吳 倩 南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科,湖南省衡陽市 421000

糖尿病(Diabetes mellitus,DM)是嚴(yán)重威脅人類生命健康的常見慢性疾病,研究發(fā)現(xiàn),患者以血糖代謝紊亂為主要臨床表現(xiàn),是遺傳因素與環(huán)境因素相互作用的結(jié)果[1]。糖尿病腎病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最為常見的并發(fā)癥之一,同時也是糖尿病患者死亡的主要原因之一,相關(guān)調(diào)查研究顯示,2型糖尿病患者中糖尿病腎病發(fā)生率約為34.7%[2]。由于糖尿病腎病病情呈漸進(jìn)式緩慢發(fā)展,起病隱匿,不易被早期診斷。因此,尋求新的生物學(xué)標(biāo)記物,早期診斷糖尿病腎病,對患者的治療及預(yù)后具有積極的意義[3]。本研究探討分析血清miR-21、YKL-40在2型糖尿病腎病患者中的表達(dá)及其意義,現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2020年3月—2022年12月我院收治的2型糖尿病患者151例,根據(jù)患者是否合并DN將患者分為兩組,其中單純2型糖尿病患者65例作為DM組,合并DN患者86例作為DN組。此外,選擇同期在我院健康體檢的健康受試者50例作為對照組。

1.2 選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn):①2型糖尿病患者均符合世界衛(wèi)生組織(WHO)擬定的2型糖尿病相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);②DN診斷標(biāo)準(zhǔn)參照美國糖尿病協(xié)會DN相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);③2型糖尿病患者病程均≥5年。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):①合并高血壓患者;②合并急、慢性感染患者;③存在腎病綜合征病史患者;④存在肝病病史患者;⑤由透析或腎移植病史;⑥2周內(nèi)使用過抗凝藥物或激素藥物患者。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄患者一般臨床資料及生化指標(biāo),包括患者性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、2型糖尿病病程、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)。采用全自動生化分析儀檢測患者空腹血糖(FPG)、尿肌酐(Cr)、尿微量白蛋白(mALb),并計算ACr,ACr=尿mALb/尿Cr。采用高效液相色譜法檢測患者血紅蛋白(HbA1c)以及血紅蛋白(Hb)。留取三組受試者24h尿液,測定尿蛋白排泄率(UAER)。并計算腎小球?yàn)V過率(eGFR),eGFR=141×(sCr/k)α×0.993年齡×1.018(女性)×1.159(非裔美國人),男性k=0.9,α=-0.411,女性k=0.7,α=-0.329。

1.4 血清miR-21檢測 抽取三組受試者清晨空腹靜脈血5ml,常規(guī)離心后分離血清,采用總RNA提取試劑盒提取血清中總RNA。然后使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,以cDNA為模版采用miRcure miRNA熒光定量檢測試劑盒進(jìn)行qPCR擴(kuò)增,總反應(yīng)體系為20μl。引物由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列:miR-21:上游引物5’-CCTTCACTTTCAGGGTCGAG-3’,下游引物:5’-CAGTTTGGGACCCCTTTACA-3’;β-actin上游引物5’-CCCATCTATGAGGGTTACGC-3’,下游引物5’-TTTAATFTCACGCACGATTTC-3’。以β-actin作為內(nèi)參基因,反應(yīng)條件:95℃ 10min,95℃ 15s、60℃ 60s,進(jìn)行45個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計算miR-21相對表達(dá)量。

1.5 血清YKL-40水平檢測 抽取三組受試者清晨空腹靜脈血5ml,常規(guī)離心后分離血清,采用ELISA法測定各組受試者血清YKL-40水平,試劑盒購于美國Quidel公司,操作嚴(yán)格參照試劑盒使用說明書進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS25.0分析數(shù)據(jù),三組間計量資料比較采用方差分析,組間兩兩比較采用t檢驗(yàn),三組間計數(shù)資料比較采用秩和檢驗(yàn),組間兩兩比較采用 檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析;采用ROC曲線分析血清miR-21、YKL-40對DN診斷價值,以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組臨床資料比較 三組受試者性別、年齡、BMI、SBP、DBP比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),而三組受試者FBG、ALB、Hb比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),DM組與DN組患者病程、HbA1c、eGFR以及UAER比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 三組受試者臨床資料比較

2.2 三組受試者血清miR-21、YKL-40水平比較 三組受試者血清miR-21、YKL-40水平比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其中DM組、DN組患者血清miR-21、YKL-40水顯著高于對照組(P<0.05),而DN組患者血清miR-21、YKL-40水平顯著高于DM組(P<0.05),見表2。

表2 三組受試者血清miR-21、YKL-40水平比較

2.3 血清miR-21、YKL-40與DN患者臨床指標(biāo)相關(guān)性 相關(guān)性分析結(jié)果顯示,DN患者血清miR-21、YKL-40與患者病程無關(guān)(P>0.05),而與患者FBG、HbA1c、UAER呈顯著正相關(guān)關(guān)系(P<0.05),與患者ALB、Hb、eGFR呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.05),見表3。

表3 血清miR-21、YKL-40與DN患者臨床指標(biāo)相關(guān)性

2.4 ROC曲線分析血清miR-21、YKL-40對DN的診斷價值 分析血清miR-21、YKL-40對DN的診斷價值,結(jié)果顯示,ROC曲線下面積分別為0.918、0.851,見表4、圖1。

圖1 血清miR-21、YKL-40對DN的診斷價值的ROC曲線

表4 ROC曲線相關(guān)參數(shù)

3 討論

糖尿病腎病作為2型糖尿病患者常見的并發(fā)癥之一,具有發(fā)病隱匿、發(fā)病緩慢、機(jī)體代謝紊亂等特點(diǎn)。對于早期糖尿病腎病患者,若未采取及時有效的治療措施,患者極容易發(fā)展成終末期腎病,導(dǎo)致臨床治療難度的增加。目前,關(guān)于糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制尚未明確,臨床治療僅通過控制患者血糖、血壓以及血脂水平,從而達(dá)到減緩患者病情進(jìn)展的目的,但是仍無法從根本上遏制病情的發(fā)展[4-5]。因此,糖尿病腎病患者的早期診斷和治療對于改善臨床預(yù)后具有的重要意義。

miRNA是生物體內(nèi)長度為18～24個核苷酸的單鏈非編碼RNA,其廣泛參與了機(jī)體內(nèi)的多種病理生理學(xué)過程[6]。目前越來越多的研究已經(jīng)證實(shí),多種疾病發(fā)生、發(fā)展過程中,均有miRNA的參與及調(diào)控,因此miRNA已經(jīng)成為多種疾病診斷和治療的潛在標(biāo)志物[7]。miR-21是較早發(fā)現(xiàn)的一類在人體組織和細(xì)胞中廣泛存在的miRNA,其位于17q23.2染色體區(qū)域上,相關(guān)報道顯示,miR-21與多種腎臟疾病有關(guān)[8]。YKL-40屬于哺乳動物甲殼酶樣蛋白家族成員之一,但是YKL-40本身不具備酶活性[9]。機(jī)體內(nèi)多種細(xì)胞均可分泌YKL-40,其主要參與激活先天免疫系統(tǒng)以及組織重塑過程,被認(rèn)為與機(jī)體血管內(nèi)皮功能異常有關(guān)[10]。為了進(jìn)一步提高糖尿病腎病患者的早期診斷,本研究探討分析了血清miR-21、YKL-40在2型糖尿病腎病患者中的表達(dá)及其意義。

本文結(jié)果顯示,DM組、DN組患者血清miR-21、YKL-40水顯著高于對照組,而DN組患者血清miR-21、YKL-40水平顯著高于DM組;DN患者血清miR-21、YKL-40水平與FBG、HbA1c、UAER呈顯著正相關(guān)關(guān)系,與ALB、Hb、eGFR呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。與研究報道結(jié)果相似[11],提示在糖尿病腎病患者血清miR-21以及YKL-40水平顯著升高,且糖尿病血清miR-21以及YKL-40水平表達(dá)與糖尿病腎病患者疾病進(jìn)展密切相關(guān),血清miR-21以及YKL-40可能參與到了糖尿病腎病疾病發(fā)生發(fā)展過程。此外,分析血清miR-21、YKL-40對DN的診斷價值,結(jié)果顯示,ROC曲線下面積分別為0.918、0.851。表明血清miR-21、YKL-40對糖尿病患者是否并發(fā)糖尿病腎病具有良好的診斷價值。

綜上所述,糖尿病腎病患者血清miR-21、YKL-40表達(dá)異常升高,且血清miR-21、YKL-40表達(dá)與患者糖尿病腎病疾病進(jìn)展密切相關(guān),對糖尿病腎病具有良好的臨床診斷價值,可能成為糖尿病腎病臨床診斷和治療的潛在生物學(xué)標(biāo)志物,值得臨床進(jìn)一步深入研究分析。