摘 要：以膨腹海馬（Hippocampus abdominalis）為原料，1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除率為指標(biāo)，優(yōu)化海馬酶解物提取工藝。根據(jù)DPPH自由基清除率，從堿性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、胰酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶中篩選出最優(yōu)堿性蛋白酶進(jìn)行工藝優(yōu)化，在單因素試驗基礎(chǔ)上，通過Box-Behnken中心復(fù)合設(shè)計數(shù)學(xué)模型，采用響應(yīng)曲面對酶解時間、pH值、酶底物比例（enzyme/substrate，E/S）進(jìn)行考察，篩選出最佳的酶解工藝，并進(jìn)行體外抗氧化能力的驗證。結(jié)果表明，膨腹海馬最佳酶解工藝為料液比1∶20、pH 11、E/S 7.581%、酶解溫度50 ℃、酶解時間3 h，在此條件下DPPH自由基清除率能達(dá)64.62%。因此，響應(yīng)曲面優(yōu)化膨腹海馬酶解物的提取工藝能夠在較短時間內(nèi)酶解得到抗氧化活性較高的活性肽。

關(guān)鍵詞：膨腹海馬；單因素試驗；響應(yīng)面試驗；抗氧化活性肽；制備工藝

Optimized Preparation and Antioxidant Activity of Enzymatic Hydrolysate from Hippocampus abdominals

CHEN Peilu1，2， LI Ming1， ZHANG Jiayuan1， QIU Fengyan3， QIU Xianzhu4， LUO Youhua1，2， QI Huanyang1， XU Guanghui1，2，*

（1. Xiamen Key Laboratory of Natural Medicines Research and Development， Xiamen Institute of Pharmaceutical Research，

Xiamen 361000， China; 2. School of Pharmacy， Fujian University of Traditional Chinese Medicine， Fuzhou 350000， China; 3. Xiamen Xiaodeng Aquatic Technology Co. Ltd.， Xiamen 361000， China; 4. Xiamen Enci Health Business Co. Ltd.， Xiamen 361000， China）

Abstract： Objective： To optimize the preparation process of an enzymatic hydrolysate with 1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl （DPPH） scavenging activity from Hippocampus abdominalis. Methods： Alcalase， flavor protease， trypsin， papain， trypsin， and pepsin were screened for DPPH scavenging activity， and alcalase was found to be optimal. The optimization of the hydrolysis process was conducted using a combination of single factor experiments and response surface methodology （RSM） based on Box-Behnken design. Hydrolysis time， pH， and enzyme/substrate （E/S） ratio were considered as independent variables. The in vitro antioxidant capacity of the hydrolysate was verified. Results： The optimal hydrolysis conditions were determined as 1：20， 11， 7.581%， 50 ℃ and 3 h for solid/liquid ratio， pH， E/S ratio， temperature and time， respectively. The DPPH scavenging activity of the as-prepared hydrolysate was 64.62%. Conclusion： The optimized hydrolysis process can give peptides with high antioxidant activity from Hippocampus abdominalis.

Keywords： Hippocampus abdominalis; single factor experiments; response surface methodology; antioxidant peptides; preparation process

DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20230927-088

中圖分類號：TS254.4 " " " " " " " " " " " " " " " " " " " "文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1001-8123（2023）10-0022-08

引文格式：

陳佩璐， 李明， 張嘉媛， 等. 膨腹海馬酶解物制備工藝優(yōu)化與抗氧化活性[J]. 肉類研究， 2023， 37（10）： 22-29. DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20230927-088. " "http：//www.rlyj.net.cn

CHEN Peilu， LI Ming， ZHANG Jiayuan， et al. Optimized preparation and antioxidant activity of enzymatic hydrolysate from Hippocampus abdominals[J]. Meat Research， 2023， 37（10）： 22-29. （in Chinese with English abstract） DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20230927-088. " "http：//www.rlyj.net.cn

海馬屬于脊索動物門硬骨魚綱的小型海洋生物，是我國傳統(tǒng)的名貴中藥材，已有幾千年的藥用歷史，最早被《本草經(jīng)集注》所收載。海馬中具有氨基酸、脂肪酸、多肽、甾體類等多種活性成分[1-2]，具有增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力、保護(hù)腦缺血再灌注損傷、激素樣、抗疲勞、抗抑郁等藥理作用[3-6]。膨腹海馬（Hippocampus abdominalis）是所有海馬中體型最大的一種，體長超過30 cm，體質(zhì)量高達(dá)30 g，主要分布于澳大利亞和新西蘭海域[7-8]。海洋中具有豐富的多肽生物資源，多肽作為具有生物活性的天然產(chǎn)物有廣闊的應(yīng)用前景。近年來，在各種海洋生物及其副產(chǎn)物的生物活性肽這一領(lǐng)域進(jìn)行了大量的研究，發(fā)現(xiàn)海洋生物肽具有廣泛的生物活性如抗腫瘤、降血壓、免疫調(diào)節(jié)等作用[9-11]。Kim等[12]從膨腹海馬中提取分離出抗氧化肽和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin I-converting enzyme，ACE）抑制肽；Lee等[13]

發(fā)現(xiàn)膨腹海馬酶解物具有抗氧化的潛力；Lee等[14]還發(fā)現(xiàn)從膨腹海馬中分離純化的多肽具有潛在降血壓活性。因此對膨腹海馬酶解物的研究具有良好的前景。海洋生物來源的多肽具有安全性高、結(jié)構(gòu)新穎、更有益于人體健康等優(yōu)點；此外，多肽抗氧化活性越好，氨基酸含量越高[15-16]。氨基酸是海馬的主要化學(xué)成分之一，因此將海馬用于制備抗氧化活性肽具有極好的發(fā)展前景。

響應(yīng)面與正交試驗設(shè)計和均勻設(shè)計相比，具有精確性高、實驗次數(shù)少的優(yōu)點，是一種廣泛用于生物、醫(yī)學(xué)、食品等領(lǐng)域的優(yōu)化方法[17-18]。自由基會導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷從而導(dǎo)致多種慢性疾病的發(fā)生發(fā)展，因此對具有抗氧化活性的物質(zhì)的研究十分重要[19]。超微粉碎技術(shù)又稱細(xì)胞破壁技術(shù)，在細(xì)胞層面對藥物進(jìn)行破碎，有助于增加藥物的溶解度，提高有效成分的溶出度，增強(qiáng)中藥藥效[20-21]。本研究采用酶解法制備膨腹海馬超微粉酶解物，并通過單因素試驗和響應(yīng)面試驗設(shè)計優(yōu)化酶解工藝，對酶解物進(jìn)行抗氧化活性的研究，進(jìn)一步拓寬膨腹海馬的應(yīng)用市場。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

膨腹海馬 廈門小嶝水產(chǎn)科技有限公司。

胰酶（4 000 U/g）、木瓜蛋白酶（80萬 U/g）、胃蛋白酶（3 000 NFU/mg） 南寧龐博生物工程有限公司；胰蛋白酶（250 NFU/mg）、堿性蛋白酶（200 000 U/g）、風(fēng)味蛋白酶（30 000 U/g）、牛血清白蛋白 北京索萊寶科技有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、VC、硫酸亞鐵 上海麥克林生化科技股份有限公司；過氧化氫、過硫酸鉀 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；水楊酸 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；2，2’-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（2，2’-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid） diammonium salt，ABTS） 美國 Sigma公司。

1.2 儀器與設(shè)備

CW3-40QA破壁超微粉碎機(jī) 煙臺慧寶設(shè)備制造有限公司；Centrifuge 5810R臺式離心機(jī) 美國Eppendorf公司；Spectra Max M3酶標(biāo)儀 美國Molecular Devices

公司；Beta 2-8 LSCplus冷凍干燥機(jī) 德國Martin Christ公司；DELTA 320 pH計 美國Mettler Toledo公司。

1.3 方法

1.3.1 膨腹海馬粉制備

將膨腹海馬洗凈曬干，放入熱循環(huán)烘箱干燥。當(dāng)干海馬水分含量小于6%后，使用粗粉碎機(jī)將海馬粉碎成粒徑10 mm的小塊，后經(jīng)細(xì)粉碎機(jī)將其粉碎至可全部通過80 目篩。最后使用破壁超微粉碎機(jī)在－10 ℃條件下粉碎50 min。將得到的粉末置于－20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 膨腹海馬酶解物制備

參考劉云姣等[22]方法稍作修改，具體工藝流程如下：將1.3.1節(jié)中制得的膨腹海馬粉→加水混勻調(diào)節(jié)pH值與水浴鍋溫度至各酶適宜值→預(yù)熱10 min后→加入一定量酶水解4 h，再經(jīng)15 min、95 ℃高溫使酶失活→調(diào)節(jié)pH值至中性→5 000 r/min離心10 min→定性濾紙過濾離心液，取上清液保留→冷凍干燥。

1.3.3 最佳蛋白酶篩選

分別采用堿性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰酶6 種酶進(jìn)行酶解。固定料液比1∶20、酶與底物比例（enzyme/substrate，E/S）為4%，在各酶最適條件下酶解4 h。以DPPH自由基清除率為指標(biāo)篩選出最佳酶。各酶最適宜條件如表1所示。

1.3.4 DPPH自由基清除率測定

參考文獻(xiàn)[23-24]并在此基礎(chǔ)上適當(dāng)改進(jìn)。取膨腹海馬酶解物凍干粉，用超純水配制成質(zhì)量濃度為10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL的溶液。取50 μL溶液加到96 孔板中，再加入含量為0.06 mg/mL的DPPH溶液150 μL?；靹蚝笾糜诎堤幏磻?yīng)30 min，于517 nm波長處測定吸光度，并設(shè)置對照組，每個樣品設(shè)3 個復(fù)孔，按式（1）計算DPPH自由基清除率。

（1）

式中：As為樣品溶液＋DPPH溶液吸光度；Ac為樣品溶液＋無水乙醇溶液吸光度；Ab為DPPH溶液＋樣品溶劑吸光度。

1.3.5 ABTS陽離子自由基清除率測定

參考文獻(xiàn)[25]方法，略有改動。將7 mmol/L ABTS溶液與2.45 mmol/L的過硫酸鉀按體積比1∶1混合，于室溫下暗處反應(yīng)16 h，形成ABTS陽離子溶液。使用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）將其稀釋至在734 nm波長處的吸光度為0.70±0.02后使用。稱量10 mg海馬酶解物凍干粉溶解于1 mL超純水中，制成10 mg/mL的樣品溶液。將100 μL樣品溶液與100 μL ABTS陽離子溶液混勻，在室溫下反應(yīng)10 min，于734 nm波長處測定吸光度。以同等質(zhì)量濃度的VC為陽性對照，水為空白對照。ABTS陽離子自由基清除率按式（2）計算。

（2）

式中：Ao為空白對照吸光度；Ai為樣品溶液吸光度。

1.3.6 羥自由基清除率測定

參考文獻(xiàn)[26]測定方法，略有改動。稱量10 mg海馬酶解物凍干粉溶解于1 mL超純水中，制成10 mg/mL的樣品溶液。在96 孔板中加入15 μL 0.15 mol/L硫酸亞鐵溶液、60 μL 2 mmol/L水楊酸乙醇溶液，再加入75 μL超純水和30 μL樣品溶液，最后加入6 mmol/L過氧化氫溶液30 μL，在37 ℃條件下反應(yīng)1 h，于510 nm波長處測定吸光度。以VC為陽性對照，水為空白對照。羥自由基清除率按式（3）計算。

（3）

式中：Ai為對照加樣液吸光度；Aj為樣品溶液吸光度；A0為空白對照吸光度。

1.3.7 單因素試驗

酶解時間：在固定料液比為1∶20（m/V）、E/S為4%、pH 10、酶解溫度50 ℃條件下，考察不同酶解時間（2、3、4、5、6 h）對膨腹海馬酶解物DPPH自由基清除率的影響。

酶解pH值：在固定料液比為1∶20、E/S為4%、溫度50 ℃條件下酶解4 h，考察不同酶解pH值（pH 8、9、10、11、12）對膨腹海馬酶解物DPPH自由基清除率的影響。

酶解溫度：在固定料液比為1∶20、E/S為4%、pH 10條件下酶解4 h考察不同酶解溫度（40、45、50、55、60 ℃）對膨腹海馬酶解物DPPH自由基清除率的影響。

1.3.8 響應(yīng)面試驗優(yōu)化酶解工藝

在單因素實驗的基礎(chǔ)上，根據(jù)Box-Behnken設(shè)計原理，對酶解時間、pH值、酶添加量進(jìn)行3因素3水平優(yōu)化，如表4所示。

1.4 數(shù)據(jù)處理

使用Design Expert 8.0.6軟件進(jìn)行響應(yīng)面實驗設(shè)計與數(shù)據(jù)分析，采用GraphPad Prism 8.0.2和Origin 2022軟件繪圖。所有的數(shù)據(jù)均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 蛋白酶篩選結(jié)果

不同蛋白酶的酶切位點不同，可以剪切出具有不同生物活性的肽段，從而產(chǎn)生不同生物活性。本研究選用堿性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰酶分別對膨腹海馬粉進(jìn)行酶解，以DPPH自由基清除率為指標(biāo)，篩選出最優(yōu)酶。6 種酶解物對DPPH自由基的清除能力如圖1可知。不同蛋白酶對DPPH自由基的清除率不同，其中，堿性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、胰蛋白酶在固定酶解時間下對DPPH自由基的清除率較高。堿性蛋白酶是一種內(nèi)肽酶，具有多個酶切位點，主要切割疏水氨基酸的羧基端[27]；風(fēng)味蛋白酶主要切割亮氨酸和脯氨酸之間的肽鍵，使得酶解產(chǎn)物具有廣泛的特異功

能[28]；胰蛋白酶也屬于內(nèi)肽酶，主要作用位點在賴氨酸和精氨酸形成的肽鍵的羧基端[27]。但胰蛋白酶從動物胰臟中提純，價格昂貴；堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶分別提取自枯草芽孢桿菌和米曲霉等微生物代謝產(chǎn)物，具有酶活力強(qiáng)、產(chǎn)量高、價格低廉等優(yōu)勢[29]。因此，綜合對DPPH自由基的清除能力和成本考慮，選用堿性蛋白酶進(jìn)行后續(xù)實驗。

2.2 單因素試驗結(jié)果

2.2.1 酶解時間對酶解多肽DPPH自由基清除率的影響

酶解時間過短不能完全酶解底物，過長則會使酶解反應(yīng)過度[30]。由圖2可知，在其他酶解條件相同、酶解時間2～6 h內(nèi)，隨著酶解時間延長，多肽粉對DPPH自由基清除率升高，并于5 h達(dá)到峰值后減少。綜合考慮，選擇3、4、5 h進(jìn)行優(yōu)化實驗。

2.2.2 pH值對酶解多肽DPPH自由基清除率的影響

pH值通過改變極性基團(tuán)的解離來改變酶分子帶電狀態(tài)，使得酶中心結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，進(jìn)而影響酶解效率以及酶解產(chǎn)物活性，pH值過低或者過高都會導(dǎo)致酶失活[30]。由圖3所知，維持其他條件不變，考察pH值

在8～12范圍內(nèi)酶解多肽影響的DPPH自由基清除率。結(jié)果顯示，在pH值到達(dá)11之前，隨著pH值的增大，DPPH自由基清除率逐漸增大；當(dāng)pH值為11時，DPPH清除率達(dá)到最大值（44.77±1.95）%。然而，當(dāng)pH值繼續(xù)增加至12時，DPPH自由基清除率降低至（3.73±1.00）%，原因可能是由于酶解過程中需要消耗較大量NaOH以維持pH值穩(wěn)定，酶解結(jié)束后也需用HCl將pH值調(diào)至中性，在此過程中產(chǎn)生的鹽對DPPH自由基清除率的影響較大。因此選擇pH 9、10、11進(jìn)行優(yōu)化試驗考察。

2.2.3 酶解溫度對酶解多肽DPPH自由基清除率的影響

酶解溫度影響蛋白酶作用的活力，溫度過高或過低都會改變酶分子的中心活性結(jié)構(gòu)使酶失活，導(dǎo)致酶解效率下降，多肽得率降低，生物活性也下降[31]。由圖4可知，改變酶解溫度，控制其他條件不變的情況下，考察40～60 ℃范圍內(nèi)酶解多肽對DPPH自由基清除率的影響。隨著溫度升高，DPPH自由基清除率也逐步上升。

2.2.4 堿性蛋白酶E/S對酶解多肽的影響

在保持其他條件不變的情況下，觀察堿性蛋白酶E/S為2%～8%時對DPPH自由基清除率的影響。由圖5可知，當(dāng)E/S為4%時DPPH自由基清除率最高。當(dāng)E/S超過6%時，酶解產(chǎn)物對DPPH自由基的清除率趨于平緩，這可能是由于當(dāng)加酶量增大時，溶液中的酶能夠充分與底物反應(yīng)，酶解物的生物活性提高；但當(dāng)加酶量過高時，在一定反應(yīng)條件下，底物中的蛋白幾乎酶解完全，酶解到達(dá)飽和。

2.3 響應(yīng)面試驗結(jié)果

2.3.1 試驗設(shè)計與結(jié)果分析

響應(yīng)面試驗?zāi)軌蛲ㄟ^少量試驗獲得獨立因子和預(yù)測因子之間的相互作用效應(yīng)，并構(gòu)建回歸模型，是一項成本低、效益高的實驗技術(shù)；Box-Behnken設(shè)計能夠考察獨立參數(shù)對響應(yīng)值的獨立效應(yīng)、二次效應(yīng)以及交互效應(yīng)，采用二階多項式方程擬合，預(yù)測值更貼近正常值，并能夠做出3D變量曲面圖，對變量直接的關(guān)系進(jìn)行更直觀的量化分析[32-33]。本研究根據(jù)Box-Behnken設(shè)計條件進(jìn)行實驗，測定不同酶解時間、pH值、E/S對DPPH自由基清除率的影響，實驗設(shè)計和結(jié)果見表5。

通過Design Expert 8.0.6軟件對實驗結(jié)果進(jìn)行分析，獲得響應(yīng)值與自變量之間的關(guān)系，以二階多項式方程表示。海馬多肽DPPH自由基清除率的回歸方程為：

Y＝35.7－0.28A＋15.22B＋1.47C＋1.86AB＋0.16AC＋1.66BC＋5.01A2＋4.22B2＋7C2。對回歸方程進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表6。一次項B和二次項A2、B2、C2對提取得到的海馬多肽DPPH自由基清除率影響極顯著，其他因素不顯著。通過F值得到影響海馬多肽粉DPPH清除率的因素順序為：B＞C＞A，即pH值＞E/S＞酶解時間。

此模型的F＝45.19，P＜0.000 1，響應(yīng)面回歸模型極為顯著；失擬項F＝1.65，P＝0.313 1（＞0.05），失擬項

不顯著，說明失擬相對于純誤差不顯著，模型合適[34]。變異系數(shù)5.52%（＜10%），說明非實驗因素對結(jié)果影響不大，模型的實驗穩(wěn)定性好；模型相關(guān)系數(shù)

R2＝0.983 1，說明該實驗?zāi)Ｐ秃蛯嶋H擬合較好，實驗中約有98.31%的結(jié)果可以通過擬合模型進(jìn)行解釋[35]。校正后的

R2Adj＝0.961 3，與R2接近，說明模型具有準(zhǔn)確性和通用

性[36]，因此可用該模型來分析和預(yù)測海馬多肽提取實驗中各因素對DPPH自由基清除率的影響。

2.3.2 各因素交互作用對酶解物DPPH自由基清除率的影響

在回歸模型方差分析結(jié)果的基礎(chǔ)上，采用Design-Expert 8.0.6根據(jù)回歸方程式繪制響應(yīng)面圖和等高線圖，分析酶解時間、pH值和E/S對DPPH自由基清除率的影響。2 個因素的交互作用對響應(yīng)值的影響可以用等高線圖和響應(yīng)曲面表示，結(jié)果見圖6。響應(yīng)曲面越陡，交互作用對響應(yīng)值的影響越顯著；等高線越接近橢圓，因素之間的交互作用越強(qiáng)[37]。

酶解時間和pH值、pH值和E/S的響應(yīng)曲面與酶解時間和E/S的響應(yīng)曲面相比更加陡峭，因此前兩者對響應(yīng)值的影響更顯著。pH值和E/S的交互作用等高線接近橢圓，表明其對DPPH自由基清除率的影響最大，酶解時間和pH值的交互作用對DPPH自由基清除率的影

響次之。

圖 6 Box-Behnken響應(yīng)面三維圖和等高線圖

Fig. 6 Response surface and contour plots

2.3.3 工藝優(yōu)化驗證

采用Design Expert 8.0.6軟件求解方程，得到理想的提取條件為：酶解時間3 h、pH 11、E/S 7.518%，此時得到的海馬多肽對DPPH自由基清除率為64.745%。進(jìn)行3 次重復(fù)實驗，平均值為63.6170%，與預(yù)測值相符，提取工藝穩(wěn)定。

2.4 體外抗氧化能力測定

2.4.1 不同質(zhì)量濃度海馬多肽的DPPH自由基清除率

由圖7可知，海馬多肽對DPPH自由基的清除能力弱于VC，但隨著多肽質(zhì)量濃度增加，對DPPH自由基的清除力也不斷增強(qiáng)。其半清除質(zhì)量濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）為4.549 mg/mL。

2.4.2 不同質(zhì)量濃度海馬多肽的ABTS陽離子自由基清除率

由圖8可知，海馬多肽對ABTS陽離子自由基的清除作用與VC相當(dāng)，當(dāng)多肽質(zhì)量濃度為1.25 mg/mL時，對ABTS陽離子自由基清除率為（94.42±0.15）%，而VC的ABTS陽離子自由基清除率為（94.76±0.01）%。

2.4.3 不同質(zhì)量濃度海馬多肽的羥自由基清除率

由圖9可知，海馬多肽對羥自由基的清除能力弱于VC，但隨海馬多肽含量的增加，清除能力也不斷增強(qiáng)，其IC50為6.815 mg/mL。

3 結(jié) 論

本研究通過酶解法對膨腹海馬酶解多肽進(jìn)行提取，以DPPH自由基清除率為指標(biāo)篩選出堿性蛋白酶為最優(yōu)酶。進(jìn)一步通過單因素和響應(yīng)曲面試驗確定膨腹海馬酶解物的最佳提取工藝。最終確定最佳提取工藝：在料液比1∶20、pH 11、溫度50 ℃、E/S 7.581%條件下酶解3 h，此時含量為10 mg/mL的酶解物溶液對DPPH自由基清除率能夠達(dá)到64.62%，與模型預(yù)測值相近。通過DPPH自由基、ABTS陽離子自由基以及羥自由基清除實驗對最佳提取工藝提取出的膨腹海馬酶解物的抗氧化活性進(jìn)行驗證，實驗結(jié)果表明該方法提取的酶解物具有良好的抗氧化活性，可用于食品、化妝品、藥品等研發(fā)原料，具有較廣闊的研究應(yīng)用前景。

海馬作為一種名貴中藥材，在藥用領(lǐng)域有著十分悠久的研究歷史。為進(jìn)一步拓寬海馬在食品領(lǐng)域的開發(fā)，海馬酒是一種常見的應(yīng)用形式，但海馬酒生產(chǎn)過程中易造成大量殘渣蛋白質(zhì)流失，導(dǎo)致資源未能得到有效的利用。本研究可為后續(xù)對海馬酒殘渣酶解多肽的研究提供一定的基礎(chǔ)。之后還可通過對酶解物中氨基酸、分子質(zhì)量的測定以及分離純化多肽，對其活性進(jìn)一步研究。

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