53%。七葉一枝花種子在育苗58 d和72 d的萌發(fā)率分別為61.20%、80.40%。

        2.2 不同時期七葉一枝花種子淀粉酶和抗氧化酶活性的變化

        2.2.1 淀粉酶活性變化" 由圖2: A可知,七葉一枝花種子的α-淀粉酶活性隨萌發(fā)進程在S4期出現(xiàn)小高峰,達440.7 μg·g-1FW·min-1,較S1期升高2.67倍,并在S6期下降至最小值,之后于S8期達到最大值502.83 μg·g-1FW·min-1,表明α-淀粉酶可誘導(dǎo)子葉和胚芽的發(fā)育以及胚根細胞的分化。由圖2: B可知,七葉一枝花種子β-淀粉酶活性隨萌發(fā)進程先下降后上升。S1期時β-淀粉酶活性較高,在S2期時該酶活性快速下降至10.11 μg·g-1FW·min-1,在S3-S7期呈現(xiàn)出波動性上升的趨勢,并在S8期時其活性顯著增加。七葉一枝花種子在不同萌發(fā)時期α-淀粉酶活性均明顯高于β-淀粉酶,說明七葉一枝花的種子主要以α-淀粉酶水解淀粉和糖原,并提供碳水化合物和能量,從而促進種子的萌發(fā)。

        2.2.2 抗氧化酶活性變化" 在七葉一枝花種子萌發(fā)的不同時期SOD活性總體趨勢變化不大,其中S1期和S6期顯著低于其他時期 (圖3: A)。POD活性在S1期至S7期的變化波動較大,但在S8期時活性顯著增強,達11 388.23 U·g-1 FW·min-1(圖3: B),表明POD可能參與調(diào)控七葉一枝花的種胚細胞生長,并促進種子萌發(fā)胚根伸長。CAT活性隨萌發(fā)進程總體呈上升趨勢,并且其活性在S7期、S8期時顯著高于其他時期(圖3:C),表明CAT可能參與調(diào)控胚乳分解且促進了下胚軸膨大和胚根伸長??扇苄缘鞍缀侩S萌發(fā)進程先下降后升高,S1期至S5期的結(jié)果表明七葉一枝花種子內(nèi)部的代謝活動增強,為種子的休眠解除提供物質(zhì)和能量(圖3:D)。

        2.3 七葉一枝花種子內(nèi)源激素含量和比例的變化

        2.3.1 種子內(nèi)源激素含量變化" 不同萌發(fā)時期七葉一枝花種子各激素含量的變化較大。IAA、GA3、ABA和SA含量呈逐漸下降趨勢,并在S2期時含量最高,在S4期至S8期時含量顯著下降(圖4:A-C,G)。IAA含量在S6期時下降至5.5 ng·g-1FW(圖4:A);GA3含量在S4期時下降至11.06 ng·g-1FW(圖4:B);ABA含量在S8期時最低,僅為S2期的15.32%(圖4:C)。水楊酸(salicylic acid,SA)含量在S4期至S8期時顯著下降(圖4:G)。細胞分裂

        素類(cytokinins, CTKs)含量在不同時期無顯著性差異(圖4:D)。1-氨基環(huán)丙烷羧酸(l-aminocyclo-propane-l-carboxylic acid, ACC)是乙烯的合成前體,而乙烯可促進種子休眠解除。ACC含量隨七葉一枝花種子萌發(fā)進程呈現(xiàn)出先下降后上升的趨勢,并在S4期時最低(60.59 ng·g-1FW),在S8期時最高,達162.51 ng·g-1FW(圖4:E)。茉莉酸(jasmonic acid,JA)含量在S2期、S4期、S6期時無顯著性差異,而在S8期則顯著上升,為S4期的10.01倍(圖4: F)。油菜素內(nèi)酯(brassinolides,BRs)含量隨種子萌發(fā)進程呈現(xiàn)出逐漸上升的趨勢,在S8期高達6 572.19 ng·g-1FW(圖4:H)。

        2.3.2 種子內(nèi)源激素比例變化" 由圖5可知,IAA/ABA、GA3/ABA變化趨勢基本相似,即先降后升,但IAA/ABA在S6期降至最低,而GA3/ABA在S4期時降至最低,表明IAA、GA3在種子萌發(fā)作用上具有協(xié)同效應(yīng)。CTKs/ABA隨種子萌發(fā)進程不斷升高。

        2.4 七葉一枝花的種子酶活性、內(nèi)源激素含量與種子胚率的相關(guān)性

        由表2可知,在七葉一枝花種子萌發(fā)過程中,ABA、IAA、GA3含量與胚率呈顯著負相關(guān),而ACC、JA、BRs含量與胚率則呈顯著正相關(guān),并且POD、CAT、β-淀粉酶與胚率呈極顯著正相關(guān)。通過比較激素含量之間的相關(guān)系數(shù),結(jié)果為RABAgt;RBRsgt;RACCgt;RJAgt;RIAAgt;RGA3gt;RSAgt;RCTKs。

        3" 討論與結(jié)論

        3.1 七葉一枝花的種胚生長階段劃分和種子育苗管理

        蘇海蘭等(2017a)將七葉一枝花種子萌發(fā)分

        為3個階段,即未萌發(fā)、未解除休眠階段(第一階段);萌發(fā)后上胚軸并不伸長,當年不出苗,處于上胚軸休眠階段(第二階段);上胚軸伸長,子葉發(fā)育完全,即將破土出苗階段(第三階段)。本研究與蘇海蘭等(2017a)的劃分方法略有不同,在第二階段的上胚軸休眠階段中,可細分為5個時期,即心形胚時期(S2期)、種胚膨大時期(S3期)、胚根未突破種皮時期(S4期)、子葉柄伸長和胚根突破種皮時期(S5期)、下胚軸突破種皮時期(S6期)。本研究在七葉一枝花種子萌發(fā)進程中,露白、胚根伸長和上胚軸萌發(fā)是種子萌發(fā)進程的重要標志:種子在進入S5期時,種子開始露白,此時取出種子播種,可提高種子田間存活率;而在種子進入S6期后,種子的胚軸突破種皮,種胚僅靠子葉柄與種殼相連,若此時取出種子播種,就容易造成子葉柄斷裂,從而導(dǎo)致種胚死亡。

        3.2 種子酶活性變化對七葉一枝花種子萌發(fā)的影響

        種子通過各種酶的作用,促進蛋白質(zhì)、淀粉、脂質(zhì)等物質(zhì)轉(zhuǎn)化,進而促進種胚發(fā)育、胚根分化和出苗等活動。本研究結(jié)果表明,七葉一枝花種子的α-淀粉酶活性在種子休眠未解除時較低,珠孔膨大時上升,與蘇海蘭等(2017b)的研究結(jié)果一致,但隨后酶活性下降,至S8期時再度上升,與蘇海蘭等(2017b)的研究結(jié)果不同,這可能與本研究中七葉一枝花種子的胚根伸長發(fā)生時期較后有關(guān),α-淀粉酶分解淀粉所釋放的能量作用于胚根的伸長,從而導(dǎo)致α-淀粉酶活性升高(王鳳鳳等,2017)。

        本研究中,七葉一枝花從種子休眠期向萌動期過渡,并伴隨著體內(nèi)抗氧化酶活性的變化,SOD活性在S2-S5、S7-S8期均呈高值,此類時期均伴有種胚細胞增多的特征,而在S1、S6期SOD活性較低。這與浙貝母(許美玲,2019)、滇重樓(李戈等,2015; 蘇海蘭等,2018)、華重樓(李昭玲等,2015)萌發(fā)時SOD的變化無規(guī)律略有不同。但一般認為,種子維持較高的SOD活性則有利于對活性氧以及過氧化氫的清除,為種子萌發(fā)創(chuàng)造了良好條件(Buetler, et al.,2004; Liszkay et al.,2004)。本研究中,POD活性在胚根伸長時期較其他時期顯著提高,這與七葉一枝花(蘇海蘭等,2017a)、天山郁金香(張偉,2020)的研究結(jié)果一致,POD活性參與植物細胞壁的形成和脂肪酸的氧化,在S8期時該酶活性增加可為胚根伸長提供能量。

        3.3 IAA、GA及ABA與七葉一枝花種子萌發(fā)的關(guān)系

        植物激素對種子萌發(fā)有至關(guān)重要的調(diào)控作用,七葉一枝花隨著種子的萌發(fā)進程,種子內(nèi)源激素含量呈現(xiàn)出不同的變化趨勢,從而參與調(diào)控種子。本研究中,七葉一枝花種子IAA含量高峰出現(xiàn)在S2期,該高峰的出現(xiàn)可能與種子的種胚形成有關(guān),本研究結(jié)果與多花黃精(張武君等,2022)、紫花苜蓿(李浩天等,2023)的研究結(jié)果相似,但與蘇海蘭等(2017a)與李曉冬(2018)的研究結(jié)果卻

        不同。Liu等(2013)的研究發(fā)現(xiàn),IAA在擬南芥種子的休眠過程中起正向調(diào)控作用,是第二類促進種子休眠的激素;而本研究發(fā)現(xiàn),IAA含量在心形胚時期最高,可能與種子剛結(jié)束休眠有關(guān)。本研究結(jié)果顯示,IAA含量與胚縱莖、胚率呈顯著負相關(guān),與七葉一枝花(蘇海蘭等,2017a)、滇重樓(浦梅等,2016)的研究結(jié)果不同,這可能與不同的萌發(fā)階段需要不同濃度的IAA刺激有關(guān)。成京晉等(2018)的研究發(fā)現(xiàn),多花黃精種子在層積過程中IAA含量無明顯變化規(guī)律;李浩天等(2023)的研究發(fā)現(xiàn),紫花苜蓿種子IAA含量隨萌發(fā)進程遞減,這與本研究的結(jié)果相似。

        本研究中,七葉一枝花的種子ABA含量隨萌發(fā)進程降低,這與滇重樓(浦梅等,2016)、棉花(夏

        軍等,2019)的種子萌發(fā)現(xiàn)象相似,而與蘇海蘭等(2017a)對七葉一枝花的種子萌發(fā)現(xiàn)象不同。ABA正向調(diào)控種子的休眠誘導(dǎo)和維持(宋松泉等,2020b),并且在吸脹的休眠種子中其萌發(fā)的抑制是在吸脹過程中維持較高水平的ABA積累(Iwasakiet al.,2022)。但是,Schmitz等(2002)的研究認為,種子之所以萌發(fā)是因為胚對ABA敏感性下降,與ABA含量降低關(guān)系不大。

        GA3含量在S2期大量積累,此時形成心形胚,表明GA3參與調(diào)控七葉一枝花種子的種胚形成和發(fā)育,可能作為上游信號調(diào)控七葉一枝花種子整個萌發(fā)進程的開始,這與蘇海蘭等(2017a)的研究結(jié)果不同。種子萌發(fā)與否取決于胚生長的機械力和胚乳的限制力,前期較高的GA3含量既可以弱化種胚覆蓋層的機械阻力(宋松泉等,2020c),也可以誘導(dǎo)α-淀粉酶進而動員貯藏物的降解(Hauvermale, et al.,2012)。本研究發(fā)現(xiàn)GA3對七葉一枝花種子的萌發(fā)有顯著促進作用,而GA3含量在S4期和S8期較低,推測GA3可能與胚根伸長關(guān)系不大。在擬南芥種子萌發(fā)過程中,GA生物合成的時空表達模式顯示,GA4僅在胚根伸出前積累(Urbanova amp; Leubner-Metzger,2016),隨后含量下降,本研究結(jié)果與之相似。

        種子萌發(fā)不僅受內(nèi)源激素各自含量的影響,還與各類激素之間的平衡有關(guān),特別是促進生長激素與抑制生長激素之間的比例和平衡,而ABA與GA之間的動態(tài)平衡是種子打破休眠與萌發(fā)的關(guān)鍵(佐月和許永華,2021)。本研究結(jié)果顯示,七葉一枝花種子在S2期GA3/ABA比值較高,可能與該時期接近S1期有關(guān),ABA和GA的比值是植物種子休眠狀態(tài)的主要調(diào)節(jié)器(佐月和許永華,2021),S1期是七葉一枝花種子打破休眠開始萌發(fā)的始點,往往含有較高GA3/ABA比值,而往后GA3/ABA比值降低。IAA與ABA對種子萌發(fā)具有協(xié)同作用,

        Shuai等(2017)研究表明IAA可促進ABA的生物合成且降低ABA分解,并可增強ABA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(Shu et al.,2016)。本研究中,七葉一枝花的IAA/ABA值從S2-S6期逐漸降低,而在S8期因IAA促進胚根生長(Casanova-Sáez amp; Vo,2019)而進一步升高。

        綜上所述,根據(jù)種胚形態(tài)可將七葉一枝花種子萌發(fā)過程細分為8個時期,在不同時期種子內(nèi)源激素含量及相關(guān)酶活性各不相同,其中α-淀粉酶活性、POD活性可能與種胚胚根伸長有關(guān),GA3可能影響七葉一枝花種胚形成,而ABA則可能抑制種胚的生長發(fā)育。

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        (責(zé)任編輯" 蔣巧媛" 王登惠)

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