DOI： 10.11931/guihaia.gxzw202311040

吳巧芬， 馬曉雅， 夏科， 等， 2024.

白及銹病病原菌的鑒定及抗銹病資源篩選 ［Ｊ］.

廣西植物， 44（6）： 1129-1137.

WU QF， MA XY， XIA K， et al.， 2024.

Identification of Bletilla striata rust pathogen and resistance resources screening ［J］.

Guihaia， 44（6）： 1129-1137.

摘" 要：" 為鑒定引起廣西種植區(qū)白及銹病的病原菌種類且篩選抗銹病的白及資源，該研究對(duì)白及銹病病原菌進(jìn)行分離，并采用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的方法對(duì)病原菌進(jìn)行鑒定，同時(shí)通過人工接種病原菌法對(duì)23份白及進(jìn)行銹病抗性評(píng)價(jià)以及篩選抗銹病的白及資源。結(jié)果表明：（1）從白及感病葉片中分離的銹病病原菌X2夏孢子呈金黃色，卵圓形或橢圓形，大小為（21.43～30.95） μm × （13.10～19.05） μm；冬孢子呈橘紅色、紅褐色，倒卵形或棍棒狀，大小為（17.25～30） μm × （5.5～6.65） μm。（2）把菌株X2全長(zhǎng)689 bp的ITS序列（OQ826009）與GenBank 已登陸的序列進(jìn)行相似性分析發(fā)現(xiàn)，菌株X2與Coleosporium sp.（KY783686.1）匹配度最高，序列一致性為95.86%，但系統(tǒng)發(fā)育樹表明，X2與Coleosporium bletiae （MN108161.1，OP363680.1）聚為一類群；結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的方法，鑒定菌株X2為Coleosporium bletiae。（3）人工接種菌株X2 14 d后，23份白及的病情指數(shù)范圍在0～70.7之間，并根據(jù)病情指數(shù)將 ２３ 份白及劃分為 ６ 個(gè)抗性等級(jí)，即表現(xiàn)為免疫的白及1份，病情指數(shù)為0；表現(xiàn)為高抗的白及4份，病情指數(shù)為1.7～4.7；表現(xiàn)為抗病的白及6份，病情指數(shù)為5.6～9.4；表現(xiàn)為中抗的白及5份，病情指數(shù)為12.7～18.3；表現(xiàn)為感病的白及5份，病情指數(shù)為32.0～49.1；表現(xiàn)為高感的白及2份，病情指數(shù)為62.2～70.7。綜上認(rèn)為，表現(xiàn)為免疫和高抗的5份白及（分別來自云南紅河、廣西恭城、廣西百色、貴州遵義、湖北宜昌）病情指數(shù)低、抗銹病能力強(qiáng)，可推廣應(yīng)用或作為培育抗銹病優(yōu)良種質(zhì)的親本材料。該研究結(jié)果為后續(xù)開展白及銹病的有效防治與致病機(jī)理研究提供了支撐。

關(guān)鍵詞： 白及， 銹病， 病原菌鑒定， 鞘銹菌， 抗病資源

中圖分類號(hào)：" Q945.8

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：" A

文章編號(hào)：" 1000-3142（2024）06-1129-09

收稿日期：" 2024-02-28" 接受日期： 2024-04-21

基金項(xiàng)目：" 廣西重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目 （桂科AB18294026）； 桂林市技術(shù)應(yīng)用與推廣計(jì)劃項(xiàng)目 （20220135-1）； 廣西科學(xué)院園藝植物種質(zhì)資源創(chuàng)新及利用創(chuàng)新研究團(tuán)隊(duì)啟動(dòng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目 （CQZ-E-1919）； 廣西植物研究所基本業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目 （桂植業(yè)24011）； 廣西植物功能物質(zhì)與資源持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自主研究課題（ZRJJ2023-9）。

第一作者： 吳巧芬（1993—），碩士，助理研究員，主要從事藥用植物栽培研究，（E-mail） 2547508570@qq.com。

*通信作者：" 鄭文俊，博士，教授，主要從事民族鄉(xiāng)土景觀及風(fēng)景旅游規(guī)劃研究，（E-mail）149480860@qq.com； 仇碩，博士，副研究員，主要從事園藝植物種質(zhì)資源創(chuàng)新與利用研究，（E-mail）qiushuo001@163.com。

Identification of Bletilla striata rust pathogen

and resistance resources screening

WU Qiaofen1， MA Xiaoya1，2， XIA Ke1， LU Xi1，2， LIU Qiao1，

ZHAO Zhiguo1， ZHENG Wenjun2*， QIU Shuo1*

（ 1. Guangxi Key Laboratory of Plant Functional Phytochemicals and Sustainable Utilization， Guangxi Institute of Botany， Guangxi

Zhuang Autonomous Region and Chinese Academy of Sciences， Guilin 541006， Guangxi， China; 2. College of Tourism amp;

Landscape Architecture， Guilin University of Technology， Guilin 541006， Guangxi， China ）

Abstract：" In order to identify the pathogen that caused rust of Bletilla striata in Guangxi Zhuang Autonomous Region and to screen resistance resources for B. striata， the rust pathogen was isolated from infected leaves of B. striata and identified using morphology and molecular methods. At the same time， the resistance of 23 B. striata from different regions was evaluated by artificial inoculation of pathogen. The results were as follows： （1） The urediopores of strain X2 isolated from diseased leaves in B. striata were golden yellow， oval， （21.43-30.95） μm × （13.10-19.05） μm. The teleutospores were golden yellow， obovate or clavate， （17.25-30） μm × （5.5-6.65） μm. （2） The length of ITS sequence of strain X2（OQ826009） was 689 bp， which were compared with other ITS sequences in the GenBank， and the similarity reached 95.86% compared with Coleosporium sp. （KY783686.1）. But the phylogenetic tree showed that the sequence was clustered together with two sequences of Coleosporium bletiae （MN108161.1， OP363680.1）. The strain X2 was identified as Coleosporium bletiae by combining morphology and molecular methods. （3） After 14 days of artificial inoculation with strain X2， the disease index of 23 Bletilla striata ranged from 0 to 70.7. And the resistance of strain X2 from 23 B. striata were divided into six different levels according to the disease index. Among them， one immune materials was identified for the disease index was 0. Four highly resistant materials were identified for the disease index was 1.7-4.7. Six disease-resistant materials were identified for the disease index was 5.6-9.4. Five medium-resistant materials were identified for the disease index was 12.7-18.3. Five susceptible materials were identified for the disease index was 32.0-49.1 and two highly susceptible materials were identified for the disease index was 62.2-70.7. In conclusion， five materials （one immune material and four highly resistant materials） of B. striata from different places

（Honghe City in Yunnan Province， Gongcheng County and Baise City in Guangxi Zhuang Autonomous Region， Zunyi City in Guizhou Province and Yichang City in Hubei Province， respectively） can be promoted directly or applied as parent materials for creating excellent germplasm to resist the rust in B. striata for they express immune or highly resistance. This study" provides the basis for further research on pathogenesis and control of rust in B. striata.

Key words： Bletilla striata， rust， pathogen identification， Coleosporium sp.， resistance resource

白及（Bletilla striata）是蘭科白及屬（Bletilla）多年生草本植物，又名白芨，別名白根、地螺絲、羊角七等（中國(guó)植物志，1999）。白及是一種重要的中藥材品種，具有收斂止血、消腫生肌功效，可外治創(chuàng)傷出血、瘡瘍腫毒、皮膚皸裂，內(nèi)治吐血、咳血、慢性胃潰瘍以及腫瘤等（Sun et al.， 2016；Zhang et al.， 2019；中華人民共和國(guó)藥典，2020）。白及既可用于止癢、消退色斑、消除痤瘡、防止粗糙，也可作糊料，制作高級(jí)香煙的煙蒂以及釀酒等（劉光斌等，2005；宋志姣等，2019）。此外，白及葉態(tài)優(yōu)美、花型獨(dú)特、花大色艷，還可用于園藝觀賞。隨著白及規(guī)模化種植面積的不斷擴(kuò)大，病蟲害發(fā)生越來越多，其中銹病是近年來較為嚴(yán)重的主要病害之一，全國(guó)多地均有白及銹病流行的現(xiàn)象（游崇娟，2012）。因此，有必要確定白及銹病的發(fā)生情況及病原菌種類，并篩選抗病性較好的種質(zhì)資源。

白及銹病是由真菌寄生引起的一類病害，受銹病侵染嚴(yán)重的葉片上密布孢子堆，從而導(dǎo)致光合作用受阻、葉片扭曲干枯，不僅影響白及的美觀，還使白及產(chǎn)量和品質(zhì)下降（宋莉莎，2019；徐明玥等，2023）。近年來，在廣西地區(qū)白及銹病連年大面積發(fā)生，總體發(fā)病率在50%以上，給生產(chǎn)造成極大損失。余中蓮等（2021）研究表明，銹病病原菌是氣傳性寄生菌，隨氣流傳播，受環(huán)境影響較大，溫度、水分、風(fēng)力等均可影響銹菌的傳播，作物生產(chǎn)區(qū)一旦感染該病害，就很難防控。銹菌致病種類繁多，同種銹菌可感染不同植物，同種植物也可感染多種銹菌（余中蓮等，2021），僅云南省保山市的紫皮石斛就發(fā)現(xiàn)了柄銹菌（Puccinia sp.）和鞘銹菌（Coleosporium sp.）兩種不同屬的病原菌（胡永亮等，2013；趙桂華等，2016）。據(jù)調(diào)查結(jié)果顯示，湖北、貴州、重慶等地白及銹病在4—6月均有發(fā)生，有的種植區(qū)發(fā)病率在90%以上（劉燕琴等，2017；宋莉莎，2019；徐明玥等，2023）。前人研究鑒定了貴州、湖北、江西、云南等地白及銹病病原菌為鞘銹菌（Coleosporium sp.）（游崇娟，2012；宋莉莎，2019；徐明玥等，2023）。然而，廣西地區(qū)未見白及銹病病原菌的相關(guān)報(bào)道?，F(xiàn)階段，白及銹病的防控主要有農(nóng)業(yè)管理和化學(xué)藥劑防治，防治效果一般，并且容易引起農(nóng)藥殘留、污染環(huán)境等問題（趙仁全等，2016；劉燕琴等，2017；楊德輝等，2018）。有研究認(rèn)為，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，選育和推廣抗銹病的品種是控制和治理銹病最經(jīng)濟(jì)、安全和有效的途徑（于海天等，2020；成良強(qiáng)等，2022）。

基于以上情況，廣西種植區(qū)的白及銹病病原菌是否和其他地區(qū)的一致仍需要鑒定，同時(shí)不同地理來源的白及對(duì)銹病抗性是否存在差異也需要進(jìn)行評(píng)價(jià)。本研究通過對(duì)白及銹病的調(diào)查和病原菌的形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定，并進(jìn)一步通過人工接種法對(duì)不同地理來源的23份白及進(jìn)行抗性評(píng)價(jià)，擬探討：（1）廣西種植區(qū)白及銹病的發(fā)病特征；（2）廣西種植區(qū)白及銹病病原菌在系統(tǒng)發(fā)育上屬于哪個(gè)類別；（3）不同地理來源的白及對(duì)銹病抗性的差異。本研究首次對(duì)不同地理來源的白及進(jìn)行抗性評(píng)價(jià)，并篩選對(duì)銹病具有較好抗性的白及材料，以期明確廣西種植的白及銹病發(fā)生情況及病原菌種類，為后續(xù)開展白及銹病的有效防治與致病機(jī)理研究提供基礎(chǔ)。

1" 材料與方法

1.1 材料

供試白及均從不同地理來源引種栽培于桂林市雁山區(qū)廣西植物研究所科研試驗(yàn)種植基地（110°17′ E、25°01′ N）（表1）；供試的菌株取自3號(hào)白及銹病侵染葉片上的病原菌，并將其命名為X2。

1.2 方法

1.2.1 白及銹病調(diào)查" 2022年4—10月，觀察3號(hào)白及的田間自然發(fā)病情況，拍照、記錄白及銹病癥狀，并統(tǒng)計(jì)發(fā)病植株和病害嚴(yán)重度。

1.2.2 病原菌形態(tài)觀察" 選取銹病典型癥狀病葉，于體視顯微鏡下觀察孢子堆形態(tài)。挑取葉片背面夏孢子，將其置于載玻片上，用無菌水做浮載劑，制成臨時(shí)玻片。對(duì)產(chǎn)生冬孢子的葉片則采用切片法制成玻片，即用刀片切取含有冬孢子堆的葉片組織，觀察橫切面。將制成的玻片置于萊卡正置式顯微鏡DM2500下觀察病原菌形態(tài)，對(duì)病原菌進(jìn)行拍照，同時(shí)測(cè)量夏孢子和冬孢子的大小。

1.2.3 分子生物學(xué)鑒定" 選取與白及銹病夏孢子形態(tài)相同的新鮮病葉，用無菌毛刷輕輕刷下葉背的夏孢子，采用CTAB法提取病原菌DNA。用rDNA-ITS引物 ITS1（5′-TCCGTAGGTGAACCTGCG

G-3′）/ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系共 25 μL： Master Mix 12.5 μL、10 μmol·L-1引物各1 μL、30 ng·μL-1模板 DNA 1 μL、ddH2O 9.5 μL。反應(yīng)程序： 94 ℃預(yù)變性 3 min，94 ℃變性30 s，55 ℃退火 30 s，72 ℃延伸45 s，30個(gè)循環(huán)；72 ℃終延伸5 min；PCR 產(chǎn)物經(jīng)1% 的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，送武漢擎科生物科技有限公司測(cè)序。將測(cè)序獲得的菌株rDNA-ITS序列在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST同源性比對(duì)分析，下載同源性較高的rDNA-ITS序列?；诠┰嚲旰瓦x取同源性大于95%的其他菌株ITS序列的rDNA-ITS序列，采用MEGA 7. 0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.4 白及銹病抗性鑒定

1.2.4.1 人工接種銹病孢子" 將上述（1.2.3）病葉的夏孢子堆用無菌毛刷輕輕刷進(jìn)無菌水中，制備成病原菌孢子懸浮液（光學(xué)顯微鏡100倍視野下20～25個(gè)孢子），加入0.1%濃度的吐溫-80，均勻噴灑在23份不同地理來源的健康白及葉片背面，以加入0.1%吐溫-80的無菌水為對(duì)照，套上塑料袋保濕24 h，每個(gè)處理6株，3個(gè)重復(fù)；接種后每天觀察植株情況，14 d后以葉片為取樣單位統(tǒng)計(jì)發(fā)病情況，并記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。

1.2.4.2 銹病抗性評(píng)價(jià)" 參照賀占雪等（2019）的方法，結(jié)合廣西地區(qū)白及銹病的發(fā)病特點(diǎn)稍作改進(jìn)。接種銹病病原菌后根據(jù)白及每張葉片上病斑面積占整個(gè)葉面積的百分比進(jìn)行病害分級(jí)。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)，無病斑；1級(jí)，病斑占葉面積0～20%；2級(jí)，病斑占葉面積21%～40%；3級(jí)，病斑占葉面積41%～60%；4級(jí)，病斑占葉面積61%～80%；5級(jí)，病斑占葉面積在80%以上。病情指數(shù)（ID）=∑（各級(jí)病葉數(shù)×該級(jí)代表數(shù)值）/（調(diào)查總?cè)~片數(shù)×最重級(jí)別代表數(shù)值）×100。根據(jù)病情指數(shù)將白及材料抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行劃分，即免疫（immune， I），病情指數(shù)=0；高抗（high resistance， HR），0＜病情指數(shù)≤5；抗?。╮esistance， R），5＜病情指數(shù)≤10；中抗（moderate resistance， MR），10＜病情指數(shù)≤30；感病（susceptible， S），30＜病情指數(shù)≤50；高感（high susceptible， HS），病情指數(shù)＞50。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

使用Excel 2010和 SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析。

2" 結(jié)果與分析

2.1 白及銹病的發(fā)生情況

經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，2022年廣西桂林市種植區(qū)的白及4月上旬開始出現(xiàn)銹病，受銹病侵染的葉片背面散生許多粉末狀的黃色夏孢子堆，葉片正面有淡黃色的病斑，隨著時(shí)間的推移，夏孢子堆邊緣變蠟質(zhì)，顏色逐漸變深；9月下旬，夏孢子堆周圍形成表面蠟狀、光滑的紅褐色冬孢子堆，冬孢子堆單生或聚在一起成圓環(huán)狀。廣西桂林市種植區(qū)的白及銹病主要危害葉片，未見侵染花、果、葉鞘，銹菌傳播速度快，發(fā)病率高，其中3號(hào)白及達(dá)到100%，被害嚴(yán)重的葉片形成大型枯斑、干枯，嚴(yán)重影響白及的觀賞效果和產(chǎn)量（圖1）。

2.2 白及銹病病原菌的形態(tài)特征

選取白及的典型銹病葉片，對(duì)病原菌形態(tài)特征進(jìn)行觀察，結(jié)果如圖2所示，廣西桂林市種植的白及銹病病原菌具有夏孢子和冬孢子兩種形態(tài)。夏孢子堆呈黃色、橘黃色，粉末狀，無包被，中心隆起，單個(gè)夏孢子堆的直徑為0.2～0.5 mm（圖2：A，B）；夏孢子呈金黃色，卵圓形或橢圓形，大小為（21.43～30.95） μm × （13.10～19.05） μm，長(zhǎng)寬比小于2∶1，壁無色，表面有疣狀突起（圖2：C，D）。冬孢子堆呈橘紅色、紅褐色，由多個(gè)冬孢子排列成柵欄狀排列，表面覆蓋有透明的膠狀物；冬孢子為倒卵形、棍棒狀，大小為（17.25～30.0） μm × （5.5～6.65） μm，長(zhǎng)寬比小于5∶1，壁無色（圖2：E）。上述特征與Coleosporium bletiae的形態(tài)特征基本相符（游崇娟，2012）。

2.3 白及銹病病原菌的分子鑒定

采用ITS1/ITS4引物對(duì)菌株X2的ITS序列進(jìn)行擴(kuò)增。測(cè)序結(jié)果顯示，菌株X2的ITS序列（OQ826009）長(zhǎng)度為698 bp。將所得到的ITS序列在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行同源性比對(duì)，結(jié)果顯示菌株X2與銹病病原菌Coleosporium sp.（KY783686.1）的匹配度最高，序列一致性為95.86%。但是，以里氏木霉Trichoderma reesei（Z31016.1）為外群對(duì)照，基于菌株X2的ITS序列與同源性大于95%的其他菌株的ITS序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果顯示菌株X2與鞘銹菌屬（Coleosporium）的白及鞘銹菌Coleosporium bletiae（MN108161.1，OP363680.1）、馬先蒿鞘銹菌Coleosporium pedicularidis（KP017554.1）、千里光鞘銹菌Coleosporium senecionis（KY810475.1）、兔兒傘鞘銹菌Coleosporium cacaliae（KY810462.1）、鞘銹菌Coleosporium sp.（MW666045.1）、風(fēng)鈴草鞘銹菌Coleosporium campanulae（KP017555.1）聚為一個(gè)大類群，而與Coleosporium bletiae（MN108161.1，OP363680.1）聚為一個(gè)小類群，親緣關(guān)系最近，但單獨(dú)一支（圖3）。

以上結(jié)果說明廣西桂林市種植的白及銹病病原菌為C. bletiae，但與已報(bào)道的白及銹病致病菌存在一定的遺傳分化。

2.4 白及種質(zhì)資源的銹病抗性鑒定

人工接種菌株X2 14 d后，白及發(fā)病癥狀與田間自然發(fā)病癥狀相似，葉片有淡黃色的夏孢子堆，但不同來源的白及病害程度存在較大差異（圖4）。根據(jù)病害程度計(jì)算23份白及的病情指數(shù)范圍為0～70.7，不同地理來源白及之間的差異性如表2所示。根據(jù)病情指數(shù)將23份白及對(duì)菌株X2的抗性劃分為6個(gè)等級(jí)，其中來自云南紅河的白及表現(xiàn)為免疫（I），病情指數(shù)為0，占試驗(yàn)總數(shù)的4.35%；來自廣西恭城、廣西百色、貴州遵義和湖北宜昌的白及表現(xiàn)為高抗（HR），病情指數(shù)為1.7～4.7，占試驗(yàn)總數(shù)的17.39%；來自廣西賀州、湖南桑植、四川巴中、四川廣元、重慶及湖北襄陽(yáng)的白及表現(xiàn)為抗?。≧），病情指數(shù)為5.6～9.4，占試驗(yàn)總數(shù)的26.09%；來自廣西資源（1號(hào)）、廣西河池、江西修水、江西上饒、江蘇南京的白及表現(xiàn)為中抗（MR），病情指數(shù)為12.7～18.3，占試驗(yàn)總數(shù)的21.74%；來自廣西資源（2號(hào)）、廣西桂林、廣西靖西、江西永新及安徽廣德的白及表現(xiàn)為感?。⊿），病情指數(shù)為32.0～49.1，占試驗(yàn)總數(shù)的21.74%；來自云南羅平、湖南永州的白及表現(xiàn)為高感（HS），病情指數(shù)為62.2～70.7，占試驗(yàn)總數(shù)的8.69%。

以上結(jié)果說明，不同地理來源的白及對(duì)菌株X2的抗性存在較大差異。在23份白及中，免疫和高抗的白及病情指數(shù)低于5.0，表現(xiàn)抗銹病能力強(qiáng)；抗病和中抗的資源最多，共有11份，病情指數(shù)為5.6～17.0。

3" 討論與結(jié)論

3.1 廣西種植區(qū)的白及銹病發(fā)病特征

余中蓮等（2021）的報(bào)道認(rèn)為，銹病可危害植物的莖、葉、花、果等組織，嚴(yán)重影響藥用植物的產(chǎn)量和品質(zhì)。本研究發(fā)現(xiàn)，銹病主要危害白及的葉片，侵染初期葉片背面散生粉末狀的黃色夏孢子堆，侵染后期密布黃色孢子堆，進(jìn)而導(dǎo)致葉片光合作用受阻，從而影響白及的發(fā)育，這與湖北白及銹病發(fā)病特征一致（徐明玥等，2023）。然而，與貴州等其他白及種植區(qū)相比（宋莉莎，2019），廣西種植區(qū)的白及發(fā)病時(shí)間相對(duì)較早，發(fā)病率及病情指數(shù)高，其原因可能是銹病屬于氣傳性病害，環(huán)境、氣候等條件均可影響其發(fā)病時(shí)間、傳播速度和病情指數(shù)（余中蓮等，2021），這與王曉鳴等（2020）和楊雙昱等（2022）在玉米和花椒等農(nóng)作物上的研究報(bào)道類似。此外，陳文娟等（2018）和高新培等（2023）的研究表明，不同地區(qū)銹病的發(fā)病情況與寄主和銹菌的遺傳背景有關(guān)。因此，還需進(jìn)一步研究不同白及種植區(qū)銹病病原菌的寄主以及遺傳背景等。

3.2 廣西種植區(qū)的白及銹病病原菌鑒定

Kaneko（1981）的研究認(rèn)為，孢子的形態(tài)大小可作為銹菌傳統(tǒng)分類的依據(jù)。本研究通過形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，廣西種植區(qū)的白及銹病病原菌具有夏孢子、冬孢子兩種形態(tài)，其中夏孢子金黃色，卵圓形或橢圓形，表面有疣狀突起；冬孢子橘紅色或紅褐色，倒卵形、棍棒狀，與已報(bào)道的白及鞘銹菌相似（游崇娟，2012）。本研究還發(fā)現(xiàn)，廣西種植區(qū)的白及銹菌冬孢子小于宋莉莎（2019）報(bào)道的白及銹菌冬孢子，其原因可能是病原菌的孢子形態(tài)大小隨地理分布、寄主植物、取樣時(shí)間和測(cè)試者及測(cè)定方式的不同發(fā)生的變化（游崇娟，2012；席剛俊等，2018；羅凱等，2021），這進(jìn)一步說明不能單憑孢子形態(tài)大小對(duì)銹菌進(jìn)行分類。rDNA-ITS序列因具有較高的保守性常被用于銹病病原菌分類和系統(tǒng)發(fā)育的研究。韓盛等（2022）基于ITS序列鑒定伊犁橡

膠草銹病的病原菌為山柳菊柄銹菌（Puccnicia hieracii）；鄧東等（2022）利用ITS序列鑒定云南省玉溪豌豆上的銹病病原菌應(yīng)為豌豆?；停║romyces viciae-fabae ex P. sativaum），而來源于其它地區(qū)蠶豆上的銹病病原菌為蠶豆?；停║. viciae-fabae ex V. faba）。本研究基于ITS序列鑒定廣西種植區(qū)的白及銹病病原菌為鞘銹菌，與徐明玥等（2023）和游崇娟（2012）在白及銹病上的研究結(jié)果一致。Park和 Wellings（2012）的研究認(rèn)為，基因突變和重組是銹菌高度變異的原因。前人的研究表明，銹菌易受到自身和寄主產(chǎn)生的誘變物質(zhì)或傳播過程中某些自然因素以及化學(xué)藥劑的刺激，從而導(dǎo)致遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，而異核現(xiàn)象和有性生殖可能使銹菌發(fā)生基因重組（張靜秋等，2013；Ali et al.， 2014；姚強(qiáng)，2018）。本研究通過構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現(xiàn)廣西種植區(qū)的白及銹病病原菌與Coleosporium bletiae（MN108161.1，OP363680.1）聚為一個(gè)類群，但為不同分支，說明病原菌與這些Coleosporium bletiae之間存在遺傳分化，可能是不同的生理小種，這與黃亮（2022）和郭云燕等（2013）在小麥條銹菌和玉米南方銹菌上的研究結(jié)果類似。下一步應(yīng)該采集不同種植區(qū)的白及銹病病原菌進(jìn)行深入鑒定及遺傳多樣性分析，為白及銹病防控奠定基礎(chǔ)。

3.3 不同地理來源的白及對(duì)銹病的抗性差異

王曉鳴等（2020）和段璐瑤等（2020）的研究認(rèn)為，植物在不同地理環(huán)境間形成的種質(zhì)資源及育成品種的遺傳背景存在較大差異，而抗性基因（組合）的不同會(huì)影響其對(duì)銹病的抗性。陳文娟等（2018）研究表明，不同地理來源的玉米種質(zhì)對(duì)南方銹病的抗性存在較大差異，而抗性玉米種質(zhì)之間遺傳多樣性較高。譚小艷等（2021）研究表明，新泰地區(qū)引進(jìn)的黃花菜品種普遍為銹病易感植株，而當(dāng)?shù)氐钠贩N抗病能力較強(qiáng)。本研究對(duì)23份不同地理來源的白及進(jìn)行了銹病抗性評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)，不同地理來源的白及存在較大的抗性差異，導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因可能是不同地區(qū)的白及長(zhǎng)期受生殖隔離的影響而引起的，造成這種抗性差異的原因需要進(jìn)一步分析生理生化及分子水平上的差異。本研究篩選了1份免疫、4份高抗、6份抗病、5份中抗、5份感病、2份高感的白及，其中表現(xiàn)免疫和高抗的僅有5份，分別來自云南紅河、廣西恭城、廣西百色、貴州遵義、湖北宜昌，病情指數(shù)相對(duì)較低，抗銹病能力強(qiáng)，可推廣應(yīng)用或作為培育抗銹病優(yōu)良種質(zhì)的親本材料。而抗病和中抗的資源雖然具有一定的抗性，但隨著發(fā)病時(shí)間的持續(xù)，病情加重，不宜直接推廣。

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（責(zé)任編輯" 蔣巧媛" 王登惠）