羅干明，朱小鳳，江 珊

（廣東省佛山市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，廣東 佛山 528000）

吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.、石虎Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.officinalis（Dode）Huang 或疏毛吳茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.bodinieri（Dode）Huang 的干燥近成熟果實(shí)，功效為散寒止痛、降逆止嘔、助陽止瀉［1］。吳茱萸的主要藥效成分有吳茱萸堿、吳茱萸次堿、檸檬苦素等［2-6］，同時(shí)也是2020 年版《中國藥典（一部）》中吳茱萸藥材及飲片質(zhì)量控制的指標(biāo)。吳茱萸為“陳久者良”的6 種藥材之一，有研究認(rèn)為，隨著貯藏時(shí)間的延長，吳茱萸藥材中揮發(fā)油總量和檸檬苦素含量均有下降趨勢，吳茱萸堿和吳茱萸次堿的總含量均有增加趨勢［7-10］。目前，市場銷售的吳茱萸藥材大多未經(jīng)陳化即制成飲片。為更好地控制吳茱萸飲片的質(zhì)量，本研究中以目前常用的牛皮紙袋、聚乙烯塑料袋（真空、非真空）包裝吳茱萸飲片，進(jìn)行吳茱萸飲片長期留樣穩(wěn)定性試驗(yàn)，以性狀、水分、浸出物及多指標(biāo)成分含量的變化考察貯藏條件對吳茱萸飲片質(zhì)量的影響，以及指標(biāo)性成分含量在不同干燥、光照、避光條件下的穩(wěn)定性，探討了影響吳茱萸藥材及飲片質(zhì)量的主要因素，為吳茱萸飲片的貯藏及含吳茱萸制劑的開發(fā)提供了參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters E2695e 型高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；AE100 型電子天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.1 mg）；KQ-500DA 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為300 W，頻率為40 kHz）。

1.2 試藥

吳茱萸飲片（市售，12 批樣品信息見表1）；吳茱萸堿對照品（批號為110802-202111，含量為99.8%），吳茱萸次堿對照品（批號為110801 - 202109，含量為99.3%），檸檬苦素對照品（批號為110800-201707，含量為97.9%），均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純，水為自制超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 貯藏穩(wěn)定性

2.1.1 貯藏條件

將吳茱萸飲片樣品分別采用牛皮紙袋、聚乙烯塑料袋（真空和非真空）進(jìn)行包裝，放在藥品陰涼柜（溫度為16～17 ℃，相對濕度為50%～60%）中貯藏，分別在0～3年內(nèi)取樣。

2.1.2 性狀

按表2 中的條件分別貯藏吳茱萸飲片，結(jié)果12 批樣品的表面呈暗黃綠色至褐色，氣味芳香濃郁，放置后顏色逐漸加深；其中，牛皮紙袋包裝的樣品氣味稍變淡，性狀無顯著變化，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。詳見表2。

表2 不同貯藏年限吳茱萸飲片貯藏穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of the stability test of Evodiae Fructus decoction pieces with different storage years

2.1.3 鑒別

水分：按2020 年版《中國藥典（四部）》通則0832水分測定法測定，結(jié)果水分為9.34%～14.13%。除真空聚乙烯塑料袋包裝樣品外，其余樣品放置后水分均逐漸減少，差異不大，較穩(wěn)定，均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定（不得過15.0%）。詳見表2。

浸出物：按2020 年版《中國藥典（四部）》通則2201浸出物測定法項(xiàng)下醇溶性浸出物浸定法測定，以稀乙醇為溶劑，結(jié)果浸出物為42.75%～51.15%，放置后浸出物變化不大，較穩(wěn)定，均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定（不得少于30.0%）。詳見表2。

2.1.4 含量測定

1）色譜條件

色譜柱：Waters Kromasil C18柱（200 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：［乙腈- 四氫呋喃（25∶15，V/V）］-0.02%磷酸溶液（35∶65，V/V）；流速：1.0 mL/ min；檢測波長：215 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2）溶液制備

取吳茱萸堿、吳茱萸次堿、檸檬苦素對照品各適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL 含吳茱萸堿80 μg 和吳茱萸次堿50 μg、檸檬苦素0.1 mg 的混合對照品溶液。取樣品粉末（過3 號篩）0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，浸泡1 h，超聲處理（功率為300 W，頻率為40 kHz）40 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

3）含量測定

12 批樣品的含量測定結(jié)果見表2。結(jié)果顯示，所有樣品中吳茱萸堿和吳茱萸次堿的總含量均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定（不得少于0.15%），其中2批樣品中檸檬苦素含量不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定（不得少于0.20%）；在貯藏期內(nèi)，吳茱萸堿和吳茱萸次堿的總含量隨著貯藏年限的延長有一定增加趨勢，檸檬苦素含量隨著貯藏年限的延長有一定下降趨勢。

2.2 指標(biāo)性成分含量的穩(wěn)定性考察

干燥條件穩(wěn)定性試驗(yàn)：取7 號樣品粉末（過3 號篩）2 g，平鋪于干燥的扁形稱量瓶中，精密稱定，開啟瓶蓋，在0，60，80，105 ℃溫度條件下分別干燥0，4，6，8 h，將瓶蓋蓋好，移至干燥器中，放冷30 min，精密稱定，分別取樣，按2.1.4項(xiàng)下色譜條件測定樣品含量。結(jié)果顯示，吳茱萸堿、吳茱萸次堿和檸檬苦素的含量基本穩(wěn)定。詳見表3。

表3 吳茱萸飲片中3種指標(biāo)性成分含量在不同干燥條件下的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（%）Tab.3 Results of the stability test of three index components in Evodiae Fructus decoction pieces under different drying conditions（%）

光照條件穩(wěn)定性試驗(yàn)：取7 號樣品的供試品溶液，分別置日光燈下（光照強(qiáng)度159 lx）照射0，4，8，16，32 h后，按2.1.4項(xiàng)下色譜條件測定樣品含量。結(jié)果顯示，吳茱萸次堿的光穩(wěn)定性較好；吳茱萸堿和檸檬苦素對光照較敏感，隨著光照時(shí)間的延長而逐漸降解。詳見表4。

表4 吳茱萸飲片中3種指標(biāo)性成分含量在不同光照時(shí)間下的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（%）Tab.4 Results of the stability test of three index components in Evodiae Fructus decoction pieces under different lighting conditions（%）

避光條件穩(wěn)定性試驗(yàn)：取7號樣品供試品溶液，分別于室溫條件下避光放置0，1，3，5 d后，按2.1.4項(xiàng)下色譜條件測定樣品含量。結(jié)果顯示，在避光條件下，吳茱萸堿、吳茱萸次堿和檸檬苦素含量基本穩(wěn)定。詳見表5。

3 討論

歷代文獻(xiàn)記載吳茱萸“陳久者良”，是由于放置一段時(shí)間后，其中的化學(xué)成分含量有所下降，藥性緩和［7］。本研究中以性狀、水分、浸出物和含量為評價(jià)指標(biāo)，考察評價(jià)指標(biāo)在3 年貯存過程中的變化。結(jié)果顯示，在3 年貯藏期內(nèi)，吳茱萸飲片中的吳茱萸堿和吳茱萸次堿總含量有升高趨勢，表明吳茱萸飲片貯藏有利于生物堿類含量的轉(zhuǎn)化與積累，從而提高藥效；但檸檬苦素含量有下降趨勢，飲片顏色逐漸變深，氣味變淡，影響療效?？梢姡词乖陉帥鰲l件下，吳茱萸飲片的貯藏時(shí)間也不是越久越好。揮發(fā)油是吳茱萸的有效成分之一，密封不利于其有毒性揮發(fā)油的揮發(fā)［7］，故建議吳茱萸藥材陳化后再制成飲片。

市場銷售的吳茱萸藥材按成熟程度不同分為大花、中花、小花3種規(guī)格［11-12］，其中中花占主流。規(guī)格對吳茱萸藥材質(zhì)量的影響顯著［9］，檸檬苦素含量不合格的2 批吳茱萸飲片均為大花?！吨兴幉纳唐芬?guī)格等級：吳茱萸》中記載，“當(dāng)前市場上仍存在吳茱萸大花規(guī)格，頂端多開裂，不符合藥典性狀描述”，故將大花規(guī)格排除在外，建議加強(qiáng)對大花規(guī)格吳茱萸飲片的監(jiān)管。

在以指標(biāo)性成分含量探討吳茱萸“陳久者良”和制劑穩(wěn)定性方面，其含量變化主要由降解和成分之間的相互轉(zhuǎn)化導(dǎo)致，影響因素主要有溫度、濕度、光照等［13-16］。張慧芳等［8］認(rèn)為，臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)將吳茱萸密封并置遮光處保存，且貯藏年限不能太久。溫英麗等［9］認(rèn)為，檸檬苦素含量隨陳放時(shí)間的延長而降低顯著，推測與內(nèi)酯類成分不穩(wěn)定、易水解有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，在干燥條件下，吳茱萸指標(biāo)性成分的含量基本穩(wěn)定，表明短時(shí)間的高溫處理不會導(dǎo)致吳茱萸指標(biāo)性成分損失，但同時(shí)測定高溫處理前后樣品中揮發(fā)油的含量，發(fā)現(xiàn)揮發(fā)性成分損失明顯，揮發(fā)油成分的大量減少必然影響其藥理學(xué)活性，故低溫環(huán)境有利于其長期穩(wěn)定貯存；在避光條件下，吳茱萸指標(biāo)性成分的含量基本穩(wěn)定，表明檸檬苦素在提取時(shí)不易水解；在光照作用下，除吳茱萸次堿外，吳茱萸堿和檸檬苦素含量均不穩(wěn)定，表明光是影響吳茱萸質(zhì)量的主要因素。因此，在陰涼、遮光條件下，吳茱萸飲片可貯藏較長時(shí)間；在分析和開發(fā)含吳茱萸藥材成分的制劑時(shí)，應(yīng)盡量避光操作；在應(yīng)用吳茱萸飲片時(shí)，不能只注重其是否陳久，也應(yīng)關(guān)注其貯藏時(shí)間及條件［8］。