孫佳,李容,2,勾健,2,潘文琪,3,陸苑,劉春花,黃勇,劉亭**

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 貴州省藥物制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州 貴陽 550004; 2.貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院,貴州 貴陽 550004; 3.貴州醫(yī)科大學(xué) 臨床醫(yī)學(xué)院,貴州 貴陽 550004; 4.貴州醫(yī)科大學(xué) 民族藥與中藥開發(fā)應(yīng)用教育部工程研究中心 &省部共建藥用植物功效與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州 貴陽 550004)

急性心肌缺血(acute myocardial infarction,AMI)是一種嚴(yán)重的缺血性心臟病,發(fā)病時(shí)會(huì)出現(xiàn)心臟代謝紊亂、心肌壞死、心律失常以及心肌梗塞[1-3]。參芎葡萄糖注射液(shenxiong glucose injection,SGI)為丹參水提液和鹽酸川芎嗪配制而成的復(fù)方制劑[4];臨床上常用于治療急性腦梗死、冠心病、心絞痛以及無癥狀心肌缺血等心腦血管疾病[5-7],其含有的水溶性丹酚酸類成分和鹽酸川芎嗪是其發(fā)揮抗心血管疾病的活性成分[8-9]。中藥復(fù)方是中藥臨床應(yīng)用的主要形式,配伍通過引起藥物代謝酶的改變從而導(dǎo)致藥物的吸收、分布、代謝以及排泄(ADME)過程發(fā)生變化[10]。課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn),與正常組相比,AMI模型大鼠體內(nèi)川芎嗪的清除率會(huì)顯著升高[11],可見模型狀態(tài)對(duì)藥物的清除有一定影響,因此在病理狀態(tài)下研究藥物配伍前后的體內(nèi)過程具有更重要的臨床意義。而排泄作為藥代動(dòng)力學(xué)的最后一個(gè)步驟,是指藥物及其代謝產(chǎn)物從體內(nèi)清除的過程[12],對(duì)藥物療效、毒副作用以及藥物療效持續(xù)時(shí)間具有一定影響[13];同時(shí)通過研究藥物配伍前后的排泄情況,可進(jìn)一步完善配伍前后的體內(nèi)過程研究,從藥物消除的角度闡明其配伍機(jī)制。人體內(nèi)參與Ⅱ相代謝的酶主要包括UDP-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UDP-glucurosyl-transferases,UGTs)、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(glutathione S-transferases,GSTs)、磺基轉(zhuǎn)硫酶、甲基化轉(zhuǎn)移酶和N-乙?；D(zhuǎn)移酶等[14-15]。藥物在Ⅰ相代謝中進(jìn)行氧化、還原或水解反應(yīng),經(jīng)Ⅱ相UGT酶發(fā)生葡萄醛酸化結(jié)合反應(yīng)后生成的化合物親水性增強(qiáng),進(jìn)而更好地從尿液或膽汁排出體外[16]。實(shí)驗(yàn)室前期考察了單次靜脈注射SGI、DGI、LGI后Ⅰ相代謝酶的表達(dá)及其對(duì)藥動(dòng)行為的影響[17],但目前SGI配伍前后在病理狀態(tài)下的排泄及Ⅱ相代謝酶表達(dá)情況尚未見文獻(xiàn)報(bào)道,故本實(shí)驗(yàn)以制劑中含量較高的丹參素和川芎嗪為檢測(cè)指標(biāo),采用超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜(ultra high performance liquid phase tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)法測(cè)定丹參素和川芎嗪在AMI大鼠尿液和糞便中的含量,從UGT酶表達(dá)的角度分析配伍前后各成分在大鼠體內(nèi)的排泄差異機(jī)制,對(duì)SGI的臨床合理用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康的SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,體質(zhì)量為230～250 g,購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司,合格證號(hào)為SCXK(湘)2019-0014,實(shí)驗(yàn)倫理審查編號(hào)1801210。按前期課題考察的造模和驗(yàn)證方法進(jìn)行AMI模型大鼠的制備和評(píng)價(jià)[18],按50 mg/kg劑量皮下注射鹽酸異丙腎上腺素溶液,1次/d,連續(xù)給藥2 d制備AMI模型大鼠,并隨機(jī)抽取6只大鼠進(jìn)行模型驗(yàn)證[觀察大鼠心電圖ST段,測(cè)定血清中血清乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸磷酸激酶同工酶(creatine phosphokinase isoenzyme,CK-MB)的含量]。

1.1.2儀器 ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-S超高效液相串聯(lián)三重四極桿聯(lián)用儀(TQS,美國(guó)Waters)、ACQUITY UPLC-TQD 超高效液相串聯(lián)三重四極桿聯(lián)用儀(TQD,美國(guó)Waters),MTN-2800D氮吹濃縮儀(天津奧特賽恩斯),Allegra 64R低溫高速離心機(jī)(美國(guó)Beckman Coulter),代謝籠(意大利 Tecniplast ),WP-UP-WF-20微量分析型超純水機(jī)(四川沃特爾),GBOXChemiXL1.4 凝膠成像儀(英國(guó)Syngene),Variouskan LUX多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo Fisher Scientific ),PowerPac Basic 電泳儀(美國(guó) Bio-Rad),Trans-Blot Turbo 蛋白快速轉(zhuǎn)印儀(美國(guó)Bio-Rad),微量移液槍(德國(guó)Eppendorf)。

1.1.3材料 鹽酸異丙腎上腺素(純度≥99%,批號(hào)G2028261)購(gòu)于上海阿拉丁生化科技股份有限公司,丹參浸膏(批號(hào)07200801)購(gòu)于貴州景峰注射劑有限公司,木犀草苷對(duì)照品(純度≥98%,批號(hào)AF20072618)購(gòu)于成都埃法生物科技有限公司,鹽酸川芎嗪、丹參素、葛根素對(duì)照品(純度≥98%,批號(hào)分別為X08O9C71471、H09N10S102463、S02M9B54875)均購(gòu)于上海源葉生物科技公司,辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二抗(批號(hào)ab205718)、鼠二抗(ab205719)、磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogen,GAPDH)單克隆抗體(批號(hào)ab8245)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1(UDP-glucurosyl-transferases 1A1,UGT1A1)一抗(批號(hào)ab194697)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A6(UDP-glucurosyl-transferases 1A6,UGT1A6)一抗(批號(hào)ab97646)均購(gòu)于美國(guó) Abcam 公司,特超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒(批號(hào)P0018AS)購(gòu)于上海碧云天生物技術(shù)有限公司,乙腈、甲醇為色譜純購(gòu)于德國(guó)Merck公司,其余試劑均為分析純。

1.2 研究方法

1.2.1SGI、丹參注射液、川芎嗪注射液、空白注射液的配制 按照 SGI 國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)“處方”、“制法”項(xiàng)下進(jìn)行注射液的配制,分別精密稱取丹參浸膏、川芎嗪后按標(biāo)準(zhǔn)加入甘油、葡萄糖、注射用水,用鹽酸調(diào)pH至5.5～6.5,配制成SGI、丹參注射液(danshen injection,DGI,不含川芎嗪)、川芎嗪注射液(ligustrazine injection,LGI,不含丹參浸膏)、空白注射液(不含丹參浸膏、川芎嗪),并進(jìn)行過濾,滅菌(115 ℃,30 min)。

1.2.2對(duì)照品溶液的配制 精密稱取丹參素、鹽酸川芎嗪、木犀草苷(TQD內(nèi)標(biāo))、葛根素(TQS內(nèi)標(biāo))對(duì)照品適量,甲醇定容,配制得丹參素(1 030 mg/L)、川芎嗪(9 986 mg/L)、木犀草苷(1 052 mg/L)、葛根素(1 023 mg/L)的儲(chǔ)備液,于-20 ℃保存?zhèn)溆谩７謩e精密量取適量丹參素、川芎嗪對(duì)照品儲(chǔ)備液,50%甲醇稀釋得65.920 mg/L、14.979 mg/L的混合對(duì)照品母液,再用50%甲醇2倍逐級(jí)稀釋得到不同濃度梯度的混合對(duì)照品工作液。

1.2.3鹽酸異丙腎上腺素溶液的配制 精密稱取鹽酸異丙腎上腺素0.1g于10 mL量瓶中,用生理鹽水充分溶解并定容至刻度,即得質(zhì)量濃度為10 g/L的鹽酸異丙腎上腺素溶液,現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.4色譜條件 各成分均采用實(shí)驗(yàn)室前期建立的色譜條件和質(zhì)譜條件[17]。Waters BEH C18色譜柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),Waters Van Guard BEH C18保護(hù)柱,流動(dòng)相為0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B),梯度洗脫:0～1.0 min,92% A;1.0～1.5 min,92%至70% A;1.5～2.0 min,70%至60% A;2.0～2.5 min,60%至10% A;2.5～3.0 min,10% A;3.0～4.0 min,10%至92% A;柱溫40 ℃,進(jìn)樣體積為1 μL,流速0.35 mL/min。

1.2.5質(zhì)譜條件 由于 SGI 中丹參素與川芎嗪在儀器中響應(yīng)差別較大,故本實(shí)驗(yàn)中川芎嗪采用 TQD 檢測(cè),丹參素采用 TQS 檢測(cè)。采用電噴霧電離源(ESI)正、負(fù)離子同步監(jiān)測(cè),多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式,離子源溫度120 ℃,毛細(xì)管電離電壓 3 kV,去溶劑氣溫度 350 ℃,去溶劑氣流速 650 L/h,噴霧氣與反吹氣為N2,反吹氣流速50 L/h,碰撞氣為氬氣,碰撞氣流速0.16 mL/min,丹參素、川芎嗪及內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 待測(cè)成分及內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)

1.2.6AMI模型大鼠尿液及糞便樣品的收集 取AMI模型大鼠18只,分為3組(n=6),分別飼養(yǎng)于代謝籠中,收集空白尿液及糞便。根據(jù)SGI臨床用藥劑量換算成大鼠給藥劑量,按10 mL/kg劑量分別給大鼠尾靜脈注射SGI、DGI、LGI(相當(dāng)于丹參素3.78 mg/kg、川芎嗪13.68 mg/kg)。收集給藥后0～4 h、4～6 h、6～8 h、8～12 h、12～24 h、24～36 h、36～48 h時(shí)間段尿液及糞便,并記錄尿液體積以及烘干后糞便的重量。于-20 ℃保存,備用。

1.2.7尿液樣品處理方法 取200 μL尿液于2 mL 離心管,再加入20 μL內(nèi)標(biāo)(葛根素1.02 mg/L,木犀草苷157.80 mg/L)、60 μL鹽酸(1 mol/L)、1 mL乙腈,渦旋超聲,4 ℃下14 000 r/min離心10 min,得上清液a;沉淀中加入1 mL乙腈,渦旋超聲,4 ℃下14 000 r/min離心10 min,得上清液b;合并a、b液后氮?dú)獯蹈?殘?jiān)尤?0%甲醇200 μL渦旋溶解,4 ℃下15 000 r/min離心10 min,上清液進(jìn)樣分析。

1.2.8糞便樣品處理方法 取烘干后糞便樣品0.2 g,加生理鹽水800 μL,制成25%的勻漿液,渦旋超聲,4 ℃下14 000 r/min離心10 min,取上清液200 μL置于2 mL離心管,其余同尿液處理方法“1.2.7”項(xiàng)下操作。

1.2.9Western blotting 測(cè)定大鼠肝臟中UGT1A1、UGT1A6蛋白的表達(dá)量 另取24只AMI模型大鼠,分為SGI組、DGI組、LGI組、空白溶劑組(n=6),每組大鼠給藥3 h后斷頸處死,按照前期考察的樣品處理方法進(jìn)行肝微粒體的制備[17]。取等量總蛋白上樣,用SDS-PAGE 電泳分離總蛋白后轉(zhuǎn)膜,5%BSA室溫封閉3 h,加入U(xiǎn)GT1A1一抗(1∶1 000)、UGT1A6一抗(1∶5 000)、GAPDH抗體(1∶5 000),4 ℃下過夜。TBST洗滌5次,每次5 min,加入二抗,室溫下孵育2 h;TBST洗滌5次,每次5 min,加入發(fā)光液,凝膠成像儀曝光,拍照保存。使用 Quantity one 凝膠圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行灰度值分析,計(jì)算目的蛋白與內(nèi)參蛋白(GADPH)的灰度值比值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1專屬性 分別制備尿液、糞便空白樣品,空白加對(duì)照品及給藥后的含藥樣品,按“1.2.7”“1.2.8”項(xiàng)下操作,進(jìn)樣分析獲得相應(yīng)色譜圖,結(jié)果表明,木犀草苷、川芎嗪、葛根素、丹參素的保留時(shí)間分別為1.57、1.09、1.15、0.74 min,各成分分離度和峰形良好,被測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物的測(cè)定不受生物樣品中內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。

2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量下線 取空白尿液、糞便樣品各200 μL,分別加入“1.2.2”項(xiàng)下不同濃度梯度的混合對(duì)照品工作液20 μL,再按“1.2.7”“1.2.8”項(xiàng)下方法操作,以待測(cè)成分峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值(A/Ai)為縱坐標(biāo)(Y),各成分的濃度(C)為橫坐標(biāo)(X),并以1/X2為權(quán)重系數(shù),求得回歸方程。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)(R2)>0.999 0。2個(gè)成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、線性范圍及定量下限見表2。

表2 2個(gè)成分在大鼠尿液、糞便中的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.3準(zhǔn)確度和精密度 取空白尿液、糞便樣品各200 μL,加入高、中、低3個(gè)濃度的混合對(duì)照品溶液,再按“1.2.7”“1.2.8”項(xiàng)下方法操作,每個(gè)濃度5個(gè)樣本,連續(xù)進(jìn)樣3 d,計(jì)算準(zhǔn)確度和精密度。2個(gè)成分在各排泄樣品中的日內(nèi)、日間精密度RSD值均<15%,準(zhǔn)確度范圍為88.64%～99.48%,提示該方法準(zhǔn)確度、精密度良好,結(jié)果見表3。

表3 2個(gè)成分在大鼠尿液、糞便中的準(zhǔn)確度、精密度

2.1.4提取回收率和基質(zhì)效應(yīng) 取空白尿液、糞便樣品各200 μL,加入高、中、低3個(gè)濃度的混合對(duì)照品溶液,再按“1.2.7”“1.2.8”項(xiàng)下方法操作,測(cè)得峰面積A;將尿液、糞便樣品各200 μL按“1.2.7”“1.2.8”項(xiàng)下方法操作得到的上清液加入高、中、低3個(gè)濃度的混合對(duì)照品溶液及內(nèi)標(biāo)溶液,吹干后加入200 μL流動(dòng)相復(fù)溶,離心取上清液進(jìn)樣分析測(cè)得峰面積B;以流動(dòng)相代替空白尿液、糞便,加入高、中、低3個(gè)濃度的混合對(duì)照品溶液,進(jìn)樣分析測(cè)得峰面積C。提取回收率=A/B×100%,基質(zhì)效應(yīng)=B/C×100%。2個(gè)成分的提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)分別在96.91%～101.68%、94.36%～102.89%,RSD均<15%,結(jié)果見表4。

表4 2個(gè)成分在大鼠尿液、糞便中的提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)

2.1.5樣品穩(wěn)定性 配制高、中、低3個(gè)濃度的混合對(duì)照品溶液,考察在自動(dòng)進(jìn)樣器放置24 h,-20 ℃凍存30 d,經(jīng)3次凍融(-20 ℃至室溫)循環(huán)后的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示在這3種條件下樣品均比較穩(wěn)定,符合生物樣品測(cè)試要求,結(jié)果見表5。

表5 2個(gè)成分在大鼠尿液、糞便中的穩(wěn)定性

2.2 排泄實(shí)驗(yàn)結(jié)果

AMI模型大鼠靜脈注射SGI、DGI、LGI后,SGI組中丹參素經(jīng)尿液、糞便的累積排泄量分別為(304.586±7.430)μg、(60.530±11.931)μg,累積排泄率分別為(31.354±2.096)%、(6.077±0.955)%;川芎嗪經(jīng)尿液、糞便的累積排泄量分別為(23.948±0.734)μg、(1.423±0.043)μg,累積排泄率分別為(0.517±0.034)%、(0.032±0.001)%。DGI組中丹參素經(jīng)尿液、糞便的累積排泄量分別為(313.504±6.205)μg、(47.835±7.658)μg,累積排泄率分別為(33.270±1.297)%、(4.525±0.765)%;LGI組中川芎嗪經(jīng)尿液、糞便的累積排泄量分別為(44.148±1.001)μg、(2.978±0.066)μg,累積排泄率分別為(0.995±0.066)%、(0.077±0.006)%。見表6。

表6 丹參素、川芎嗪在尿液、糞便中的累積排泄百分率

2.3 不同給藥組對(duì)UGT1A1、UGT1A6蛋白表達(dá)的影響

SGI組中UGT1A1、UGT1A6蛋白的表達(dá)量分別為0.228±0.042、1.051±0.092,DGI組中UGT1A1、UGT1A6蛋白的表達(dá)量分別為0.155±0.002、0.727±0.019,LGI組中UGT1A1、UGT1A6蛋白的表達(dá)量分別為0.177±0.008、0.582±0.019。與DGI組相比,SGI組UGT1A1、UGT1A6蛋白的表達(dá)量均升高(P<0.05,P<0.01);與LGI組相比,SGI組中UGT1A6蛋白的表達(dá)量明顯增加(P<0.001),UGT1A1蛋白的表達(dá)量有增高趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1。

注：A為Western blot電泳條帶,B為Western blot統(tǒng)計(jì)結(jié)果;與DGI組比較,(1)P<0.05,(2)P<0.01;(3)與LGI組比較,P<0.001。

3 討論

本課題基于AMI 模型大鼠靜脈注射SGI、DGI、LGI后,分別收集給藥后不同時(shí)間段的尿液、糞便樣品,樣品前處理后經(jīng) UPLC-MS/MS 分析,結(jié)果顯示,丹參素經(jīng)尿液的累積排泄率為31%～33%,是其排泄的主要途徑;川芎嗪經(jīng)尿液、糞便的排泄量很少,累積排泄率均不足1%。2個(gè)成分在給藥后0～4 h或12～24 h達(dá)到排泄高峰;在給藥后24～36 h或36～48 h時(shí),各成分在尿液和糞便中基本排泄完全,不存在較長(zhǎng)時(shí)間的蓄積現(xiàn)象。從配伍前后的累積排泄量結(jié)果可知,丹參素在配伍后經(jīng)尿液的排泄量降低,經(jīng)糞便的排泄量增加,整體改變無顯著性差異;川芎嗪在配伍后整體排泄量均顯著降低,在尿液和糞便中的排泄達(dá)峰時(shí)間前移。這與丹參素的藥動(dòng)學(xué)過程改變無顯著性差異,配伍后川芎嗪的藥時(shí)曲線下面積(area under the curve,AUC)顯著降低,體內(nèi)分布變廣、消除加快[17]的藥動(dòng)結(jié)果一致。

中藥配伍使用一方面可以誘導(dǎo)藥物代謝酶和外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá),加速藥物代謝和排泄,減少有毒藥物在某一器官的分布、積累和暴露,從而減弱有毒藥物對(duì)機(jī)體的影響[19]。如Kim等[20]研究發(fā)現(xiàn),甘草中的黃酮類苷元甘草素可顯著誘導(dǎo)肝細(xì)胞外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和主要的Ⅱ相代謝酶UGTs和GSTs的表達(dá),促進(jìn)有毒物質(zhì)的膽汁排泄而起到保肝作用。另一方面,也可通過對(duì)代謝酶的抑制調(diào)控作用,從而顯著改變主要藥效成分的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)特征,進(jìn)而影響整體藥效。Shi等[21]研究表明,與單體給藥相比,靜脈注射燈盞細(xì)辛注射液能增加顯著燈盞乙素的血漿暴露量以及膽汁和尿液的排泄量,且能提高其在腦組織的分布,其機(jī)制可能是注射液中芹菜素-7-O葡萄糖醛酸苷和咖啡?？鼘幩狨ヒ种屏甩?葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶和有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽2B1的活性,降低了燈盞乙素的水解和轉(zhuǎn)運(yùn),從而引起藥動(dòng)行為改變而達(dá)到神經(jīng)保護(hù)作用?？梢?中藥的合理配伍使用可通過影響代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體的活性及表達(dá)從而改變相關(guān)藥動(dòng)行為,進(jìn)而起到更好的治療效果。

有研究表明川芎嗪以原型形式排出體外的量極少[22],推測(cè)其存在廣泛的代謝途徑。川芎嗪在體內(nèi)有多種代謝產(chǎn)物[23],而作為參與川芎嗪Ⅰ相氧化代謝的主要細(xì)胞色素P450(cytochrome P450,CYP)同工酶中的主要亞型CYP3A4、CYP2C9 和 CYP1A2,介導(dǎo)了川芎嗪的活性代謝產(chǎn)物2-羥甲基-3,5,6-三甲基吡嗪(HTMP)的生成[24],UGT是人體Ⅱ相反應(yīng)中最重要的酶之一[25],其中的UGT1A1和UGT1A6作為UGT的亞型,進(jìn)一步介導(dǎo)了HTMP葡萄醛酸結(jié)合反應(yīng)[26],通過形成葡萄糖醛酸苷進(jìn)而促進(jìn)藥物的排泄。據(jù)報(bào)道,發(fā)現(xiàn)丹參與川芎嗪配伍后,參與川芎嗪Ⅰ相代謝的同工酶CYP1A2、CYP2C11以及CYP3A2的表達(dá)相對(duì)單方顯著增加[17],可見川芎嗪-丹參配伍后加快了川芎嗪代謝產(chǎn)物的生成,包括其中的活性代謝產(chǎn)物HTMP;通過對(duì)藥物代謝酶介導(dǎo)的排泄機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),參與HTMPⅡ相反應(yīng)的UGT1A1和UGT1A6 在SGI組中的表達(dá)均顯著增加,提示丹參與川芎嗪合用后會(huì)加快HTMP的葡萄醛酸化進(jìn)程,促進(jìn)HTMP排出體外,推測(cè)這是配伍后川芎嗪原型排泄量降低的原因之一。

藥物的排泄與藥效強(qiáng)度及毒副作用等密切相關(guān),且藥物的排泄過程直接影響藥物在體內(nèi)的血藥濃度和藥效持續(xù)時(shí)間。當(dāng)藥物排泄量增大時(shí),血中藥量減少,會(huì)導(dǎo)致藥效降低,卻忽視了藥物的靶器官分布、及活性代謝產(chǎn)物等影響因素。前期研究發(fā)現(xiàn)川芎嗪和丹參聯(lián)用后,單次給藥的情況下,川芎嗪在血中含量降低,代謝加快[17],推測(cè)原型成分并非其發(fā)揮藥效的主要原因;而Ⅰ相、Ⅱ相代謝酶的高表達(dá),從代謝平衡的角度增加了活性代謝產(chǎn)物的生成,推測(cè)在川芎嗪和丹參的配伍中活性代謝產(chǎn)物HTMP是其發(fā)揮藥效的主要因素之一。