邢亞麗

南陽市中心醫(yī)院口腔科 (河南 南陽 473000)

作為臨床中較為多發(fā)的疾病之一，牙科疾病屬于常見性疾病，而牙周炎是其中一類，該疾病的形成因素與菌斑性微生物感染具有相關(guān)性。牙周牙髓病變是發(fā)生在患者牙髓組織以及牙周組織的一種細(xì)菌感染性疾病，該疾病會(huì)對(duì)患者的牙周牙髓以及周圍的組織造成損傷，從而使得患者出現(xiàn)牙齒缺失的情況[1]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，牙周牙髓病變疾病的發(fā)生主要是由于牙周病晚期或者根尖周病的發(fā)生所形成的，因此該疾病的臨床表現(xiàn)會(huì)呈現(xiàn)多樣性、復(fù)雜性，涉及的病變組織也較為的廣泛；同時(shí)，隨著患者患牙的病變情況不斷加重，就會(huì)導(dǎo)致患者病情越加復(fù)雜，這也就使得臨床上對(duì)于疾病病因的確定以及治療難度顯著的提升[2]。 因此，本研究就通過對(duì)牙周牙髓病變與牙周病原菌感染之間的相關(guān)性進(jìn)行研究分析，通過對(duì)研究納入的所有患牙采取聚合酶鏈反應(yīng)檢測病原菌感染情況，同時(shí)對(duì)本次研究的結(jié)果采取統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。具體研究結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料本次研究隨機(jī)性的抽取2021年3月-2022年8月期間在我院進(jìn)行治療的30例牙周牙髓病變患者，該30例患者中出現(xiàn)病變的患牙總數(shù)量為50顆，選取其治療的50顆患牙作為本次研究的觀察對(duì)象(觀察組)；所有患者均通過采取影像學(xué)檢查、臨床口腔?？茩z查以及病史檢查作為臨床診斷的參考依據(jù)。同時(shí)選擇同期在我院牙科就診接受牙齒矯正或者其他牙齒疾病治療的患者35例，選取其治療的患牙35顆作為本次研究的對(duì)照對(duì)象(對(duì)照組)。入院時(shí)，分別給與觀察組和對(duì)照組患者進(jìn)行探診初學(xué)、齦溝出血指數(shù)、牙周袋探診深度、菌斑指數(shù)等臨床檢查，通過分析發(fā)現(xiàn)，兩組患者的臨床資料比較不存在顯著的差異性(P>0.05)，詳見表1。

表1 兩組患者入院時(shí)各項(xiàng)臨床資料對(duì)比情況

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者的患牙不具有齲齒疾病、牙微裂、不全壓裂等情況的發(fā)生。排除標(biāo)準(zhǔn)：患者在三個(gè)月時(shí)間內(nèi)服用過抗菌藥物治療 ；患者的疾病類型為隱裂患者以及非齲性疾病者。

1.2 研究方法

1.2.1 研究樣品的收集和處置 首先對(duì)參與本次研究的30例牙周牙髓病變患者的患牙進(jìn)行樣品的采集，收集患者的患牙50顆。樣品的采集需要處于無菌的環(huán)境下，由樣品采集人員對(duì)兩組的離體牙進(jìn)行開髓、去除冠髓、揭頂以及擴(kuò)管等相應(yīng)的操作，然后再對(duì)離體牙的根尖孔進(jìn)行石蠟封閉性操作，并通過其根尖孔往內(nèi)注入硫乙醇酸鹽溶液，需要注意的是注入的含量需要控制在少量的范圍內(nèi)；隨即操作人員采用無菌紙尖在離體牙上進(jìn)行采樣，無菌紙尖需要放入至硫乙醇酸鹽溶液內(nèi)1毫升，將其進(jìn)行保存，需要注意的是關(guān)于無菌紙尖的采樣需要反復(fù)進(jìn)行兩次；對(duì)于觀察組的樣品需要采取探針采樣的方式，收集1毫克樣品與牙菌斑進(jìn)行充分的混勻，混勻后將混勻物放置入離心管內(nèi)保存，離心管內(nèi)含有1毫升的硫乙醇酸鹽液，保存完好后將離心管放置在-20℃的環(huán)境內(nèi)進(jìn)行冷凍保存，用以留存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 聚合酶鏈反應(yīng)檢測病原菌微生物DNA 針對(duì)研究樣品進(jìn)行DNA的抽提，主要是采聚合酶鏈反應(yīng)的方式進(jìn)行檢測，具體步驟為：將留存?zhèn)溆玫碾x心管樣本先進(jìn)行樣本的解凍操作，待樣品完全解凍后將其進(jìn)行離心操作處理5分鐘，速度為1000r/min，離心結(jié)束后清除紙尖以及離心液的上清；隨后采用上海陽關(guān)試劑有限公司生產(chǎn)的DNA Minikit試劑盒對(duì)根尖周組織的DNA進(jìn)行抽提，DNA的抽提嚴(yán)格的按照試劑盒的操作說明書進(jìn)行操作。針對(duì)聚合酶鏈反應(yīng)的擴(kuò)增，首先需要根據(jù)細(xì)菌通用物引物形成全長16SrDNA產(chǎn)物，并將該產(chǎn)物作為模板。因此對(duì)于目標(biāo)病原微生物DNA擴(kuò)增而言，就需要采取細(xì)菌特異引物，即PCR反應(yīng)體系(50μl)[3]。

1.2.3 電池的檢驗(yàn) PCR擴(kuò)增放大會(huì)得到特異性的DNA產(chǎn)物，該產(chǎn)物經(jīng)過電池的檢驗(yàn)過后，再采取核算染料的浸染，浸染時(shí)間為40分鐘，對(duì)于染色后的DNA產(chǎn)物需要認(rèn)真仔細(xì)的查看其存在的電泳條帶，并對(duì)觀察到的電泳條帶進(jìn)行拍照存儲(chǔ)資料。隨后再將DNA產(chǎn)物上的電泳條帶進(jìn)行切膠，需要注意的是切膠的電泳條帶一定是具有典型性的條帶，將切割好的條帶放置入滅菌的雙蒸水中，然后根據(jù)克隆的測試順序依次的將條帶進(jìn)行回收，對(duì)于克隆測試的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，分析的載體主要為Gen-bank，從而分析出該DNA產(chǎn)物中存在的病原菌的類型[4]。

1.2.4 P C R 引物 針對(duì)聚合酶鏈反應(yīng)的擴(kuò)增，細(xì)菌通用物引物形成全長1 6 S r D N A 產(chǎn)物，故將該產(chǎn)物作為模板，即1 6 S r D N A；而在牙髓感染的病原菌也是將1 6 S r D N A 作為通用性模板進(jìn)行應(yīng)用。對(duì)于牙髓感染有關(guān)的微生物，梭桿菌、牙髓卟啉單胞菌、牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌以及福賽類桿菌的引物長度區(qū)間范圍為3 1 5-1 5 0 6(h P)、引物對(duì)為(5＇→3＇)。病原菌的P C R 引物序列則具體為：細(xì)菌通用性16SrDNA：引物對(duì)F:AGAGTTGAATCCTGGCTCAG/R:A C C G G C T A C C T T G T T G T T A C G A C T T、引物長度為1506hP；梭桿菌：引物對(duì)F:AGAGTTTGAATCCTGGCTCAG/R:CTCATCGTGCACAGAATTGCTG、引物長度為360hP；牙密螺旋體：引物對(duì)F:TAAATACCGAATTGTGCTCATTTACAT/R:TC A A A G A A G C AT TCCCTCT TCT TCT TA、引物長度為3 1 5 h P；牙髓感染相關(guān)的微生牙髓卟啉性單胞菌：引物對(duì)F:GCTGCAGCTCAACTGTAGTC/R:CCGCTTCATGTCACCATGTC、引物長度為6 7 1 h P ； 牙齦卟啉單胞菌： 引物對(duì)F:AGGCAGCTTCCATACTGCG/R:ACTGTTAGCAACTACCGATGT、引物長度為4 0 5 h P ； 中間普氏菌： 引物對(duì)F:TTTGTGGGGAGTAAAGCGGG/TCAACATCTCTGTATCCTGCGT、引物長度為5 7 6 h P ； 福賽類桿菌： 引物對(duì)F:GCGTATGTAACCTGCCCGCA/R:TGCTTCAGTGTCATTATAGGT、引物長度為642hP[5-6]。

1.3 觀察指標(biāo)本次研究中主要就觀察組和對(duì)照組患者患牙的病原菌陽性結(jié)果以及病原菌類型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果分析牙周牙髓病變與牙周病原菌感染的相關(guān)性，從而為牙周牙髓病變的診斷和治療提供參考依據(jù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 24.0軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果分析。計(jì)量資料采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”(±s)表示，使用t進(jìn)行檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用百分率[例(%)]表示，使用χ2進(jìn)行檢驗(yàn)，當(dāng)P<0.05時(shí)視為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患牙的病原菌陽性對(duì)比通過研究數(shù)據(jù)顯示，本次研究的50顆牙周牙髓病變患牙中發(fā)生病原菌感染的患牙有23顆(46%)，而對(duì)照組患牙的病原菌感染為0株，故對(duì)照組未檢測出病原菌。見表2。

表2 兩組患牙的病原菌陽性對(duì)比[例(%)]

2.2 觀察組患牙的病原菌類型對(duì)比觀察組患牙的病原菌感染為26株，具體的株型分別有：具梭桿菌2株(7.69%)、牙髓卟啉單胞菌3株(11.54%)、牙齦卟啉單胞菌4株(15.38%)、中間普氏菌6株(23.08%)、福賽類桿菌11株(42.31%)。詳見表3。

表3 觀察組患牙的病原菌類型對(duì)比

3 討 論

牙周牙髓病變屬于一種聯(lián)合性病變，主要是指同一牙齒牙周周圍以及牙髓組織等均同時(shí)出現(xiàn)了病變的情況[7]。牙周牙髓病變的原因是由于牙髓與牙周下根管與根尖孔之間的關(guān)系是彼此連接、彼此作用，互為一體，這也就導(dǎo)致了某一方受到感染后，發(fā)生感染的牙髓與牙周均會(huì)出現(xiàn)不同情況下的交叉感染，這種感染是以厭氧菌為主要的感染菌，在厭氧菌的交叉感染下，牙周以及牙髓出現(xiàn)病變的部分就會(huì)出現(xiàn)擴(kuò)散，從而影響到更多的區(qū)域，形成聯(lián)合性的病變情況[8]。對(duì)于牙周牙髓病變來說，病變會(huì)導(dǎo)致牙周炎和牙髓炎的發(fā)生時(shí)間在同一期，并且臨床上牙周炎和牙髓炎的表現(xiàn)特征主要為患者出現(xiàn)疼痛以及腫脹。而對(duì)于牙周牙髓病變而言。該病變疾病的臨床表現(xiàn)特征主要為竇道的形成、溢膿、疼痛紅腫等。因此該疾病的病程較為復(fù)雜，牽涉的范圍也較為廣泛，這也就導(dǎo)致了臨床上對(duì)于該疾病的治療也較為漫長，治療的效果也會(huì)受到影響，從而無法有效的達(dá)到預(yù)期的效果[9]。

針對(duì)牙周牙髓病變情況，臨床中可以采取牙周探查的方式對(duì)患者進(jìn)行診斷，由于牙周探查能夠直接的觸及到患者的牙周內(nèi)部，即根尖孔部位，因此當(dāng)患者的牙齒出現(xiàn)松動(dòng)的情況時(shí)，探查部位會(huì)出現(xiàn)疼痛的感覺[10]。此外，在臨床中也能夠通過對(duì)患者采取X線檢查的方式來顯示患者的病變部位。雖然目前臨床上認(rèn)為治療牙周牙髓病變的關(guān)鍵在于能夠采取合適的方法進(jìn)行治療，但是由于該疾病的聯(lián)合性病變的特點(diǎn)，導(dǎo)致治療預(yù)后的效果較差[11]。這也就使得部分學(xué)者提出，在治療牙周牙髓病變疾病上首要的目標(biāo)是找出病變的源頭，在徹底消除源頭的感染源的前提下，在逐步的對(duì)周邊病變組織和部位進(jìn)行有效的處理，從而達(dá)到治愈的效果[12]。

本研究通過對(duì)我院進(jìn)行治療的30例牙周牙髓病變患者與同期就診進(jìn)行牙齒矯正或者其他牙齒疾病治療的35例患者進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)檢測病原菌感染，分析兩者之間的相關(guān)性；研究結(jié)果表明：本次研究的50顆牙周牙髓病變患牙中發(fā)生病原菌感染的患牙有23顆(46%)，這也進(jìn)一步的說明了病原菌感染在牙周牙髓病變中的影響性；此外，觀察組患牙的病原菌感染為26株，其中梭桿菌2株(7.69%)、牙髓卟啉單胞菌3株(11.54%)、牙齦卟啉單胞菌4株(15.38%)、中間普氏菌6株(23.08%)、福賽類桿菌11株(42.31%)，說明具梭桿菌、牙髓卟啉單胞菌、牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌以及福賽類桿菌這五種感染菌在牙周牙髓病變中屬于主要的致病菌。形成這種情況的原因主要是因?yàn)樽顬椴≡鄣母甙l(fā)地，牙髓和牙周交叉感染的現(xiàn)象頻發(fā)，且牙髓與牙周之間相互連接、深齲也常作用于牙髓上，誘發(fā)炎癥反應(yīng)；同時(shí)，牙髓還會(huì)受到牙周炎癥的作用，當(dāng)根尖孔部位裸露在外時(shí)，牙周出現(xiàn)炎癥的情況與牙髓出現(xiàn)炎癥的情況保持一致性，這也就使得這兩者呈現(xiàn)為相關(guān)性的趨勢[13]。伴隨著牙周炎癥情況的急劇下降，牙髓出現(xiàn)壞死的可能性也就會(huì)顯著的提升，這主要是由于根尖區(qū)的損傷性增加或牙齒咬合程度的松弛造成的，因此針對(duì)這種情況時(shí)，就需要積極的采取有效措施，防止牙周和牙髓的炎癥情況加劇[14]。目前，臨床上針對(duì)牙周牙髓病變情況的治療是根據(jù)治療病程的長度采取不同的措施，如病程短時(shí)先醫(yī)牙周，若牙周治療效果不佳時(shí)，根據(jù)牙髓的情況采取相應(yīng)的措施[15]。本次研究中，致病菌檢出最高的為福賽類性桿菌、最低為梭桿菌；而對(duì)照組的35顆患牙并未檢測出病原菌，這也就進(jìn)一步反映了牙周可疑性病原菌是牙周牙髓病變的主要感染方式。

綜上所述，牙周牙髓病變與牙周病原菌感染具有相關(guān)性，且牙周可疑致病微生物會(huì)導(dǎo)致牙周牙髓病變，因此在臨床中針對(duì)牙周牙髓病變的治療是基于消除感染源的前提下，再完善相應(yīng)的治療措施，從而提升臨床治療的效果。