摘要：牛卵巢顆粒細(xì)胞是雌激素（Estrogen，E2）合成的主要來源，具有E2恬性的牛顆粒細(xì)胞體外模型的建立是研究E2合成與分泌過程中潛在調(diào)控機制的重要工具，該細(xì)胞模型的建立可為E2合成分子調(diào)控機制及牛卵巢卵泡發(fā)育機制的研究提供理論與技術(shù)支持。細(xì)胞接種密度是顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的關(guān)鍵因素，高密度可引起細(xì)胞生理及分子的顯著變化。研究通過不同接種密度下的形態(tài)變化和基因表達(dá)篩選牛顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)最優(yōu)接種密度，采用長期無血清法培養(yǎng)牛原代顆粒細(xì)胞，培養(yǎng)液中添加FSH及IGF-l以誘導(dǎo)E2的合成。培養(yǎng)7 d后，采集6孔板中高（3.0×10個細(xì)胞／孔）、中（2.O×10個細(xì)胞／孔）、低（1.0×10個細(xì)胞／孔）3種不同接種密度的細(xì)胞圖像進(jìn)行觀測，并利用qRT-PCR技術(shù)檢測3種不同接種密度中相關(guān)基因的表達(dá)情況。結(jié)果表明，低密度（1.0×10個細(xì)胞／孔）接種細(xì)胞呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞樣外觀，細(xì)腮無聚集傾向；中密度組（2.0×10個細(xì)胞／孔）可觀察到少量聚集的細(xì)胞團，高密度（3.0×10個細(xì)胞／孔）培養(yǎng)條件下，大多數(shù)細(xì)胞聚集成細(xì)胞團。低密度組（1.0×10個細(xì)胞／孔）中，CYP19A1及FSHR高表達(dá)，RGS2及VNN2低表達(dá)；高密度組（3.0×10個細(xì)胞／孔）表達(dá)量則相反。綜上所述，低密度組（10×10個細(xì)胞／孔）細(xì)胞可作為具有E2活性的牛顆粒細(xì)胞體外模型。

關(guān)鍵詞：牛；顆粒細(xì)胞，接種密度；無血清培養(yǎng)；細(xì)胞培養(yǎng)模型

中圖分類號：S823.148 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1002-2481（2024）03-0147-06