摘要：目的" 評(píng)價(jià)大黃解毒散的皮膚刺激性、皮膚過(guò)敏性及急性毒性。方法" 皮膚刺激性試驗(yàn)：家兔4只，采用自身對(duì)照，左側(cè)為對(duì)照部位（溫水），右側(cè)為試驗(yàn)部位（大黃解毒散），連續(xù)14 d完整皮膚給藥并評(píng)分。皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)：豚鼠30只，隨機(jī)數(shù)字表法均分為對(duì)照組（溫水）、陽(yáng)性組（2，4-二硝基氯苯）和給藥組（大黃解毒散），分別于第1、7、14天致敏，末次致敏后14 d激發(fā)，并于1、24、48、72 h評(píng)分。急性毒性試驗(yàn)：大鼠40只，隨機(jī)數(shù)字表法均分為對(duì)照組（溫水）和給藥組（大黃解毒散），分別于給藥后1、24、48、72 h及14 d分別觀察其毒性反應(yīng)并評(píng)分。結(jié)果" 家兔皮膚偶見(jiàn)紅斑，無(wú)水腫；陽(yáng)性組豚鼠過(guò)敏現(xiàn)象明顯，評(píng)分較高，致敏率為100%，其余組無(wú)過(guò)敏現(xiàn)象，評(píng)分及致敏率為0；各組大鼠在給藥后均無(wú)生理異常表現(xiàn)及死亡情況，給藥組大鼠皮膚偶見(jiàn)紅斑，無(wú)水腫，大體解剖學(xué)檢查顯示各臟器均未發(fā)現(xiàn)異常改變。結(jié)論" 大黃解毒散外用時(shí)對(duì)皮膚無(wú)刺激、無(wú)過(guò)敏、毒性較小。

關(guān)鍵詞：大黃解毒散；皮膚刺激性；皮膚過(guò)敏性；急性毒性

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5" " " " " " " " " " " " " " " " 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A" " " " " " " " " " " " " " " " " DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2023.14.019

文章編號(hào)：1006-1959（2023）14-0099-05

Experimental Study on Skin Irritation， Irritability and Acute Toxicity

of Dahuang Jiedu Powder

LIANG Xiao1，2，LIU Jiao1，2，HU Tao1，2，RUAN Jing-hua3，QIAN Hai-bing1，2

（1.School of Basic Medicine，Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550025，Guizhou，China;

2.Guizhou Genuine Herbs Center of Consistency of Utility，Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，

Guiyang 550025，Guizhou，China;

3.First Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550001，Guizhou，China）

Abstract：Objective" To evaluate the skin irritation， skin irritability and acute toxicity of Dahuang Jiedu powder.Methods" Skin irritation test： 4 rabbits were used as their own control. The left side was the control part （warm water）， and the right side was the test part （Dahuang Jiedu powder）， the complete skin was administered and scored for 14 consecutive days. Skin irritability test： Thirty guinea pigs were randomly divided into control group （warm water）， positive group （2， 4-dinitrochlorobenzene） and administration group （Dahuang Jiedu powder）. The rats were sensitized at 1， 7 and 14 days， stimulated at 14 days after the last sensitization， and scored at 1， 24， 48 and 72 hours. Acute toxicity test： 40 rats were randomly divided into control group （warm water） and administration group （Dahuang Jiedu powder）. The toxicity reaction was observed and scored at 1， 24， 48， 72 h and 14 d after administration.Results" Skin erythema was occasionally observed in rabbits without edema. In the positive group， the allergic phenomenon was obvious and the score was high， and the sensitization rate was 100%; in the other groups， there was no allergic phenomenon， and the score and sensitization rate were 0. No physiological abnormalities or death were found in rats in each group after administration. Skin erythema was occasionally observed and no edema was observed in rats in the administration group， and gross anatomy examination showed no abnormal changes in each organ.Conclusion" Dahuang Jiedu powder has no irritation， no allergy and little toxicity to the skin when used externally.

Key words：Dahuang Jiedu powder;Skin irritation;Skin irritability;Acute toxicity

大黃解毒散是由大黃、硫黃組方而成的外用制劑，具有清熱解毒、化瘀散結(jié)的功效，用于肺熱上炎，熱毒瘀結(jié)所致紅斑、丘疹、粉刺、膿皰、囊腫、疼痛等癥。大黃外用入藥在我國(guó)歷史悠久，其味苦，性寒，歸脾、胃、大腸、肝及心包經(jīng)，具有瀉下攻積，清熱瀉火，涼血解毒，逐瘀通經(jīng)，利濕退黃的功效[1]。硫黃味酸，性溫，有毒，歸腎及大腸經(jīng)，外用可解毒、殺蟲(chóng)、療瘡，用于疥癬、禿瘡及陰疽惡瘡[1]。本研究參照《中藥、天然藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[2]和《藥物刺激性、過(guò)敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[3]進(jìn)行大黃解毒散皮膚刺激性、過(guò)敏性及急性毒性試驗(yàn)，旨在為該藥臨床應(yīng)用中的安全性問(wèn)題提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物" 家兔4只，體重1.5～2 kg，雌雄各半，由貴州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（黔）2018-0001。豚鼠30只，體重300～400 g，雌雄各半，由貴州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（黔）2018-0001。SPF級(jí)SD大鼠40只，體重180～220 g，雌雄各半，由長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0014。所有動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后開(kāi)始試驗(yàn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作符合貴州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)要求。

1.2主要藥物及試劑" 大黃解毒散，棕褐色至棕褐色粉末，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑中心提供，批號(hào)：20190202；20210910；2，4-二硝基氯苯，西亞試劑，批號(hào)：20210420。

1.3大黃解毒散皮膚刺激性試驗(yàn)" 家兔4只，試驗(yàn)前24 h，在每只家兔脊背兩側(cè)相同部位備皮，備皮面積為3 cm×3 cm，左側(cè)為對(duì)照部位，右側(cè)為試驗(yàn)部位。試驗(yàn)當(dāng)日取大黃解毒散粉末8 g，開(kāi)水調(diào)勻備用。試驗(yàn)時(shí)取制備好且冷卻至膚溫的藥物（大黃解毒散）敷于試驗(yàn)部位，敷藥面積為2.5 cm×2.5 cm，用塑料薄膜外包，無(wú)刺激性膠布、紗布固定，對(duì)照部位給予溫水，給藥次數(shù)為1 次/d，共14 d。給藥1 h后觀察敷藥局部皮膚是否出現(xiàn)紅斑、水腫等刺激反應(yīng)。

1.4大黃解毒散皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)" 豚鼠30只，隨機(jī)數(shù)字表法均分為對(duì)照組（溫水）、陽(yáng)性組（2，4-二硝基氯苯，致敏濃度1.0%、激發(fā)濃度0.1%）、給藥組（大黃解毒散），每組10只。試驗(yàn)前24 h，在每只豚鼠脊背兩側(cè)相同部位備皮，備皮面積為4 cm×4 cm，左側(cè)為致敏部位，右側(cè)為激發(fā)部位。試驗(yàn)當(dāng)日取大黃解毒散粉末20 g，開(kāi)水調(diào)勻備用。致敏時(shí)分別在每只豚鼠左側(cè)致敏部位涂抹相應(yīng)藥物，2層紗布覆蓋，無(wú)刺激性膠布、繃帶固定6 h后溫水清洗，分別于試驗(yàn)開(kāi)始第1、7、14天致敏，共致敏3次。末次致敏后14 d，分別于每只豚鼠右側(cè)激發(fā)部位按上述操作進(jìn)行激發(fā)接觸，并于激發(fā)后1、24、48、72 h分別觀察豚鼠皮膚是否出現(xiàn)紅斑、水腫等過(guò)敏反應(yīng)。

1.5大黃解毒散急性毒性試驗(yàn)" 大鼠40只，隨機(jī)數(shù)字表法均分為給藥組（大黃解毒散）和對(duì)照組（溫水），每組20只，雌雄各半。試驗(yàn)前24 h，在每只大鼠脊背兩側(cè)相同部備皮，備皮面積為4 cm×7 cm（≥10%體表面積）。試驗(yàn)當(dāng)日取大黃散100 g，開(kāi)水配制成最大給藥量20 g/kg備用。上午9時(shí)給藥，將制備好且已冷卻至膚溫的藥物分別敷于每只大鼠的備皮部位，消毒紗布和網(wǎng)孔尼龍繃帶固定4 h，對(duì)照組給予溫水涂抹。給藥后1、24、48、72 h及14 d分別觀察每只動(dòng)物的毒性反應(yīng)和死亡情況，并記錄各組動(dòng)物的一般生理狀況、行為活動(dòng)、眼和粘膜的變化、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、體重、進(jìn)食、大小便等有否中毒表現(xiàn)和死亡情況，同時(shí)觀察備皮部位給藥局部皮膚是否出現(xiàn)紅斑、水腫等刺激反應(yīng)，試驗(yàn)結(jié)束后將動(dòng)物處死進(jìn)行大體解剖學(xué)檢查。

1.6評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)" 皮膚刺激性、皮膚過(guò)敏性及急性毒性試驗(yàn)均按表1、表2進(jìn)行皮膚刺激（過(guò)敏）反應(yīng)評(píng)分及刺激（過(guò)敏）強(qiáng)度評(píng)價(jià)，皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)分值=（紅斑總分+水腫總分）/合計(jì)動(dòng)物數(shù)。急性毒性試驗(yàn)計(jì)算致敏率，0～10%為無(wú)致敏性，11%～30%為輕度致敏性，31%～60%為中度致敏性，61%～80%為高度致敏性，81%～100%為極度致敏性。致敏率（%）=皮膚過(guò)敏反應(yīng)陽(yáng)性（不論程度輕重）動(dòng)物數(shù)×100%/受試動(dòng)物總數(shù)。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析" 使用SPSS 26.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，體重結(jié)果采用（x±s）表示，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1大黃解毒散皮膚刺激性試驗(yàn)" 家兔完整皮膚給藥連續(xù)14 d局部給藥，給藥后家兔精神狀態(tài)、活動(dòng)、呼吸、攝食量、體質(zhì)量、外觀、大小便性狀及顏色、被毛膚色等接未見(jiàn)明顯異常，鼻、咽、口腔無(wú)異常分泌物。家兔給藥部位個(gè)別時(shí)段出現(xiàn)有紅斑現(xiàn)象，皮膚未出現(xiàn)水腫，刺激強(qiáng)度評(píng)分均值為0.107，見(jiàn)表3。

2.2大黃解毒散皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)" 給藥組及對(duì)照組豚鼠激發(fā)接觸72 h內(nèi)皮膚無(wú)紅斑及水腫現(xiàn)象出現(xiàn)，過(guò)敏反應(yīng)及強(qiáng)度評(píng)分為0，致敏率為0；陽(yáng)性組豚鼠激發(fā)接觸72 h內(nèi)，皮膚紅斑、水腫現(xiàn)象明顯，各時(shí)段過(guò)敏反應(yīng)及強(qiáng)度評(píng)分均較高，致敏率均為100%，見(jiàn)表4。

2.3大黃解毒散急性毒性試驗(yàn)

2.3.1一般情況" 各組大鼠在給藥后精神狀態(tài)、活動(dòng)、呼吸、攝食量、體質(zhì)量、外觀、大小便性狀及顏色、被毛膚色等未見(jiàn)明顯異常，鼻、咽、口腔無(wú)異常分泌物。試驗(yàn)前后相同性別的給藥組大鼠與對(duì)照組大鼠體重比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），各組大鼠試驗(yàn)前后體重變化及死亡情況見(jiàn)表5。

2.3.2皮膚刺激性評(píng)分及刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)" 分值給藥組大鼠給藥部位在給藥后24～72 h出現(xiàn)有紅斑現(xiàn)象，皮膚未出現(xiàn)水腫，見(jiàn)表6。

2.3.3急性毒性試驗(yàn)結(jié)果" 試驗(yàn)期內(nèi)無(wú)動(dòng)物死亡，各給藥組動(dòng)物均無(wú)生理異常表現(xiàn)，毛皮光滑，進(jìn)食、體重增長(zhǎng)及大小便正常，眼、鼻無(wú)異常分泌物，粘膜無(wú)充血、水腫，呼吸正常。處死動(dòng)物并對(duì)心、肝、脾、肺、腎、腦、胃、腸等主要臟器作解剖學(xué)檢查，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)所檢器官有腫脹、囊腫、萎縮、出血、水腫、顏色異常、粘連、硬化等異常改變，毒性反應(yīng)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表7。

3討論

中藥經(jīng)皮外用制劑是中藥外用制劑的一種，是指在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，直接給藥于皮膚的制劑。中藥外用具有用藥方便的優(yōu)點(diǎn)，但此法在應(yīng)用時(shí)也會(huì)產(chǎn)生不良反應(yīng)，臨床表現(xiàn)復(fù)雜且因人而異，除局部反應(yīng)外也累及人體系統(tǒng)[4]。

2020版中國(guó)藥典中記載的中藥外用劑型以散劑為主，其中大黃為中藥外用制劑中的高頻中藥，硫黃為中藥外用制劑中的毒性飲片[5]。大黃的主要化學(xué)成分包括蒽醌類(lèi)、蒽酮類(lèi)、黃酮類(lèi)、鞣質(zhì)類(lèi)等[1，6]?，F(xiàn)代藥理研究表明[7-10]，大黃在心血管系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)發(fā)揮重要作用，且具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎、抑菌等藥理作用。硫黃為自然元素類(lèi)礦物硫族自然硫，采挖后，加熱熔化，除去雜質(zhì)，或用含硫礦物經(jīng)加工制得[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明[11]，硫黃在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮重要作用，切具有緩瀉、溶解角質(zhì)、脫毛、抗炎、抗菌、殺蟲(chóng)、鎮(zhèn)咳、祛痰、抗病毒等藥理作用?！吨兴幧┡R床外用技術(shù)規(guī)范（草案）》提出，對(duì)于含有毒中藥的外用散劑不宜大面積使用[12]。用法用量是影響制劑安全有效作用發(fā)揮的重要內(nèi)容，目前大黃解毒散用量并不明確，嚴(yán)重影響了臨床應(yīng)用[13]。

大黃解毒散在我院應(yīng)用效果顯著，但目前未曾對(duì)其進(jìn)行安全性研究。為評(píng)價(jià)大黃解毒散的安全性，為其臨床應(yīng)用提供安全性依據(jù)，指導(dǎo)臨床合理用藥，本研究對(duì)其進(jìn)行皮膚刺激性、皮膚過(guò)敏性及急性毒性試驗(yàn)。目前皮膚毒性研究主要集中在皮膚刺激性和致敏性[14，15]。大黃解毒散皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果顯示，家兔完整皮膚連續(xù)給藥14 d，受試皮膚局部未出現(xiàn)明顯刺激性?；诖私Y(jié)果，可認(rèn)為大黃解毒散外用時(shí)無(wú)刺激性。大黃解毒散皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)結(jié)果顯示，大黃解毒散對(duì)豚鼠無(wú)皮膚過(guò)敏現(xiàn)象，致敏率為0，可認(rèn)為大黃解毒散外用時(shí)無(wú)致敏因素。急性毒性試驗(yàn)是指機(jī)體單次或24 h內(nèi)多次接觸外來(lái)藥物，觀察其所引起的中毒效應(yīng)及死亡狀況的方法，是藥物毒性研究的第一步[16]。大黃解毒散急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠體重增長(zhǎng)與對(duì)照組無(wú)差異，且未見(jiàn)任何毒性反應(yīng)和死亡情況，動(dòng)物解剖肉眼檢查主要臟器及給藥局部未發(fā)現(xiàn)異常改變，對(duì)給藥局部完整皮膚也無(wú)刺激性，可認(rèn)為大黃解毒散外用時(shí)毒性較小。

綜上所述，可認(rèn)為大黃解毒散外用時(shí)對(duì)皮膚刺激性、過(guò)敏性及毒性反應(yīng)較小，臨床外用較為安全。

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收稿日期：2022-08-23；修回日期：2022-10-24

編輯/肖婷婷

基金項(xiàng)目：貴州省普通高等學(xué)校特色重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（編號(hào)：黔教合KY字[2017]006）

作者簡(jiǎn)介：梁瀟（1998.2-），女，四川德陽(yáng)人，碩士研究生，主要從事中藥藥理研究

通訊作者：錢(qián)海兵（1977.10-），男，河南衛(wèi)輝人，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥藥理研究