劉五梅 ,劉永飛 ,彭 林 ,張海紅 ,郭琦麗 ,盧 晶 (1.南昌醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院,南昌 330052;2.江西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院藥學(xué)系,南昌 330052)
糖尿病腎病是糖尿病導(dǎo)致的腎臟病變,嚴(yán)重增加了我國醫(yī)療經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1]。其中,糖尿病引起的高血糖和炎癥反應(yīng)是腎小管間質(zhì)纖維化的主要促進(jìn)因素[2]。抑制腎小管細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)沉積和轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)分泌可抑制Ⅳ型膠原蛋白(type Ⅳ collagen,Col Ⅳ)、纖維連接蛋白(fibronectin,F(xiàn)n)等沉積,可有效阻滯腎小管間質(zhì)纖維化,延緩糖尿病腎病的發(fā)展[3]。此外,核因子E2相關(guān)因子2/血紅素氧合酶1(nuclear factor erythroid 2-related factor 2/heme oxygenase-1,Nrf2/HO-1)信號通路的抑制、細(xì)胞內(nèi)高血糖引起的活性氧(reactive oxygen species,ROS)產(chǎn)生[4]以及蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/Nrf2信號通路的激活[5]與糖尿病腎病的發(fā)展密切相關(guān)。
風(fēng)輪菜Clinopodium chinense(Benth.)O.Ktze.為唇形科風(fēng)輪菜屬多年生草本植物,其味辛、苦,性涼,具有抗腫瘤、抗炎、降血糖等多種藥理作用,常用于治療咽喉腫痛、糖尿病、膽囊炎等疾病[6]。紫丹酸B(tournefolic acid B,TAB)是風(fēng)輪菜的主要成分之一,具有抗氧化、抗炎、抗心肌缺血等多種生物活性,可減輕ECM的沉積和腎小管間質(zhì)纖維化[7]。此外,TAB 可以通過阻斷大鼠腦皮層神經(jīng)元中ROS 的積累來減輕谷氨酸引起的神經(jīng)毒性[8]。同時(shí),TAB還能通過激活A(yù)kt信號通路,在心肌缺血再灌注損傷模型中發(fā)揮保護(hù)作用[9]。這些研究結(jié)果表明,風(fēng)輪菜中的TAB 具有潛在的藥用價(jià)值,可以應(yīng)用于糖尿病腎病等相關(guān)疾病的治療和預(yù)防。然而,目前尚不清楚TAB 能否通過激活A(yù)kt/Nrf2/HO-1 信號通路,進(jìn)而改善糖尿病腎病?;诖?,本研究通過建立糖尿病腎病模型小鼠初步探討了TAB 對其腎組織糖代謝、腎功能、氧化應(yīng)激和腎小管間質(zhì)纖維化的影響,并進(jìn)一步研究TAB基于Akt/Nrf2/HO-1信號通路的抗氧化和抗纖維化作用,為糖尿病腎損傷的臨床治療提供參考。
Form Steri-Cycle型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱、Multiskan Sky-High 型全波長酶標(biāo)儀均購自美國Thermo Fisher Scientific 公司;TE2000 型熒光顯微鏡購自日本Nikon 公司;Mini-Protein 型垂直電泳系統(tǒng)、ChemiDoc MP 全能型凝膠成像系統(tǒng)購自美國Bio Rad 公司;強(qiáng)生穩(wěn)豪倍優(yōu)型血糖儀購自強(qiáng)生(中國)醫(yī)療器械有限公司。
TAB(分子量為312.063 3 kDa,純度≥98%)由北京藥用植物研究所贈送;鹽酸維生素E 腸溶片(批號20201012,規(guī)格0.5 g)購自貴州圣濟(jì)堂制藥有限公司;鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(批號為021J2742)均購自美國Sigma公司;血清尿酸、尿素氮、肌酐、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、胰島素、尿蛋白、尿微量白蛋白試劑盒(批號分別為20180927、c01311、A00512、S0101S、a00312、20190521、H20311、C03521、20170316)均購自南京建成生物工程研究所有限公司;過碘酸希夫(periodic acidschiff,PAS)染色試劑盒、Masson 染色試劑盒(批號分別為20190712、20200305)均購自北京索萊寶科技有限公司;鼠源8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)單克隆抗體、兔源TGF-β1單克隆抗體、Col Ⅳ多克隆抗體、Fn 多克隆抗體、HO-1 單克隆抗體、Nrf2 多克隆抗體、磷酸化Akt(p-Akt)多克隆抗體、β-actin 單克隆抗體(批號分別為GR115731、5832、48508、5830、201734、305290、8226、25831)均購自美國Abcam 公司;辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗(批號33101)購自美國Jackson公司。
本研究所用動物為4 周齡SPF 級的C57BL/6J 雄性小鼠[10―11],共100只,體重為(15.0±1.5)g,購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司,動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(京)2016-0011。本實(shí)驗(yàn)方案通過南昌醫(yī)學(xué)院動物倫理委員會批準(zhǔn)和審核(倫理號WY.No20191030b0601231),并嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)動物使用和保護(hù)的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行操作。飼養(yǎng)期間小鼠自由進(jìn)食飲水,動物房內(nèi)溫度穩(wěn)定在23~25 ℃,每天日光燈照射12 h。高脂飼料(批號ZL20111-0127312.5)購自北京華阜康生物科技股份有限公司。
隨機(jī)選取12 只小鼠作為正常對照組,給予普通飲食。另外80 只小鼠通過高脂飲食(其中蛋白質(zhì)占18.14%,脂肪占60.65%,碳水化合物占21.21%)聯(lián)合小劑量STZ 建立糖尿病腎病小鼠模型[12],具體方法如下:小鼠以相應(yīng)飼料喂養(yǎng)6周后,禁食12 h,然后一次性腹腔注射5% STZ(50 mg/kg),注射后第3天檢測小鼠空腹血糖,當(dāng)空腹血糖>16.7 mmol/L時(shí),表明糖尿病模型造模成功[13](共造模成功72只糖尿病小鼠);進(jìn)一步喂養(yǎng)相應(yīng)飼料10周后,收集糖尿病小鼠尿液,當(dāng)24 h尿蛋白排泄量>30 mg/dL時(shí),表明糖尿病腎病模型造模成功[13]。最終共造模成功64只糖尿病腎病模型小鼠。
將60 只造模成功的糖尿病腎病模型小鼠隨機(jī)分為模型組、陽性對照組(維生素E[14],20 mg/kg,劑量參考文獻(xiàn)[6]設(shè)置)和TAB 低、中、高劑量組(1、2、4 mg/kg,劑量參考文獻(xiàn)[4]設(shè)置),每組12只。各給藥組小鼠灌胃相應(yīng)藥物,正常對照組及模型組小鼠灌胃等量生理鹽水,連續(xù)4周。
2.2.1 空腹血糖含量測定
TAB灌胃后,各組小鼠每周用75%乙醇對小鼠尾尖消毒后,于尾靜脈處利用血糖儀檢測一次空腹血糖(檢測前禁食禁水12 h)。
2.2.2 葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)和胰島素耐量實(shí)驗(yàn)
葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn):給藥后第4周,每組小鼠禁食不禁水過夜后,稱重,腹腔注射葡萄糖(1.5 g/kg)后,于0、15、30、60、120 min時(shí)尾靜脈取血0.1 mL,然后檢測血糖值,并計(jì)算葡萄糖耐量曲線下面積(area under curve,AUC)。
胰島素耐量實(shí)驗(yàn):給藥后第4周,每組隨機(jī)選取6只小鼠禁食不禁水過夜后,稱重,腹腔注射胰島素(0.75 U/kg)后,于0、15、30、60、120 min時(shí)尾靜脈取血0.1 mL,然后檢測血糖值,并計(jì)算胰島素耐量AUC。
2.2.3 血清胰島素含量測定
給藥后第4周,每組小鼠禁食過夜后,腹腔注射150 mg/kg戊巴比妥鈉處死,稱重。取小鼠心尖血0.8 mL,以2 000 r/min離心10 min,收集上層血清,采用胰島素試劑盒檢測小鼠血清胰島素含量。
2.3.1 腎臟系數(shù)
給藥后第4 周,每組小鼠進(jìn)行“2.2.3”項(xiàng)下心尖血取血后,解剖摘取腎臟,稱重,計(jì)算腎臟系數(shù):腎臟系數(shù)(mg/g)=腎臟質(zhì)量/體重。
2.3.2 血清中尿酸、尿素氮和肌酐水平的測定
給藥后第4 周,每組小鼠進(jìn)行“2.2.3”項(xiàng)下心尖血取血的同時(shí)利用眼球采血法收集血液,血樣先置于37 ℃條件下1 h,再置于4 ℃下過夜,待血液凝固后,以2 000 r/min 離心10 min,收集上層血清;按照相應(yīng)試劑盒說明書方法操作分別檢測小鼠血清中尿酸、尿素和肌酐水平。
2.3.3 尿微量白蛋白與肌酐比值測定
給藥后第4周,每組小鼠放進(jìn)代謝籠,禁食,采集24 h尿量;按相應(yīng)試劑盒說明書方法操作,分別檢測小鼠尿微量白蛋白和尿肌酐水平,并計(jì)算兩者的比值。
2.4.1 小鼠腎組織中SOD、GSH-Px和MDA含量測定
“2.3.1”項(xiàng)下腎臟稱重后,取一半按照質(zhì)量體積比1∶9(g/mL)加入生理鹽水,2 000 r/min離心15 min,取沉淀研磨制備腎組織勻漿,按相應(yīng)試劑盒說明書方法操作,檢測小鼠腎組織中SOD、GSH-Px和MDA的含量。
2.4.2 小鼠腎組織中8-OHdG含量測定
采用免疫組化法進(jìn)行檢測。取“2.4.1”項(xiàng)下另一半腎組織置于10%甲醛溶液固定48 h,經(jīng)梯度乙醇脫水浸蠟后進(jìn)行石蠟包埋、切片(5 μm);取部分切片進(jìn)行抗原熱修復(fù),5%山羊血清封閉非特異抗原,加入8-OHdG 一抗(稀釋度1∶200),4 ℃孵育過夜;次日,以磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗3次,加入相應(yīng)二抗(稀釋度為1∶5 000),37 ℃孵育30 min;以PBS 清洗3 次后,進(jìn)行DAB 顯色和蘇木素染色,然后經(jīng)梯度乙醇脫水、透明、封片。采用熒光顯微鏡觀察切片棕色或棕黑色的陽性區(qū)域。
將“2.4.2”項(xiàng)下剩余切片進(jìn)行脫蠟水化,取部分切片進(jìn)行PAS染色,基底膜、系膜基質(zhì)、糖原及糖蛋白呈紫紅色,細(xì)胞核呈藍(lán)色。另取部分切片進(jìn)行Masson 染色,ECM的膠原纖維被染成藍(lán)色,肌纖維和細(xì)胞核則呈紅色或粉紅色。利用熒光顯微鏡觀察腎組織纖維化程度,并用ImageJ V1.8.0軟件統(tǒng)計(jì)染色面積占比。
采用Western blot 法進(jìn)行檢測。使用液氮研磨20 mg腎組織,加入RIPA裂解液置于冰上30 min完全溶解樣品后,于4 ℃條件下以12 000 r/min 離心20 min,收集上清液進(jìn)行BCA 定量,然后進(jìn)行變性處理。取變性后的蛋白樣品進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳和轉(zhuǎn)膜,以5%脫脂牛奶室溫封閉1 h,加入TGF-β1、Fn、Col Ⅳ、p-Akt、Nrf2、HO-1、β-actin 一抗(稀釋度均為1∶1 000),4 ℃孵育過夜;以PBS 漂洗3 次×5 min,加入相應(yīng)二抗(稀釋度為1∶5 000),室溫孵育1 h;以PBS 漂洗3 次×5 min;經(jīng)顯色處理后,進(jìn)行凝膠成像。采用ImageJ V1.8.0軟件分析蛋白條帶灰度值,以目標(biāo)蛋白與內(nèi)參蛋白β-actin的灰度值比值表示蛋白的表達(dá)水平。
建模第4 周小鼠空腹血糖、血清胰島素檢測及耐量實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與正常對照組比較,模型組小鼠空腹血糖、葡萄糖耐量AUC、胰島素耐量AUC、血清胰島素含量均顯著升高(P<0.05)。與模型組比較,TAB 各劑量組小鼠上述指標(biāo)均顯著降低(P<0.05),且呈劑量依賴性;陽性對照組小鼠上述指標(biāo)均顯著降低(P<0.05)。結(jié)果見表1。
表1 各組小鼠葡萄糖代謝功能相關(guān)指標(biāo)的檢測結(jié)果(±s,n=12)
a:與正常對照組相比,P<0.05;b:與模型組相比,P<0.05;c:與TAB低劑量組相比,P<0.05;d:與TAB中劑量組相比,P<0.05。
組別正常對照組模型組TAB低劑量組TAB中劑量組TAB高劑量組陽性對照組第4周空腹血糖/(mmol/L)5.10±0.42 16.05±0.03a 12.06±0.28b 9.21±0.67bc 5.42±0.61bcd 5.38±0.41b葡萄糖耐量AUC/(mmol·min/L)20.33±1.53 62.33±0.58a 54.00±2.00b 40.67±1.53bc 30.33±2.08bcd 29.27±1.87b胰島素耐量AUC/(mIU·min/L)34.67±1.53 70.00±1.00a 59.00±1.00b 41.67±0.58bc 38.67±1.53bcd 37.44±2.32b血清胰島素含量/mIU 10.67±1.53 23.00±1.00a 18.67±1.53b 15.33±0.58bc 12.67±0.58bcd 12.38±0.43b
與正常對照組相比,模型組小鼠腎臟系數(shù)和血清中尿酸、尿素氮、肌酐水平以及尿微量白蛋白與肌酐比值均顯著升高(P<0.05)。與模型組比較,TAB 各劑量組小鼠上述指標(biāo)水平均顯著降低(P<0.05),且呈劑量依賴性;陽性對照組小鼠上述指標(biāo)均顯著降低(P<0.05)。結(jié)果見表2。
表2 各組小鼠腎臟指數(shù)和腎功能相關(guān)指標(biāo)水平的檢測結(jié)果(±s,n=12)
表2 各組小鼠腎臟指數(shù)和腎功能相關(guān)指標(biāo)水平的檢測結(jié)果(±s,n=12)
a:與正常對照組相比,P<0.05;b:與模型組相比,P<0.05;c:與TAB低劑量組相比,P<0.05;d:與TAB中劑量組相比,P<0.05。
組別正常對照組模型組TAB低劑量組TAB中劑量組TAB高劑量組陽性對照組腎臟指數(shù)/(mg/g)0.013±0.00 0.027±0.00a 0.015±0.00b 0.014±0.00bc 0.012±0.00bcd 0.011±0.00b血清中尿酸水平/(mmol/L)293.33±54.37 541.33±38.87a 466.67±9.57b 403.67±13.47bc 336.00±11.43bcd 331.36±8.35b血清中尿素氮水平/(mmol/L)5.90±0.78 16.00±0.10 a 13.73±0.41b 12.13±0.74bc 7.30±0.65bcd 7.25±0.72b血清中肌酐水平/(μmol/L)147.67±7.59 218.67±7.36a 187.00±5.35b 177.33±2.06bc 164.67±5.25bcd 163.00±4.32b尿微量白蛋白與肌酐比值/(mmol/L)0.31±0.09 4.97±1.12a 3.22±1.27b 2.32±1.03bc 1.42±0.89bcd 1.44±0.48b
與正常對照組相比,模型組小鼠腎組織中SOD、GSH-Px含量均顯著降低,MDA、8-OHdG含量均顯著升高(P<0.05)。與模型組比較,TAB 各劑量組小鼠上述指標(biāo)水平均顯著逆轉(zhuǎn)(P<0.05),且呈劑量依賴性;陽性對照組小鼠上述指標(biāo)均顯著逆轉(zhuǎn)(P<0.05)。結(jié)果見圖1(陽性對照組圖略)、表3。
圖1 各組小鼠腎組織中8-OHdG的染色圖
表3 各組小鼠腎組織氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)含量的檢測結(jié)果(±s,n=12)
表3 各組小鼠腎組織氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)含量的檢測結(jié)果(±s,n=12)
a:與正常對照組相比,P<0.05;b:與模型組相比,P<0.05;c:與TAB低劑量組相比,P<0.05;d:與TAB中劑量組相比,P<0.05。
組別正常對照組模型組TAB低劑量組TAB中劑量組TAB高劑量組陽性對照組SOD/(U/mL)317.33±13.79 193.00±11.52a 235.83±4.58b 255.50±5.47bc 280.17±9.22bcd 291.42±8.33b GSH-Px/(U/L)321.50±10.75 196.50±14.65a 243.00±8.85b 264.67±8.87bc 293.50±8.22bcd 298.42±9.44b MDA/(μmoL/mg)54.67±5.35 91.17±3.66a 83.33±3.08b 69.83±4.96bc 65.50±2.74bcd 66.91±4.38b 8-OHdG 2.03±0.19 4.90±0.63a 4.37±0.39b 3.18±0.19bc 2.42±0.32bcd 2.31±0.22b
與正常對照組相比,模型組小鼠基底膜增厚、系膜基質(zhì)堆積、腎小球硬化、腎小管間質(zhì)纖維化明顯,基質(zhì)染色面積和ECM沉積染色面積均顯著增大(P<0.05)。與模型組比較,TAB 各劑量上述病變減輕,基質(zhì)染色面積和ECM 染色沉積面積均顯著減?。≒<0.05),且呈劑量依賴性;陽性對照組小鼠上述病變減輕,基質(zhì)染色面積和ECM染色沉積面積均顯著減?。≒<0.05)。結(jié)果見圖2(陽性對照組圖略)、表4。
圖2 各組小鼠腎組織的PAS、Masson染色圖
表4 各組小鼠腎組織PAS、Masson染色面積的檢測結(jié)果(±s,n=12)
表4 各組小鼠腎組織PAS、Masson染色面積的檢測結(jié)果(±s,n=12)
a:與正常對照組相比,P<0.05;b:與模型組相比,P<0.05;c:與TAB低劑量組相比,P<0.05;d:與TAB中劑量組相比,P<0.05。
組別正常對照組模型組TAB低劑量組TAB中劑量組TAB高劑量組陽性對照組基質(zhì)染色面積占比/%5.17±0.75 15.67±2.25a 9.67±0.52b 7.83±0.50bc 5.33±0.82bcd 5.24±0.77b ECM沉積染色面積占比/%0.21±0.09 0.71±0.03a 0.51±0.02b 0.36±0.04bc 0.27±0.03bcd 0.26±0.02b
與正常對照組相比,模型組小鼠腎組織中TGF-β1、Fn、Col Ⅳ蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05)。與模型組比較,TAB 各劑量組小鼠上述指標(biāo)水平均顯著降低(P<0.05),且呈劑量依賴性;陽性對照組小鼠上述指標(biāo)均顯著降低(P<0.05)。結(jié)果見圖3、表5。
圖3 各組小鼠腎組織中ECM沉積相關(guān)蛋白的電泳圖
表5 各組小鼠腎組織中ECM 沉積相關(guān)蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果(±s,n=12)
表5 各組小鼠腎組織中ECM 沉積相關(guān)蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果(±s,n=12)
a:與正常對照組相比,P<0.05;b:與模型組相比,P<0.05;c:與TAB低劑量組相比,P<0.05;d:與TAB中劑量組相比,P<0.05。
組別正常對照組模型組TAB低劑量組TAB中劑量組TAB高劑量組陽性對照組TGF-β1/β-actin 0.99±0.04 1.79±0.04a 1.27±0.03b 0.89±0.03bc 0.68±0.02bcd 0.99±0.04b Col Ⅳ/β-actin 0.40±0.05 1.50±0.04a 1.00±0.04b 0.67±0.03bc 0.36±0.03bcd 0.40±0.05b Fn/β-actin 0.42±0.04 1.89±0.03a 0.80±0.02b 0.65±0.05bc 0.60±0.02bcd 0.42±0.04b
與正常對照組相比,模型組小鼠腎組織中p-Akt、Nrf2、HO-1 蛋白表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)。與模型組比較,TAB 各劑量組小鼠上述指標(biāo)水平均顯著升高(P<0.05),且呈劑量依賴性;陽性對照組小鼠上述指標(biāo)均顯著升高(P<0.05)。結(jié)果見圖4、表6。
圖4 各組小鼠腎組織中Akt/Nrf2/HO-1 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的電泳圖
表6 各組小鼠腎組織中Akt/Nrf2/HO-1 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果(±s,n=12)
表6 各組小鼠腎組織中Akt/Nrf2/HO-1 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果(±s,n=12)
a:與正常對照組相比,P<0.05;b:與模型組相比,P<0.05;c:與TAB低劑量組相比,P<0.05;d:與TAB中劑量組相比,P<0.05。
組別正常對照組模型組TAB低劑量組TAB中劑量組TAB高劑量組陽性對照組HO-1/β-actin 0.91±0.03 0.58±0.03a 0.74±0.05b 1.08±0.03bc 1.52±0.04bcd 1.48±0.06b Nrf2/β-actin 1.10±0.02 0.54±0.05a 0.77±0.06b 1.05±0.06bc 1.30±0.07bcd 1.26±0.06b p-Akt/β-actin 1.13±0.02 0.62±0.03a 0.82±0.03b 0.90±0.05bc 1.03±0.03bcd 1.98±0.04b
糖尿病腎病是由于糖尿病所致的慢性腎臟疾病,是糖尿病主要的并發(fā)癥之一,其主要病理學(xué)特征表現(xiàn)為腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化,臨床表現(xiàn)主要為持續(xù)性蛋白尿。高糖引起的過量ROS 產(chǎn)生被認(rèn)為是糖尿病腎損傷的始動因素[15]。體內(nèi)過多的ROS 可通過攻擊體內(nèi)的不飽和脂肪酸導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化,誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化物MDA 的形成[8]。抗氧化酶如SOD、GSH-Px 的活性可反映機(jī)體的抗氧化能力[16],這時(shí)可通過檢測機(jī)體內(nèi)MDA、GSH-Px等指標(biāo)含量反映腎臟的受損程度。高脂飲食聯(lián)合腹腔注射STZ 制備的動物模型與人類糖尿病十分相似,是目前嚙齒類動物糖尿病模型常用的構(gòu)建方法[13]。維生素E作為體內(nèi)重要的抗氧化劑,可清除生物體中產(chǎn)生的ROS,抑制氧化應(yīng)激的水平,進(jìn)而延緩糖尿病腎病患者腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化[17]。因此,本研究采用高脂飲食聯(lián)合腹腔注射STZ 誘導(dǎo)糖尿病腎病模型小鼠,并以維生素E 為陽性對照。本研究結(jié)果顯示,與正常對照組相比,模型組小鼠系膜基質(zhì)堆積、腎小球硬化、腎小管間質(zhì)纖維化明顯,腎臟系數(shù)、腎功能相關(guān)指標(biāo)水平和MDA、8-OHdG 含量均顯著升高,SOD、GSH-Px含量均顯著降低;經(jīng)TAB干預(yù)后,上述指標(biāo)均顯著改善,這提示TAB可改善糖尿病腎病模型小鼠的腎功能、氧化應(yīng)激水平、腎小管間質(zhì)纖維化。
在糖尿病腎病中,高血糖和氧化應(yīng)激會導(dǎo)致腎臟內(nèi)ECM沉積相關(guān)因子的異常積聚,伴隨著腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化,從而加劇了腎臟損傷。Akt/Nrf2/HO-1信號通路是重要的細(xì)胞保護(hù)通路,可對抗氧化應(yīng)激,減輕細(xì)胞受損。在糖尿病腎病中,該信號通路的活性通常受到抑制,導(dǎo)致細(xì)胞對氧化應(yīng)激的抵抗力下降[4—5]。本研究結(jié)果顯示,經(jīng)TAB 干預(yù)后,小鼠腎組織中TGF-β1、Fn、Col Ⅳ蛋白表達(dá)水平均顯著降低,p-Akt、Nrf2、HO-1蛋白表達(dá)水平均顯著升高,這提示TAB可通過激活A(yù)kt/Nrf2/HO-1 信號通路,減少腎組織ECM 沉積,進(jìn)而減緩糖尿病腎病的進(jìn)展。
綜上所述,TAB可改善糖尿病腎病模型小鼠糖代謝和腎功能,減輕腎小管間質(zhì)纖維化;其作用機(jī)制可能與激活A(yù)kt/Nrf2/HO-1 信號通路,抑制ECM 沉積,拮抗高糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激有關(guān)。