摘要 目的：基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接探討龍加通絡(luò)膠囊治療缺血性中風(fēng)物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制。方法：通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）、中醫(yī)藥綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（TCMID）以及查閱文獻(xiàn)獲得穿山龍、刺五加的主要活性成分；使用PharmMapper數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)活性成分靶點(diǎn)，利用人類(lèi)基因綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（GeneCards）和在線人類(lèi)孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)（OMIM）得到疾病相關(guān)靶點(diǎn)，對(duì)活性成分靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)取交集后采用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因本體（GO）功能以及京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）富集分析。最后通過(guò)AutoDock Vina軟件對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)和化合物進(jìn)行分子對(duì)接批量處理。結(jié)果：篩選出穿山龍、刺五加針對(duì)缺血性中風(fēng)的14個(gè)活性成分和179個(gè)作用靶點(diǎn)。蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治霭l(fā)現(xiàn)白蛋白（ALB）、蛋白激酶B1（AKT1）、胱天蛋白酶3（CASP3）、表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、酪氨酸激酶（SRC）是穿山龍、刺五加治療缺血性中風(fēng)的關(guān)鍵靶點(diǎn)。GO功能分析發(fā)現(xiàn)龍加通絡(luò)膠囊生物過(guò)程主要集中在中性粒細(xì)胞脫粒、RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄過(guò)程的正調(diào)控、凋亡過(guò)程的負(fù)調(diào)控等多個(gè)方面；KEGG信號(hào)富集分析主要涉及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶 B（PI3K/AKT）、有絲分裂原激活蛋白激酶（MAPK）、Ras相關(guān)蛋白1（Rap1）等信號(hào)通路。分子對(duì)接結(jié)果顯示活性物質(zhì)與靶點(diǎn)蛋白之間存在較強(qiáng)的結(jié)合力，其中薯蕷皂苷與AKT1的結(jié)合力最強(qiáng)。結(jié)論：穿山龍、刺五加治療缺血性中風(fēng)具有多組分、多靶點(diǎn)相互協(xié)同的特點(diǎn)，為今后龍加通絡(luò)膠囊的臨床應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)和參考。

關(guān)鍵詞 缺血性中風(fēng)；龍加通絡(luò)膠囊；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；益氣活血；分子對(duì)接

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2023.15.006

To Explore the Molecular Mechanism of Longjiatongluo Capsule in the Treatment of Ischemic Stroke Based on Modern Network Pharmacology and Molecular Docking Technology

YAO Yaoyao， GAO Ying， WU Yichao， ZHENG Xiangyi， XUE Bingjie

Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China; Dongzhimen Hospital， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100700， China

Corresponding Author XUE Bingjie， E-mail： xuelibang2008@163.com

Abstract Objective：To study themechanism of Longjiatongluo Capsule in the treatment of ischemic stroke（IS） by modern network pharmacology and molecular docking technology.Methods：The main active components of Chuanshanlong and Ciwujia were obtained by traditional Chinese medicine system pharmacology database（TCMSP），comprehensive therapy of Chinese medicine database（TCMID） and literature review.PharmMapper database was used to predict drug targets，disease-related targets were obtained using the comprehensive database of human genes（GeneCards） and the human Mendelian genetic（OMIM） databases. String and DAVID databases were used to perform Gene Ontology（GO） function and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG） enrichment analysis after the intersection of drug action targets and disease targets.AutoDock Vina software was used to conduct molecular docking batch processing for key targets and compounds.Results：Fourteen active components and 179 targets of Chuanshanlong and Ciwujia for IS were screened out.The protein-protein interaction network（PPI） network topology analysis showed that albumin（ALB），AKT serine/threonine kinase 1（AKT1），cysteinyl aspartate specific proteinase 3（CASP3），epidermal growth factor receptor（EGFR）and sarcoma（SRC） were the key targets of Chuanshanlong and Ciwujia in the treatment of ischemic stroke.GO function analysis showed that the biological processes of Longjiatongluo Capsule mainly focused on neutrophil threshing，positive regulation of RNA polymerase Ⅱ promoter transcription and negative regulation of apoptosis.KEGG signal enrichment analysis mainly involves phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B（PI3K/Akt），mitogen-activated protein kinase（MAPK），Ras-associated protein 1（Rap1），and other signaling pathways.The molecular docking results showed that there was a strong binding force between the active substance and the target protein，and the binding force between diosgenin and AKT1 was the strongest one.Conclusion：Chuanshanlong and Ciwujia Show the characteristics of multi-component and multi-target coordination in the treatment of IS，which will provide theoretical basis and reference for the clinical application of Longjiatongluo capsule in the future.

Keywords ischemic stroke; Longjiatongluo Capsule; network pharmacology; Qi and blood circulation; molecular docking

中風(fēng)是一種致命性的腦血管疾病，嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量［1］。流行病學(xué)調(diào)查顯示，缺血性中風(fēng)（ischemic stroke，IS）占中風(fēng)病人的87%，已成為世界范圍內(nèi)導(dǎo)致病人死亡的第2位原因以及導(dǎo)致殘障的首位原因［2］。在我國(guó)，2020年《中國(guó)腦卒中防治報(bào)告》亦指出，中風(fēng)是我國(guó)居民首位的致殘、致死病因，缺血性中風(fēng)的發(fā)病率由2010年的129/10萬(wàn)上升至2019年的145/10萬(wàn)，增長(zhǎng)率超過(guò)11%，且70%的生存者多有偏癱、失語(yǔ)等神經(jīng)缺失殘障［3］。由于腦組織在缺血后數(shù)小時(shí)內(nèi)發(fā)生神經(jīng)細(xì)胞死亡，因此，通過(guò)溶栓治療盡快恢復(fù)血流可挽救病人的半暗帶損傷，降低中風(fēng)后遺癥發(fā)生率和死亡率。然而，目前的溶栓藥物有嚴(yán)格的時(shí)間窗限制，故只有少數(shù)病人能從中獲益?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于缺血性中風(fēng)病人的指南和臨床治療在不斷地完善和實(shí)踐創(chuàng)新，但實(shí)際臨床治療效果仍有待提高［4］。

中醫(yī)認(rèn)為缺血性中風(fēng)基本病機(jī)為氣虛血瘀，益氣活血是中醫(yī)對(duì)氣虛血瘀的常用治法。龍加通絡(luò)膠囊是根據(jù)該法組成的復(fù)方中藥制劑，由穿山龍和刺五加組成，穿山龍具有活血化瘀、舒筋活絡(luò)的功效；刺五加具有益氣健脾、補(bǔ)腎安神的功效，治療瘀血內(nèi)停、經(jīng)絡(luò)受阻、筋脈失濡所致半身不遂或偏身麻木、口眼歪斜、言語(yǔ)蹇澀或不語(yǔ)?；A(chǔ)研究表明，穿山龍的根莖中含有豐富的薯蕷皂苷，薯蕷皂苷經(jīng)口服吸收后，由腸道菌群代謝生成薯蕷皂苷元，薯蕷皂苷元可抗血小板聚集、降血脂、增強(qiáng)認(rèn)知功能等［5-6］。刺五加中富含酚類(lèi)化合物，如刺五加苷B（紫丁香苷）和刺五加苷E，具有抗應(yīng)激、抗氧化、抗炎、改善學(xué)習(xí)和記憶功能［7］。但由于中藥作用復(fù)雜，物質(zhì)基礎(chǔ)不是完全清晰，故本研究擬采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接，探討中藥復(fù)方龍加通絡(luò)膠囊治療腦缺血性損傷的物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制，為龍加通絡(luò)膠囊的臨床應(yīng)用提供理論及參考。

1 資料與方法

1.1 龍加通絡(luò)膠囊活性成分的搜集、篩選

基于中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（traditional Chinese medicine system pharmacology database，TCMSP，http：//tcmspw.com/tcmsp.php）、中醫(yī)藥綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（TCMID）（http：//www.megabionet.org/tcmid）以及相關(guān)文獻(xiàn)查閱，分別以“穿山龍”“刺五加”為關(guān)鍵詞檢索穿山龍、刺五加中的活性口服生物利用度（oral bioavailability，OB）值≥30%、類(lèi)藥性（drug-likeness，DL）值≥0.18對(duì)檢索結(jié)果進(jìn)行篩選，選出符合條件的成分作為活性成分。

1.2 龍加通絡(luò)膠囊靶點(diǎn)篩選及“藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

通過(guò)PharmMapper數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/），篩選穿山龍、刺五加化合物所對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)，利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//https：//www.uniprot.org）對(duì)靶點(diǎn)的基因名進(jìn)行規(guī)范化。然后再將靶點(diǎn)蛋白輸入到CytoScape 3.9.0軟件中構(gòu)建“藥物-活性成分-靶點(diǎn)”的網(wǎng)絡(luò)模型并最終完成網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治觥?/p>

1.3 缺血性中風(fēng)的靶點(diǎn)篩選及共同靶點(diǎn)的獲取

分別在人類(lèi)基因綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（GeneCards）（https：//www.Genecards.org）和在線人類(lèi)孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)（OMIM）（https：//omim.org）中以“ischemic stroke”進(jìn)行靶點(diǎn)檢索，從而獲取缺血性中風(fēng)的相關(guān)靶點(diǎn)，將其與檢索所得到的龍加通絡(luò)膠囊藥物活性成分靶點(diǎn)信息輸入到Venny 2.1.0中，制作韋恩圖，得到龍加通絡(luò)膠囊的活性成分靶點(diǎn)與缺血性中風(fēng)相關(guān)疾病靶點(diǎn)之間的交集，即共同靶點(diǎn)。

1.4 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)的篩選

首先，將藥物-疾病的共同靶點(diǎn)數(shù)據(jù)導(dǎo)入到STRING數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/）中，形成一個(gè)蛋白相互作用的網(wǎng)絡(luò)，然后再將網(wǎng)絡(luò)中所得到的蛋白數(shù)據(jù)直接輸入到Cytoscape 3.9.0軟件中進(jìn)行處理和分析，并根據(jù)條件篩選核心靶點(diǎn)。利用度值（Degree）進(jìn)行篩選，計(jì)算度值中位數(shù)，以其中位數(shù)作為篩選條件，構(gòu)建核心靶點(diǎn)的相互作用網(wǎng)絡(luò)。

1.5 基因本體（GO）功能與京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析

將藥物-疾病的共同靶點(diǎn)信息輸入到DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//david.ncifcrf.gov）中，選定條目“homo sapiens”，實(shí)現(xiàn)GO功能和KEGG通路的富集分析，選擇條目P≤0.05，得到符合要求的條目，對(duì)其結(jié)果進(jìn)行可視化解析。GO功能分析的3個(gè)模塊參與了龍加通絡(luò)膠囊治療缺血性中風(fēng)研究的全部過(guò)程。KEGG富集分析系統(tǒng)主要是對(duì)其信號(hào)通路進(jìn)行富集，篩選出龍加通絡(luò)膠囊治療缺血性中風(fēng)最可能的信號(hào)通路。

1.6 分子對(duì)接驗(yàn)證

將“藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)中度值排名居前5位的藥物活性成分與共同靶點(diǎn)中度值排名居前5位的靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接。從PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)獲取龍加通絡(luò)膠囊活性成分的小分子結(jié)構(gòu)sdf格式，通過(guò)Chem3D軟件使之能量最小化后存儲(chǔ)為mol2格式。從RCSB PDB數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.rcsb.org）中下載核心靶點(diǎn)蛋白的結(jié)構(gòu)，利用PyMOL對(duì)蛋白分子進(jìn)行去水和刪除配體。通過(guò)使用AutoDock Vina軟件生成的pdbqt格式來(lái)保存蛋白質(zhì)分子和配體分子，隨后進(jìn)行蛋白質(zhì)和配體分子對(duì)接。若對(duì)接后分?jǐn)?shù)＜－29.3 kJ/mol時(shí)則表示其結(jié)合的能力很強(qiáng)［8］。最后利用 PyMOL軟件將分子對(duì)接中得分相對(duì)較高，并且分子結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定的化合物與靶點(diǎn)基因進(jìn)行可視化分析。

2 結(jié) 果

2.1 龍加通絡(luò)膠囊主要活性成分的篩選

通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)、TCMID數(shù)據(jù)庫(kù)以及文獻(xiàn)調(diào)研，匯總篩選后最終獲得龍加通絡(luò)膠囊活性成分共有14個(gè)，其中6個(gè)來(lái)自穿山龍，8個(gè)來(lái)自刺五加。詳見(jiàn)表1。

2.2 “藥物-活性成分-靶點(diǎn)”的網(wǎng)絡(luò)分析

通過(guò)PharmMapper數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選與穿山龍、刺五加活性成分相對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)分別為248、301個(gè)，二者合并去除重復(fù)靶點(diǎn)后，共獲得324個(gè)靶點(diǎn)。利用Cytoscape 3.9.0軟件網(wǎng)絡(luò)模型并加以分析，該網(wǎng)絡(luò)中共有340個(gè)節(jié)點(diǎn)，其中2個(gè)藥物節(jié)點(diǎn)、14個(gè)活性成分節(jié)點(diǎn)、324個(gè)靶點(diǎn)節(jié)點(diǎn)以及1 447條邊。網(wǎng)絡(luò)中圓形代表穿山龍和刺五加，六邊形代表活性物質(zhì)，菱形代表靶基因。詳見(jiàn)圖1。在網(wǎng)絡(luò)模型中，度值大小代表著該網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)能夠和其他網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)之間的有效連接數(shù)量的多少，利用Analyze Network插件可以對(duì)整個(gè)網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)進(jìn)行分析，篩選度值相對(duì)較高的一些網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)，即表示該節(jié)點(diǎn)在整個(gè)網(wǎng)絡(luò)中能夠發(fā)揮關(guān)鍵作用，度值排名居前5位的活性成分為刺五加苷E（eleutheroside E）、芝麻素（sesamin）、蘆?。╮utin）、薯蕷皂苷（dioscin）和纖細(xì)薯蕷皂苷（gracillin）。2.3 龍加通絡(luò)膠囊治療缺血性中風(fēng)靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及篩選

通過(guò)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)和OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)共篩選得到3 746個(gè)缺血性中風(fēng)的靶點(diǎn)，使用Venny 2.1.0作出龍加通絡(luò)膠囊活性成分靶點(diǎn)與缺血性中風(fēng)靶點(diǎn)的韋恩圖，所得到的交集靶點(diǎn)共有179個(gè)，這些靶點(diǎn)是龍加通絡(luò)膠囊治療缺血性中風(fēng)的可能靶點(diǎn)。詳見(jiàn)圖2。

2.4 龍加通絡(luò)膠囊治療缺血性中風(fēng)的核心靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

將篩選后得到的179個(gè)靶點(diǎn)輸入到STRING 11.0數(shù)據(jù)庫(kù)中，構(gòu)建蛋白網(wǎng)絡(luò)模型。利用Cytoscape 3.9.0軟件建立蛋白網(wǎng)絡(luò)模型，其結(jié)構(gòu)包括175個(gè)節(jié)點(diǎn)、2 004條邊，詳見(jiàn)圖3。圖中節(jié)點(diǎn)面積越大，顏色越深，度值越大，表明與其相關(guān)聯(lián)的靶點(diǎn)蛋白數(shù)量越多。使用Analyze Network插件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)算出靶點(diǎn)度值，按照度值的大小進(jìn)行降序排列，以大于靶點(diǎn)度值的中位數(shù)31作為篩選條件，共篩選出41個(gè)靶點(diǎn)作為核心靶點(diǎn)構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)。詳見(jiàn)圖4。

2.5 GO功能及KEGG通路富集分析

基于DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)篩選得到596個(gè)GO功能富集條目（P＜0.05），分別是56種細(xì)胞組分（cellular component，CC）、108種分子功能（molecular function，MF）和432個(gè)生物過(guò)程（biological process，BP）。BP方面主要涉及中性粒細(xì)胞脫粒、RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄過(guò)程的正調(diào)控、蛋白質(zhì)水解、信號(hào)通路、凋亡過(guò)程。詳見(jiàn)圖5。

KEGG富集分析共得到149條信號(hào)通路（P＜0.05），主要涉及脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶 B（PI3K/AKT）信號(hào)通路、有絲分裂原激活蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路、Ras相關(guān)蛋白1（Rap1）信號(hào)通路等，對(duì)排名居前20位的信號(hào)通路進(jìn)行可視化分析。詳見(jiàn)圖6。

2.6 分子對(duì)接

對(duì)篩選后得到的179個(gè)靶點(diǎn)中關(guān)鍵靶點(diǎn)白蛋白（ALB）、蛋白激酶B1（AKT1）、胱天蛋白酶3（CASP3）、表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、酪氨酸激酶（SRC）和活性成分進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果顯示龍加通絡(luò)膠囊活性成分和關(guān)鍵靶點(diǎn)的對(duì)接分?jǐn)?shù)均＜－29.3 kJ/mol，從而確定龍加通絡(luò)膠囊活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)有較強(qiáng)的結(jié)合力。詳見(jiàn)表2。

分子對(duì)接可發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白的活性位點(diǎn)與配體分子之間的結(jié)合與聯(lián)系，放大圖中展示的配體分子與受體蛋白之間發(fā)生的氫鍵作用，同時(shí)標(biāo)注出相連的氨基酸殘基。詳見(jiàn)圖7。通過(guò)對(duì)數(shù)據(jù)和結(jié)果的驗(yàn)證，得出刺五加苷E、芝麻素、蘆丁、薯蕷皂苷和纖細(xì)薯蕷皂苷等是龍加通絡(luò)膠囊中重要的活性成分。

3 討 論

缺血性中風(fēng)在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率不斷攀升，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康，給社會(huì)造成了極大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［9］。研究發(fā)現(xiàn)，中風(fēng)后癡呆風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加4～12倍，30%的腦梗死幸存者將出現(xiàn)認(rèn)知功能和學(xué)習(xí)記憶下降，嚴(yán)重影響病人生活質(zhì)量［10］。傳統(tǒng)中藥含有多種活性組分，可靶向腦缺血病理過(guò)程的多個(gè)環(huán)節(jié)，逆轉(zhuǎn)其疾病進(jìn)程，干預(yù)腦缺血后認(rèn)知功能下降，因此，開(kāi)發(fā)和挖掘中藥對(duì)治療中風(fēng)具有十分重要的意義。

龍加通絡(luò)膠囊由君藥穿山龍和臣藥刺五加組成，具有活血化瘀、益氣通絡(luò)的功效，其中穿山龍可以活血化瘀、舒筋活絡(luò)；刺五加可以益氣健脾、補(bǔ)腎安神。研究表明，穿山龍根莖中含有豐富的薯蕷皂苷，臨床上薯蕷皂苷片已用于腦梗死治療［11］，其具有降血脂、抑制血小板聚集、清除氧自由基、改善血液微循環(huán)、促進(jìn)神經(jīng)軸突生長(zhǎng)、增強(qiáng)認(rèn)知功能、延緩?fù)庵軇?dòng)脈粥狀硬化過(guò)程等作用［12］。刺五加注射液已經(jīng)在臨床用于治療急性腦梗死，改善病人血脂水平及內(nèi)皮細(xì)胞功能，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化等作用［13］，其在擴(kuò)張血管、提高冠狀動(dòng)脈血流量、減少血小板凝集、抑制神經(jīng)元萎縮、改善學(xué)習(xí)和記憶功能等方面都具有較好效果［14］。

通過(guò)龍加通絡(luò)膠囊治療缺血性中風(fēng)的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)共篩選得到179個(gè)靶點(diǎn)，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)ALB、AKT1、CASP3、EGTR、SRC等靶點(diǎn)可能是龍加通絡(luò)膠囊治療缺血性中風(fēng)的關(guān)鍵靶點(diǎn)。ALB是在肝臟中合成最豐富的血清蛋白，具有抗血小板聚集、抗炎和維持膠體滲透壓等多種生理作用［15］?；A(chǔ)研究表明，白蛋白對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)具有保護(hù)作用，中劑量白蛋白可明顯降低急性腦梗死體積，減輕腦水腫，提高神經(jīng)功能［16］。AKT參與了腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖分化與凋亡，AKT基因缺失會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，引起血管平滑肌的變化、遷移，加劇動(dòng)脈粥樣硬化［17］。海馬神經(jīng)元對(duì)缺血性刺激更為敏感，容易損傷，導(dǎo)致嚴(yán)重的學(xué)習(xí)記憶障礙。通過(guò)抑制腦缺血后凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)蛋白CASP3激活，增加AKT磷酸化，提高海馬神經(jīng)元存活率，降低認(rèn)知障礙［18］。EGFR與配體如神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的有益作用已在中風(fēng)病人的大腦中得到證實(shí)，EGFR配體轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α及EGFR可保護(hù)缺血性中風(fēng)大鼠神經(jīng)功能并降低梗死體積［19］。SRC的活化明顯升高血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，增加血管通透性，破壞血腦屏障［20-21］，故以SRC蛋白為靶標(biāo)進(jìn)行腦缺血后血腦屏障的保護(hù)已成為目前的研究熱點(diǎn)［22］。本研究團(tuán)隊(duì)后期將會(huì)以此為切入點(diǎn)進(jìn)行深入研究。

為進(jìn)一步研究龍加通絡(luò)膠囊治療缺血性中風(fēng)的作用機(jī)制，在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和文獻(xiàn)調(diào)研的基礎(chǔ)上，本課題組對(duì)篩選出5個(gè)中藥活性成分刺五加苷E、芝麻素、蘆丁、薯蕷皂苷、纖細(xì)薯蕷皂苷，與關(guān)鍵靶點(diǎn)ALB、AKT1、CASP3、EGFR及SRC進(jìn)行分子對(duì)接。結(jié)果顯示，芝麻素、蘆丁、薯蕷皂苷、纖細(xì)薯蕷皂苷與靶點(diǎn)ALB、AKT1、CASP3、EGFR及SRC的結(jié)合度均比較高，刺五加苷E略低。芝麻素具有減少血栓、降壓降脂、防止動(dòng)脈粥樣硬化等作用，還可通過(guò)抗炎、抗氧化和抑制細(xì)胞凋亡等降低缺血后腦組織損傷［23］。此外，芝麻素可改善慢性應(yīng)激誘導(dǎo)小鼠的認(rèn)知功能，可能是由于抑制了神經(jīng)炎癥導(dǎo)致的突觸損傷［24］。蘆丁是一種黃酮類(lèi)化合物，是最有效的抗氧化劑之一，在抑制氧化應(yīng)激、炎癥等方面發(fā)揮著重要作用［25］。蘆丁可降低神經(jīng)細(xì)胞中活性氧生成和脂質(zhì)過(guò)氧化，作為一種適當(dāng)?shù)纳窠?jīng)保護(hù)劑用于缺血性發(fā)作和其他神經(jīng)退行性疾?。?6］。研究表明，蘆丁通過(guò)降低血清和大腦丙二醛水平，提高了大鼠的學(xué)習(xí)和空間記憶能力［27］。薯蕷皂苷經(jīng)口服吸收后生成的薯蕷皂苷元，才是調(diào)控腦缺血后一系列病理變化的關(guān)鍵物質(zhì)。薯蕷皂苷元能顯著降低缺血性中風(fēng)模型的梗死體積和神經(jīng)學(xué)評(píng)分，其對(duì)缺血性中風(fēng)大鼠白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和CASP3活性有明顯的抑制作用，說(shuō)明薯蕷皂苷元對(duì)缺血性中風(fēng)的保護(hù)主要依賴(lài)于抗炎和抗凋亡［28］。纖細(xì)薯蕷皂苷具有抗血栓形成、抗血小板聚集、降血脂、改善血管功能、調(diào)節(jié)免疫等多種藥理作用［29］。研究表明，纖細(xì)薯蕷皂苷可以減輕神經(jīng)元的慢性炎癥和突觸損傷，抑制細(xì)胞凋亡［30］。

4 小 結(jié)

綜上所述，本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接，探討龍加通絡(luò)膠囊治療缺血性中風(fēng)的作用機(jī)制，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和文獻(xiàn)調(diào)研篩選活性成分并預(yù)測(cè)靶點(diǎn)蛋白，在此基礎(chǔ)上采用分子對(duì)接進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示，龍加通絡(luò)膠囊中活性成分刺五加苷E、芝麻素、蘆丁、薯蕷皂苷、纖細(xì)薯蕷皂苷等化合物主要作用于ALB、AKT1、CASP3、EGFR、SRC等信號(hào)靶點(diǎn)，通過(guò)抗炎、抗氧化、保護(hù)神經(jīng)、抑制細(xì)胞凋亡等機(jī)制，改善腦缺血后認(rèn)知功能障礙。本研究以中醫(yī)理論為中藥研究的指導(dǎo)思想，探討了中醫(yī)藥治療多組分、多靶點(diǎn)的綜合協(xié)同效果，為龍加通絡(luò)膠囊的臨床應(yīng)用提供理論參考和數(shù)據(jù)支持。

參考文獻(xiàn)：

［1］PAUL S，CANDELARIO-JALIL E.Emerging neuroprotective strategies for the treatment of ischemic stroke：an overview of clinical and preclinical studies［J］.Experimental Neurology，2021，335：113518.

［2］ORELLANA-URZA S，ROJAS I，LBANO L，et al.Pathophysiology of ischemic stroke：role of oxidative stress［J］.Current Pharmaceutical Design，2020，26（34）：4246-4260.

［3］王隴德，彭斌，張鴻祺，等.《中國(guó)腦卒中防治報(bào)告2020》概要［J］.中國(guó)腦血管病雜志，2022，19（2）：136-144.

［4］安鑫，張連運(yùn)，苑奇志，等.缺血性中風(fēng)病的中醫(yī)理論研究概況［J］.光明中醫(yī)，2016，31（8）：1205-1208.

［5］于浩，杜建玲.穿山龍?jiān)碥盏乃幚碜饔眉皺C(jī)制的研究現(xiàn)狀［J］.中國(guó)中藥雜志，2017，42（24）：4694-4699.

［6］YANG X M，NOMOTO K，TOHDA C.Diosgenin content is a novel criterion to assess memory enhancement effect of yam extracts［J］.Journal of Natural Medicines，2021，75（1）：207-216.

［7］LIU M，XIONG Y，SHAN S，et al.Eleutheroside E enhances the long-term memory of radiation-damaged c.elegans through G-Protein-Coupled receptor and neuropeptide signaling pathways［J］.Journal of Natural Products，2020，83（11）：3315-3323.

［8］HSIN K Y，GHOSH S，KITANO H.Combining machine learning systems and multiple docking simulation packages to improve docking prediction reliability for network pharmacology［J］.PLoS One，2013，8（12）：e83922.

［9］WANG W Z，JIANG B，SUN H X，et al.Prevalence，incidence，and mortality of stroke in China：results from a nationwide population-based survey of 480 687 adults［J］.Circulation，2017，135（8）：759-771.

［10］BARBA R，MARTNEZ-ESPINOSA S，RODRGUEZ-GARC A E，et al.Poststroke dementia：clinical features and risk factors［J］.Stroke，2000，31（7）：1494-1501.

［11］張朕華.維奧欣治療腦血管疾病的臨床循證研究［J］.中國(guó)醫(yī)藥指南，2011，9（23）：177-178.

［12］OU-YANG S H，JIANG T，ZHU L，et al.Dioscorea nipponica makino：a systematic review on its ethnobotany，phytochemical and pharmacological profiles［J］.Chemistry Central Journal，2018，12（1）：57.

［13］宮曉，劉峘，楊靖，等.基于真實(shí)世界中刺五加注射液應(yīng)用于腦血管病的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析［J］.世界中醫(yī)藥，2021，16（20）：3063-3068.

［14］HUANG L Z，ZHAO H F，HUANG B K，et al.Acanthopanax senticosus：review of botany，chemistry and pharmacology［J］.Die Pharmazie，2011，66（2）：83-97.

［15］BABU M S，KAUL S，DADHEECH S，et al.Serum albumin levels in ischemic stroke and its subtypes：correlation with clinical outcome［J］.Nutrition，2013，29（6）：872-875.

［16］HUANG Y J，XIAO Z.Albumin therapy for acute ischemic stroke：a meta-analysis［J］.Neurological Sciences，2021，42（7）：2713-2719.

［17］FERNNDEZ-HERNANDO C，JZSEF L，JENKINS D，et al.Absence of Akt1 reduces vascular smooth muscle cell migration and survival and induces features of plaque vulnerability and cardiac dysfunction during atherosclerosis［J］.Arteriosclerosis，Thrombosis，and Vascular Biology，2009，29（12）：2033-2040.

［18］YANG J，PAN Y，LI X J，et al.Atorvastatin attenuates cognitive deficits through Akt1/Caspase-3 signaling pathway in ischemic stroke［J］.Brain Research，2015，1629：231-239.

［19］SHIM J W，MADSEN J R.VEGF signaling in neurological disorders［J］.International Journal of Molecular Sciences，2018，19（1）：275.

［20］BAI Y S，XU G H，XU M X，et al.Inhibition of Src phosphorylation reduces damage to the blood-brain barrier following transient focal cerebral ischemia in rats［J］.International Journal of Molecular Medicine，2014，34（6）：1473-1482.

［21］MAO X W，PAN C S，HUANG P，et al.Levo-tetrahydropalmatine attenuates mouse blood-brain barrier injury induced by focal cerebral ischemia and reperfusion：involvement of Src kinase［J］.Scientific Reports，2015，5：11155.

［22］PAUL R，ZHANG Z G，ELICEIRI B P，et al.Src deficiency or blockade of Src activity in mice provides cerebral protection following stroke［J］.Nature Medicine，2001，7：222-227.

［23］WANG Y L，WEN J，ALMOILIQY M，et al.Sesamin protects against and ameliorates rat intestinal ischemia/reperfusion injury with involvement of activating Nrf2/HO-1/NQO1 signaling pathway［J］.Oxidative Medicine and Cellular Longevity，2021，2021：5147069.

［24］AHMAD S，ELSHERBINY N M，HAQUE R，et al.Sesamin attenuates neurotoxicity in mouse model of ischemic brain stroke［J］.Neurotoxicology，2014，45：100-110.

［25］ANNAPURNA A，ANSARI M A，MANJUNATH P M.Partial role of multiple pathways in infarct size limiting effect of quercetin and rutin against cerebral ischemia-reperfusion injury in rats［J］.European Review for Medical and Pharmacological Sciences，2013，17（4）：491-500.

［26］NASSIRI-ASL M，GHORBANI A，SALEHISAR S，et al.Effect of rutin on oxidative DNA damage in PC12 neurons cultured in nutrients deprivation condition［J］.Iranian Journal of Basic Medical Sciences，2020，23（3）：390-395.

［27］ASGHARIAN S，HOJJATI M R，AHRARI M，et al.Ruta graveolens and rutin，as its major compound：investigating their effect on spatial memory and passive avoidance memory in rats［J］.Pharmaceutical Biology，2020，58（1）：447-453.

［28］ZHU S，TANG S，SU F.Dioscin inhibits ischemic stroke induced inflammation through inhibition of the TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway in a rat model［J］.Molecular Medicine Reports，2018，17（1）：660-666.

［29］ZHANG X X，XUE X J，ZHAO J，et al.Quantitative determination of gracillin by HPLC-MS/MS after oral administration and its application to a pharmacokinetic study［J］.Steroids，2016，113：78-86.

［30］SONG Y X，OU Y M，ZHOU J Y.Gracillin inhibits apoptosis and inflammation induced by lipopolysaccharide（LPS） to alleviate cardiac injury in mice via improvingmiR-29a［J］.Biochemical and Biophysical Research Communications，2020，523（3）：580-587.

（收稿日期：2022-04-13）

（本文編輯王雅潔）

基金項(xiàng)目 國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃-中醫(yī)藥現(xiàn)代化專(zhuān)項(xiàng)（No.2018YFC1705000，2018YFC1705001）；中醫(yī)藥傳承與創(chuàng)新“百千萬(wàn)”人才工程（岐黃工程）-國(guó)家中醫(yī)藥領(lǐng)軍人才支持計(jì)劃項(xiàng)目，編號(hào)：國(guó)中醫(yī)藥人教發(fā)〔2018〕12號(hào)

作者單位 1.北京中醫(yī)藥大學(xué)（北京 100029）；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院（北京 100700）；3.國(guó)家中醫(yī)藥管理局腦病中醫(yī)證治重點(diǎn)研究室（北京 100700）

通訊作者 薛冰潔，E-mail：xuelibang2008@163.com

引用信息 姚堯堯，高穎，武藝超，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接探討龍加通絡(luò)膠囊治療缺血性中風(fēng)的分子機(jī)制［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2023，21（15）：2735-2742.