王玲梅 徐 洪 陳雪貞 彭 穎

神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤,最多發(fā)于消化道,手術(shù)切除是最有效的治療方法;然而,對于還有其他有用的治療選擇[1]。生長抑素類藥物、部分分子靶向制劑及細(xì)胞毒性劑是神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的可用治療方法,鉑基化療被證明對治療神經(jīng)內(nèi)分泌癌有效[2];然而,其療效是暫時(shí)和有限的。實(shí)體瘤的基因突變逐漸成為指導(dǎo)臨床治療及判斷預(yù)后的指標(biāo)。當(dāng)前腫瘤基因突變研究主要熱點(diǎn)是免疫抑制劑通路和表皮生長因子通路。免疫抑制劑通路具有代表性的基因?yàn)殄e(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)(MMR)和PD1/PD-L1通路[3]。MMR/MSI不僅是泛癌種免疫治療的標(biāo)志物,并且其表達(dá)缺失適合PD-L1抗體治療。本研究主要研究GEP-NENs的錯(cuò)配修復(fù)蛋白缺失與PD-L1表達(dá)的臨床病理特征和相關(guān)臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2016年8月至2021年11月收治的47例GEP-NEN患者的腫瘤組織標(biāo)本。對入組病例均進(jìn)行了臨床病理特征方面的審查。

1.2 方法

把腫瘤組織蠟塊,切成4 μm切片,通過常規(guī)方法脫蠟,然后隨機(jī)分批次上DAKO公司全自動(dòng)免疫組化儀操作完成。一抗:PD-L1(DAKO anti-PD-L1 22C3),四種MMR蛋白標(biāo)記(福州邁新公司);二抗:使用DAKO 公司產(chǎn)品 。

1.3 免疫組化的染色評(píng)估

MLH1、PMS2、MSH2和MSH6均對細(xì)胞核進(jìn)行評(píng)估。4種MMR蛋白均陽性,即微衛(wèi)星穩(wěn)定(MSS);若其中任意一種或幾種蛋白缺失則判定微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)。評(píng)估PD-L1陽性腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞占總腫瘤細(xì)胞的百分比,陽性表達(dá)定義為≥1%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,組間采用χ2或Fisher確切概率法,計(jì)數(shù)資料用例(%)表示。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GEP-NENs患者的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與其臨床病理特征的相關(guān)性

47例GEP-NENs中9例MSI,38例MSS,分別占總數(shù)的19.1%和80.9%。MLH1表達(dá)缺失4例,PMS2表達(dá)缺失6例(其中4例伴隨MLH1表達(dá)缺失),MSH2表達(dá)缺失3例,MSH6表達(dá)缺失3例(均伴隨MSH2表達(dá)缺失)。MSI和MSS患者的年齡、性別、腫瘤部位、WHO分級(jí)、臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05),見表1。

表1 47例GEP-NETs患者微衛(wèi)星狀態(tài)與其臨床病理特征的關(guān)系(例,%)

2.2 PD-L1表達(dá)與其臨床病理特征的相關(guān)性分析

47例GEP-NENs組織中PD-L1表達(dá)陽性24例,占比51.1%;陰性23例,占比48.9%。PD-L1表達(dá)與腫瘤臨床分期顯著相關(guān)(P≤0.05),而與其他臨床病理特征無關(guān)(P均>0.05),見表2。

表2 PDL1表達(dá)與GEP-NETs臨床病理特征的關(guān)系(例,%)

2.3 GEP-NENs患者的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與PD-L1表達(dá)的關(guān)系

47例GEP-NENs中PD-L1在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)陽性23例(48.9%),在腫瘤和(或)免疫細(xì)胞中表達(dá)陽性24例(51.1%)。微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)患者腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)陽性率為88.9%、腫瘤和(或)免疫細(xì)胞PD-L1表達(dá)陽性率為88.9%,均明顯分別高于微衛(wèi)星穩(wěn)定(MSS)患者的39.5%和42.1%。分析顯示GEP-NENs患者的微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)與PD-L1表達(dá)顯著相關(guān)(P≤0.05),見表3。

表3 GEP-NETs患者微衛(wèi)星狀態(tài)與PD-L1表達(dá)關(guān)系(例,%)

3 討論

GEP-NENs,占全身神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤約2/3,在近幾十年內(nèi)GEP-NENs增加了5倍[4]。目前GEP-NENs還只是根據(jù)組織分型使用傳統(tǒng)治療方案治療,缺乏個(gè)體化治療。錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)是專門修復(fù)DNA堿基錯(cuò)配以維持遺傳材料的完整性,盡可能使其保持穩(wěn)定;其由許多種錯(cuò)配修復(fù)蛋白組成,主要為MLH1、MSH2、PMS2和MSH6[5]。MMR蛋白缺陷或喪失時(shí),細(xì)胞就會(huì)失去正常的錯(cuò)配修復(fù)功能,導(dǎo)致錯(cuò)配修復(fù)功能缺陷(dMMR/MSI)[6]。DNA錯(cuò)配修復(fù)基因是與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的基因,國內(nèi)外很多研究證明錯(cuò)配修復(fù)蛋白的缺失與多種腫瘤的發(fā)生相關(guān)。有研究者們在許多不同來源組織中發(fā)現(xiàn)MSI,如:宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、非上皮性卵巢癌、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤等[7]。人們已經(jīng)證實(shí)錯(cuò)配修復(fù)基因突變不僅是Lynch綜合征患者遺傳學(xué)病因,還影響部分散發(fā)性結(jié)直腸癌的發(fā)病和預(yù)后;所有Lynch綜合征患者90%是MLH1或MSH2突變[8]。免疫組織化學(xué)染色法檢測MMR與PCR測序法比較符合率。

有報(bào)道MMR在胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(GEP-NENs)中的缺失率為23.2%。本研究顯示MMR蛋白缺失率18.5%,與之前報(bào)道差異不大。本實(shí)驗(yàn)是應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測MMR;免疫組織化學(xué)染色法與PCR測序比較符合率非常高,可以達(dá)98%以上[9-10]。

Luchini等報(bào)道,MLH1與PMS2、MSH2與MSH6之間有協(xié)同作用,依賴與伴侶蛋白結(jié)合的情況,即MSH2蛋白的結(jié)合情況影響MSH6其表達(dá),MLH1蛋白的結(jié)合情況影響PMS2其表達(dá)[11]。本研究進(jìn)一步證實(shí)了這一點(diǎn)。Arai等研究發(fā)現(xiàn),胃癌的MSI發(fā)生與臨床特征相關(guān),特別是性別和年齡方面。我們的研究結(jié)果顯示,MSI與患者的臨床病理特征(性別、年齡WHO分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)無相關(guān)性。有可能是實(shí)驗(yàn)只是通過免疫組化法檢測,未同時(shí)用PCR法檢測,不足以進(jìn)行準(zhǔn)確的MSI分析,這還需大數(shù)據(jù)進(jìn)一步研究。

程序性死亡蛋白配體1(PD-L1)在許多種腫瘤中表達(dá)升高[12],PD-L1升高促進(jìn)腫瘤細(xì)胞免疫逃逸,從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展;其作用機(jī)制為PD-L1通過與淋巴細(xì)胞表面的程序性死亡1(PD-1)相互作用,削弱機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答[13]。許多研究顯示,PD-1 及PD-L1參與形成腫瘤微環(huán)境,而通過抑制PD-1或PD-L1,進(jìn)而破壞腫瘤微環(huán)境,則可增強(qiáng)內(nèi)源性抗腫瘤免疫效應(yīng),減少腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移[14]。PD-L1在許多癌組織中表達(dá)[15]。在淋巴瘤中也常見PD-L1表達(dá),并與其臨床病理特征和預(yù)后相關(guān)[16-17]。本研究結(jié)果顯示PD-L1在神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中表達(dá)常見,且PD-L1的表達(dá)與臨床分期相關(guān)與其他臨床病理特征無關(guān)。有研究報(bào)道PD-L1在腫瘤細(xì)胞表面的表達(dá)與WHO分級(jí)分相關(guān)[18],在我們的研究中,雖然在G3和NEC中表達(dá)率相比G1、G2更高,但是我們沒有發(fā)現(xiàn)WHO分級(jí)和PD-L1表達(dá)之間存在明顯的相關(guān)性,這有待擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。許多研究報(bào)道,若腫瘤組織及相關(guān)免疫細(xì)胞PD-L1表達(dá)陽性(陽性細(xì)胞占比>1%),則使用PD-1/PD-L1免疫抑制劑就會(huì)有明顯療效,且表達(dá)率越高療效越顯著[19-20]。在本研究中,具有MSI分子表型或晚期GEP-NENs患者腫瘤組織中PD-L1呈高表達(dá),即PD-1/PD-L1相關(guān)免疫抑制劑對治療微衛(wèi)星不穩(wěn)定的GEP-NENs患者很可能具有非常好的療效,給GEP-NENs患者提供新的治療方案。

綜上所述,本研究結(jié)果顯示微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)會(huì)上調(diào)PD-L1在胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫(GEP-NENs)的腫瘤細(xì)胞和腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞中的表達(dá),可以預(yù)測免疫抑制劑藥物的療效,可以作為免疫檢查點(diǎn)抑制劑PD-L1的陽性預(yù)測標(biāo)志物。