唐云戶,趙 媛,代 艷

（電子科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬綿陽(yáng)醫(yī)院/綿陽(yáng)市中心醫(yī)院眼科，四川 綿陽(yáng) 621000）

糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）是2 型糖尿病常見(jiàn)的微血管并發(fā)癥，是老年人視力喪失的主要原因[1-2]。DR 的發(fā)展與糖尿病病程、高血糖密切相關(guān)[3]。目前，DR 的治療已取得了進(jìn)展，但由于醫(yī)療資源有限，部分地區(qū)眼底檢查率較低，導(dǎo)致DR 的治療延誤，患者預(yù)后不佳[4]。因此，尋找更多的血液學(xué)生物標(biāo)志物診斷DR 十分重要。miR-384 作為非編碼內(nèi)源性microRNA（miRNAs）被廣泛研究。研究表明，miRNAs 可通過(guò)調(diào)控血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，從而在血管生成過(guò)程中發(fā)揮重要作用[5]。也有研究指出，miR-384-3p 在DR 小鼠模型中低表達(dá)，可影響模型小鼠視網(wǎng)膜新生血管的形成[6]，提示miR-384 可能參與DR 的發(fā)生發(fā)展。LIN28B 是一種高度保守的RNA 結(jié)合蛋白，在調(diào)控機(jī)體發(fā)育中具有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中LIN28B 的陽(yáng)性率明顯高于癌旁組織，LIN28B的表達(dá)與患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)[7]。據(jù)報(bào)道，在糖尿病中miR-384和LIN28B 之間具有一定聯(lián)系[8]。然而，關(guān)于miR-384 和LIN28B在DR患者血清中的表達(dá)水平及作用目前仍未可知?；诖?，本研究通過(guò)檢測(cè)DR 患者、非DR 患者及健康體檢者血清中miR-384 及LIN28B 的表達(dá)水平，分析其與DR 患者臨床資料的關(guān)系，并繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲線以評(píng)價(jià)miR-384、LIN28B在DR患者中的臨床診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2020 年1 月至2021 年11 月于本院確診的100 例2 型糖尿病患者作為觀察組，其中男52 例，女48 例；年齡39～70 歲，平均（56.51±7.92）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合2 型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]；②完成DR 篩查；③首次確診并接受治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神狀態(tài)異常，無(wú)法正常交流；②合并青光眼、白內(nèi)障等眼部疾?。虎厶幱谌焉锲诨虿溉槠?；④臨床信息不完整；⑤合并惡性腫瘤。根據(jù)是否合并視網(wǎng)膜病變將觀察組患者分為非DR組（40例）和DR組（60例）；另選取同期本院的健康體檢者40 例作為對(duì)照組，其中男18 例，女22 例；年齡38～68 歲，平均（54.78±6.56）歲。觀察組與對(duì)照組年齡和性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究通過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)（20191108002），患者及其家屬了解本研究并簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法

收集整理患者年齡、性別、吸煙史、飲酒史、BMI、糖尿病病程、血糖等臨床資料。采用qRT-PCR 法檢測(cè)DR 組、非DR 組患者及對(duì)照組健康體檢者血清miR-384、LIN28B的相對(duì)表達(dá)水平，并進(jìn)行比較。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

利用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t或F檢驗(yàn)。Pearson法分析DR 患者血清中miR-384 與LIN28B 表達(dá)的相關(guān)性。Logistic回歸分析DR 發(fā)生的影響因素。ROC曲線分析血清miR-384、LIN28B 水平對(duì)DR 患者的診斷價(jià)值。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清miR-384、LIN28B表達(dá)水平比較

DR 組患者血清miR-384水平明顯低于非DR 組和對(duì)照組（P＜0.05），且非DR 組低于對(duì)照組（P＜0.05）；DR 組患者血清LIN28B 水平明顯高于非DR 組和對(duì)照組（P＜0.05），且非DR 組高于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 各組血清miR-384、LIN28B的表達(dá)情況（±s）

表1 各組血清miR-384、LIN28B的表達(dá)情況（±s）

*:與對(duì)照組比較，P＜0.05；#：與非DR組比較，P＜0.05

組別對(duì)照組非DR組DR組F P n 40 40 60 miR-384 0.97±0.21 0.72±0.20*0.62±0.15*#44.390＜0.001 LIN28B 1.03±0.26 1.31±0.32*1.61±0.44*#31.137＜0.001

2.2 DR 患者血清miR-384、LIN28B 表達(dá)水平與臨床資料的關(guān)系

分別以DR 患者血清miR-384、LIN28B 表達(dá)水平的中位數(shù)0.64、1.38 為臨界值，將DR 組患者分為miR-384 高、低表達(dá)組和LIN28B 高、低表達(dá)組，各30 例。分析miR-384、LIN28B 表達(dá)水平與DR 患者臨床資料的關(guān)系，結(jié)果顯示，miR-384、LIN28B 表達(dá)水平與患者年齡、性別、吸煙史、飲酒史、BMI無(wú)關(guān)（P＞0.05），與糖尿病病程、血糖有關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 DR患者血清miR-384、LIN28B表達(dá)水平與臨床資料的關(guān)系[例（%）]

2.3 DR患者血清miR-384與LIN28B的相關(guān)性分析

Pearson法分析結(jié)果顯示，DR 患者血清中miR-384與LIN28B 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.296，P＜0.05），見(jiàn)圖1。

圖1 DR患者血清miR-384與LIN28B的相關(guān)性分析

2.4 多因素Logistic回歸分析DR發(fā)生的危險(xiǎn)因素

將2型糖尿病患者是否發(fā)生DR作為因變量（1=發(fā)生，0=未發(fā)生），以血清miR-384、LIN28B 水平為自變量進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，miR-384、LIN28B是DR發(fā)生的獨(dú)立影響因素（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 Logistic回歸分析影響DR發(fā)生的危險(xiǎn)因素

2.5 血清miR-384、LIN28B 水平對(duì)DR 患者的診斷效能

ROC曲線分析結(jié)果顯示，miR-384、LIN28B 單獨(dú)診斷DR 患者的ROC曲線下面積（area under the curve，AUC）及特異度均低于二者聯(lián)合診斷的AUC及特異度，見(jiàn)表4、圖2。

圖2 血清miR-384、LIN28B水平對(duì)DR患者的診斷效能

表4 血清miR-384、LIN28B水平對(duì)DR患者的診斷效能

3 討論

DR 是由高血糖誘導(dǎo)的代謝應(yīng)激引起神經(jīng)膠質(zhì)和血管損傷之間復(fù)雜的相互作用而導(dǎo)致的[10]。臨床上DR 可分為非增殖性DR 和增殖性DR，非增殖性DR 代表DR 的早期階段，其中血管通透性增加和毛細(xì)血管閉塞是視網(wǎng)膜脈管系統(tǒng)中的2 個(gè)主要觀察結(jié)果；增殖性DR 是DR 的晚期階段，其特征是新生血管形成[11]。目前，DR 的發(fā)病率不斷增加，對(duì)其進(jìn)行早期診治，可提高患者及家屬的生活質(zhì)量。因此，尋求潛在的DR血清學(xué)生物標(biāo)志物以盡早診斷DR，對(duì)該病的治療尤為重要。

miRNA是一種具有18～25個(gè)核苷酸的單鏈非編碼RNA，其可以參與胚胎分化、增殖、血管生成的過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA 可影響DR 分期及病程，對(duì)DR 的病情發(fā)展具有較強(qiáng)的診斷價(jià)值[12]。miR-384 作為一種小分子RNA，近年來(lái)被廣泛研究。據(jù)報(bào)道，miR-384在癌細(xì)胞中呈低表達(dá)，其在多種腫瘤中發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖、遷移和促進(jìn)凋亡的作用[13-14]。也有研究指出，與正常細(xì)胞相比，大鼠缺血心肌細(xì)胞和缺氧H9c2 細(xì)胞中miR-384-5p 的表達(dá)水平降低[15]，提示miR-384-5p 可能是機(jī)體內(nèi)一種重要的保護(hù)因子。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)DR 患者中miR-384 的表達(dá)探討其在DR 中的作用，結(jié)果顯示，DR 組患者血清中miR-384 水平明顯低于非DR 組和對(duì)照組，且非DR 組低于對(duì)照組。表明miR-384 異常與DR 的進(jìn)展密切相關(guān)。通過(guò)分析miR-384 表達(dá)水平與DR 患者臨床資料的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，血清miR-384 表達(dá)水平與患者年齡、性別、吸煙史、飲酒史、BMI 無(wú)關(guān)，與糖尿病病程、血糖有關(guān)，這提示miR-384可能是DR發(fā)生的臨床診斷指標(biāo)。

LIN28B是一種高度保守的結(jié)構(gòu)蛋白，可在調(diào)節(jié)干細(xì)胞活性方面發(fā)揮作用，也是調(diào)節(jié)發(fā)育分化的關(guān)鍵因子[16-17]。研究發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸癌組織中檢測(cè)到LIN28B 過(guò)表達(dá)[18]。也有研究表明，LIN28B 可促進(jìn)神經(jīng)母細(xì)胞瘤遷移，沉默LIN28B 可抑制腫瘤的生長(zhǎng)，并明顯延長(zhǎng)患者的生存期[19]。LIN28 屬于Blet-7 miRNA 家族的一員，Blet-7 miRNA 通過(guò)抑制LIN28B 的表達(dá)來(lái)減弱糖尿病相關(guān)動(dòng)脈粥樣硬化中的炎癥作用[20]，提示LIN28B 可能參與了糖尿病并發(fā)癥的進(jìn)程。Fu 等[21]研究發(fā)現(xiàn)，miR-152/LIN28B 軸可以通過(guò)調(diào)節(jié)VEGF 信號(hào)來(lái)影響高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成，并可影響DR 的進(jìn)程。然而血清LIN28B 在DR 中的作用目前尚不清楚。本研究結(jié)果顯示，DR 組患者血清中LIN28B水平明顯高于非DR 組和對(duì)照組，且非DR 組高于對(duì)照組；LIN28B 表達(dá)水平與糖尿病病程、血糖有關(guān)。以上結(jié)果均提示LIN28B 可能參與了DR 的病理過(guò)程，值得進(jìn)一步的探究。

本研究采用Pearson法分析DR 患者血清中miR-384 與LIN28B 表達(dá)的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DR 患者血清中miR-384與LIN28B 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，且miR-384、LIN28B 均是DR 發(fā)生的獨(dú)立影響因素。這表明miR-384與LIN28B的表達(dá)密切相關(guān)，miR-384、LIN28B可能是DR潛在的生物標(biāo)志物，從基因水平增加miR-384的表達(dá)或干擾LIN28B 的表達(dá)，可能是治療DR 的一個(gè)新思路。ROC曲線結(jié)果顯示，miR-384、LIN28B二者聯(lián)合檢測(cè)診斷DR 患者的AUC及特異度均高于單項(xiàng)檢測(cè)?？梢?jiàn)，二者聯(lián)合能夠彌補(bǔ)單項(xiàng)血清LIN28B 或miR-384檢測(cè)的不足，對(duì)DR的臨床診斷具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，DR 患者血清中miR-384 呈低表達(dá)，LIN28B 呈高表達(dá)，miR-384、LIN28B 表達(dá)水平與DR 患者糖尿病病程、血糖有關(guān)；且DR 患者血清中miR-384與LIN28B 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，miR-384、LIN28B 均是DR 發(fā)生的影響因素，二者有望成為DR臨床診斷的指標(biāo)。