◎ 林 緒，陳瓊?cè)A，李冰虹

（廣電計(jì)量檢測集團(tuán)股份有限公司，廣東 廣州 510065）

預(yù)制菜又稱“方便菜”，一般是以各類農(nóng)產(chǎn)品為原料，以調(diào)味料為輔料，經(jīng)預(yù)選、調(diào)制等工藝加工而成的半成品或成品[1]。隨著生活節(jié)奏越來越快，簡單烹調(diào)就能食用的預(yù)制菜，對于時間緊湊、不擅長烹調(diào)的年輕人來說，越來越盛行[2]。預(yù)制菜中，蔬菜水果等原料會帶入農(nóng)藥殘留，肉蛋奶及水產(chǎn)品會帶入獸藥殘留[3]，威脅人體的健康安全[4]。然而，目前預(yù)制菜缺乏藥物殘留的檢測標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)安全標(biāo)準(zhǔn)[5]，在監(jiān)管方面存在一定的困難。因此，本研究旨在開發(fā)一種經(jīng)濟(jì)、快速準(zhǔn)確的預(yù)制菜藥物殘留檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

乙酸銨、甲酸，質(zhì)譜純（美國Thermofisher 公司）；乙腈、甲醇，色譜純；N-丙基乙二胺（PSA）、十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）、中性氧化鋁（ALN）、無水硫酸鎂，分析純（上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；氯化鈉，分析純（上海潤捷科技發(fā)展有限公司）；實(shí)驗(yàn)用水為超純水；標(biāo)準(zhǔn)品分別購于阿爾塔科技有限公司、德國 DrEhrenstorfer GmbH 公司、上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

AB 4500 超高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀（配有ESI、Analyst 采集系統(tǒng)及MultiQuant 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)）（美國SCIEX 公司）；ME203E 電子分析天平、XS205DU 電子分析天平（瑞士梅特勒公司）；TGL-21高速冷凍離心機(jī)（四川蜀科儀器有限公司）；T18 均質(zhì)器（德國IKA 公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

①分別準(zhǔn)確稱取60 種藥物殘留標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量，用乙腈溶解并稀釋成濃度為10 μg·mL-1的儲備液。②分別吸取標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用空白基質(zhì)提取液稀釋至濃度為4、10、20、50、100 ng·mL-1。

1.2.2 前處理方法

①樣品取可食部分，充分混勻粉碎后備用。②稱取樣品2.00 g（精確至0.01 g）于50 mL 離心管中，加入10 mL 0.8%甲酸水乙腈（體積比，下同）溶液，12 000 r·min-1均質(zhì)提取1 min，加入1 g NaCl后劇烈振蕩30 s，8 000 r·min-1離心5 min，放置冰箱-20 ℃冷凍1 h，立即取乙腈層1.5 mL 于裝有50 mg ALN、30 mg C18、50 mg PSA 的凈化管中，渦旋1 min，靜置5 min，取上清液過0.22 μm，待測。

1.2.3 液相色譜條件

①XBridge BEH C18 色譜柱（2.5 μm，2.1×100 mm）；進(jìn)樣量5 μL；流速：0.35 mL·min-1；柱溫40 ℃。②梯度洗脫：洗脫液A 為5 mmol·L-1乙酸銨含0.1%甲酸水；洗脫液B 為含乙腈。③洗脫程序：0～1.8 min，A 85%；1.8～5 min，A 85%～20%；5～8 min，A 20%～20%；8～8.1 min，A 20%～85%；8.1～10 min，A 85%～85%。

1.2.4 質(zhì)譜條件

氣簾氣流速：30 L·min-1；霧化氣流速（GS1）：55 L·min-1；輔助加熱氣流速（GS2）：55 L·min-1；碰撞氣（CAD）：中等強(qiáng)度（medium）；輔助加熱氣溫度：550 ℃；噴霧電壓：5 000 V（ESI+）/－4 500 V（ESI-）；掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測模式。

2 結(jié)果與分析

2.1 流動相優(yōu)化

為了獲得良好的峰型和離子化效率，對比0.1%甲酸水-甲醇、0.1%甲酸水-乙腈、5 mmol·L-1乙酸銨含0.1%甲酸水-甲醇、5 mmol·L-1乙酸銨含0.1%甲酸水-乙腈、水-甲醇、水-乙腈。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5 mmol·L-1乙酸銨含0.1%甲酸水-乙腈作為流動相時，絕大部分藥物殘留響應(yīng)較好，且峰型較好。因此，綜合考慮，選此作為測試的流動相。在優(yōu)化的色譜及質(zhì)譜條件下，60種藥物殘留的總離子流色譜圖見圖1。

圖1 60 種藥物殘留的總離子流色譜圖

2.2 前處理?xiàng)l件優(yōu)化

2.2.1 提取溶劑的選擇及其條件的優(yōu)化

相關(guān)研究表明，乙腈不僅是農(nóng)藥殘留檢測方法中的最優(yōu)提取溶劑，也是獸藥殘留檢測中的優(yōu)選提取溶劑[6-7]。因此，本研究不再進(jìn)行有機(jī)溶劑的對比實(shí)驗(yàn)，而是通過對比不用pH 的乙腈對藥物殘留的提取效果。本研究比較0.1%甲酸乙腈、0.3%甲酸乙腈、0.5%甲酸乙腈、0.8%甲酸乙腈、1%甲酸乙腈、0.5%氨水、1%氨水、3%氨水、5%氨水、8%氨水的提取效果，稱取預(yù)制菜試樣2 g 于50 mL 離心管中，以30 μg·kg-1進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)（提取溶液未做凈化）。60 種藥物殘留的提取效率見圖2。

圖2 不同提取溶劑平均回收率分布圖

由上述數(shù)據(jù)可知，用0.8%甲酸乙腈作為提取溶劑時，有多種藥物殘留的回收率在60%～100%，效果最好。因此，采用0.8%甲酸乙腈作為60 種藥物殘留的提取溶劑。

2.2.2 提取方式的選擇

目前，廣泛應(yīng)用于食品樣品中藥物殘留分析的提取方法主要有微波輔助萃取[8]、高速勻漿提取[9]、超聲提取[10]等。本研究通過微波輔助萃取的提取方法，發(fā)現(xiàn)微波提取時會使溶劑溫度升高，使得熱不穩(wěn)定的藥物殘留降解。選取腐霉利、多菌靈、恩諾沙星陽性樣品對比超聲提取和高速勻漿提取的前處理方式，通過比較其回收率，結(jié)果顯示，高速勻漿提取相比超聲提取的效率更高，原因可能在于超聲提取未能完全提取已經(jīng)跟基質(zhì)結(jié)合的藥物，而高速勻漿提取時間快、能使細(xì)胞膜破裂至核分離，進(jìn)而目標(biāo)物更容易被提取。因此，本文選擇高速勻漿提取的方式。

2.2.3 凈化方法的選擇及優(yōu)化

一般預(yù)制菜都含有大量的蛋白質(zhì)及油脂，而乙腈可以沉淀蛋白質(zhì)，同時，冷凍可以去除一定量的脂肪和蛋白質(zhì)。因此，本研究將乙腈提取液在-20 ℃以下冷凍1 h，發(fā)現(xiàn)脂肪和蛋白質(zhì)會在提取液表面凝結(jié)成塊狀。通過對乙腈溶液氮吹后發(fā)現(xiàn)，對于油脂含量高的樣品乙腈仍會溶解部分油脂。這說明，僅使用低溫冷凍凈化的效果不佳，仍需進(jìn)一步凈化。

為達(dá)到更佳的凈化效果，對比凈化填料PSA、C18、ALN、GCB單個及組合用量的凈化效果，配比如下：

A.30 mg GCB+100 mg MgSO4

B.50 mg ALN+30 mg C18+30 mg PSA+100 mg MgSO4

C.100 mg ALN+50 mg C18+50 mg PSA+100 mg MgSO4

D.100 mg ALN+100 mg C18+100 mg PSA+100 mg MgSO4

E.100 mg ALN+30 mg C18+30 mg PSA+100 mg MgSO4

5 種組合填料對預(yù)制菜中60 種藥物殘留回收率的影響分布見表1。

表1 不同凈化填料的凈化效果表

通過比對實(shí)驗(yàn)，說明在0.8%甲酸水乙腈提取溶劑下，以B 組分散萃取凈化填料，對于預(yù)制菜中60 種藥物殘留的凈化效果和回收率最佳。同時，對比發(fā)現(xiàn)B 組跟E 組填料凈化比較接近，而ALN 可以除去油脂，因此，對于油脂含量較大的樣品，可適當(dāng)增加ALN 的用量。

2.3 檢出限和定量限

按本前處理在空白基質(zhì)添加一定濃度的標(biāo)液，以信噪比為3 時的濃度作為檢出限，信噪比為10時的濃度作為定量限，60 種藥物殘留的檢出限均≤20 μg·kg-1，定量限均≤50 μg·kg-1，檢出限和定量限均較低。

2.4 方法準(zhǔn)確度和精密度

以陰性樣品小炒肉為基質(zhì)，以50、100、150μg·kg-13 個添加水平進(jìn)行添加回收率和精密度的實(shí)驗(yàn)。按試樣制備的方法加入適量的對照品，按照優(yōu)化好前處理檢測方法進(jìn)行平行測定6 次，計(jì)算回收率。結(jié)果表明，樣品檢測平行性良好，RSD 小于10%，回收率在60%～120%，符合相關(guān)方法驗(yàn)證要求。

2.5 實(shí)際樣品測定

在市場采購了咖喱雞、青豆炒肉、梅菜扣肉、牛肉牛筋方便菜、東坡扣肉、招牌鹵肉各一批，按照該方法開展檢測工作。結(jié)果顯示，青豆炒肉檢出噻蟲嗪及滅線磷，含量分別為54 μg·kg-1和21 μg·kg-1，為不合格產(chǎn)品。因此，預(yù)制菜相關(guān)安全及檢測標(biāo)準(zhǔn)亟須完善。

3 結(jié)語

本研究經(jīng)過對預(yù)制菜樣品提取方式及凈化方式進(jìn)行優(yōu)化，有效除去了樣品中的雜質(zhì)，并采用空白樣品基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜儀同時測定預(yù)制菜中60 種藥物殘留。本研究覆蓋項(xiàng)目種類廣，且靈敏度高、選擇性好、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于市場上預(yù)制菜的抽查，進(jìn)而為預(yù)制菜的市場監(jiān)管提供技術(shù)支持。