呂欣然，溫 馨，王揚蕊，白鳳翎，崔方超，檀茜倩，勵建榮，2*，郭曉華

（1 渤海大學食品科學與工程學院 生鮮農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工及安全控制技術(shù)國家地方聯(lián)合工程研究中心遼寧省高等學校生鮮食品產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院 遼寧錦州121013 2 大連工業(yè)大學 海洋食品精深加工關(guān)鍵技術(shù)省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心 遼寧大連116034 3 山東美佳集團有限公司 山東日照 276800）

熒光假單胞菌（Psdeuomnoda fluoerncnet）作為水產(chǎn)品中常見的優(yōu)勢腐敗菌，其自身分泌的蛋白酶、脂肪酶、嗜鐵素、生物膜等因子受N-?；?高絲氨酸內(nèi)酯（N-Acyl-homoserine lactones，AHLs）介導的LuxI/R 型QS 系統(tǒng)調(diào)控[1-2]。常通過使用抗生素等化學制劑控制腐敗微生物對水產(chǎn)品的污染，然而長期使用不僅使細菌產(chǎn)生耐藥性，還危害人體健康。以細菌QS 系統(tǒng)為作用靶點，干擾其相關(guān)致腐因子的表達，為控制由熒光假單胞菌引發(fā)的食品腐敗提供新策略。

群體感應淬滅（Quorum quenching，QQ）是以QS 系統(tǒng)為靶點，通過抑制AHLs 合成、干擾AHLs與受體蛋白結(jié)合或酶促降解AHLs 等途徑淬滅細菌群體感應效應的一種方式[3]。其中，降解AHLs信號分子，使其濃度低于臨界值，抑制細菌相關(guān)毒力因子表達的酶稱之為群體感應淬滅酶（Quorum quenching enzymes，QQE）。其具有專一性強、催化效率高、安全無毒等優(yōu)點，是目前最為有效的群體感應淬滅途徑。依據(jù)結(jié)構(gòu)特性，QQE 主要包括AHLs 內(nèi)酯酶、AHLs ?；D(zhuǎn)移酶、AHLs 氧化還原酶[4]，根據(jù)來源可分為植物源、動物源、微生物源[5-7]。乳酸菌（Lactic acid bacteria，LAB）作為國際公認的安全菌株，已被廣泛應用在食品工業(yè)領域。研究表明，乳酸菌來源的苯乳酸、細菌素和青霉素酰化酶等代謝產(chǎn)物具有良好的群體感應淬滅活性[8-10]，而同種或不同種微生物分泌的淬滅酶結(jié)構(gòu)和催化特性的差異性，導致其淬滅機制也存在一定差異。本課題組前期獲得的面包乳桿菌（Lactobacillus crustorum）ZHG2-1 具有QQ 活性，對C4-HSL、C8-HSL 和3-oxo-C12-HSL 等AHLs 信號分子均具有較強的降解作用，該活性物質(zhì)初步鑒定為AHLs-?；D(zhuǎn)移酶或氧化-還原酶[11]，然而，其對熒光假單胞菌群體感應的淬滅機制尚不清楚。

鑒于上述問題，本文以面包乳桿菌ZHG2-1為研究對象，利用雙層瓊脂擴散法分析菌株ZHG2-1 對熒光假單胞菌AHLs 的降解效果。通過測定生物膜、胞外蛋白酶、胞外多糖、生物胺等腐敗指標，探究菌株ZHG2-1 對熒光假單胞菌的細胞表型淬滅效應。采用qRT-PCR 技術(shù)研究菌株ZHG2-1 對熒光假單胞菌致腐因子基因水平的影響，闡明其淬滅機制，以期為開發(fā)水產(chǎn)品新型生物防腐劑提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌種及培養(yǎng)條件 面包乳桿菌（Lactobacillus crustorum）ZHG 2-1，分離自遼寧阜新彰武腌制酸黃瓜。熒光假單胞菌（Psdeuomnoda fluoerncnet）PF08，分離自腐敗大菱鲆。

紫色桿菌（Chromobacterium violaceum）CV026 為紫色桿菌ATCC 31532 的mini-Tn5 突變體，菌株自身不產(chǎn)生AHLs，僅當外源AHLs 存在時，可產(chǎn)生特征性紫色菌素，檢測?；鶄?cè)鏈長度為C4～C8 的信號分子。以上菌種均于本實驗室保藏。

1.1.2 培養(yǎng)基與試劑 MRS 肉湯、LB 肉湯、LB 培養(yǎng)基，北京奧博星生物技術(shù)有限公司；乙酸乙酯（分析純級），福晨（天津）化學試劑有限公司；AO/EB 雙熒光染色試劑盒，北京雷根生物技術(shù)有限公司。

1.2 儀器與設備

Imark 酶標儀，美國BIO-RAD 公司；MS105UD 電子分析天平，瑞士梅特勒-托利多有限公司；SS-4800 場發(fā)射掃描電子顯微鏡，日本日立公司；徠卡激光共聚焦顯微鏡，德國徠卡儀器有限公司；Bioscerrn C 全自動生長曲線分析儀，上海謂載商貿(mào)發(fā)展有限公司5804R 高速冷凍離心機，德國Eppendorf 公司；DL-CJ-2N 超級潔凈工作臺，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；SPX-25 生化培養(yǎng)箱，寧波海曙賽福實驗儀器廠；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；Multifuge1L-R高速冷凍離心機，德國Heraeus 公司；SCIENTZ-10N/A 冷凍干燥機，寧波新芝生物科技股份有限公司；立式自動壓力蒸汽滅菌器GI80DS，致微（廈門）儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 菌株ZHG2-1 上清液與熒光假單胞菌AHLs 的制備

1.3.1.1 菌株ZHG2-1 上清液粗提物的制備 參照Lv 等[12]方法，將面包乳桿菌ZHG2-1 以2%的接種量在MRS 肉湯中活化至第3 代，離心過濾得乳酸菌無細胞上清液（Cell free supernatants，CFS），用乙酸乙酯萃取CFS 活性成分，經(jīng)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、真空冷凍干燥制成粉末狀固體，置于-80℃冰箱備用。

1.3.1.2 熒光假單胞菌AHLs 粗提物的制備 將熒光假單胞菌在LB 肉湯中培養(yǎng)，傳代2 次后于30 ℃培養(yǎng)16 h，離心過濾后用含0.01%冰醋酸的乙酸乙酯萃取，50 ℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以消除有機溶劑并用70%甲醇溶解。

1.3.2 菌株ZHG2-1 對熒光假單胞菌AHLs 淬滅活性驗證 參照Cui 等[11]方法制備AHLs 檢測平板，牛津杯打孔。將菌株ZHG2-1 CFS 調(diào)至中性，加入10 μL 熒光假單胞菌AHLs 粗提物，30 ℃培養(yǎng)24 h，離心后取上清，調(diào)pH 值至中性，取180 μL 加入打好的孔中，30 ℃培養(yǎng)24 h。

1.3.3 熒光假單胞菌與紫色桿菌CV026 的最小抑菌濃度與亞抑制質(zhì)量濃度 將菌懸液濃度為106CFU/mL 的熒光假單胞菌與紫色桿菌CV026（100 μL）分別加入96 孔板中，依次加入10 μL 上清液粗提物至終質(zhì)量濃度分別為0，2.0，4.0，8.0，16.0，32.0 mg/mL，以不添加提取物的LB 肉湯作為陰性對照，30 ℃靜置培養(yǎng)24 h。在波長595 nm 處每隔2 h 測OD 值。

1.3.4 菌株ZHG2-1 上清液粗提物對熒光假單胞菌產(chǎn)生物膜量的影響

1.3.4.1 生物膜抑制的定量分析 取200 μL 熒光假單胞菌懸液到96 孔板中，添加菌株ZHG2-1粗提物至終質(zhì)量濃度為1.0，2.0，3.0 mg/mL，以不添加提取物的LB 肉湯作為陰性對照，30 ℃培養(yǎng)12 h，吸去多余懸浮液，用無菌PBS 洗滌，參照Shikha 等[9]方法結(jié)晶紫染色定量檢測生物模量。同時，參考Cui 等[11]方法測定浮游細胞存活率。

1.3.4.2 生物膜清除的定量分析 在96 孔板中加入熒光假單胞菌培養(yǎng)物（106CFU/mL），30 ℃培養(yǎng)12 h，移除懸浮液，PBS 洗滌后，向孔板中添加不同亞抑制質(zhì)量濃度的菌株ZHG2-1 粗提物，以不添加粗提物的LB 肉湯作為陰性對照，30 ℃培養(yǎng)24 h，按上述方法定量檢測生物膜殘留量和浮游細胞存活率。

1.3.5 菌株ZHG2-1 上清液粗提物對熒光假單胞菌生物膜結(jié)構(gòu)的影響 在24 孔板中放入無菌硅片（1 cm×1 cm），取1 mL 熒光假單胞菌菌液浸沒，樣品處理如1.3.4 節(jié)方法。PBS 洗滌硅片，2.5%戊二醛固定12 h，無菌水洗滌3 次，40%，70%，90%，100%乙醇依次脫水處理15 min，待硅片干燥后噴金，掃描電鏡（SEM）觀察生物膜結(jié)構(gòu)。

1.3.6 菌株ZHG2-1 上清液粗提物對熒光假單胞菌致腐因子的影響

1.3.6.1 胞外多糖 參照Mohammed 等[13]方法，將熒光假單胞菌與不同亞抑制質(zhì)量濃度的菌株ZHG2-1 粗提物30 ℃共培養(yǎng)16 h，離心，將沉淀重懸于0.85% NaCl 溶液中，離心30 min，將上清液與冷乙醇按體積比1∶3 混合，4 ℃過夜沉淀，移除上清液后，苯酚硫酸法定量檢測胞外多糖含量。

1.3.6.2 胞外蛋白酶 參照Vijayaraghavan 等[14]方法制備脫脂牛奶平板，牛津杯打孔。將不同質(zhì)量濃度的菌株ZHG2-1 粗提物與熒光假單胞菌30 ℃共培養(yǎng)24 h，離心過濾后取180 μL 上清液加入打好的孔中，30 ℃培養(yǎng)24 h，測量孔徑周圍透明圈的大小，計算抑制率。

1.3.6.3 生物胺 根據(jù)張黎明等[15]的方法制備生物胺檢測培養(yǎng)基，牛津杯打孔。取180 μL 菌株ZHG2-1 粗提物與熒光假單胞菌共培養(yǎng)物上清液加入孔中，30 ℃培養(yǎng)24 h，測量孔徑周圍藍紫色圈的大小，計算抑制率。

1.3.6.4 脂肪酶 根據(jù)Leelatulasi 等[16]方法并稍作修改。50 mL 沸水將3 mL 三丁甘油酸酯和1 g聚乙烯醇-2000 混合乳化，調(diào)pH 值至中性，取4 mL 乳化液與100 mL LB 瓊脂混合，制備脂肪酶瓊脂平板。取180 μL 共培養(yǎng)物上清液加入孔中，30℃培養(yǎng)24 h，測量孔徑周圍透明圈的大小，計算抑制率。

1.3.7 菌株ZHG2-1 上清液粗提物對熒光假單胞菌QS、生物膜及致腐基因表達的影響 將過夜活化的熒光假單胞菌菌液稀釋至106CFU/mL，加入3.0 mg/mL 菌株ZHG2-1 粗提物，30 ℃培養(yǎng)24 h，離心，棄上清，無菌PBS（pH 7.2）洗滌沉淀，再次離心收集菌體。將菌體送至北京華大蛋白質(zhì)研發(fā)中心進行qRT-PCR 測試。qRT-PCR 用Gene 9600 定量PCR 儀進行，引物序列見表1，熒光假單胞菌的16S rRNA 為內(nèi)參基因，引物由上海Sangon Biotech 公司設計并合成。

表1 熒光假單胞菌qRT-PCR 引物序列Table 1 The qRT-PCR primer sequences of Pseudomonas fluorescens

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

每組試驗設3 個平行，用SPSS 19.0 軟件進行數(shù)據(jù)的分析處理，Origin 8.5 軟件進行繪圖處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株ZHG2-1 對熒光假單胞菌AHLs 的降解活性

采用雙層瓊脂擴散法檢測面包乳桿菌ZHG2-1 CFS 對熒光假單胞菌AHLs 的降解活性。由圖1 可知，菌株ZHG2-1 CFS 對熒光假單胞菌AHLs 的降解活性為100%。

圖1 菌株ZHG2-1 CFS 對熒光假單胞菌AHLs淬滅活性Fig.1 The quenching activity of strain ZHG2-1 CFS on Pseudomonas fluorescens AHLs

2.2 熒光假單胞菌和紫色桿菌CV026 的最小抑菌濃度與亞抑制質(zhì)量濃度

面包乳桿菌ZHG2-1 上清液粗提物對熒光假單胞菌和紫色桿菌的最小抑菌濃度分別為8.0 mg/mL 和4.0 mg/mL。為確認菌株ZHG2-1 粗提物的降解活性是出自群體感應淬滅作用，還是抑菌作用，研究不同亞抑制質(zhì)量濃度對熒光假單胞菌和紫色桿菌生長的影響。由圖2 可知，1.0，2.0，3.0 mg/mL 的菌株ZHG2-1 粗提物對熒光假單胞菌和紫色桿菌的生長均無影響，選取這3 個質(zhì)量濃度作后續(xù)研究。

圖2 亞抑制質(zhì)量濃度下菌株ZHG2-1 粗提物對熒光假單胞菌（a）和紫色桿菌（b）生長的影響Fig.2 Effects of strain ZHG2-1 crude extract on the growth of Pseudomonas fluorescens（a）and Chromobacterium violaceum（b）at sub-inhibitory mass concentrations

2.3 面包乳桿菌ZHG2-1 對熒光假單胞菌產(chǎn)生物膜量的影響

生物膜指黏附在物體表面的細菌與其分泌的胞外基質(zhì)聚集形成的群落組織，其對外界環(huán)境變化的抵抗力遠高于浮游細胞[17]。在食品加工中，細菌能快速附著在設備及食品表面形成生物膜，并難以清除，給食品工業(yè)帶來嚴峻考驗[18]。圖3 所示，在不影響熒光假單胞菌生長的前提下，質(zhì)量濃度為1.0，2.0，3.0 mg/mL 的菌株ZHG2-1 粗提物對熒光假單胞菌生物膜抑制率分別為（9.66±2.92）%，（20.46±3.72）%，（31.32±3.39）%，清除率分別為（28.62±3.20）%，（37.07±3.82）%，（62.82±5.84）%，且呈質(zhì)量濃度依賴性。Shikha 等[9]研究發(fā)現(xiàn)鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus rhamnosus）上清液對銅綠假單胞菌生物膜形成的抑制率為35.01%，對成熟生物膜的清除率約為75%，本研究結(jié)果與其相近。上述結(jié)果說明菌株ZHG2-1 粗提物通過群體感應有效抑制和清除熒光假單胞菌生物膜。

圖3 菌株ZHG2-1 粗提物對熒光假單胞菌生物膜量及浮游細胞數(shù)目的影響Fig.3 The effects of strain ZHG2-1 crude extract on the Pseudomonas fluorescens biofilm biomass and number of planktonic cells

2.4 面包乳桿菌ZHG2-1 對熒光假單胞菌生物膜結(jié)構(gòu)的影響

利用掃描電鏡觀察亞抑制質(zhì)量濃度菌株ZHG2-1 粗提物對熒光假單胞菌生物膜二維結(jié)構(gòu)的影響，如圖4 所示，未經(jīng)處理的熒光假單胞菌生物膜厚實緊密，隨著菌株ZHG2-1 粗提物質(zhì)量濃度的不斷增大，致密的膜結(jié)構(gòu)逐漸被解體。當用3.0 mg/mL 的菌株ZHG2-1 粗提物處理時，細菌胞外聚合物顯著減少，細菌菌落處于分散狀態(tài)。結(jié)果表明，菌株ZHG2-1 粗提物可通過抑制熒光假單胞菌胞外基質(zhì)的形成，減弱細菌生物膜形成能力。圖4b 顯示經(jīng)菌株ZHG2-1 粗提取處理、預先形成生物膜后，生物膜結(jié)構(gòu)疏松分散，抑制效果沒有清除效果顯著，表明菌株ZHG2-1 粗提物可破壞熒光假單胞菌成熟生物膜結(jié)構(gòu)。Lv 等[12]研究發(fā)現(xiàn)植物乳桿菌CY 1-1 粗提物處理的溫和氣單胞菌（Aeromonas sobria）數(shù)量減少且黏附性差，3.0 mg/mL 粗提物處理幾乎沒有形成生物膜。1.0，2.0 mg/mL 和3.0 mg/mL CY1-1 粗提物處理后的成熟生物膜結(jié)構(gòu)稀疏，形成量顯著低于對照組，本研究結(jié)果與其一致。

圖4 菌株ZHG2-1 粗提物對熒光假單胞菌生物膜結(jié)構(gòu)的影響Fig.4 Effects of strain ZHG2-1 crude extract on Pseudomonas fluorescens biofilm structure

2.5 面包乳桿菌ZHG2-1 對熒光假單胞菌產(chǎn)胞外多糖的影響

胞外多糖是組成細菌生物膜的重要基質(zhì)，主要由藻酸鹽、生物被膜胞外基質(zhì)多聚糖以及在菌膜和生物被膜的形成過程中起作用的胞外多糖（Pel）等構(gòu)成[19]。與如圖5a 所示，菌株ZHG2-1 粗提物可顯著降低熒光假單胞菌菌胞外多糖分泌，并顯示質(zhì)量濃度依賴性。與對照組相比，當用3.0 mg/mL 菌株ZHG2-1 粗提物處理細菌時，抑制率達（64.08±4.47）%。Yeon 等[20]研究發(fā)現(xiàn)釀酒酵母無細胞上清液對單增李斯特菌胞外多糖的抑制率為65.1%～86.02%，本研究結(jié)果與其相似。

圖5 菌株ZHG2-1 粗提物對熒光假單胞菌產(chǎn)胞外多糖（a）、胞外蛋白酶（b）、生物胺（c）、脂肪酶（d）影響Fig.5 Effects of strain ZHG2-1 crude extract on Pseudomonas fluorescens production of extracellular polysaccharides（a），extracellular proteases（b），biogenic amines（c），and lipases（d）

2.6 面包乳桿菌ZHG2-1 對熒光假單胞菌產(chǎn)胞外蛋白酶的影響

熒光假單胞菌可分泌胞外蛋白酶，能將水產(chǎn)品中富含的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、游離氨基酸等成分降解，產(chǎn)生致腐代謝物，使水產(chǎn)品喪失原有風味和品質(zhì)[21]。由圖5b 可知，隨著菌株ZHG2-1 粗提物質(zhì)量濃度的增大，熒光假單胞菌分解蛋白能力不斷被減弱，3.0 mg/mL 時抑制率達100%，結(jié)果表明，菌株ZHG2-1 上清液提取物能顯著抑制熒光假單胞菌的胞外蛋白酶的產(chǎn)生。Chu 等[22]研究發(fā)現(xiàn)芽孢桿菌上清液對嗜水氣單胞菌YJ-1 蛋白酶抑制率為83.9%，本研究結(jié)果與其相似。

2.7 面包乳桿菌ZHG2-1 對熒光假單胞菌產(chǎn)生物胺影響

生物胺是一類低分子堿性含氮化合物，主要由微生物產(chǎn)生的氨基酸脫羧酶分解游離氨基酸形成。水產(chǎn)品腐敗會產(chǎn)生大量生物胺，過量積累會對人體造成毒害作用[23]。生物胺平板的原理是細菌可分解培養(yǎng)基中游離氨基酸，溴甲酚紫可與產(chǎn)生的堿性生物胺呈藍紫色反應，藍紫色圈直徑越大，細菌產(chǎn)生物胺能力越強。如圖5c 所示，對照組中，熒光假單胞菌有很強的產(chǎn)胺能力，而1.0 mg/mL 菌株ZHG2-1 粗提物可完全抑制生物胺的產(chǎn)生，結(jié)果表明，較低質(zhì)量濃度的菌株ZHG2-1 粗提物可顯著抑制熒光假單胞菌生物胺的產(chǎn)生。馮杰等[24]研究發(fā)現(xiàn)2.0 mg/mL 藍莓花色苷對波羅的海希瓦氏菌（Shewanella balticia）腐胺含量的抑制率為94.4%，本研究結(jié)果與其相似。

2.8 面包乳桿菌ZHG2-1 對熒光假單胞菌產(chǎn)生脂肪酶的影響

脂肪酶被定義為甘油三酯?；饷浮＜賳伟鷮偻ㄟ^分泌脂肪酶催化甘油三酯分解為脂肪酸、甘油等物質(zhì)，會改變?nèi)庵破芳∪饨M織，從而使肉制品變黏、變色、產(chǎn)生異味，導致腐敗發(fā)生[25-26]。本文采用三丁酸甘油酯平板透明圈法研究不同質(zhì)量濃度菌株ZHG2-1 粗提物對熒光假單胞菌脂肪酶活性的影響。如圖5d 所示，1.0 mg/mL 菌株ZHG2-1 粗提物抑制率為（44.09±3.95）%，隨著質(zhì)量濃度的增大，抑制活性可達100%。Shen 等[27]研究發(fā)現(xiàn)來源于熒光假單胞菌的AHLs-?；D(zhuǎn)移酶PF-1240 可干擾蜂房哈夫尼亞菌脂肪酶的形成，本研究結(jié)果與其相似。

2.9 面包乳桿菌ZHG2-1 對熒光假單胞菌QS、生物膜及致腐基因表達的影響

為了探究ZHG2-1 的群體感應淬滅機制，通過qRT-PCR 檢測ZHG2-1 對熒光假單胞菌QS、生物膜及致腐基因的表達水平。在熒光假單胞菌QS 系統(tǒng)中，rhlI 編碼的是AHLs 合成酶，rhlR 編碼的是AHLs 受體蛋白，兩者組成的rhlI/R 系統(tǒng)共同調(diào)控熒光假單胞菌QS 現(xiàn)象[28]。aprX 是熒光假單胞菌胞外蛋白酶基因[29]。algA 編碼的藻酸鹽合成蛋白是構(gòu)成胞外多糖的重要組分，不僅利于細菌的黏附和定殖，在生物膜成熟后期還可以幫助細菌攝取和利用環(huán)境中的微量元素[30]。orm 是嗜鐵素合成基因，有助于細菌絡合食品基質(zhì)中的Fe3+[31]。flgA編碼與生物膜形成以及細菌運動能力相關(guān)的鞭毛合成蛋白[32]。ldcA 編碼賴氨酸脫羧酶，細菌通過酶解食品中的游離氨基酸，進而形成生物胺[33]。

由圖6 可知，3.0 mg/mL ZHG2-1 處理下，rhlI和rhlR 的基因表達被顯著下調(diào)0.93 和0.99，與熒光假單胞菌生物膜及腐敗特性相關(guān)的aprX、algA、orm、flgA、ldcA 等基因的表達水平也被顯著抑制，分別下調(diào)0.91，0.79，0.90，0.94，0.93，這與前期腐敗表型的結(jié)果一致。Toushik 等[34]研究發(fā)現(xiàn)植物乳桿菌J.27 和M.21 可以下調(diào)致病菌生物膜形成及QS 相關(guān)基因表達，qRT-PCR 結(jié)果與其相似。乳酸菌分泌的群體感應猝滅活性物質(zhì)可以下調(diào)QS（luxS、lasB、rhlR、pfs）相關(guān)基因的表達，從而使食源性致病菌致病性下降[35]。由此推測面包乳桿菌ZHG2-1 可通過干擾QS 基因表達，進而影響熒光假單胞菌生物膜和腐敗因子的產(chǎn)生。

圖6 3.0 mg/mL 菌株ZHG2-1 粗提物對熒光假單胞菌QS、生物膜及致腐基因表達的影響Fig.6 Effects of 3.0 mg/mL strain ZHG2-1 crude extract on the expression of QS，biofilm and putrefaction genes of Pseudomonas fluorescens

3 結(jié)論

面包乳桿菌ZHG2-1 具有較強的群體感應淬滅活性，其乙酸乙酯提取物可顯著抑制熒光假單胞菌生物膜及相關(guān)致腐因子的產(chǎn)生。菌株ZHG2-1 粗提物對熒光假單胞菌生物膜形成量及預先形成的成熟生物模量均有顯著的抑制作用。掃描電鏡進一步顯示菌株ZHG2-1 粗提物處理使其生物膜量顯著減少，細菌菌落處于分散狀態(tài)。在亞抑制質(zhì)量濃度的菌株ZHG2-1 粗提物處理下，熒光假單胞菌胞外多糖、生物胺、蛋白酶、脂肪酶等致腐因子均被顯著抑制，與細菌QS、生物膜、腐敗因子相關(guān)的基因表達水平也被顯著下調(diào)。綜上所述，面包乳桿菌ZHG2-1 作為天然安全的生物防腐劑，通過干擾細菌QS 系統(tǒng)，調(diào)控生物膜和致腐基因表達，進而影響生物膜及相關(guān)腐敗因子的產(chǎn)生，其具體機制可通過轉(zhuǎn)錄組學進一步研究。