趙冠宇，辛蕊華，仇正英，石 磊，王瑞瓊,2，邵 晶,2，吳國泰,2*，杜麗東,2*

1. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000

2. 隴藥產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新研究院，甘肅 蘭州 730000

3. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所，甘肅 蘭州 730050

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種由過度炎癥反應(yīng)引起的非特異性腸病，已被世界衛(wèi)生組織定義為難治性疾病。主要表現(xiàn)為從直腸開始出現(xiàn)潰爛并最終延伸至結(jié)腸近端，且伴有腹痛的血性腹瀉。近年來，UC 的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)逐年遞增，在亞洲地區(qū)尤為明顯[1-2]。UC 患者的正常生活受到嚴(yán)重影響，更令人擔(dān)憂的是UC 病程長且易反復(fù)發(fā)作，患者腸道癌變的風(fēng)險(xiǎn)遠(yuǎn)高于正常人[3-4]。目前，UC 發(fā)病機(jī)制尚未完全揭示，臨床治療藥物中5-氨基水楊酸類藥物（5-amino salicylic acid，5-ASA）應(yīng)用最廣、治療效果較好，但長期應(yīng)用存在一定的不良反應(yīng)。因此對新型治療藥物的需求與日俱增。

傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論將UC 定義為濕熱蘊(yùn)腸、肝脾虛弱、外邪入體導(dǎo)致出血性腹瀉，中藥的多靶點(diǎn)、低毒性的特點(diǎn)為破解UC 反復(fù)發(fā)作的治療困境提供可能。烏梅丸是出自東漢張仲景《傷寒論》的經(jīng)典方劑，由烏梅、花椒、細(xì)辛、干姜、黃連等10 味藥物組成，有緩肝調(diào)中、清上溫下之效，用于治療蛔厥久痢，距今已有近2000 年的用藥歷史[5]?，F(xiàn)今，烏梅丸用于治療多種胃腸疾病[6]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)烏梅丸對UC 有一定治療作用，但其對結(jié)腸上皮細(xì)胞焦亡的影響尚不清楚。核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）是NOD 樣受體家族（NOD-like receptors，NLRs）的重要成員，是先天免疫的核心之一?；罨腘LRP3 炎癥小體通過激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（cysteinasparate protease-1，Caspase-1），促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-1β 前體的活化，激活消皮素D（gasdermin D，GSDMD）觸發(fā)細(xì)胞焦亡[7]。研究發(fā)現(xiàn)，NLRP3 在UC 患者及不同方式誘導(dǎo)的UC 動(dòng)物模型中均異常表達(dá)。王康等[8]通過體外研究發(fā)現(xiàn)葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium salt，DSS）誘導(dǎo)24 h 后，人結(jié)直腸腺癌Caco-2 細(xì)胞和人正常結(jié)腸上皮NCM460 細(xì)胞的細(xì)胞膜完整性被破壞，細(xì)胞損傷明顯，細(xì)胞焦亡誘導(dǎo)蛋白GSDMD-N 的表達(dá)顯著升高，提示DSS 能夠誘導(dǎo)上皮細(xì)胞過量焦亡，破壞腸黏膜屏障誘發(fā)UC。本研究使用2% DSS 誘導(dǎo)建立UC 小鼠模型，ig 烏梅丸水煎液進(jìn)行干預(yù)，通過藥效指標(biāo)和NLRP3/Caspase-1/GSDMD 通路相關(guān)蛋白檢測，研究烏梅丸上皮細(xì)胞焦亡的影響，為烏梅丸治療UC 的推廣應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF 級雄性C57BL/6J 小鼠，6～7 周齡，購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號SYXK（甘）2019-0002。動(dòng)物于室溫（25.0±0.5）℃、相對濕度（55±5）%、自然光照/黑暗循環(huán)的環(huán)境下飼養(yǎng)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（2022-009）并在其指南下進(jìn)行。

1.2 藥材

烏梅丸（烏梅30 g、當(dāng)歸6 g、桂枝6 g、人參6 g、干姜9 g、制附子6 g、花椒5 g、細(xì)辛3 g、黃連9 g、黃柏6 g）按照《方劑學(xué)》組方，中藥飲片均購自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院楊錫倉主任中藥師分別鑒定為薔薇科植物梅Prunusmume(Sieb.) Sieb. et Zucc.的干燥近成熟果實(shí)、傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis(Oliv.)Diels 的干燥根、樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl 的干燥嫩枝、五加科植物人參PanaxginsengC.A. Mey.的干燥根和根莖、姜科植物姜ZingiberofficinaleRosc.的干燥根莖、毛茛科植物烏頭AconitumcarmichaeliiDebx.的子根的加工品、蕓香科植物花椒ZanthoxylumbungeanumMaxim.的干燥成熟果實(shí)、 馬兜鈴科植物北細(xì)辛Asarum heterotropoidesFr. Schmidt var.mandshuricum(Maxim.) Kitag.的干燥根和根莖、毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch.的干燥根莖、蕓香科植物黃皮樹PhellodendronchinenseSchneid.的干燥樹皮。

1.3 藥品與試劑

美沙拉嗪（批號GC16607）購自美國GLP BIO公司；DSS（批號S2839，相對分子質(zhì)量36 000～50 000）購自美國MP 公司；Occludin-1 兔多克隆抗體（批號66378-1-ig）購自美國Proteintech 公司；NLRP3 抗體（批號13158S）、Caspase-1 抗體（批號89332S）、GSDMD-N 抗體（批號10137S）、β-actin抗體（批號4970S）均購自美國CST 公司；山羊抗兔IgG 二抗（批號BF03008）、山羊抗鼠IgG 二抗（批號BF03001）均購自北京博奧龍免疫技術(shù)有限公司；小鼠IL-18 ELISA 試劑盒（批號JL20253）、IL-1β ELISA 試劑盒（批號JL18442）、二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）、ELISA 試劑盒（批號JL11855）均購自上海江萊生物公司；TUNEL 染色試劑盒（批號11684795910）購自瑞士羅氏公司。

1.4 儀器

CX-23 型光學(xué)顯微鏡（日本Olympus 公司）；ASP300S 型組織脫水機(jī)、RM2016 型石蠟切片機(jī)（德國Leica 公司）；Bead Ruptor 12 型組織研磨機(jī)（美國Omni International 公司）；5418R 型低溫離心機(jī)、BioPhotometer plu/D30 型核酸蛋白測定儀（德國Eppendorf 公司）；Gen5 型多功能酶標(biāo)儀（美國Bio-Tek 公司）；ProFlex 3×32 型熒光定量PCR 儀（購自美國Thermo Fisher Scientific 公司）；Quant Studio 5 型qRT-PCR 儀（美國ABI 公司）；PowerPac HC型電泳儀（美國Bio-Rad 公司）；DYCZ-40S 型轉(zhuǎn)膜槽（北京六一生物技術(shù)有限公司）。

2 方法

2.1 溶液的制備

2.1.1 烏梅丸給藥溶液的制備 烏梅丸全方用10倍量水浸泡30 min（制附子先煎30 min，人參隔水蒸30 min）后煎煮，武火煮沸后轉(zhuǎn)文火煎煮45 min，趁熱濾過。剩余藥渣再加入8 倍量水重復(fù)煎煮45 min，合并2 次藥液。濃縮后得到含生藥量1.3 g/mL藥液。經(jīng)HPLC 檢測烏梅丸水煎液中鹽酸黃柏堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.18 mg/g、鹽酸黃連堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.72 mg/g、鹽酸小檗堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.84 mg/g，均符合《中國藥典》2020 年版一部中烏梅丸含量檢測標(biāo)準(zhǔn)。

2.1.2 美沙拉嗪給藥溶液的制備 稱取0.625 g 美沙拉嗪溶于25 mL 5%羧甲基纖維素鈉中，配制成25 mg/mL 的美沙拉嗪溶液。

2.1.3 2% DSS 溶液的制備 稱取2 g DSS 溶于水，并加水至100 mL 配制成2% DSS 溶液，于4 ℃冰箱保存待用。

2.2 動(dòng)物分組、造模與給藥

小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d 后，按照隨機(jī)數(shù)字表法將30 只小鼠分為對照組、模型組、美沙拉嗪（0.5 g/kg）組和烏梅丸低、高劑量（13.04、26.09 g/kg，分別相當(dāng)于臨床劑量的1、2 倍）組，每組6 只。對照組小鼠自由飲水，其余各組自由飲用2% DSS 溶液復(fù)制UC 小鼠模型，同時(shí)各給藥組ig 相應(yīng)藥物，1 次/d，連續(xù)7 d。末次給藥后，所有動(dòng)物禁食不禁水24 h，異氟烷吸入麻醉，摘眼球取血，脫頸椎處死小鼠，取完整結(jié)腸測量長度并拍照，同時(shí)取結(jié)腸后段2～3 cm 處剖開拍照，剩余結(jié)腸分段保存于4%多聚甲醛和?80 ℃冰箱待用。

2.3 疾病活動(dòng)指數(shù)（disease activity index，DAI）評分

每天稱定小鼠體質(zhì)量，觀察糞便和便血情況。參照Zhou 等[9]方法進(jìn)行DAI 評分。

2.4 結(jié)腸長度測量及結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)（colon mucosa damage index，CMDI）評分

取各組小鼠完整結(jié)腸，測量并記錄結(jié)腸長度。取2～3 cm 結(jié)腸段沿腸系膜縱向剖開，生理鹽水沖去結(jié)腸內(nèi)糞便，觀察結(jié)腸表面損傷情況。參考Cheng等[10]方法進(jìn)行CMDI 評分。

2.5 組織學(xué)評價(jià)

取4%多聚甲醛固定的結(jié)腸組織，脫水后石蠟包埋，切成5 μm 薄片，進(jìn)行蘇木素-伊紅（HE）染色。于光學(xué)顯微鏡下觀察組織形態(tài)并參照Almarzooqi 等[11]評分方法進(jìn)行組織病理學(xué)評分。

2.6 TUNEL 染色

取“2.5”項(xiàng)下組織石蠟塊，按5 μm 連續(xù)切片，按TUNEL 染色試劑盒說明書染色后，于熒光顯微鏡下觀察并拍照。

2.7 qRT-PCR 檢測結(jié)腸組織Occludin-1、IL-18、IL-1β、NLRP3、GSDMD 和Caspase-1 mRNA 表達(dá)

取?80 ℃冰箱保存的結(jié)腸組織，用TRIZOL 提取組織中總RNA。按照試劑盒說明書合成cDNA，進(jìn)行qRT-PCR 分析。反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性10 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，40 個(gè)循環(huán)。使用2???Ct計(jì)算目的基因相對表達(dá)量，引物序列見表1。

表1 引物序列Table 1 Primer sequences

2.8 Western blotting 檢測Occludin-1、NLRP3、GSDMD-N 和Caspase-1 蛋白表達(dá)

取?80 ℃保存的結(jié)腸組織，加入800 μL 預(yù)冷的蛋白提取混合液（RIRP 緩沖液-蛋白酶抑制劑-磷酸酶抑制劑100∶1∶1）及研磨珠4～5 粒，組織研磨機(jī)研磨20 s，制備組織勻漿。4 ℃、12 000 r/min 離心5 min，取上清液。采用BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度后，加入PBS 及Loading Buffer 于100 ℃金屬浴中進(jìn)行蛋白變性10 min。蛋白樣品經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF膜，5%脫脂牛奶封閉后，加入一抗孵育過夜，隔天加入二抗孵育1 h，滴加ECL 發(fā)光液，暗室內(nèi)曝光，掃描顯影條帶，采用Image J 軟件分析目的蛋白的灰度值并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2.9 ELISA 檢測外周血DAO 活性和IL-18、IL-1β含量

取各組小鼠血液，4 ℃、3500 r/min 離心15 min，吸取上層血清，按照ELISA 試劑盒說明書檢測血清DAO 活性和IL-18、IL-1β 含量。

2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用GraphPad Prism 9軟件作圖，用Image J及Imagepro plus 6.0 軟件對HE 染色、TUNEL 染色、Western blotting 圖片進(jìn)行處理。用IBM SPSS 27 軟件通過獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性統(tǒng)計(jì)，數(shù)據(jù)表示為±s。

3 結(jié)果

3.1 烏梅丸對UC 小鼠一般狀態(tài)和DAI 評分的影響

與對照組比較，模型組小鼠造模第3 天起出現(xiàn)倦怠、扎堆、肛門附近毛發(fā)雜亂等變化，4～7 d 出現(xiàn)逐漸加重的便血現(xiàn)象，2 d 后體質(zhì)量下降逐漸加劇，并于第5 天起具有顯著性差異（P＜0.05、0.01，圖1）；同時(shí)DAI 評分升高，并于第3 天起具有顯著性差異（P＜0.01）。與模型組比較，美沙拉嗪和烏梅丸能顯著減輕小鼠體質(zhì)量下降（P＜0.05、0.01），延緩DSS 導(dǎo)致的小鼠便血，減輕便血癥狀，顯著降低小鼠DAI 評分（P＜0.05、0.01）。

圖1 烏梅丸對UC 小鼠體質(zhì)量和DAI 評分的影響 (±s, n = 6)Fig. 1 Effect of Wumei Wan on body weight and DAI score of UC mice (±s, n = 6)

3.2 烏梅丸對UC 小鼠結(jié)腸長度和CMDI 評分的影響

如圖2 所示，與對照組比較，模型組小鼠結(jié)腸長度顯著縮短（P＜0.01），CMDI 評分顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，美沙拉嗪組和烏梅丸高劑量組小鼠結(jié)腸長度顯著增加（P＜0.01），各給藥組CMDI 評分顯著降低（P＜0.05、0.01）。

圖2 烏梅丸對UC 小鼠結(jié)腸長度和CMDI 評分的影響 (±s, n = 6)Fig. 2 Effect of Wumei Wan on colonic length and CMDI scores of UC mice (±s, n = 6)

3.3 烏梅丸對UC 小鼠結(jié)腸組織病理變化的影響

如圖3 所示，對照組小鼠結(jié)腸中未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤，絨毛和隱窩結(jié)構(gòu)良好，上皮細(xì)胞層完整，黏膜下層未見明顯水腫。與對照組比較，模型組小鼠結(jié)腸黏膜下層出現(xiàn)明顯的炎癥細(xì)胞浸潤，黏膜下層間隙增大，隱窩結(jié)構(gòu)損傷，腸上皮細(xì)胞損傷，病理組織學(xué)評分顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，烏梅丸高劑量組炎癥細(xì)胞浸潤面積降低，黏膜下層水腫緩解，絨毛和隱窩結(jié)構(gòu)完整，上皮細(xì)胞層損傷修復(fù)，病理組織學(xué)評分顯著降低（P＜0.01），作用優(yōu)于低劑量組。

圖3 烏梅丸對UC 小鼠結(jié)腸組織病理變化的影響 (±s, n = 3)Fig. 3 Effect of Wumei Wan on pathological changes of colon tissue in UC mice (±s, n = 3)

3.4 烏梅丸對UC 小鼠腸黏膜通透性的影響

如圖4 所示，與對照組比較，模型組小鼠外周血DAO 活性顯著升高（P＜0.01），結(jié)腸組織Occludin-1 蛋白和mRNA 表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組小鼠外周血DAO活性均顯著下降（P＜0.01），結(jié)腸組織Occludin-1mRNA 表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.01），美沙拉嗪組和烏梅丸高劑量組結(jié)腸組織Occludin-1 蛋白表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05、0.01），提示烏梅丸能修復(fù)腸黏膜屏障，降低腸黏膜通透性。

圖4 烏梅丸對UC 小鼠外周血DAO 活性 (A)、結(jié)腸組織Occludin-1 mRNA (B) 和蛋白 (C) 表達(dá)的影響 (±s, n = 3)Fig. 4 Effect of Wumei Wan on DAO activity (A) in peripheral blood, Occludin-1 mRNA (B) and protein (C) expressions in colon tissue of UC mice (±s, n = 3)

3.5 烏梅丸對UC 小鼠腸上皮細(xì)胞的保護(hù)作用

如圖5 所示，與對照組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中受損死亡的細(xì)胞數(shù)量增加，死亡細(xì)胞比例顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組結(jié)腸組織中細(xì)胞死亡數(shù)量減少，死亡細(xì)胞比例顯著降低（P＜0.05、0.01），且烏梅丸高劑量組作用優(yōu)于低劑量組。

圖5 烏梅丸對UC 小鼠腸上皮細(xì)胞的保護(hù)作用 (±s, n = 3)Fig. 5 Protective effect of Wumei Wan on intestinal epithelial cells in UC mice (±s, n = 3)

3.6 烏梅丸對UC 小鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞焦亡關(guān)鍵炎癥因子的影響

如圖6 所示，與對照組比較，模型組小鼠外周血IL-18、IL-1β 含量顯著升高（P＜0.01），結(jié)腸組織IL-18、IL-1βmRNA 表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組外周血IL-18、IL-1β 含量和結(jié)腸組織IL-18、IL-1βmRNA 表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05、0.01）。

圖6 烏梅丸對UC 小鼠外周血IL-1β、IL-18 含量 (A) 和結(jié)腸組織IL-1β、IL-18 mRNA 表達(dá) (B) 的影響 (±s, n = 3)Fig. 6 Effect of Wumei Wan on IL-1β, IL-18 levels in peripheral blood (A) and IL-1β, IL-18 mRNA expressions in colon tissue(B) of UC mice (±s, n = 3)

3.7 烏梅丸對UC 小鼠結(jié)腸組織NLRP3/Caspase-1/GSDMD 焦亡通路的影響

如圖7 所示，與對照組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織NLRP3、Caspase-1、GSDMD的mRNA 和蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組小鼠結(jié)腸組織NLRP3、Caspase-1、GSDMDmRNA 表達(dá)水平顯著下降（P＜0.01），Caspase-1 蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01），美沙拉嗪組和烏梅丸高劑量組NLRP3 和GSDMD-N 蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.01），提示烏梅丸能夠抑制DSS誘導(dǎo)NLRP3/Caspase-1/GSDMD 通路的過度活化進(jìn)而抑制細(xì)胞焦亡的發(fā)生。

圖7 烏梅丸對UC 小鼠結(jié)腸組織NLRP3/Caspase-1/GSDMD 焦亡通路的影響 (, n = 3)Fig. 7 Effect of Wumei Wan on NLRP3/Caspase-1/GSDMD pyroptosis pathway in colon tissue of UC mice (±s, n = 3)

4 討論

UC 發(fā)病率的全球性升高帶來的醫(yī)療壓力已經(jīng)引起廣泛關(guān)注，尚未明確的復(fù)雜發(fā)病機(jī)制為UC 的治療帶來了重大阻礙。美沙拉嗪作為臨床最常用治療藥物，使用頻率逐年增加，同時(shí)暴露出一定的使用限制[12-13]。傳統(tǒng)中草藥成為UC 治療的新選擇，其中烏梅丸等中藥方劑在治療UC 上被寄予厚望[14-15]。烏梅丸出自張仲景所著的《傷寒論》，有溫上清下、安蛔止痛之效[16]，對治療腸道疾病，尤其對炎癥性腸病有顯著療效[17]。核因子-κB、Notch 等通路已被研究證實(shí)是烏梅丸治療UC 的作用靶點(diǎn)，充分展現(xiàn)了中藥多靶點(diǎn)治療的優(yōu)勢[18-19]。本研究在已有研究的基礎(chǔ)上，構(gòu)建UC 小鼠模型并ig 烏梅丸水煎液，發(fā)現(xiàn)烏梅丸能緩解DSS 誘導(dǎo)的小鼠體質(zhì)量下降、便血、結(jié)腸縮短等癥狀，修復(fù)腸道黏膜屏障的病理損傷，對UC 有治療作用。

腸黏膜屏障具有維護(hù)腸道穩(wěn)態(tài)，控制腸內(nèi)外物質(zhì)交換的功能。腸上皮細(xì)胞和細(xì)胞間連接構(gòu)成的完整結(jié)構(gòu)是維持屏障功能的重要保證[20]。黏膜通透性的增加是UC 發(fā)病的關(guān)鍵機(jī)制之一，促進(jìn)腸道修復(fù)、恢復(fù)腸黏膜通透性被認(rèn)為是UC 治愈中的關(guān)鍵[21-22]。本研究發(fā)現(xiàn)烏梅丸組小鼠血清DAO 活性顯著減少，結(jié)腸組織中Occludin-1 蛋白和mRNA 表達(dá)水平顯著回升，提示烏梅丸通過促進(jìn)緊密連接表達(dá)，促進(jìn)腸黏膜屏障修復(fù)。HE 和TUNEL 染色發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠腸道中腫脹破裂的上皮細(xì)胞比例增加，死亡的細(xì)胞出現(xiàn)脫離現(xiàn)象，而烏梅丸能減少結(jié)腸上皮細(xì)胞死亡，維持上皮屏障結(jié)構(gòu)完整性，這一發(fā)現(xiàn)證明了上皮細(xì)胞在腸黏膜屏障的重要作用，為UC 的相關(guān)研究提供了新的切入點(diǎn)。

上皮細(xì)胞的增殖分化、衰老以及損傷細(xì)胞的脫落共同維持腸道上皮屏障的穩(wěn)定，保證腸道功能的同時(shí)維持腸道細(xì)胞活力[23]。Yan 等[24-25]研究發(fā)現(xiàn)，烏梅丸能夠通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化、維持上皮細(xì)胞增殖和凋亡間的平衡等機(jī)制緩解UC。細(xì)胞焦亡是一種較為獨(dú)特的細(xì)胞程序性死亡的方式，表現(xiàn)為細(xì)胞不斷脹大直至細(xì)胞膜破裂，并伴隨細(xì)胞內(nèi)炎癥因子的釋放，能夠進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)。上皮細(xì)胞過度焦亡造成上皮細(xì)胞層損傷，同時(shí)加劇腸道內(nèi)的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致UC 的加劇[26]。本研究通過檢測血清和組織中參與細(xì)胞焦亡的炎癥因子IL-1β、IL-18 的表達(dá)，以及結(jié)腸中關(guān)鍵因子NLRP3、Caspase-1、GSDMD 蛋白和mRNA 表達(dá)，減少上皮細(xì)胞焦亡比例。

本研究結(jié)果表明，烏梅丸能夠減輕由DSS 誘導(dǎo)的小鼠腸道黏膜病理損傷、逆轉(zhuǎn)便血及體質(zhì)量降低等病理現(xiàn)象，其作用機(jī)制可能是通過抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD 信號通路發(fā)揮修復(fù)腸道上皮屏障、緩解腸道炎癥損傷的作用。本研究結(jié)果為烏梅丸作為UC 的臨床有效治療藥物提供理論基礎(chǔ)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突