金蓀青

廣東省輕工業(yè)技師學(xué)院，廣東 廣州 510000

乳沒活絡(luò)散具有促進(jìn)血液流通、消腫止痛的功效，民間多用此藥對(duì)骨折疾病或扭傷疾病等進(jìn)行干預(yù)，能取得理想化成效[1]。由于乳沒活絡(luò)散本質(zhì)上是由藥材原粉制得的一種藥物制劑，使用過程中能夠與機(jī)體創(chuàng)面直接接觸，因此提升其微生物限度的檢查質(zhì)量是關(guān)鍵，該藥物應(yīng)用的安全性一定程度上受微生物污染程度影響[2]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與樣品的選取

超凈工作臺(tái)（蘇州蘇潔凈化設(shè)備企業(yè)），高壓蒸汽滅菌器（上海博迅實(shí)業(yè)企業(yè)），乳沒活絡(luò)散（思南天使民族醫(yī)院）。

1.1.2 培養(yǎng)基和稀釋劑

稀釋劑是pH 為7.0 的氯化鈉-蛋白胨緩沖液；培養(yǎng)基中含有沙氏葡萄糖瓊脂、溴化十六烷基三甲胺瓊脂、甘露醇氯化鈉瓊脂等，來源于北京三藥科技企業(yè)[3]。

1.1.3 菌株

金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉、銅綠假單胞等，來源于北京三藥科技企業(yè)，本質(zhì)上是第4代菌種。

1.2 方法

基于《中國(guó)藥典》對(duì)微生物限度檢查方式的應(yīng)用要求進(jìn)行檢查，參照非無菌產(chǎn)品的微生物計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)微生物計(jì)數(shù)情況，系統(tǒng)性地檢查控制菌。

第一，準(zhǔn)備菌液。將無菌氯化鈉緩沖液置于西林瓶中，靜置0.5 min，然后將其渦旋振蕩10 s。將9 mL 無菌氯化鈉緩沖液與已經(jīng)溶解的1 mL 菌液混合[4]，再?gòu)南♂尵簝?nèi)取出1 mL 菌液，與9 mL 無菌氯化鈉緩沖液混合，最終完成菌液的配制。

第二，準(zhǔn)備供試液。將10 g 樣品與100 mL 無菌氯化鈉緩沖液混合，按照1∶10 的比例配制相應(yīng)溶液。分析滅菌之前的供試品滅菌情況，將10 g 樣品與100 mL 無菌氯化鈉緩沖液混合搖勻，即得到按照1∶10 比例處理的供試液。再取出1∶10 的供試液10 mL，將其與100 mL 無菌氯化鈉緩沖液混合，制得供試液（1∶100）。取10 g 經(jīng)過輻照滅菌加工的供試品放入100 mL 無菌氯化鈉緩沖液中，制得供試液（1∶10），備用[5]。

第三，實(shí)施計(jì)數(shù)試驗(yàn)。測(cè)定胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基中銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌的氧菌總數(shù)，然后測(cè)定沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中酵母菌、霉菌的數(shù)量，包括黑曲霉、白色念珠菌等。對(duì)于任何實(shí)驗(yàn)菌的培養(yǎng)，都需要采用2 個(gè)平皿進(jìn)行平行制備，并評(píng)估其平均指數(shù)。將無菌氯化鈉緩沖液作為稀釋液，研究組將100 μL 試驗(yàn)菌液添加到9.9 mL 供試液（1∶10、1∶100）中，每毫升供試液的含菌量應(yīng)控制在一定范圍，即100 CFU 之內(nèi)。得到1 mL 試驗(yàn)菌液，利用細(xì)菌培養(yǎng)皿進(jìn)行培養(yǎng)，輕輕晃蕩平皿使其充分混勻。供試品基礎(chǔ)組按照1∶10、1∶100 的比例制備供試液，借助稀釋液對(duì)菌液進(jìn)行取替，操作過程與研究組相同。菌液基礎(chǔ)組要準(zhǔn)備9.9 mL 稀釋液，與研究組均實(shí)施微生物回收檢驗(yàn)的相同操作[4]。

第四,控制菌實(shí)用性檢驗(yàn)。對(duì)金黃色葡萄糖菌進(jìn)行檢查，即陽(yáng)性基礎(chǔ)組準(zhǔn)備10 mL 供試液（1∶10），將100 μL 菌液在胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，在32 ℃條件下培養(yǎng)20 h。并將無菌氯化鈉緩沖液倒入胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的容器中，前者劑量是10.1 mL、后者劑量是100 mL，在32 ℃條件下培養(yǎng)20 h，將其納入陰性基礎(chǔ)組。

2 結(jié)果

2.1 乳沒活絡(luò)散相關(guān)微生物計(jì)數(shù)

輻照結(jié)束后，開始對(duì)供試品（1∶10）進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)分析。由于未經(jīng)輻照的供試品沒有達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求，所以要開展1∶100 稀釋劑研究，結(jié)果表明，輻照之前基礎(chǔ)組菌落對(duì)應(yīng)的回收率可以達(dá)到70%，供試品從1∶100 的比例入手開展后階段微生物計(jì)數(shù)，具體情況如表1、表2 所示。

表1 輻照不同批次菌落回收情況

表2 尚未輻照不同批次供試品回收情況單位：%

2.2 適用性檢驗(yàn)

基礎(chǔ)檢測(cè)可以用于金黃色葡萄球菌適用性檢驗(yàn)、銅綠假單胞菌適用性檢驗(yàn)，如表3 所示。

表3 檢驗(yàn)情況

3 討論

輻照之前，供試品濃度較高，不適合用于計(jì)數(shù)，所以要將供試品按照1∶100 的比例進(jìn)行稀釋。限度實(shí)驗(yàn)表明，乳沒活絡(luò)散對(duì)多個(gè)菌種無抑制作用，表明平皿法適用于乳沒活絡(luò)散的檢查。運(yùn)用基礎(chǔ)方式對(duì)基礎(chǔ)組的菌種進(jìn)行檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)輻照之前與輻照之后的結(jié)果之間存在顯著差異，即輻照之前樣品的菌群與檢驗(yàn)過程都沒有達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求，而輻照結(jié)束后限度檢查均符合標(biāo)準(zhǔn)要求，即輻照工藝具有科學(xué)性、規(guī)范性。

基于此，乳沒活絡(luò)散的工藝加工要通過輻照的形式進(jìn)行，輻照介入的微生物限度檢查過程能夠使用平皿法針對(duì)性地進(jìn)行霉菌計(jì)數(shù)、酵母菌計(jì)數(shù)、氧菌計(jì)數(shù)，基于基礎(chǔ)檢驗(yàn)?zāi)Ｊ饺〉美硐氲男Ч?/p>