DOI： 10.11931/guihaia.gxzw202302010李志榮， 邵起菊， 吳其妹， 等， 2024.不同成熟度老鷹茶中酚類化合物含量及抗氧化活性研究 ［Ｊ］.廣西植物， 44（6）： 1170-1181.LI ZR， SHAO QJ， WU QM， et al.， 2024.Contents and antioxidant activities of pheno"，"Introduction":""，"Columns":"民族/藥用植物研究與大健康 專刊"，"Volume":""，"Content":"

DOI： 10.11931/guihaia.gxzw202302010

李志榮， 邵起菊， 吳其妹， 等， 2024.

不同成熟度老鷹茶中酚類化合物含量及抗氧化活性研究 ［Ｊ］.

廣西植物， 44（6）： 1170-1181.

LI ZR， SHAO QJ， WU QM， et al.， 2024.

Contents and antioxidant activities of phenolic compounds in Hawk tea with different maturity levels" ［J］.

Guihaia， 44（6）： 1170-1181.

摘" 要：" 為了探究兩種不同成熟度老鷹茶中酚類化合物含量及抗氧化活性的差異，以對其進(jìn)行辨識及質(zhì)量評價，該研究利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法測定老鷹茶中15種酚類化合物，采用DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、Fe3+還原能力評價兩種茶葉抗氧化能力，再通過數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析探討兩種老鷹茶酚類化合物含量及抗氧化活性的差異，并進(jìn)一步探索老鷹茶中不同酚類化合物對于抗氧化的貢獻(xiàn)。結(jié)果表明：（1）嫩葉茶中兒茶素、對香豆酸、異槲皮苷、金絲桃苷、煙花苷、紫云英苷、山奈酚、槲皮素、阿福豆苷含量顯著高于老葉茶，其中兒茶素、異槲皮苷、紫云英苷平均含量比老葉茶分別高1 039.43、169.12、257.35 mg·100 g-1。聚類分析（HCA）、主成分分析（PCA）、正交偏最小二乘判別分析（OPLS-DA）均可將二者區(qū)分。（2）方差分析（ANOVA）結(jié)果顯示在抗氧化能力上，二者在DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、Fe3+還原能力之間具有顯著性差異，嫩葉茶優(yōu)于老葉茶。（3）偏最小二乘回歸分析（PLSR）法提示老鷹茶中的異槲皮苷、兒茶素、紫云英苷、綠原酸、金絲桃苷、對香豆酸、山奈酚是其發(fā)揮抗氧化效能的主要酚類化合物。該研究結(jié)果可為老鷹茶的質(zhì)量控制及應(yīng)用推廣提供一定的參考。

關(guān)鍵詞： 老鷹茶， 酚類化合物， LC-MS/MS， 抗氧化活性， 相關(guān)分析

中圖分類號：" Q946

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：" A

文章編號：" 1000-3142（2024）06-1170-12

收稿日期：" 2023-06-04" 接受日期： 2023-07-21

基金項目：" 國家自然科學(xué)基金（31560102， 81760652）； 遵義醫(yī)科大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項目（ZYDC2021152， ZYDC2022035）。

第一作者： 李志榮（1989—），碩士，主治醫(yī)師，研究方向為藥用植物開發(fā)利用，（E-mail）573469247@qq.com。

*通信作者：" 陳榮祥，博士，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向為藥用植物開發(fā)利用，（E-mail）chenrongxiang2014@163.com。

Contents and antioxidant activities of phenolic compounds

in Hawk tea with different maturity levels

LI Zhirong1，2， SHAO Qiju3， WU Qimei3， LI Ying3， LI Wenyang1，

FANG Cancan1， XIAO Shiji3， CHEN Rongxiang1*

（ 1. Institute of Life Sciences， Zunyi Medical University， Zunyi 563000， Guizhou， China; 2. The Third Affiliated Hospital of Zunyi Medical

University， Zunyi 563000， Guizhou， China; 3. School of Pharmacy， Zunyi Medical University， Zunyi 563000， Guizhou， China ）

Abstract：" To study the difference in the contents of phenolics and the antioxidant activities between two kinds of Hawk tea of different maturity levels， and to evaluate their qualities， the contents of 15 phenolic compounds were determined using LC-MS/MS method. Then， the antioxidant activities of" two types of tea were evaluated using DPPH radical scavenging rate， ABTS+ radical scavenging rate， and Fe3+ ferric reducing antioxidant power （FRAP）. And then， the contents of" 15 phenolic compounds and the antioxidant activities between" two kinds of Hawk tea of different maturity levels were analyzed by analysis of variance （ANOVA）. Based on the contents of 15 phenolic compounds， hierarchical cluster analysis （HCA）， principal component analysis （PCA）， and orthogonal partial least square-discriminant analysis （OPLS-DA） were used to classify" two kinds of Hawk tea. Finally， the contribution of different phenolic compounds in Hawk tea to antioxidation was discussed by partial least square regression analysis （PLSR）. The results were as follows： （1） The contents of catechin， p-coumaric acid， isoquercitrin， hyperoside， nicotiflorin， astragalin， kaempferol， quercetin， and afzelin in tender leaf tea were significantly higher than those in old leaf tea， among which the average contents of catechin， isoquercitrin， and astragalin were higher than those in old leaf tea by 1 039.43， 169.12 and 257.35 mg·100 g-1， respectively. The results of HCA， PCA， and OPLS-DA could distinguish" two kinds of Hawk tea. （2） The ANOVA showed "significant differences in DPPH radical scavenging rate， ABTS+ radical scavenging rate， and FRAP between" two kinds of tea， with the tender leaf tea superior to the old leaf tea. （3） The PLSR suggested that isoquercitrin， catechin， astragalin， chlorogenic acid， hyperoside， p-coumaric acid， and kaempferol were the main phenolic compounds those contributed to the antioxidant activity of Hawk tea. This study can provide a reference for Hawk teas quality control and application promotion.

Key words： Hawk tea， phenolic compounds， LC-MS/MS， antioxidant activity， correlation analysis

老鷹茶由樟科木姜子屬植物毛豹皮樟（Litsea coreana var. lanuginosa）的葉片制作而成（王雨鑫等，2021），其嫩葉兩面有灰黃色長柔毛，下面尤密，而老葉下面柔毛稀疏，兩類葉片分別為嫩葉、老葉老鷹茶的制作原料（艾安濤等，2021）。老鷹茶具有消渴去暑、消食解脹、提神益智等多種功效（Tan et al.， 2016），具有抗氧化、抗炎、抗紫外線、降血糖、降血脂、護(hù)肝、抗菌等藥理作用（Feng et al.， 2019； Chen et al.， 2019； 李宇航等，2021； Tao et al.， 2022； Xu et al.， 2022）。其酚類化合物含量豐富，是老鷹茶主要的活性成分（劉斌，2010； 秦昭等，2019）。

研究表明，成熟度對老鷹茶生物活性成分及抗氧活性有顯著影響，嫩葉茶中總黃酮、碳水化合物等含量及抗氧化效能均高于老葉茶（Yuan et al.， 2014； Xiao et al.， 2017）。因此，嫩葉茶被視為一種高端的別樣茶，價格相對高昂。亦有報道老葉茶具有可觀的生物活性（Chen et al.， 2019），并且相較于嫩葉茶，老葉茶來源更為豐富，因其價格便宜，亦頗受歡迎（戴前莉等，2022）。目前，關(guān)于老鷹茶的質(zhì)量控制多是基于液相色譜測定其中幾種成分（劉斌，2010），并不能全面反映老鷹茶的質(zhì)量，并且對于嫩葉、老葉中活性成分的差異及其抗氧化活性物質(zhì)基礎(chǔ)的研究較少。因此，全面測定老鷹茶的化學(xué)成分并基于此進(jìn)一步研究嫩葉茶與老葉茶之間活性成分差異的物質(zhì)基礎(chǔ)，對于制定完善的老鷹茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及應(yīng)用推廣具有重要意義。

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography-tandem mass spectrometry， LC-MS/MS）技術(shù)具有高靈敏度、高選擇性、簡單、快速等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于天然產(chǎn)物成分分析，尤其適合復(fù)雜樣品中多種成分的同時檢測。因此，本研究擬采用LC-MS/MS測定兩種不同成熟度老鷹茶葉片中主要酚類化合物，并以DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、Fe3+還原能力（ferric reducing antioxidant power， FRAP）評價其抗氧化能力，通過主成分分析（principal component analysis， PCA）、系統(tǒng)聚類分析（hierarchical cluster analysis， HCA）、正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least square-discriminant analysis， OPLS-DA）、方差分析（analysis of variance， ANOVA）、偏最小二乘回歸分析（partial least square regression analysis， PLSR）擬探討以下問題：（1）兩種老鷹茶之間酚類成分含量及體外抗氧化差異；（2）老鷹茶中不同酚類化合物對抗氧化的貢獻(xiàn)。

1" 材料與方法

1.1 材料和試劑

對照品對香豆酸、柚皮素、山奈酚、兒茶素、表兒茶素、槲皮素、綠原酸、新綠原酸、阿福豆苷、紫云英苷、金絲桃苷、異槲皮苷、煙花苷、橙皮苷及蘆丁均購自格利普生物科技（成都）有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%。乙腈（LC-MS級）、甲酸（LC-MS級）、DPPH、ABTS、奎諾二甲基丙烯酸基（Trolox）、過硫酸鉀、三氯化鐵、醋酸鈉、冰乙酸、2，4，6-三吡啶基三嗪（TPTZ）、碳酸鈉、福林酚均購于阿拉丁生化科技股份（上海）有限公司。實(shí)驗用水由純水超純水系統(tǒng)制備。18批老鷹茶于2022年4—5月由農(nóng)戶手工采摘新鮮的嫩葉、老葉（其中嫩葉茶采摘單芽至一芽三葉，老葉為往下其余葉片），分別來自貴州、重慶、四川、安徽等地，樣品情況見表1。

1.2 試劑制備

1.2.1 對照品溶液制備" 精密稱取新綠原酸、兒茶素、綠原酸、表兒茶素、對香豆酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、煙花苷、紫云英苷、橙皮苷、阿福豆苷、槲皮素、柚皮素、山奈酚對照品，加入甲醇制備成2 mg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)儲備液置于-20 ℃冰箱中備用。使用前將標(biāo)準(zhǔn)儲備液用80%甲醇（V/V）稀釋至適合濃度的混合對照品溶液進(jìn)樣。

1.2.2 樣品溶液制備" 新鮮采摘的老鷹茶葉片于40 ℃烘干、粉碎、過60目篩后，精密稱取其粉末0.75 g，加入25 mL 80%甲醇（V/V），超聲60 min，靜置放冷，補(bǔ)重。離心（10 000 r·min-1， 10 min）后取上清液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，用80%甲醇（V/V）稀釋4倍后進(jìn)樣。

1.3 分析條件

1.3.1 色譜條件" I-Class-TQ-S超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀（美國Waters公司）；Waters Acquity UPLC BEH C18（100 mm × 2.1 mm， 1.7 μm）色譜柱；流動相為乙腈（A）-0.1%甲酸水（B），梯度洗脫（0～15 min， 5%→30% A; 15～20 min， 30%→90% A）；柱溫45 ℃，流速0.4 mL·min-1，進(jìn)樣體積1 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件" 負(fù)離子模式電噴霧電離源（electrospray ionization， ESI-）；掃描方式為全掃描和多反應(yīng)監(jiān)測模式（multiple reaction monitoring， MRM）；毛細(xì)管電壓為3.5 kV；蒸發(fā)溫度為450 ℃；氣流量為750 L·h-1。15種成分的質(zhì)譜優(yōu)化參數(shù)見表2。

1.4 抗氧化活性測定

1.4.1 DPPH自由基清除率測定" 參照文獻(xiàn)（潘曉麗等，2021； Mary ＆ Merina， 2021）略作修改，取1 mL的DPPH工作液（80%甲醇配制，100 mg·L-1）加入0.5 mL稀釋后的樣品溶液，混勻后，室溫避光反應(yīng)30 min，519 nm處測定吸光度值A(chǔ)1，以0.5 mL 80%甲醇（V/V）代替樣品測吸光度值為A0。計算公式如下。

DPPH自由基清除率（%）=（A0-A1）/A0×100。

式中： A0是以0.5 mL 80%甲醇（V/V）代替樣品測定的吸光度值；A1是各批樣品反應(yīng)后測定的吸光度值。

1.4.2 ABTS+自由基清除率測定" 參照文獻(xiàn)（Wolosiak et al.， 2021； 肖坤敏等，2022）略作調(diào)整， 將ABTS水溶液和過硫酸鉀水溶液混合， 室溫

避光反應(yīng)12～16 h，以水稀釋調(diào)整至在波長734 nm處吸光度為0.8±0.05，制備得到ABTS工作液；1 mL的ABTS工作液加入0.5 mL稀釋后的樣品溶液，混勻后，室溫避光反應(yīng)30 min，在734 nm處測定吸光度值A(chǔ)1，以80%甲醇（V/V）代替樣品測吸光度為A0。ABTS+自由基清除率計算同“1.4.1”。

1.4.3 Fe3+還原能力（FRAP）測定" 參考陳培等（2020）的方法測定老鷹茶FRAP值。將100 μL待測試樣品與300 μL FRAP工作液（300 mmol·L-1、pH 3.6醋酸鈉緩沖液，10 mmol·L-1 TPTZ溶液和20 mmol·L-1氯化鐵溶液以10∶1∶1的體積比混合）充分混合；在37 ℃孵育10 min后在593 nm處測定吸光度值。以不同濃度梯度的Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.014 1x+0.151， r=0.996。以Trolox當(dāng)量評價老鷹茶的FRAP （mg TE·g-1 DW）。

2" 結(jié)果與分析

2.1 老鷹茶中主要酚類化合物鑒定

利用“1.3”的色譜條件，在負(fù)離子模式下進(jìn)行全掃描得到老鷹茶總離子流圖（掃描范圍m/z為100～800 amu），如圖1所示。通過與MRM模式下離子碎片信息與標(biāo)準(zhǔn)品對比鑒定了15種化合物，分別為新綠原酸、兒茶素、綠原酸、表兒茶素、對香豆酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、煙花苷、紫云英苷、橙皮苷、阿福豆苷、槲皮素、柚皮素、山奈酚。這些化合物在負(fù)離子模式下色譜峰面積也相對較大，是老鷹茶中含量較高的酚類化合物。

2.2 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察通過“1.2.1”標(biāo)準(zhǔn)儲備液混合配制成不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液，以“1.3”的方法進(jìn)樣得到的峰面積（y）和相應(yīng)各物質(zhì)的質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行線性回歸，得出各化合物的線性關(guān)系方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍。將混合對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，計算色譜峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）評價方法的精密度。將混合對照品加入已知濃度的老鷹茶樣品中，按“1.2.2”項下制備樣品的方法進(jìn)行處理，再按“1.3”中的儀器條件分析，平行6次。計算各成分的平均回收率和RSD以評價方法的準(zhǔn)確性。結(jié)果見表3，在各自線性范圍內(nèi)，15種化合物線性關(guān)系良好，r值均大于0.99，檢出限（S/N=3）為0.10～1.30 μg·L-1。精密度為0.70%～2.38%，表明該方法的儀器精密度良好。15種成分的平均加樣回收率介于93.2%～109.7%之間，RSD均小于6.6%，結(jié)果表明該方法的準(zhǔn)確性較好。

2.3 樣品含量測定

采用建立的LC-MS/MS方法在MRM模式下測定8批嫩葉和10批老葉樣品中15種酚類化合物，對照品和樣品信號歸一化處理后的色譜圖見圖2。具體測定結(jié)果見表4。

2.4 差異性分析

將含量測定結(jié)果導(dǎo)入SPSS 23.0軟件，采用ANOVA分析兩類老鷹茶中15種酚類成分含量的差異。結(jié)果如表5所示，兩類老鷹茶中兒茶素、對香豆酸、金絲桃苷、異槲皮苷、煙花苷、紫云英苷、阿福豆苷、槲皮素、山奈酚差異明顯（P＜0.05），嫩葉茶中以上9種化合物的含量明顯高于老葉茶。其平均含量高的成分為兒茶素 ［（1 258.46±280.64） mg·100 g-1］、紫云英苷 ［（309.65±52.54） mg·100 g-1］、異槲皮苷 ［（246.75±42.18） mg·100 g-1］、金絲桃苷 ［（134.08±70.73） mg·100 g-1］、槲皮素 ［（89.50±45.42） mg·100 g-1］。嫩葉茶中最突出的兒茶素、異槲皮苷、紫云英苷平均含量比老葉茶分別高1 039.43、169.12、257.35 mg·100 g-1。兩類茶葉中新綠原酸、綠原酸、表兒茶素、蘆丁、橙皮苷、柚皮素含量無顯著性差異（P＞0.05）。

2.5 HCA

HCA多用于同類樣品中多化學(xué)成分、生物活性、功能特性物質(zhì)分析，以判別不同樣品之間的聯(lián)系（Wang et al.， 2022）。以18批老鷹茶的15種酚類化合物含量測定結(jié)果為變量導(dǎo)入Origin軟件得到聚類熱圖，采用組間連接法以歐氏平方距離進(jìn)行聚類分析，結(jié)果見圖3。由圖3可知，基于兩類茶葉中酚類化合物含量的差異， 嫩葉茶與老葉

茶能很好地分類。HCA分析結(jié)果提示，可基于15種酚類化合物含量的測定對嫩葉茶、老葉茶進(jìn)行辨別，但對其產(chǎn)地并無明顯辨識度，推測老嫩葉茶之間的差異遠(yuǎn)大于地域差異。

2.6 PCA

以15種酚類化合物的含量為變量，采用PCA計算主成分特征值累計貢獻(xiàn)率、初始因子載荷矩陣及綜合得分。由表6可知，選取特征值大于1的成分，其累計貢獻(xiàn)率達(dá)80.210%，說明所得主成分能較好地解釋總體。第1主成分的特征值得分為7.418，累計貢獻(xiàn)率為49.450%，兒茶素、對香豆酸、金絲桃苷、異槲皮苷、煙花苷、紫云英苷、阿福豆苷、槲皮素、柚皮素、山奈酚在第1主成分上載荷絕對值大于0.5，表示第1主成分主要反映以上10種成分的信息；第2主成分得分3.299，方差百分比為21.996%， 表兒茶素、槲皮素、綠原酸、蘆丁在

第2成分上載荷絕對值大于0.5，提示第2主成分主要包含這4種成分的信息；第3主成分得分1.315，方差百分比為8.764%，主要反映新綠原酸、柚皮素的信息。各化合物因子載荷詳見表7。進(jìn)一步采用特征值大于0.5的5個主成分，其累計貢獻(xiàn)率達(dá)90.942%，能很好地反映總體。以各主成分因子得分與特征值貢獻(xiàn)率的乘積計算兩類老鷹茶的綜合評分（F），F(xiàn)=0.494 51F1+0.219 96F2+0.087 64F3+0.065 56F4+0.041 17F5，結(jié)果詳見表8。由綜合評分排名可知，大部分嫩葉茶樣品綜合得分高于老葉茶樣品，評分最高的為S2，其次為S1，兩個樣品均來自安徽宣城；老葉茶S16、S13綜合得分高于嫩葉茶S8，證明部分老葉茶亦具有良好的質(zhì)量。

利用PC1和PC2繪制二維散點(diǎn)得分圖，如圖4所示，嫩葉茶與老葉茶分布相對集中且相互獨(dú)立，與聚類分析結(jié)果一致。

2.7 OPLS-DA

OPLS-DA是結(jié)合正交信號矯正和偏最小二乘法通過去除不相關(guān)的差異信息來篩選變量，從而達(dá)到判別分類作用（Kang et al.， 2022）?；?5種酚類化合物含量的OPLS-DA判別分析其R2X（cum）、R2Y（cum）、Q2（cum）分別為0.759、0.948、0.837，說明所建立的模型穩(wěn)定可靠（嚴(yán)雅慧等，2021）。其相關(guān)系數(shù)正負(fù)代表其對判別分析的正相關(guān)和負(fù)相關(guān)，變量投影重要性（variable importance in projection， VIP）值代表其權(quán)重，以VIP值大于1為顯著影響（李振雨等，2021）。結(jié)

果如圖5所示，兩類老鷹茶可完全分類，對嫩葉茶、老葉茶判別呈正性作用且權(quán)重大于1的成分是兒茶素、對香豆酸、金絲桃苷、異槲皮苷、煙花苷、紫云英苷、阿福豆苷，結(jié)果與二者之間成分的方差分析和主成分分析結(jié)果高度重合，兩種老鷹茶可通過這些成分的差異來辨別。而對判別分析呈負(fù)性作用且VIP值小于1的新綠原酸、綠原酸、表兒茶素、蘆丁、 柚皮素則與方差分析中無明顯差

別的化合物，并且與主成分分析中的第2主成分高度重合，而這些成分可能是老葉茶也具有一定抗氧化活性的因素。

2.8 抗氧化活性測定及差異分析

不同批次老鷹茶的DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、FRAP值測定結(jié)果見表9。兩類老鷹茶在DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、FRAP值之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)一步進(jìn)行ANOVA分析，結(jié)果如表10所示，嫩葉茶在抗氧化實(shí)驗中展現(xiàn)出更強(qiáng)的活性，比較其平均值及標(biāo)準(zhǔn)差可知，老葉老鷹茶亦具有可觀的抗氧化能力。

2.9 PLSR分析探討老鷹茶抗氧化物質(zhì)基礎(chǔ)

PLSR分析是常用的相關(guān)性分析方法，可以明確不同化合物對于活性的貢獻(xiàn)。因此，進(jìn)一步通過PLSR探索老鷹茶中抗氧化活性關(guān)鍵化合物。分析自變量的標(biāo)準(zhǔn)回歸相關(guān)系數(shù)及其變量投影，相關(guān)系數(shù)的正負(fù)代表其與因變量呈正性或負(fù)性關(guān)系，其VIP值大小則代表其權(quán)重，值越大其貢獻(xiàn)率越高（Burnett et al.， 2021）。結(jié)果如圖6所示，異槲皮苷、兒茶素、紫云英苷、綠原酸、金絲桃苷、對香豆酸、山奈酚相關(guān)系數(shù)為正值且VIP值均大于1，說明這7種化合物為發(fā)揮老鷹茶抗氧化活性的關(guān)鍵成分。其中，嫩葉、老葉茶中綠原酸含量無明顯差異，老葉茶綠原酸平均含量高達(dá)（201.69±161.24） mg·100 g-1，可進(jìn)一步解釋老葉茶亦具有一定抗氧活性。

3" 討論與結(jié)論

根據(jù)測定結(jié)果，由于采集部位的不同，嫩葉酚類化合物總含量、體外抗氧化活性均優(yōu)于老葉。綜合ANOVA、PCA、OPLS-DA結(jié)果可知兒茶素、對香豆酸、異槲皮苷、金絲桃苷、煙花苷、紫云英苷、山奈酚、阿福豆苷、槲皮素、山奈酚的含量在兩類老鷹茶中差異明顯，嫩葉中以上成分含量明顯高于老葉。其中，嫩葉茶中兒茶素的含量與老葉茶相差最為突出，嫩葉茶制備加工是類似于傳統(tǒng)茶葉采集嫩芽、嫩葉的生產(chǎn)工藝， 由于兒茶素易溶于

熱水（Cuevas-Valenzuela et al.， 2014）且在嫩葉茶中的含量相當(dāng)豐富，飲用方式與傳統(tǒng)茶葉般沸水沖泡即可獲得良好的口感。而相比之下老葉茶中兒茶素含量較低，因此為了更多地獲取其中難溶于水的黃酮類化合物，人們在食用老葉茶時更多地采用熬煮的方式，將茶葉置于涼水里，大火燒開后再以小火煮兩三分鐘或更長時間（戴前莉等，2022）。黃酮和酚酸類化合物是天然植物中的主要抗氧化活性成分（Pérez-Torres et al.， 2021; Arzola-Rodriguez et al.，2022），老鷹茶質(zhì)譜鑒定及測定的成分中主要以黃酮類化合物為主，而咖啡酸系列衍生物新綠原酸和綠原酸含量在嫩葉、老葉茶中差異并不明顯，結(jié)合兩類老鷹茶抗氧化活性差異，可見黃酮類化合物是影響老鷹茶活性差異的主要成分。

PLSR提示老鷹茶中與抗氧化活性密切相關(guān)的化學(xué)成分為異槲皮苷、兒茶素、紫云英苷、綠原酸、金絲桃苷、對香豆酸、山奈酚。其中，綠原酸在兩類茶中含量均較高且無明顯差異，結(jié)合含量測定、OPLS-DA及PLSR，綠原酸等無差異的成分可能是老葉茶亦具有一定抗氧化活性的因素。這些成分均有被報道與抗氧化活性密切相關(guān)，如Morais

等（2022）發(fā)現(xiàn)古柯葉抗氧化活性與金絲桃苷、異槲皮苷的含量呈正比；關(guān)于兒茶素抗氧化作用的研究等更是近年來研究的熱點(diǎn)（Thammarat et al.， 2021; Liang et al.， 2021; Xia et al.， 2022）；Du等（2022）發(fā)現(xiàn)紫云英苷能抑制細(xì)胞胰島素抵抗及氧化應(yīng)激；Kluska等（2022）發(fā)現(xiàn)山奈酚可激活抗氧化基因和蛋白質(zhì)；Taha等（2020）證實(shí)香豆酸可通過避免脂質(zhì)過氧化、抑制細(xì)胞死亡和保存抗氧化機(jī)制來恢復(fù)肝損傷等；綠原酸類化合物具有抗氧化、護(hù)肝、抗炎、調(diào)血脂、抗細(xì)菌、抗病毒等多種活性亦備受關(guān)注（Rojas-Gonzalez et al.， 2022）。目前，關(guān)于兩類老鷹茶之間酚類化合物成分差異之間關(guān)注較少，并未建立具體的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。因此，這些具有豐富活性的成分對兩類老鷹茶的辨識和生產(chǎn)中質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的控制具有重要意義。

綜上所述，本研究采用LC-MS/MS測定了老鷹茶中15種酚類化合物含量，并基于此建立了兩類老鷹茶HCA、PCA、OPLS-DA模型，并通過PLSR分析明確了老鷹茶的主要抗氧化活性成分，對老鷹茶的質(zhì)量控制及開發(fā)利用有一定的參考價值。

參考文獻(xiàn)：

AI AT， LI YL， CHEN LX， et al.， 2021. Research progress and development and utilization status of Hawk tea" ［J］. Guangdong Tea Ind， （3）： 35-40." ［艾安濤， 李燕麗， 陳凌霄， 等， 2021. 老鷹茶的研究進(jìn)展與開發(fā)利用現(xiàn)狀 ［J］. 廣東茶業(yè)， （3）： 35-40.］

ARZOLA-RODRINGUEZ SI， MUNOZ-CASTELLANOS LN， LOPEZ-CAMARILLO C， et al.， 2022.Phenolipids， amphipilic phenolic antioxidants with modified properties and their spectrum of applications in development： a review ［J］. Biomolecules， 12（12）： 1897.

BURNETT AC， ANDERSON J， DAVIDSON KJ， et al.， 2021. A best-practice guide to predicting plant traits from leaf-level hyperspectral data using partial least squares regression" ［J］. J Exp Bot， 72（18）： 6175-6189.

CUEVAS-VALENZUELA J， GONZALEZ-ROJAS ， WISNIAK J， et al.，2014. Solubility of （+）-catechin in water and water-ethanol mixtures within the temperature range 277.6-331.2K： Fundamental data to design polyphenol extraction processes ［J］. Fluid Phase Equil， 382： 279-285.

CHEN Z， ZHANG D， GUO JJ， et al.， 2019. Active components， antioxidant， inhibition on metabolic syndrome related enzymes， and monthly variations in mature leaf Hawk tea" ［J］. Molecules， 24（4）： 657.

CHEN P， ZHOU MM， FANG SZ， et al.， 2020. Effects of light quality on accumulation of phenolic compounds and antioxidant activities in Cyclocarya paliurus （Batal.） Iljinskaja leaves from different families" ［J］. J Nanjing For Univ （Nat Sci Ed）， 44（2）： 17-25." ［陳培， 周明明， 方升佐， 等， 2020. 光質(zhì)對不同家系青錢柳葉酚類物質(zhì)積累及抗氧化活性的影響 ［J］. 南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）， 44（2）： 17-25.］

DAI QL， ZHU HX， LU M， et al.， 2022. Development and utilization status of Litsea coreana and its industrial development countermeasures" ［J］. Mod Agric Sci Technol， （5）： 195-199." ［戴前莉， 朱恒星， 盧敏， 等， 2022. 老鷹茶開發(fā)利用現(xiàn)狀及產(chǎn)業(yè)化發(fā)展對策 ［J］. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技， （5）： 195-199.］

DU H， DUAN SD， LEI R， et al.， 2022. Astragalin inhibits insulin resistance and oxidative stress in palmitic acid-induced HEPG2 cells" ［J］. Curr Top Nutraceut R， 20（4）： 635-640.

FENG JF， YANG J， CHANG Y， et al.， 2019. Caffeine-free Hawk tea lowers cholesterol by reducing free cholesterol uptake and the production of very-low-density lipoprotein" ［J］. Commun Biol， 2（1）： 173.

KLUSKA M， JUSZCZAK M， ZUCHOWSKI J， et al.， 2022. Effect of kaempferol and its glycoside derivatives on antioxidant status of HL-60 cells treated with etoposide" ［J］. Molecules， 27（2）： 333.

KANG C， ZHANG Y， ZHANG M， et al.， 2022. Screening of specific quantitative peptides of beef by LC-MS/MS coupled with OPLS-DA" ［J］. Food Chem， （387）： 132932.

LI YH， LAN L， XIE L， et al.， 2021. Study on antibacterial and antioxidant activities of alcohol extract from Sichuan Hawk tea" ［J］. J Tea Coummun， 48（4）： 724-729." ［李宇航， 蘭林， 謝玲， 等， 2021. 四川老鷹茶醇提物的抑菌及抗氧化活性研究 ［J］. 茶葉通訊， 48（4）： 724-729.］

LI ZY， HE JY， TONG PZ， et al.， 2021. Differences of Magnolia biondii from different producing areas based on fingerprint and multi-components determination" ［J］. Chin Tradit Herb Drugs， 52（1）： 234-240." ［李振雨， 何嘉瑩， 童培珍， 等， 2021. 基于UPLC指紋圖譜和多成分定量的辛夷藥材產(chǎn)地差異性研究 ［J］. 中草藥， 52（1）： 234-240.］

LIU B， 2010. Simultaneous quantification of seven flavonoids in eagle tea using pressurized liquid extraction and HPLC" ［J］. Chin J Pharm Anal， 30（8）： 1424-1427." ［劉斌， 2010. 加壓溶劑提取-HPLC法同時測定老鷹茶中7個黃酮類化合物 ［J］. 藥物分析雜志， 30（8）： 1424-1427.］

LIANG TS， JIAO SS， JING P， 2021. Molecular interaction between pectin and catechin/procyanidin in simulative juice model： Insights from spectroscopic， morphology， and antioxidant activity" ［J］. J Food Sci， 86（6）： 2445-2456.

MARY SJ， MERINA AJ， 2021. Studies on total antioxidant activity of the extract of Nyctasnthes arbortristis flower extract by DPPH radical-scavenging activity and superoxide anion scavenging activity assay" ［J］. J Med Plants Stud， 9（2）： 160-164.

MORAIS ND， MARTINS DHN， FAGG CW， et al.， 2022. Seasonal monitoring of the antioxidant activity of Erythroxylum suberosum A. St.-Hil. leaves： correlation with hyperoside and isoquercitrin contents" ［J］. Indian J Tradit Know， 21（2）： 373-382.

PAN XL， WANG FJ， ZHANG N， et al.， 2021. Effects of different extraction methods on extraction effect and functional properties of Korean pine seed oil" ［J］. J Beijing For Univ， 43（1）： 127-135." ［潘曉麗， 王鳳娟， 張娜， 等， 2021. 不同提取方法對紅松籽油提取效果及功能性質(zhì)的影響 ［J］. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報， 43（1）： 127-135.］

PREZ-TORRES I，CASTREJON-TELLEZ V， SOTO ME， et al.， 2021.Oxidative stress， plant natural antioxidants， and obesity ［J］. Int J Mol Sci， 22（4）： 1786.

QIN Z， FENG K， WANG WS， 2019. Advance in the studies on flavonoids of a Chinese traditional national tea， Hawk tea" ［J］. Food Res Dev， 40（2）： 173-177." ［秦昭， 馮堃， 王文蜀， 2019. 中國傳統(tǒng)民族老鷹茶黃酮類成分研究進(jìn)展 ［J］. 食品研究與開發(fā)， 40（2）： 173-177.］

ROJAS-GONZALEZ A， FIGUEROA-HERNANDEZ CY， GONZALEZ-RIOS O， et al.， 2022. Coffee chlorogenic acids incorporation for bioactivity enhancement of foods： a review ［J］. Molecules， 27（11）： 3400.

TAN LH， ZHANG D， WANG G， et al.， 2016. Comparative analyses of flavonoids compositions and antioxidant activities of Hawk tea from six botanical origins" ［J］. Ind Crops Prod， 80： 123-130.

TAHA MME， MOHAN S， KHEDIASH H， et al.， 2020. Amelioration of carbon tetrachloride-induced liver injury by p-coumaric acid ［J］. Curr Top Nutraaceut R， 18（4）： 337-342.

THAMMARAT P， SIRILUN S， PHONGPRADIST R， et al.， 2021. Validated HPTLC and antioxidant activities for quality control of catechin in a fermented tea （Camellia sinensis var. assamica）" ［J］. Food Sci Nutr， 9（6）： 3228-3239.

TAO W， CAO W， YU B， et al.， 2022. Hawk tea prevents high-fat diet-induced obesity in mice by activating the AMPK/ACC/SREBP1c signaling pathways and regulating the gut microbiota" ［J］. Food Funct， （13）： 6056-6071.

WANG YX， DENG YL， YAO SL， et al.， 2021. Comparison of quality of Hawk tea （Litsea coreana var. sinensis） in four counties of Guizhou Province" ［J］. Acta Agric Zhejiang， 33（1）： 142-149." ［王雨鑫， 鄧燕莉， 姚松林， 等， 2021. 貴州4個縣域豹皮樟老鷹茶的理化品質(zhì)比較 ［J］. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報， 33（1）： 142-149.］

WANG T， GUO S， REN X， et al.， 2022. Simultaneous quantification of 18 bioactive constituents in" Ziziphus jujuba fruits by HPLC coupled with a chemometric method" ［J］. Food Sci Human Wellness， 11（4）： 711-780.

WOLOSIAK R， DURUZYNSKA B， DEREWIAKA D， et al.， 2021. Verification of the conditions for determination of antioxidant activity by ABTS and DPPH assays-a practical approach" ［J］. Molecules， 27（1）： 50.

XU T， HU SS， LIU Y， et al.， 2022. Hawk tea flavonoids as natural hepatoprotective agents alleviate acute liver damage by reshaping the intestinal microbiota and modulating the Nrf2 and NF-κB signaling pathways" ［J］. Nutrients， 14（17）： 3662.

XIAO X， XU L， HU H， et al.， 2017. DPPH radical scavenging and postprandial hyperglycemia inhibition activities and flavonoid composition analysis of Hawk tea by UPLC-DAD and UPLC-Q/TOF MS（E）" ［J］. Molecules， 22（10）： 1622.

XIAO KM， MA JY， WANG JM， et al.， 2022. Extraction process and antioxidant activity of polysaccharides from Polygonatum kingianum ［J］. J SW For Univ （Nat Sci）， 42（4）： 147-154." ［肖坤敏， 馬佳鈺， 王軍民， 等， 2022. 滇黃精多糖提取工藝及其抗氧化活性研究 ［J］. 西南林業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)）， 42（4）： 147-154.］

XIA YR， NI W， WANG XT， et al.， 2022. Intermolecular hydrogen bonds between catechin and theanine in tea： slow release of the antioxidant capacity by a synergetic effect" ［J］. RSC Adv， 12（33）： 21135-21144.

YUAN M， JIA XJ， DING CB， et al.， 2014. Comparative studies on bioactive constituents in Hawk tea infusions with different maturity degree and their antioxidant activities" ［J］. Sci World J， 2014： 838165.

YAN YH， LI SP， ABDULA R， et al.， 2021. Establishment of HPLC fingerprint， chemical pattern recognition analysis and content determination of aloe" ［J］. Nat Prod Res Dev， 33（3）： 353-361." ［嚴(yán)雅慧， 李淑萍， 熱依木古麗·阿布都拉， 等， 2021. 蘆薈的HPLC指紋圖譜建立， 化學(xué)模式識別分析及其含量測定 ［J］. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)， 33（3）： 353-361.］

（責(zé)任編輯" 周翠鳴）