梁 靜，李 超，黃 俊，羅立駿，徐 登，馮 琴，程輝躍

（重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院·國(guó)家藥品監(jiān)督管理局麻醉精神藥品質(zhì)量監(jiān)測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 401121）

復(fù)方氨酚烷胺片（膠囊）屬解熱鎮(zhèn)痛類非處方［1-6］，規(guī)格均為每片（粒）含對(duì)乙酰氨基酚250 mg、金剛烷胺100 mg、咖啡因15 mg、馬來酸氯苯那敏2 mg、人工牛黃10 mg。復(fù)方氨酚烷胺片（膠囊）歷史久遠(yuǎn)，企業(yè)留存的研發(fā)及申報(bào)資料都較少，且不完整，制劑研發(fā)、標(biāo)準(zhǔn)建立的相關(guān)資料已無從溯源。復(fù)方氨酚烷胺片的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)·化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（第十六冊(cè)）》（WS1- XG - 015 - 2002）［7］，復(fù)方氨酚烷胺膠囊的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·化學(xué)藥品（第五冊(cè)》（WS-HY<05> -01）［8］，但自注冊(cè)以來從未進(jìn)行過改進(jìn)和變更，多個(gè)關(guān)鍵質(zhì)控項(xiàng)目缺失，已無法對(duì)該藥品的質(zhì)量進(jìn)行有效控制。根據(jù)2020年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0941［9］規(guī)定，“每一個(gè)單劑標(biāo)示量小于25 mg 或主藥量小于每一個(gè)單劑重量25%者”，應(yīng)檢查含量均勻度。復(fù)方氨酚烷胺片（膠囊）的咖啡因和馬來酸氯苯那敏的標(biāo)示含量分別為15 mg和2 mg，故需建立含量均勻度的測(cè)定方法。本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)咖啡因和馬來酸氯苯那敏進(jìn)行含量均勻度檢查，以更好地控制和評(píng)價(jià)各企業(yè)產(chǎn)品的混合均勻度及主成分含量均勻度。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260 型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司），配有紫外檢測(cè)器；Waters 2695 型高效液相色譜儀（美國(guó)Waters 公司），配有光電二極管列陣檢測(cè)器（PDA）；XSE204 型電子天平（精度為0.1 mg），Quintix 224 - 1CN 型電子天平（精度為0.01 mg），均購(gòu)自瑞士Mettler Toledo 公司；SB25 - 12DT 型新芝超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司，功率為600 W，頻率為50 kHz）。

1.2 試藥

復(fù)方氨酚烷胺片源于44 家生產(chǎn)企業(yè)，共106 批樣品，其中1 批（批號(hào)為X201002）用于方法學(xué)考察；復(fù)方氨酚烷胺膠囊源于52 家生產(chǎn)企業(yè)，共135 批樣品，其中1批（批號(hào)為20210622）用于方法學(xué)考察；對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品（批號(hào)為100018 - 202312，含量為100%），咖啡因?qū)φ掌罚ㄅ?hào)為171215-202013，含量為99.7%），馬來酸氯苯那敏對(duì)照品（批號(hào)為100047-202008，含量為99.7%），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，水為二次純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［10-14］與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：YMC - C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.1 mol / L 磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫銨11.5 g，加1 000 mL 水使溶解，用磷酸調(diào)pH 至3.0 ±0.05）- 甲醇（60∶40，V/V）；流速：1.0 mL/ min；檢測(cè)波長(zhǎng)：275 nm（對(duì)乙酰氨基酚），225 nm（咖啡因、馬來酸氯苯那敏）；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：5 μL（對(duì)乙酰氨基酚），20 μL（咖啡因、馬來酸氯苯那敏）。在此色譜條件下，各組分色譜峰的分離度均符合要求，理論板數(shù)按氯苯那敏峰計(jì)不低于5 000，對(duì)照品溶液各主峰峰面積的RSD均不超過1%。色譜圖見圖1。

1.馬來酸 2.對(duì)乙酰氨基酚 3.咖啡因 4.氯苯那敏圖1 高效液相色譜圖1.Maleic acid 2.Acetaminophen 3.Caffeine 4.ChlorphenamineFig.1 HPLC chromatogram

2.2 溶液制備

供試品溶液：取樣品1 片（粒），置200 mL 容量瓶中，加甲醇- 水溶液（40∶60，V/V）適量，超聲（功率為600 W，頻率為50 kHz）使溶解，再用甲醇-水溶液（40∶60，V/V）稀釋并定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

對(duì)照品溶液：取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品適量，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇-水溶液（40∶60，V/V）溶解并稀釋成每1 mL 約含對(duì)乙酰氨基酚0.125 mg 的對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品溶液；取馬來酸氯苯那敏對(duì)照品適量，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加甲醇- 水溶液（40∶60，V/V）適量，超聲使溶解并定容，搖勻，作為馬來酸氯苯那敏對(duì)照品貯備液；取咖啡因?qū)φ掌愤m量，精密稱定，置250 mL容量瓶中，加甲醇-水溶液（40∶60，V/V）適量，超聲使溶解，再精密加入馬來酸氯苯那敏對(duì)照品貯備液10 mL，用甲醇-水溶液（40∶60，V/V）稀釋成每1 mL 約含咖啡因75 μg、馬來酸氯苯那敏10 μg 的咖啡因和馬來酸氯苯那敏對(duì)照品溶液；取對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因與馬來酸氯苯那敏對(duì)照品各適量，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇- 水溶液（40∶60，V/V）溶解并稀釋成每1 mL 約含對(duì)乙酰氨基酚1.25 mg、咖啡因75 μg、馬來酸氯苯那敏10 μg的混合對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別吸取對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和馬來酸氯苯那敏對(duì)照品溶液5，10，15，20，25，30 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表1。

表1 方法學(xué)考察結(jié)果Tab.1 Results of the methodological investigation

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（片劑企業(yè)A，批號(hào)為X201002；膠囊劑企業(yè)M，批號(hào)為20210622）樣品6 份，精密稱定，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算含量。結(jié)果見表1，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批（片劑企業(yè)A，批號(hào)為X201002；膠囊劑企業(yè)M，批號(hào)為20210622）樣品適量，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于常溫下放置0，2，4，8，16，24 h 時(shí)按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果見表1，表明供試品溶液在常溫下24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取樣品（片劑企業(yè)A，批號(hào)為X201002；膠囊劑企業(yè)M，批號(hào)為20210622）適量，平行9 份，分別精密加入咖啡因和馬來酸氯苯那敏對(duì)照品溶液8，10，12 mL，各3 份，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量均勻度測(cè)定

片劑：根據(jù)2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0941［9］規(guī)定，若A+2.2S≤15.0，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若A+S>15.0，則供試品的含量均勻度不符合規(guī)定；若A+ 2.2S> 15.0 且A+S≤15.0，則另取20 片（粒）復(fù)試。隨機(jī)抽取每個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的1～6 批樣品進(jìn)行含量均勻度考察，共106 批，含量均勻度測(cè)定色譜圖見圖2。其中，需復(fù)試的樣品8 批，包括咖啡因含量均勻度需復(fù)試1批，馬來酸氯苯那敏含量均勻度需復(fù)試6批，2 個(gè)主成分均需復(fù)試1 批，涉及7 家生產(chǎn)企業(yè)；不合格樣品8 批（即A+S> 15.0），其中咖啡因和馬來酸氯苯那敏含量均勻度不合格各4 批，涉及4 家生產(chǎn)企業(yè)。需復(fù)試的樣品批數(shù)不計(jì)入合格率計(jì)算，故片劑含量均勻度的合格率為91.84%（90/98）。詳見表2。

表2 復(fù)方氨酚烷胺片（膠囊）需復(fù)試批數(shù)和不合格批數(shù)Tab.2 Number of batches of Compound Paracetamol and Amantadine Hydrochloride Tablets（Capsules）need to be retested and unqualified

1.馬來酸（225 nm） 2.對(duì)乙酰氨基酚（275 nm） 3.咖啡因（225 nm） 4.氯苯那敏（225 nm）A - B.供試品溶液 C - D.對(duì)照品溶液圖2 含量均勻度測(cè)定高效液相色譜圖1.Maleic acid（225 nm） 2.Acetaminophen（275 nm） 3.Caffeine（225 nm） 4.Chlorphenamine（225 nm）A - B.Test solution C - D.Reference solutionFig.2 HPLC chromatograms of the content uniformity

膠囊劑：隨機(jī)抽取每個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的1～6 批樣品進(jìn)行含量均勻度考察，共考察135 批，含量均勻度測(cè)定色譜圖見圖2。需復(fù)試的樣品18 批，其中咖啡因含量均勻度需復(fù)試16批，馬來酸氯苯那敏含量均勻度需復(fù)試1批，2 個(gè)主成分均需復(fù)試1 批，涉及13 家生產(chǎn)企業(yè)；不合格樣品6 批（即A+S> 15.0），其中咖啡因和馬來酸氯苯那敏含量均勻度不合格各3 批，涉及6 家生產(chǎn)企業(yè)。需復(fù)試的樣品批數(shù)不計(jì)入合格率計(jì)算，故膠囊劑含量均勻度的合格率為94.87%（111/117）。

2.5 重量/裝量差異與含量均勻度的關(guān)系

根據(jù)2.4 項(xiàng)下測(cè)定結(jié)果，對(duì)S值較大的片劑生產(chǎn)企業(yè)C、膠囊劑生產(chǎn)企業(yè)E 和膠囊劑生產(chǎn)企業(yè)K 產(chǎn)品的重量/裝量差異與含量均勻度的關(guān)系進(jìn)行考察，詳見圖3。片劑生產(chǎn)企業(yè)C、膠囊生產(chǎn)企業(yè)E的產(chǎn)品每片（粒）中3種主成分含量與片（粒）重曲線高度一致，表明主成分在制粒時(shí)混合均勻，但由于片劑生產(chǎn)企業(yè)C的產(chǎn)品重量的RSD為3.31%，膠囊生產(chǎn)企業(yè)E 的產(chǎn)品裝量的RSD為2.25%，導(dǎo)致含量均勻度不合格；膠囊生產(chǎn)企業(yè)K 的產(chǎn)品裝量的RSD為1.35%，但僅有對(duì)乙酰氨基酚的含量與裝量差異呈正相關(guān)。

A1，B1，C1.對(duì)乙酰氨基酚 A2，B2，C2.咖啡因 A3，B3，C3.馬來酸氯苯那敏圖3 重量/裝量差異與含量均勻度的關(guān)系A(chǔ)1，B1，C1.Acetaminophen A2，B2，C2.Caffeine A3，B3，C3.Chlorphenamine MaleateFig.3 Relationship between weight difference and content uniformity

3 討論

3.1 含量測(cè)定方法建立

采用高效液相色譜-紫外檢測(cè)法對(duì)對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和馬來酸氯苯那敏3個(gè)主成分進(jìn)行分離和含量測(cè)定，其難點(diǎn)在于對(duì)乙酰氨基酚每片（粒）含量250 mg，而馬來酸氯苯那敏每片（粒）含量?jī)H2 mg，上述2個(gè)主成分含量差異達(dá)125倍。因此，考慮在同一液相色譜系統(tǒng)中，采用不同的進(jìn)樣量，以保證2種主成分定量的準(zhǔn)確性。根據(jù)PDA 圖譜掃描結(jié)果，咖啡因的最大吸收波長(zhǎng)為275 nm，馬來酸氯苯那敏的最大吸收波長(zhǎng)為228 nm，由于馬來酸氯苯那敏的含量低，氯苯那敏的峰面積較小。因此，確定咖啡因和馬來酸氯苯那敏的檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm。

此外，在現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)中，流動(dòng)相采用等度洗脫方式，導(dǎo)致氯苯那敏的保留時(shí)間較長(zhǎng)，往往超過50 min 才出峰，且氯苯那敏的含量極低，導(dǎo)致氯苯那敏峰形不夠尖銳，理論板數(shù)較差，影響定量的準(zhǔn)確性。采用加大有機(jī)相的比例，氯苯那敏峰的出峰時(shí)間穩(wěn)定在16 min 左右，提高了氯苯那敏峰的理論板數(shù)和定量的準(zhǔn)確性。故選擇2.1項(xiàng)下流動(dòng)相等度洗脫程序。

3.2 含量均勻度測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)

復(fù)方氨酚烷胺片：片劑含量均勻度合格率為91.84%，106 批中有8 批產(chǎn)品需復(fù)試，有8 批產(chǎn)品不合格。咖啡因含量均勻度不合格的有4 批，來自片劑生產(chǎn)企業(yè)A 的3 批和片劑生產(chǎn)企業(yè)E 的1 批，其咖啡因的S值不大，但A值太大，導(dǎo)致A+S>15.0。片劑生產(chǎn)企業(yè)C 產(chǎn)品的含量均勻度較差，馬來酸氯苯那敏含量均勻度不合格。分析原因，生產(chǎn)企業(yè)C 產(chǎn)品的A值和S值均較大，且A值與含量測(cè)定結(jié)果差異較大。片劑生產(chǎn)企業(yè)G產(chǎn)品中馬來酸氯苯那敏的含量均勻度極差，6 批產(chǎn)品中馬來酸氯苯那敏含量均勻度有3 批不符合規(guī)定；1 批S值為5.80%，其余5 批S值最大為1.66%。表明該生產(chǎn)企業(yè)混合制粒的工藝沒有問題，結(jié)合其產(chǎn)品的含量測(cè)定結(jié)果，認(rèn)為生產(chǎn)企業(yè)G 對(duì)馬來酸氯苯那敏的投料量未嚴(yán)格按處方和標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)程序進(jìn)行投料，導(dǎo)致批間差異較大。

復(fù)方氨酚烷胺膠囊：膠囊劑含量均勻度合格率為94.87%，135 批中有18 批產(chǎn)品需復(fù)試，有6 批產(chǎn)品不合格?？Х纫蚝烤鶆蚨炔缓细竦挠?批，來自膠囊生產(chǎn)企業(yè)D，B，F(xiàn)，企業(yè)D 和B 是由于咖啡因含量均勻度A值過大而導(dǎo)致不合格；而膠囊生產(chǎn)企業(yè)F產(chǎn)品的含量均勻度較差，1批產(chǎn)品咖啡因含量均勻度不合格，馬來酸氯苯那敏含量均勻度需復(fù)試，含量均勻度A值和S值均較大，導(dǎo)致產(chǎn)品的含量均勻較差。膠囊生產(chǎn)企業(yè)K產(chǎn)品的含量均勻度極差，1 批產(chǎn)品的咖啡因和馬來酸氯苯那敏含量均勻度均需復(fù)試，2種主成分的A值僅為1.41%和0.06%，表明主藥投料量合格；但S值過大，分別為9.41%和14.14%。表明混合制粒時(shí)未混勻，導(dǎo)致產(chǎn)品的含量均勻度極差。膠囊生產(chǎn)企業(yè)O產(chǎn)品的馬來酸氯苯那敏含量高達(dá)142%，這與含量測(cè)定結(jié)果一致，其規(guī)格為同品種其他產(chǎn)品標(biāo)識(shí)量的1/2，對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺和咖啡因含量均符合規(guī)定，馬來酸氯苯那敏的含量卻遠(yuǎn)高于規(guī)定限度，表明未嚴(yán)格按處方量投料生產(chǎn)。膠囊劑中咖啡因含量均勻度需復(fù)試的批數(shù)較多，涉及12家企業(yè)的16批產(chǎn)品，除了膠囊生產(chǎn)企業(yè)K的1批產(chǎn)品外，其余均為咖啡因含量過高導(dǎo)致含量均勻度超出規(guī)定限度，表明膠囊劑中咖啡因過量投料的現(xiàn)象較片劑普遍。

3.3 含量均勻度不符合規(guī)定的原因分析

考察S值較大的片劑生產(chǎn)企業(yè)C、膠囊生產(chǎn)企業(yè)E和膠囊生產(chǎn)企業(yè)K 產(chǎn)品的重量/裝量差異和含量均勻度的關(guān)系，結(jié)果顯示，由于對(duì)乙酰氨基酚每片標(biāo)示量為250 mg，占每片（粒）制劑總質(zhì)量的50%～70%，每片（粒）制劑中對(duì)乙酰氨基酚的含量與每片（粒）質(zhì)量直接相關(guān)，故控制好重量/裝量差異的均勻性，可保證對(duì)乙酰氨基酚每片（粒）含量的均勻性。片劑生產(chǎn)企業(yè)C和膠囊生產(chǎn)企業(yè)E 的產(chǎn)品由于重量/裝量差異較大，導(dǎo)致含量均勻度不合格，提示生產(chǎn)企業(yè)C和E應(yīng)注意對(duì)壓片工藝的改進(jìn)和提高。膠囊生產(chǎn)企業(yè)K的產(chǎn)品咖啡因和馬來酸氯苯那敏的含量和膠囊的裝量差異無關(guān)聯(lián)，表明混合制粒時(shí)未充分混勻。提示生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)重視在濕法制粒時(shí)制軟材的混合工藝，改進(jìn)工藝參數(shù)，積極查找原因，提高上述3種主成分的混合均勻性。

3.4 小結(jié)

復(fù)方氨酚烷胺片（膠囊）中5 種主成分的混合順序是保證本品種含量均勻度的關(guān)鍵。建議企業(yè)根據(jù)5種主成分的處方量，按從小到大進(jìn)行逐級(jí)投料和混合，且保證足夠的混合時(shí)間，以保證每種主成分混合的均勻性。復(fù)方氨酚烷胺片（膠囊）的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，由于缺乏咖啡因和馬來酸氯苯那敏2 種主成分含量及含量均勻度的控制，部分生產(chǎn)企業(yè)對(duì)這2種成分的投料未嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，批間差異較大，含量均勻度較差。建議生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格管控咖啡因和馬來酸氯苯那敏的投料情況；同時(shí)，應(yīng)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增訂咖啡因和馬來酸氯苯那敏2種主成分的含量及含量均勻度控制項(xiàng)目。