摘要：目的 探討實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)（Xpert）和結(jié)核分枝桿菌（MTB）/利福平（RIF）檢測(cè)診斷肺結(jié)核的價(jià)值。方法 選擇2021年1月—2023年7月新余市人民醫(yī)院接診的疑似肺結(jié)核患者164例，均接受痰涂片鏡檢、Xpert amp;MTB/RIF檢測(cè)，以結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)作為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比兩種檢測(cè)方式診斷肺結(jié)核的價(jià)值及與臨床診斷的一致性，并對(duì)比兩種檢測(cè)方式的檢查所需時(shí)間。結(jié)果 164例疑似肺結(jié)核患者，經(jīng)臨床確診為肺結(jié)核84例（51.22%），非肺結(jié)核80例（48.78%）。Xpert amp;MTB/RIF對(duì)肺結(jié)核診斷的陰性預(yù)測(cè)值為72.73%、特異度為100.00%（80/80）、靈敏度為64.29%（54/84）、準(zhǔn)確度為81.71%（134/164）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為100.00%（54/54），均高于痰涂片鏡檢，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；Xpert amp;MTB/RIF診斷結(jié)果與臨床診斷結(jié)果一致性尚可（kappa=0.637，P＜0.05）；痰涂片鏡檢診斷結(jié)果與臨床診斷結(jié)果一致性不佳（kappa=0.278，P＜0.05）；Xpert amp;MTB/RIF檢查所需時(shí)間短于痰涂片鏡檢，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。結(jié)論 Xpertamp;MTB/RIF診斷效能優(yōu)于痰涂片鏡檢，且檢查所需時(shí)間較短，利于臨床早期制定治療方案。

關(guān)鍵詞：肺結(jié)核；痰涂片鏡檢；結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)；Xpertamp;MTB/RIF；一致性

中圖分類號(hào)：R978" " " " "文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A" " " " "文章編號(hào)：1001-8751（2024）05-0342-05

Research and Evaluation of New Diagnostic Technologies for

Pulmonary Tuberculosis

Peng Lei，" "Zhou Min，" "Zhang Cui，" "Liu Dan，" "Yin Qiong

（Xinyu People’s Hospital， Xinyu" " Jiangxi" "338000）

Abstract： Objective To investigate the value of real-time fluorescence quantitative nucleic acid amplification test （xpert）-Mycobacterium tuberculosis（MTB）/rifampicin （RIF） in the diagnosis of pulmonary tuberculosis. Methods A total of 164 patients with suspected pulmonary tuberculosis admitted to Xinyu People’s Hospital from January 2021 to July 2023 were selected. All patients underwent sputum smear microscopy and Xpertamp;MTB/RIF detection. Mycobacterium tuberculosis culture was used as the gold standard. A comparison was made between the two detection technologies' usefulness in diagnosing pulmonary tuberculosis， as well as their consistency with clinical diagnosis and time requirements. Results Among 164 suspected pulmonary tuberculosis patients， 84 cases （51.22%） were clinically diagnosed as pulmonary tuberculosis， and 80 cases （48.78%） were non-pulmonary tuberculosis. The negative predictive value of Xpertamp;MTB/RIF for the diagnosis of pulmonary tuberculosis was 72.73%， the specificity was 100.00%（80/80）， the sensitivity was 64.29% （54/84）， the accuracy was 81.71% （134/164）， and the positive predictive value was 100.00% （54 / 54）， which were higher than those of sputum smear microscopy， with statistical differences （Plt;0.05）; The findings of Xpertamp;mtb/rif testing agreed with the clinical diagnosis （kappa=0.637， P lt;0.05）. There was insufficient agreement between the results of sputum smear microscopic diagnosis and the clinical diagnosis （kappa = 0.278， Plt;0.05）; there was a statistically significant difference in the time required for Xpertamp;mtb/rif testing and sputum smear microscopy（Plt;0.05）. Conclusion The diagnostic efficacy of Xpertamp;MTB/RIF is better than that of sputum smear microscopy， and the examination time is shorter， which is conducive to early clinical treatment.

Key words： tuberculosis;" "sputum smear microscopy;" "Mycobacterium tuberculosis culture;" "Xpertamp;MTB/RIF; consistency

肺結(jié)核是臨床常見的嚴(yán)重慢性傳染性疾病之一，由結(jié)核分枝桿菌侵入人體所致，患者會(huì)出現(xiàn)乏力、盜汗和咳嗽等癥狀，部分患者伴有胸痛、咯血和呼吸困難癥狀，胸部影像學(xué)表現(xiàn)特點(diǎn)是病變多位于下葉背段和上葉尖后段，邊緣清晰，密度不均，變化緩慢，易形成空洞。但部分患者缺乏影像學(xué)表現(xiàn)和典型癥狀，給肺結(jié)核的及時(shí)診斷治療帶來很大難度[1-2]。痰涂片鏡檢是臨床診斷篩查肺結(jié)核的有效手段，但痰涂片的靈敏度較差，且存在標(biāo)本獲取的問題；培養(yǎng)所需時(shí)間較長(zhǎng)，不能滿足快速診斷的需要[3-4]。應(yīng)用新的診斷技術(shù)，盡早發(fā)現(xiàn)患者并給予規(guī)范的治療和管理，迅速應(yīng)用新的診斷技術(shù)和藥品，提高耐多藥和利福平耐藥（MDR/RR）患者發(fā)現(xiàn)率和成功治療率，減輕患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，減少了大量社會(huì)勞動(dòng)力的損失，取得顯著的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)（Xpert）和結(jié)核分枝桿菌（MTB）/利福平（RIF）是基于熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)實(shí)施診斷，診斷的同時(shí)還能判斷利福平耐藥情況，其具有安全性高、操作簡(jiǎn)便和快速的優(yōu)點(diǎn)，逐漸被應(yīng)用于肺結(jié)核診斷[5]。本研究分析Xpertamp;MTB/RIF診斷肺結(jié)核價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2021年1月—2023年7月新余市人民醫(yī)院接診的疑似肺結(jié)核患者164例，年齡21～79歲，平均（49.65±6.16）歲；男92例，女72例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）影像學(xué)檢查表現(xiàn)與活動(dòng)性肺結(jié)核相似，或有咳嗽、咯血等肺結(jié)核表現(xiàn)；（2）簽署知情同意書；（3）臨床資料完整；（4）年齡≥18歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）入組前2年內(nèi)未接受抗結(jié)核藥物治療者；（2）肺外結(jié)核；（3）合并其他全身器官系統(tǒng)疾病；（4）合并可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果疾??；（5）存在精神類疾病者，無(wú)法配合檢查。本研究經(jīng)新余市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，倫理審批號(hào)為2021011。

1.2 主要試劑與儀器

珠海貝索生物技術(shù)有限公司抗酸染色液；奧林巴斯BX53型顯微鏡；珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的分枝桿菌羅氏培養(yǎng)基；美國(guó)Cepheid公司Genexpert MTB/RIF檢測(cè)系統(tǒng)和配套試劑。

1.3 方法

1.3.1 痰涂片鏡檢

留取患者3～5 mL痰液，制作涂片，待其干燥后，使用染色架上火焰固定，干燥，使用顯微鏡鏡檢，陽(yáng)性結(jié)果為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲紅色桿菌。

1.3.2 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)

留取痰液1～1.5 mL，離心15 min，3000 r/min，用4%NaOH處理，取下層沉淀，并接種至羅氏培養(yǎng)管，置于結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)箱37 ℃孵育，每周觀察一次，2～8周才能得到肉眼可見的菌落。

1.3.3 Xpert amp;MTB/RIF檢測(cè)

留取1 mL患者痰液，按照1：2比例加入處理液，使用漩渦混合器震蕩15～30 s，室溫下靜置15 min。在試劑盒內(nèi)加入裂解的樣品2 mL，用菌吸管吸取2 mL混合液并轉(zhuǎn)移至反應(yīng)盒內(nèi)，使用Xpertamp;MTB/RIF系統(tǒng)自動(dòng)監(jiān)測(cè)。靶序列取ropB基因，用6種分子信標(biāo)探針檢測(cè)，探針循環(huán)閾值≤38即為陽(yáng)性，5個(gè)探針中至少2個(gè)探針Ct值≤38即為檢測(cè)到MTB。對(duì)利福平耐藥情況：△Ct值（特異性分子信標(biāo)晚期Ct值與早期Ct值的差值）＞3.5即表示對(duì)利福平耐藥，△Ct值≤3.5提示對(duì)利福平敏感。

1.4 觀察指標(biāo)

（1）以結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)作為金標(biāo)準(zhǔn)，分析痰涂片鏡檢和Xpertamp;MTB/RIF檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核診斷價(jià)值及其診斷結(jié)果與臨床診斷結(jié)果的一致性，其中診斷價(jià)值包含準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度、陰性預(yù)測(cè)值和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值。以n表示總例數(shù)，a表示真陽(yáng)性，b表示假陽(yáng)性，c表示假陰性，d表示真陰性。（a+d）/n=準(zhǔn)確度，a/（a+c）=靈敏度，d/（c+d）=陰性預(yù)測(cè)值，d/（b+d）=特異度，a/（a+b）=陽(yáng)性預(yù)測(cè)值。（2）對(duì)比兩種檢測(cè)方式的檢查所需時(shí)間。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)用Spss 23.0軟件分析，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示計(jì)量資料，兩組間對(duì)比用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)與百分比（n，%）表示，用x2檢驗(yàn)，使用一致性檢驗(yàn)（kappa），一致性良好：kappa值≥0.75，一致性尚可：0.4～0.74，一致性不佳：＜0.4，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 臨床診斷結(jié)果

164例疑似患者經(jīng)臨床診斷顯示確診84例（51.22%）肺結(jié)核，80例（48.78%）為非肺結(jié)核，其中6例（3.66%）為非典型分枝桿菌肺部感染，74例（45.12%）為一般肺部感染。

2.2 兩種檢測(cè)方式診斷肺結(jié)核的價(jià)值及臨床診斷的一致性檢驗(yàn)

Xpertamp;MTB/RIF對(duì)肺結(jié)核診斷的陰性預(yù)測(cè)值、特異度、靈敏度、準(zhǔn)確度和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值較其余兩種檢查方式高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），見表1-3。經(jīng)kappa檢驗(yàn)顯示，Xpert amp;MTB/RIF診斷結(jié)果與臨床診斷結(jié)果一致性尚可（kappa=0.637，P=0.000）；痰涂片鏡檢診斷結(jié)果與臨床診斷結(jié)果一致性不佳（kappa=0.278，P=0.000）。

2.3 兩種檢測(cè)方式的檢查所需時(shí)間比較

Xpertamp;MTB/RIF檢查所需時(shí)間短于痰涂片鏡檢，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。結(jié)果見表4。

3 討論

我國(guó)結(jié)核病占全球總數(shù)的14.3%，居于甲、乙類傳染病前列，而肺結(jié)核是結(jié)核病的主要類型之一，其可經(jīng)呼吸道傳播，若不及時(shí)治療，可能引起大范圍暴發(fā)流行，嚴(yán)重危害人民群眾健康，已成為全球主要公共衛(wèi)生問題之一[6-7]。早發(fā)現(xiàn)和早治療是控制肺結(jié)核的關(guān)鍵。目前臨床主要采用痰涂片鏡檢和結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)診斷肺結(jié)核，前者操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快，但其對(duì)痰標(biāo)本內(nèi)結(jié)核桿菌含量要求高，一般情況下痰標(biāo)本內(nèi)結(jié)核菌數(shù)量＞5000 條/mL才能檢出陽(yáng)性結(jié)果，但易出現(xiàn)漏檢，且技術(shù)要求高，生物安全性低，易引起污染[8-9]。結(jié)核分枝桿菌固體培養(yǎng)檢出率高，但因結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng)緩慢，檢測(cè)所需時(shí)間較長(zhǎng)，可能導(dǎo)致治療延誤，造成肺結(jié)核患者病情進(jìn)一步惡化及傳播，因?qū)?shí)驗(yàn)室的生物安全級(jí)別要求較高，臨床應(yīng)用受到一定局限性[10-11]。

Mansoori等[12]分析顯示，Xpert方法根據(jù)培養(yǎng)方法檢測(cè)到88例（95.7%）陽(yáng)性病例，而根據(jù)涂片顯微鏡檢測(cè)到78例（84.8%）陽(yáng)性病例。Xpert方法診斷結(jié)核病的總體敏感性和特異性分別為95.7%和99%，涂片鏡檢的敏感性和特異性分別為84.8%和97.5%，提示Xpert測(cè)定顯示出高的總體敏感性。田海兵等[13]分析顯示，Xpert amp;MTB/RIF檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)單、快速、安全等優(yōu)勢(shì)，且靈敏度和特異度都較高，可以作為基層醫(yī)院早期檢測(cè)肺結(jié)核的重要方法之一。本研究中，Xpertamp;MTB/RIF對(duì)肺結(jié)核診斷的陰性預(yù)測(cè)值、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、準(zhǔn)確度和靈敏度均高于痰涂片鏡檢，進(jìn)一步分析顯示，Xpertamp;MTB/RIF診斷結(jié)果與臨床診斷結(jié)果的一致性尚可，其余痰涂片鏡檢診斷肺結(jié)核結(jié)果與臨床診斷結(jié)果一致性不佳，而Xpertamp;MTB/RIF檢查所需時(shí)間短于痰涂片鏡檢，提示Xpertamp;MTB/RIF診斷肺結(jié)核準(zhǔn)確率更高，且檢查所需時(shí)間較短，與上述研究結(jié)果相似。GeneXpert MTB/RIF檢測(cè)原理是熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），針對(duì)MTB rpoB基因利福平耐藥決定區(qū)（RRDR）81bp設(shè)計(jì)探針和引物，判斷其是否出現(xiàn)突變，并可從痰液內(nèi)檢出MTB及其是否對(duì)利福平耐藥[14]。Xpertamp;MTB/RIF內(nèi)對(duì)照取1個(gè)球芽孢桿菌特異探針，可質(zhì)控檢測(cè)效率及DNA擴(kuò)增效率，其整合了基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)所需的擴(kuò)增、樣品準(zhǔn)備和檢測(cè)的3個(gè)步驟，只需用處理液消化處理待測(cè)樣本并置于反應(yīng)試劑盒內(nèi)，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)運(yùn)行并檢測(cè)，全程約2 h，唯一的手工操作步驟是將具有殺菌作用的緩沖液加入痰標(biāo)本后轉(zhuǎn)移至反應(yīng)試劑盒內(nèi)[15-16]。Xpertamp;MTB/RIF在密閉環(huán)境內(nèi)進(jìn)行操作，手段操作時(shí)間短，不易造成交叉感染，對(duì)操作者及周圍環(huán)境相對(duì)安全。但Xpertamp;MTB/RIF核心是檢測(cè)MTB的DNA，失活MTB仍可使其出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，對(duì)于確診復(fù)查的MTB患者，不建議使用Xpertamp;MTB/RIF監(jiān)測(cè)治療效果，且監(jiān)測(cè)利福平耐藥性時(shí)，檢測(cè)結(jié)果可能會(huì)受到異?；蛲蛔儭⑻狄吼こ砗蜆?biāo)本污染等因素影響而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。故Xpertamp;MTB/RIF仍不能完全替代傳統(tǒng)MTB培養(yǎng)與藥敏試驗(yàn)。

綜上所述，與痰涂片鏡檢相比，使用Xpertamp;MTB/RIF診斷可提高肺結(jié)核檢出率，且檢測(cè)耗時(shí)較短，值得臨床推廣使用。

參 考 文 獻(xiàn)

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