摘要：目的 對海洋真菌Aspergillus sp. LW152發(fā)酵提取物的抗細(xì)菌成分進(jìn)行研究。方法 利用硅膠柱層析、葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱層析、半制備高效液相色譜等方法，對該菌株發(fā)酵提取物進(jìn)行分離純化；化合物結(jié)構(gòu)通過核磁共振波譜（NMR）、質(zhì)譜（MS）等數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對比進(jìn)行確定；采用微量肉湯稀釋法對化合物抗菌活性進(jìn)行體外評價。結(jié)果 從真菌LW152發(fā)酵的乙酸乙酯提取物中分離得到了7個化合物，其結(jié)構(gòu)分別鑒定為7-脫氧-7，14-二脫氫水楊酸（1）、7-脫氧-7，8-二脫氫水楊酸（2）、pseudaboydin B（3）、（Z）-5-（羥甲基）-2-（6'-甲基庚-2'-烯-2'-基）苯酚（4）、aspergillusene A（5）、2，4-二羥基-6-甲基苯甲酸甲酯（6）和1-亞油酸單甘油酯（7）。結(jié)論 海洋真菌Aspergillus sp. LW152能產(chǎn)生具有抗細(xì)菌活性的次級代謝產(chǎn)物，其中化合物4和5對6種致病細(xì)菌的生長均具有一定的抑制作用，化合物7對青枯雷爾菌的生長具有抑制作用。

關(guān)鍵詞：海洋真菌；曲霉屬；分離純化；結(jié)構(gòu)鑒定；次級代謝產(chǎn)物；抗菌活性

中圖分類號：R978.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Study on antibacterial secondary metabolites from the marine-derived fungus Aspergillus sp. LW152

Liu Qianqian1， Wang Ru2， Cai Lei2，3， Yin Jun1， and Liu Ling1，2，3

（1 School of Traditional Chinese Medicine， Shenyang Pharmaceutical University， Shengyang 110016;

2 State Key Laboratory of Mycology， Institute of Microbiology， Chinese Academy of Sciences， Beijing 100101;

3 University of Chinese Academy of Sciences， Beijing 100049）

Abstract Objective This research investigated the antibacterial secondary metabolites from the fermentation extracts of the marine fungus Aspergillus sp. LW152. Methods Silica gel column chromatography， Sephadex LH-20 gel column chromatography and semi-preparative high-performance liquid chromatography （RP HPLC） were used to isolate and purify the secondary metabolites from the fermented extracts of the fungus Aspergillus sp. LW152. The structures of these secondary metabolites were determined by analysis of their NMR and MS spectroscopic data and by comparison with those in the literatures. The antibacterial activity was evaluated by the 96-well plate broth microdilution method. Results Seven compounds were isolated from fermented ethyl acetate extracts of the fungus LW152 and identified as 7-deoxy-7，14-didehydrosydonic acid （1）， 7-deoxy-7，8-didehydrosydonic acid （2）， pseudaboydin B （3）， （Z）-5-（hydroxymethyl）-2-（6'-methylhept-2'-en-2'-yl）phenol （4）， aspergillusene A （5）， methyl orsellinate （6） and 1-monolinolein （7）. Conclusion The marine-derived fungus Aspergillus sp. LW152 could produce secondary metabolites with antibacterial activities. Compounds 4 and 5 showed antibacterial activities against six kinds of pathogenic bacteria. While compound 7 showed antibacterial activity against Ralstonia solanacearum.

Key words Marine-derived fungi; Aspergillus sp.; Isolation and purification; Structure elucidation; Secondary metabolites; Antibacterial activity

隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，抗生素耐藥[1]成為藥物使用時應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注的問題，也使得對于新型藥物的需求不斷上升[2]。天然產(chǎn)物是藥物先導(dǎo)化合物的重要來源，據(jù)統(tǒng)計(jì)，近年來海洋真菌中分離得到新化合物總量正在逐年升高，因此海洋真菌已成為海洋天然產(chǎn)物的重要來源[3–4]。海洋真菌長期生存于高壓、高鹽、低溫、寡營養(yǎng)等特殊的海水環(huán)境下，為適應(yīng)其生長環(huán)境進(jìn)化出獨(dú)特的代謝途徑和防御體制，從而能產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎、活性顯著的次級代謝產(chǎn)物[5]。早在1961年，從1株海洋真菌的代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)了頭孢菌素C，并在頭孢菌素C的基礎(chǔ)上成功合成了許多高活性的半合成頭孢菌素類抗生素[6]，因此海洋真菌是藥物先導(dǎo)化合物的重要資源寶庫，海洋真菌來源的天然產(chǎn)物越來越受到研究人員的廣泛關(guān)注。曲霉屬真菌在自然界中分布廣泛，在海洋真菌中也屬于優(yōu)勢菌株，目前從曲霉屬海洋真菌中也獲得了一系列結(jié)構(gòu)新穎的活性化合物[7–8]，從1992年到2020年，共計(jì)報(bào)道了873個從海洋曲霉中分離得到的新化合物[9]。曲霉屬可以產(chǎn)生多種結(jié)構(gòu)的代謝產(chǎn)物，包括脂肪酸、聚酮、甾醇、生物堿、萜類、多肽和丁烯內(nèi)酯等，具有一系列生物活性，包括抗菌、細(xì)胞毒性、殺蟲、神經(jīng)保護(hù)和抗氧化活性，因此研究海洋曲霉來源的天然產(chǎn)物是發(fā)現(xiàn)藥物先導(dǎo)化合物的重要途徑[10–11]。

本研究以1株西北太平洋沉積物來源的曲霉屬真菌Aspergillus sp. LW152為研究對象，從其大米發(fā)酵的乙酸乙酯提取物中分離得到7個化合物，與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)比對，確定其為7-脫氧-7，14-二脫氫水楊酸（1）、7-脫氧-7，8-二脫氫水楊酸（2）、pseudaboydin B （3）、（Z）-5-（羥甲基）-2-（6'-甲基庚-2'-烯-2'-基）苯酚（4）、aspergillusene A（5）、2，4-二羥基-6-甲基苯甲酸甲酯 （6）、1-亞油酸單甘油酯（7），化合物1～7化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示。采用微量肉湯稀釋法對這7個化合物進(jìn)行了體外抗菌活性評價。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

霉菌培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；超凈工作臺（北京亞太科隆儀器技術(shù)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）；高速離心機(jī)（美國Sigma公司）；高壓滅菌鍋（日本Hirayama公司）；SpectraMax多功能酶標(biāo)儀（美國Molecular Devices公司）；Agilent 1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；Anton Paar MCP 200旋光儀（澳大利亞Anton Paar公司）；Bruker-500核磁共振儀（德國Bruker公司）；Agilent 6520液相質(zhì)譜儀（美國Agilent公司）；Reprosil-Pur Basic-C18分析色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm，德國Dr. Maisch公司）；YMC制備反相色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm，日本YMC公司）；柱層析硅膠（10～40 μm，200～300目，青島海洋化工有限公司）；柱層析硅膠（80～160 μm，100～200目，青島海洋化工有限公司）；ODS反相硅膠填料（50 μm，日本YMC公司）；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20（瑞典Amersham公司）。

甲醇、二氯甲烷、無水乙醇、乙酸乙酯、石油醚和丙酮（分析純，北京化工廠）；甲醇和乙腈（色譜純，瑞典oceanpak公司）；萬古霉素（批號：02105281，北京邁瑞達(dá)科技有限公司）；二甲基亞砜（批號：BA03114377，北京博奧森生物技術(shù)有限公司）；氘代丙酮（批號：PR-32696，青島騰龍微波科技有限公司）；氘代氯仿（批號：C79235E28，上海吉至生化科技有限公司）。

1.2 菌株發(fā)酵

1.2.1 實(shí)驗(yàn)材料

菌株LW152分離自西北太平洋深海沉積物。通過CTAB[12]法提取其DNA序列，引物ITS1、ITS4擴(kuò)增序列，使用BLAST工具（https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）進(jìn)行結(jié)果比對（相似度為100%），同時結(jié)合形態(tài)學(xué)特征對比，確定其為Aspergillus sp.，該菌株現(xiàn)保存于中國科學(xué)院微生物所，真菌學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.2.2 菌株發(fā)酵

菌株接種及種子液：菌株接種至PDA平板上，倒置于28 ℃培養(yǎng)基中生長5～7 d。待菌落在平板上生長穩(wěn)定后，在超凈臺中將連同培養(yǎng)基的1～2塊1 cm2菌塊接入500 mL錐形瓶中（內(nèi)含200 mL種子液，葡萄糖4 g，酵母提取物4 g，麥芽糖提取物10 g，蒸餾水1 L）。接種后將錐形瓶放于搖床內(nèi)培養(yǎng)3 d（溫度：28 ℃；轉(zhuǎn)速：200 r/min）獲得種子液，將種子液按照每瓶10 mL的接種量接種至裝有滅菌大米固體培養(yǎng)基（大米80 g，蒸餾水100 mL）的125個500 mL錐形瓶中，28 ℃恒溫靜置避光發(fā)酵30 d。

1.3 提取與分離

發(fā)酵30 d產(chǎn)物采用乙酸乙酯萃取4次，獲得乙酸乙酯浸膏61.1 g，以1：1的比例拌100～200目硅膠拌樣，浸膏通過正相硅膠柱層析分離，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫（體積比100：1～5：1），后用100%甲醇洗脫，得到13個餾分（Fr.1～Fr.13）。組分Fr.7（二氯甲烷-甲醇，40：1， V/V）（1.2 g）過正相硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫（2：1～1：1， V/V），后用甲醇洗脫，獲得10個餾分（Fr.7.1～Fr.7.10），F(xiàn)r.7.4（489.6 mg）利用ODS反相柱層析，甲醇-水（1：4～1：0， V/V）梯度洗脫，分析合并獲得15個餾分（Fr.7.4.1～Fr.7.4.15），其中Fr.7.4.10（甲醇-水，3：2～4：1， V/V）（29.2 mg）經(jīng)過半制備液相色譜分離（甲醇-0.1%甲酸水，80%，2.0 mL/min）得到化合物1

（5.0 mg，tR=25.3 min）、化合物2（4.0 mg，tR=26.8 min）。組分Fr.8（二氯甲烷-甲醇，20：1， V/V）（5.5 g）過正相硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫（100：1～0：1， V/V）獲得7個餾分（Fr.8.1～Fr.8.7），其中Fr.8.3（二氯甲烷-甲醇，3：7， V/V）（580.0 mg）餾分用Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，使用甲醇-二氯甲烷（體積比1：1）洗脫，其中Fr.8.3.14（106.0 mg）經(jīng)過半制備液相色譜分離（甲醇-0.1%甲酸水，65%，2.0 mL/min）得到化合物3

（3.0 mg，tR=34.8 min）。組分Fr.8.1.8（67.2 mg）經(jīng)過半制備液相色譜分離（乙腈-0.1%甲酸水，73%，2.0 mL/min）得到化合物7（2.0 mg，tR=60.5 min）。組分Fr.4（二氯甲烷-甲醇，體積比80：1）（4.5 g）過正相硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫（體積比500：1～0：1）獲得10個餾分（Fr.4.1～Fr.4.10），其中Fr.4.3（二氯甲烷-甲醇，400：1）（63.5 mg）經(jīng)過半制備液相色譜分離（乙腈-0.1%甲酸水，60%，2.0 mL/min）得到化合物4（2.0 mg，tR=26.0 min）和化合物5（2.0 mg，tR=28.0 min）。組分Fr.9（二氯甲烷-甲醇，體積比10：1）（2.1 g）過ODS反相柱層析，甲醇-水（體積比1：4～1：0）梯度洗脫，獲得14個餾分（Fr.9.1～Fr.9.14），其中Fr.9.6～Fr.9.7（甲醇-水，3：7）（304.7 mg）餾分用Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，使用甲醇-二氯甲烷（1：1， V/V）洗脫，得到10個餾分Fr.9.6.1～Fr.9.6.10，其中Fr.9.6.7（46.4 mg）經(jīng)過半制備液相色譜分離（甲醇-0.1%甲酸水，55%，2.0 mL/min）得到化合物6（2.0 mg，tR=21.8 min）。

1.4 抗病原細(xì)菌活性

采用微量肉湯稀釋法[13]評價化合物1～7抗病原細(xì)菌的活性。供試菌為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus 8325-4，MRSA），青枯雷爾菌（Ralstonia solanacearum BXL015），甘藍(lán)黑腐病菌（Xanthomonas campestris pv. campestris BLY013），辣椒青枯病菌（Pseudomonas solanacearum BLY014），枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis ATCC6633），恥垢分枝桿菌（Mycolicibacterium smegmatis ATCC700084）。在96孔板內(nèi)第1孔加入2 μL的6.4 mg/mL待測化合物母液和188 μL的LB培養(yǎng)基（蛋白胨1%，酵母提取物0.5%，氯化鈉1%，蒸餾水1 L），在96孔板中進(jìn)行二倍倍比稀釋，獲得化合物終濃度為64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.125 μg/mL，

相同處理的萬古霉素和DMSO，分別為陽性對照和陰性對照，以LB培養(yǎng)基為空白對照，每孔中加入10 μL

的待測菌液使得其菌液濃度為5×105～1×106 CFU/mL，重復(fù)3次。在37 ℃培養(yǎng)24 h后觀察96孔板菌液渾濁程度，培養(yǎng)液清澈的最小濃度為該化合物的最小抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 菌株鑒定結(jié)果

菌株LW152通過BLAST比對ITS序列，確定與其最相近的菌株為Aspergillus sp. ZTCA8 （Genbank No. MK605972.1），相似度為100%。結(jié)合形態(tài)學(xué)特征分析（圖2），將試驗(yàn)菌株LW152初步鑒定為Aspergillus sp.，ITS序列上傳至Genbank數(shù)據(jù)庫（Genbank No. OR426526）。

2.2 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

7-脫氧-7，14-二脫氫水楊酸（1）：白色粉末。根據(jù)質(zhì)譜顯示離子峰m/z 249.15 [M+H]+，其分子式為C15H20O3，不飽和度為6。1H NMR （500 MHz， acetone-d6） δH： 7.56 （1H， s， H-2）， 7.51 （1H， dd， J=7.8， 1.2 Hz， H-4）， 7.22 （1H， d， J=7.7 Hz， H-5）， 5.19 （1H， s， H-14a）， 5.08 （1H， s， H-14b）， 2.55 （2H， t， J=7.6 Hz， H-8）， 1.50 （1H， m， H-11）， 1.37 （2H， m， H-9）， 1.20 （2H， m， H-10）， 0.83 （3H， s， H-13）， 0.82 （3H， s， H-12）; 13C NMR （125 MHz， acetone-d6） δC： 167.5 （C-15）， 155.0 （C-1）， 149.2 （C-7）， 135.3 （C-6）， 130.8 （C-3， C-5）， 121.7 （C-4）， 117.2 （C-2）， 115.2 （C-14）， 39.2 （C-10）， 36.9 （C-8）， 28.5 （C-11）， 26.6 （C-9）， 22.9 （C-12， C-13）。1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]對比后基本一致，鑒定其為7-脫氧-7，14-二脫氫水楊酸。

7-脫氧-7，8-二脫氫水楊酸（2）：白色粉末。根據(jù)質(zhì)譜顯示離子峰m/z 249.15 [M+H]+，其分子式為C15H20O3，不飽和度為6。1H NMR （500 MHz， acetone-d6） δH： 7.53 （1H， d， J=1.2 Hz， H-2）， 7.48 （1H， dd， J=7.8， 1.2 Hz， H-4）， 7.17 （1H， d， J=7.8 Hz， H-5）， 5.54 （1H， t， J =7.2 Hz， H-8）， 2.21 （2H， m， H-9）， 2.02 （3H， s， H-14）， 1.64 （1H， m， H-11）， 1.35 （2H， m， H-10）， 0.94 （3H， s， H-12）， 0.93 （3H， s， H-13）; 13C NMR （125 MHz， acetone-d6） δC： 167.7 （C-15）， 155.0 （C-1）， 138.3 （C-6）， 134.6 （C-8）， 131.8 （C-7）， 131.0 （C-3）， 130.2（C-5）， 121.8 （C-4）， 117.3 （C-2）， 39.4 （C-10）， 28.4 （C-11）， 26.9 （C-9）， 22.9 （C-12， C-13）， 16.9 （C-14）。1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]對比后基本一致，鑒定其為7-脫氧-7，8-二脫氫水楊酸。

Pseudaboydin B（3）：白色固體。[α]25 D +12.0 （c 0.1，MeOH），根據(jù)質(zhì)譜顯示離子峰m/z 271.13 [M+Na]+，其分子式為C15H20O3，不飽和度為6。1H NMR （500 MHz，

acetone-d6） δH： 7.45 （1H， d， J=8.0 Hz， H-5）， 7.40 （1H， s， H-7）， 7.27 （1H， d， J=8.0 Hz， H-4）， 1.92 （1H， m， H-1'a）， 1.82 （1H， m， H-1'b）， 1.66 （3H， s， H-7'）， 1.40 （1H， m， H-4'）， 1.28 （2H， m， H-2'）， 1.14 （2H， m， H-3'）， 0.81 （3H， s， H-5'）， 0.80 （3H， s， H-6'）; 13C NMR （125 MHz， acetone-d6） δC： 167.5 （C-1）， 157.3 （C-6）， 136.6 （C-3a）， 131.4 （C-7a）， 127.6 （C-4）， 121.0 （C-5）， 118.7 （C-7）， 78.5 （C-3）， 43.8 （C-1'）， 39.9 （C-3'）， 29.3 （C-7'）， 28.5 （C-4'）， 22.9 （C-5'）， 22.8 （C-6'）， 22.4 （C-2'）。查閱文獻(xiàn)[15]，比對1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)后基本一致，鑒定其為pseudaboydin B。

（Z）-5-（羥甲基）-2-（6'-甲基庚-2'-烯-2'-基）苯酚 （4）：無色油狀。根據(jù)質(zhì)譜顯示離子峰m/z 235.17 [M+H]+，其分子式為C15H22O2，不飽和度為5。1H NMR （500 MHz， CDCl3） δH： 7.02 （1H， d， J=7.6 Hz， H-5）， 6.94 （1H， d， J=1.6 Hz， H-2）， 6.91 （1H， dd， J=7.6， 1.6 Hz， H-4）， 5.71 （1H， tq， J=7.4， 1.6 Hz， H-3'）， 5.24 （1H， s， 1-OH）， 4.65 （2H， s， H-7）， 1.97 （3H， d， J=1.2 Hz， H-9'）， 1.82 （2H， q， J=7.7 Hz， H-4'）， 1.46 （1H， m， H-6'）， 1.19 （2H， q， J=7.7 Hz， H-5'）， 0.78 （3H， s， H-7'）， 0.77 （3H， s， H-8'）; 13C NMR （125 MHz， CDCl3） δC： 151.9 （C-1）， 141.6 （C-3）， 132.2 （C-6）， 130.8 （C-3'）， 128.8 （C-5）， 127.2 （C-2'）， 119.0 （C-4）， 113.4 （C-2）， 65.3 （C-7）， 38.8 （C-5'）， 27.6 （C-6'）， 27.2 （C-4'）， 25.3 （C-9'）， 22.5 （C-7'， C-8'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]對比后基本一致，鑒定其為（Z）-5-（羥甲基）-2-（6'-甲基庚-2'-烯-2'-基）苯酚。

Aspergillusene A（5）：無色油狀。根據(jù)質(zhì)譜顯示離子峰m/z 235.17 [M+H]+，其分子式為C15H22O2，不飽和度為5。1H NMR （500 MHz， CDCl3） δH： 7.07 （1H， d， J=7.7 Hz， H-5）， 6.93 （1H， d， J=1.6 Hz， H-2）， 6.88 （1H， dd， J=7.7， 1.6 Hz， H-4）， 5.66 （1H， s， 1-OH）， 5.56 （1H， tq， J=7.2， 1.5 Hz， H-3'）， 4.63 （2H， s， H-7）， 2.22 （2H， q， J=7.7 Hz， H-4'）， 1.98 （3H， d， J=1.2 Hz， H-9'）， 1.61 （1H， m， H-6'）， 1.33 （2H， q， J=7.7 Hz， H-5'）， 0.94 （3H， s， H-7'）， 0.92 （3H， s， H-8'）; 13C NMR （125 MHz， CDCl3） δC： 152.2 （C-1）， 141.1 （C-3）， 132.2 （C-2'）， 131.7 （C-3'）， 130.6 （C-6）， 128.6 （C-5）， 118.8 （C-4）， 113.9 （C-2）， 65.2 （C-7）， 38.7 （C-5'）， 27.9 （C-6'）， 26.5 （C-4'）， 22.7 （C-7'， C-8'）， 18.0 （C-9'）。1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]對比后基本一致，鑒定其為aspergillusene A。

2，4-二羥基-6-甲基苯甲酸甲酯（6）：白色粉末。根據(jù)質(zhì)譜顯示離子峰m/z 183.07 [M+H]+，其分子式為C9H10O4，不飽和度為5。1H NMR （500 MHz， acetone-d6） δH： 11.61 （1H， s， 2-OH）， 6.29 （1H， d， J=

2.5 Hz， H-5）， 6.23 （1H， d， J=2.5 Hz， H-3）， 3.91 （3H， s， O-CH3）， 2.45 （3H， s， 6-CH3）; 13C NMR （125 MHz， acetone-d6） δC： 173.0 （C-7）， 166.3 （C-2）， 163.4 （C-4）， 144.3 （C-6）， 112.3 （C-5）， 105.3 （C-1）， 101.6 （C-3）， 52.2 （O-CH3）， 24.3 （6-CH3）。綜合其1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]對比后基本一致，鑒定其為2，4-二羥基-6-甲基苯甲酸甲酯。

1-亞油酸單甘油酯（7）：黃色油狀。[α]25 D -6.0 （c 0.1，MeOH），根據(jù)質(zhì)譜顯示離子峰m/z 355.28 [M+H]+，其分子式為C21H38O4，不飽和度為3。1H NMR （500 MHz， CDCl3） δH： 5.34 （4H， m， H-9'， H-10'， H-12'， H-13'）， 4.15 （2H， m， H-1）， 3.92 （1H， m， H-2）， 3.68 （1H， dd， J=11.5， 5.9 Hz， H-3a）， 3.58 （1H， dd， J=11.5， 3.8 Hz， H-3b）， 2.76 （2H， t， J=7.0 Hz， H-11'）， 2.34 （2H， t， J=7.6 Hz， H-2'）， 2.04 （4H， m， H-8'， H-14'）， 1.61 （2H， m， H-3'）， 1.31 （14H， m， H-4'， H-5'， H-6'， H-7'， H-15'， H-16'， H-17'）， 0.88 （3H， t， J=6.9 Hz， H-18'）; 13C NMR （125 MHz， CDCl3） δC： 174.5 （C-1'）， 130.4 （C-9'）， 130.1 （C-13'）， 128.2 （C-10'）， 128.0 （C-12'）， 70.4 （C-2）， 65.2 （C-1）， 63.4 （C-3）， 34.3 （C-2'）， 31.9 （C-7'）， 31.6 （C-15'）， 29.7 （C-6'）， 29.5 （C-5'）， 29.3 （C-4'）， 29.2 （C-3'）， 27.3 （C-14'）， 25.7 （C-16'）， 25.0 （C-11'）， 22.7 （C-17'）， 14.2 （C-18'）。1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]對比后基本一致，鑒定其為1-亞油酸單甘油酯。

2.3 抗菌活性結(jié)果

用肉湯微量稀釋法對化合物1～7進(jìn)行了體外抗菌活性測試。結(jié)果顯示化合物4和5對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌8325-4、青枯雷爾菌、甘藍(lán)黑腐病菌及辣椒青枯病菌均具有抗菌活性，MIC值均為64 μg/mL；4和5對枯草芽孢桿菌的MIC值均為32 μg/mL；而4和5對恥垢分枝桿菌的MIC值分別為32 μg/mL和64 μg/mL。此外，化合物7表現(xiàn)出對青枯雷爾菌的抑菌活性，其MIC值為64 μg/mL。陽性對照活性如表1所示，其余化合物對測試病原細(xì)菌均未表現(xiàn)出明顯的抑制活性。

3 討論與結(jié)論

本文對深海沉積物來源的真菌Aspergillus sp. LW152進(jìn)行次級代謝產(chǎn)物研究，分離獲得7個化合物，其中1～5為倍半萜類化合物。據(jù)報(bào)道化合物1對甲型流感病毒H1N1具有較好的抗病毒活性[20]；化合物2和3無顯著的抗菌活性[15，20]；化合物4對于大腸埃希菌Escherichia coli，四聯(lián)球菌Micrococcus tetragenus表現(xiàn)出抗菌活性[21]；化合物5通過抑制人中性粒細(xì)胞中超氧陰離子和彈性蛋白酶的釋放而表現(xiàn)出抗炎活性，且對人宮頸癌細(xì)胞HeLa，人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29和HCT-116在內(nèi)的多種細(xì)胞系具有細(xì)胞毒活性[22–23]；化合物6為歐芹酸衍生物，其對新生隱球菌Cryptococcus neoformans具有一定的抗菌活性，MIC值為200 μg/mL[24]；而化合物7為磷脂酶A2的抑制劑，具有潛在的抗炎活性[25]。本文首次報(bào)道了化合物4和5對于青枯雷爾菌、甘藍(lán)黑腐病菌、辣椒青枯病菌及恥垢分枝桿菌的抗菌活性，并首次報(bào)道了化合物5對MRSA及枯草芽孢桿菌的抗菌活性。此外還首次發(fā)現(xiàn)了化合物7對青枯雷爾菌具有抗菌活性。本研究不僅豐富了海洋曲霉屬天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)多樣性，同時為新型抗生素的研發(fā)奠定了一定基礎(chǔ)。

參 考 文 獻(xiàn)

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