王妍雨，張 燕

(1.山東省博興縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務(wù)中心，山東 博興 256500；2.天津市漢邦植物保護(hù)劑有限責(zé)任公司，天津 301600)

30%丙硫菌唑·啶氧菌酯懸浮劑是由20%丙硫菌唑和10%啶氧菌酯混配而成，丙硫菌唑的化學(xué)名稱：2-(2-(1-氯環(huán)丙基)-3-(2-氯苯基)-2-羥丙基-1-2-二氫-3-1，2，4-三唑-3-硫代。是三唑硫酮類殺菌劑，為甾醇脫甲基化(麥角甾醇生物合成)抑制劑；可提供很好的內(nèi)吸作用，優(yōu)異的保護(hù)、治療和鏟除活性，持效期長，對作物安全。丙硫菌唑主要用于谷物、大豆、油菜、水稻、花生、甜菜和蔬菜等，殺菌譜很廣，幾乎對谷物上所有真菌病害都有優(yōu)異防效，既可葉面噴霧，也可作種子處理。

啶氧菌酯的化學(xué)名稱：E)-3-甲氧基-2-{2-[6-(三氟甲基)-2-吡啶氧甲基]苯基}丙烯酸甲酯(E)-3-甲氧-2-[2-[6-(三氟甲基)-2-吡啶氧甲基]苯基}丙烯酸甲酯(E)-α-甲氧基亞甲基-2-(3-三氟甲基-2-吡啶氧甲基)乙酸苯甲酯。啶氧菌酯屬于內(nèi)吸廣譜殺菌劑，可以通過阻止細(xì)胞色素b和c1的Qo中心的電子轉(zhuǎn)移來抑制線粒體呼吸，有鏟除、保護(hù)、滲透和內(nèi)吸作用。防治對14-脫甲基化酶抑制劑、苯甲酰胺類、二羧酰胺類和苯并咪唑類產(chǎn)生抗性的菌株有效。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑 日本島津公司LC-10A型高效液相色譜儀、具紫外可變波長檢測器、N2000工作站、過濾器、超聲波清洗器。

乙腈(色譜純)，重蒸二次蒸餾水，丙硫菌唑標(biāo)樣(純度≥98.0%)、啶氧菌酯標(biāo)樣(純度≥98.0%)，30%丙硫菌唑·啶氧菌酯懸浮劑。

1.2 色譜分析條件 色譜柱：6.5 mm×250 mm(i.d.)，5 um，ZapchromTmC18不銹鋼色譜柱；柱溫：室溫；流動相：乙腈：水(體積比70∶30)；流速1.0 mL/min；檢測波長254 nm；進(jìn)樣體積10 μL.保留時(shí)間：丙硫菌唑6.532 min，啶氧菌酯7.998 min。在上述色譜條件下，30%丙硫菌唑·啶氧菌酯懸浮劑的液相色譜圖(圖1、2)。

圖2 樣品液相色譜圖

1.3 溶液的配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制 稱取丙硫菌唑標(biāo)樣0.04 g(準(zhǔn)確至0.2 mg)，啶氧菌酯標(biāo)樣0.02 g(準(zhǔn)確至0.2 mg)、置于100 mL容量瓶中，加入乙腈30 mL，在超聲波清洗器上脫氣10 min，使標(biāo)樣全部溶解，冷卻至室溫，再用流動相定容，搖勻，用0.22 μm的濾膜過濾器備用。

1.3.2 試樣溶液的配制 稱取30%丙硫菌唑·啶氧菌酯懸浮劑試樣0.20 g(準(zhǔn)確至0.2 mg)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈超聲溶解，冷卻至室溫，再用流動相定容，搖勻，用0.22 μm的濾膜過濾器備用。

1.3.3 測定 采用上述色譜條件，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針的響應(yīng)值變化<1.5%后，再按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液順序進(jìn)樣分析。標(biāo)樣溶液和試樣溶液的色譜圖分別(圖1、2)。

1.3.4 計(jì)算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中丙硫菌唑(啶氧菌酯)的峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中丙硫菌唑(啶氧菌酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)按下式計(jì)算：

式中：

A1為標(biāo)樣溶液中丙硫菌唑(啶氧菌酯)峰面積的平均值；

A2為試樣溶液中丙硫菌唑(啶氧菌酯)峰面積的平均值；

m1為標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2為試樣的質(zhì)量，g；

p為標(biāo)樣中丙硫菌唑(啶氧菌酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 流動相的選擇 用不同比例的甲醇、水作為流動相對試樣進(jìn)行分離檢測，丙硫菌唑和啶氧菌酯峰形不好，分離不好；選擇不同比例的甲醇、乙腈、水作為流動相對試樣進(jìn)行多次分離檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：用流動相溶樣品，乙腈、水作為流動相分離效果好，出峰時(shí)間短，而且色譜峰尖銳。綜合以上因素，最終選定乙腈、水(體積比為70∶30)作為流動相效果最佳。

2.1.2 檢測波長的選擇 對丙硫菌唑和啶氧菌酯標(biāo)樣溶液分別進(jìn)行紫外掃描，得到相應(yīng)的吸收波長與響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖。丙硫菌唑和啶氧菌酯的最大吸收波長分別在269、207 nm左右。當(dāng)選用269 nm波長時(shí)啶氧菌酯吸收較小，選用254 nm波長時(shí)，丙硫菌唑和啶氧菌酯均有較強(qiáng)吸收峰，同時(shí)雜質(zhì)響應(yīng)值小，流動相無吸收。因此，綜合考慮多種因素，最終選定254 nm作為檢測波長。

2.2 非分析物的干擾測定 溶劑空白：流動相。制劑空白溶液配制：稱取制劑空白 0.201 2 g ，置于100 mL容量瓶中，用乙腈超聲溶解，冷卻至室溫，再用流動相定容，搖勻，用0.22 μm的濾膜過濾器備用。

丙硫菌唑標(biāo)樣溶液配制：稱取丙硫菌唑標(biāo)樣0.040 2 g(準(zhǔn)確至0.2 mg)，置于100 mL容量瓶中，加入乙腈30 mL，在超聲波清洗器上脫氣10 min，使標(biāo)樣全部溶解，冷卻至室溫，再用流動相定容，搖勻，用0.22 μm的濾膜過濾器備用。

啶氧菌酯標(biāo)樣溶液配制：稱取啶氧菌酯標(biāo)樣0.020 5 g(準(zhǔn)確至0.2 mg)、置于100 mL容量瓶中，加入乙腈30 mL，在超聲波清洗器上脫氣10 min，使標(biāo)樣全部溶解，冷卻至室溫，再用流動相定容，搖勻，用0.22 μm的濾膜過濾器備用。

丙硫菌唑原藥溶液配制：稱取丙硫菌唑標(biāo)樣0.040 9 g(準(zhǔn)確至0.2 mg)，置于100 mL容量瓶中，加入乙腈30 mL，在超聲波清洗器上脫氣10 min，使標(biāo)樣全部溶解，冷卻至室溫，再用流動相定容，搖勻，用0.22 μm的濾膜過濾器備用。

啶氧菌酯原藥溶液配制：稱取啶氧菌酯標(biāo)樣0.020 7 g(準(zhǔn)確至0.2 mg)、置于100 mL容量瓶中，加入乙腈30 mL，在超聲波清洗器上脫氣10 min，使標(biāo)樣全部溶解，冷卻至室溫，再用流動相定容，搖勻，用0.22 μm的濾膜過濾器備用。

試樣溶液配制：稱取30%丙硫菌唑·啶氧菌酯懸浮劑試樣0.206 8 g(準(zhǔn)確至0.2 mg)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈超聲溶解，冷卻至室溫，再用流動相定容，搖勻，用0.22 μm的濾膜過濾器備用。

在1.2的色譜條件下，用島津 LC-10A型高效液相色譜儀進(jìn)行非分析物的干擾測定。(圖3～9)，溶劑空白、制劑空白、丙硫菌唑原藥在啶氧菌酯的出峰位置(Rt約8.0 min)無干擾峰，且啶氧菌酯標(biāo)樣、啶氧菌酯原藥、 試樣中啶氧菌酯的最小峰純度相似度均為 1.000 000，未檢測到不純物，表明目標(biāo)峰沒有其他非分析物的干擾；溶劑空白、制劑空白、啶氧菌酯原藥在丙硫菌唑的出峰位置(Rt 約 6.5 min)無干擾峰，且丙硫菌唑標(biāo)樣、丙硫菌唑原藥、試樣中丙硫菌唑的最小峰純度相似度均為 1.000 000，未檢測到不純物，表明目標(biāo)峰沒有其他非分析物的干擾。

﹤色譜圖﹥

圖3 溶劑空白液相色譜圖

﹤色譜圖﹥

圖4 制劑空白液相色譜圖

﹤色譜圖﹥

圖5 丙硫菌唑標(biāo)樣液相色譜圖

﹤色譜圖﹥

圖6 丙硫菌唑原藥液相色譜圖

﹤色譜圖﹥

圖7 啶氧菌酯標(biāo)樣液相色譜圖

﹤色譜圖﹥

圖8 啶氧菌酯原藥液相色譜圖

﹤色譜圖﹥

圖9 試樣液相色譜圖

2.3 特異性測定 溶劑空白：同 2.2；制劑空白溶液配制：同2.2；丙硫菌唑標(biāo)樣溶液配制：同 2.2；丙硫菌唑原藥溶液配制：同 2.2；啶氧菌酯標(biāo)樣溶液配制：同 2.2；啶氧菌酯原藥溶液配制：同 2.2；試樣溶液配制：同 2.2。

在1.2的色譜條件下，用島津 LC-10A型高效液相色譜儀進(jìn)行系統(tǒng)特異性測定。(圖 3～9)，溶劑空白、制劑空白、丙硫菌唑原藥在啶氧菌酯的出峰位置(Rt約8.0 min)無干擾峰，且啶氧菌酯標(biāo)樣、啶氧菌酯原藥、試樣中啶氧菌酯的最小峰純度相似度均為 1.000 000，未檢測到不純物，表明該方法特異性良好；溶劑空白、制劑空白、啶氧菌酯原藥在丙硫菌唑的出峰位置(Rt 約 6.5 min)無干擾峰，且丙硫菌唑標(biāo)樣、丙硫菌唑原藥、試樣中丙硫菌唑的最小峰純度相似度均為 1.000 000，未檢測到不純物，表明該方法特異性良好。

2.4 線性關(guān)系曲線的測定(表1、2) 分別配制5個(gè)不同質(zhì)量的丙硫菌唑、啶氧菌酯標(biāo)樣溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣測定。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，丙硫菌唑在100～410 mg/L、啶氧菌酯在170～330 mg/L范圍內(nèi)濃度與對應(yīng)的峰面積呈良好的線性關(guān)系，計(jì)算得到：

表1 丙硫菌唑線性范圍試驗(yàn)

丙硫菌唑的線性回歸方程為Y=7.103X-0.000 5，r=0.999 91；

啶氧菌酯的線性回歸方程為Y=5.589X-0.000 6，r=0.999 7。

由(表1)可知，當(dāng)丙硫菌唑濃度在0.11 mg/mL～0.40 mg/mL范圍內(nèi)時(shí)，丙硫菌唑濃度與對應(yīng)的峰面積呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為Y=7.103X-0.000 5，r=0.999 914。

由(表2)可知,當(dāng)啶氧菌酯濃度在0.10 mg/mL～0.50 mg/mL范圍內(nèi)時(shí)，啶氧菌酯濃度與對應(yīng)的峰面積呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為Y=3.563X-0.000 1，r=0.999 7。

2.5 精密度測定(表3) 在上述色譜條件下，對同一丙硫菌唑·啶氧菌酯樣品平行測定6次，丙硫菌唑和啶氧菌酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.08、0.10，變異系數(shù)分別為0.39%、0.95%，結(jié)果表明方法的精密度好。

表3 分析方法精密度試驗(yàn)

2.6 準(zhǔn)確度測定 在已知含量的樣品中分別加入適量的丙硫菌唑和啶氧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品，測其回收率，其平均回收率分別為99.4%和99.2%(表4)，此方法回收率較高，可以準(zhǔn)確分析制劑中丙硫菌唑和啶氧菌酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

表4 添加回收率測定結(jié)果

2 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在同一條件下測定兩種有效成分的目標(biāo)峰沒有其他非分析物的干擾，特異性良好，準(zhǔn)確度和精密度較高，線性關(guān)系良好，具有簡單、快速、準(zhǔn)確及分離效果好的優(yōu)點(diǎn)，是一種理想的分析方法。