謝 龍 ，趙雨芯 ，劉 凱 ，古 環(huán) ，李小芳 #（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)西南特色中藥資源國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都 611137；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，成都 611137）

黃芩苷（baicalin，BCN）是從黃芩干燥根中提取的主要有效成分，具有解熱抗炎、抗病毒及免疫調(diào)節(jié)等多種藥理活性，但其水溶性及脂溶性較差，體內(nèi)生物利用度較低，嚴(yán)重限制了黃芩苷的臨床應(yīng)用[1]。甘草酸（glycyrrhizic acid，GA）是從甘草干燥根及根莖中提取的主要有效成分，具有抗炎、抗腫瘤、抗病毒等多種藥理活性，難溶于冷水，但可與其他天然產(chǎn)物形成復(fù)合物[2]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，黃芩-甘草藥對(duì)中BCN 的溶出與兩者配伍比例有關(guān)，且GA可能會(huì)增加BCN的溶解度[3]。

納米晶是近年一種增加難溶性藥物溶解度的新型載藥技術(shù)，以少量表面活性劑或高分子材料作為穩(wěn)定劑，可降低原料藥的粒徑至納米級(jí)以增加難溶性藥物的溶出度，進(jìn)而提高藥物的生物利用度[4―5]。基于此，本研究根據(jù)經(jīng)典藥對(duì)“黃芩-甘草”配伍比例，采用沉淀法結(jié)合高壓均質(zhì)法制備BCN-GA 納米晶（BCN-GA solid nanocrystals，BCN-GA-SN），對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行表征，并考察其體外釋放性能，以期為BCN-GA-SN 制劑的研發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有MS-280-H型磁力攪拌器（杭州旌斐儀器科技有限公司）、FA224 型電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）、AH-100型高壓均質(zhì)機(jī)（加拿大ATS公司）、Nicomp 380ZLS型激光粒度分析儀（美國(guó)PSS公司）、SJIA-10N-50型冷凍干燥機(jī)（寧波市雙嘉儀器有限公司）、ZRS-8G 型智能溶出試驗(yàn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）、Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司）、DSC3 型差示掃描量熱儀（瑞士Mettler Toledo 公司）、SU8010 型掃描電子顯微鏡（日本Hitachi公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

BCN原料藥（批號(hào)GB-20191023，純度92%）、GA原料藥（批號(hào)GB-201905021，純度98%）均購自西安小草植物科技有限公司；BCN 對(duì)照品（批號(hào)MUST-19081012，純度98%）、GA 對(duì)照品（批號(hào)MUST-1908080，純度98.89%）均購自成都曼斯特生物科技有限公司；十二烷基硫酸鈉（sodium dedecyl sulfate，SDS）、聚乙二醇400[Poly（ethylene glycol）-400，PEG-400]、泊洛沙姆188（poloxamer 188，P188）、吐溫-80、聚乙烯吡咯烷酮K30（polyvinylpyrrolidone-K30，PVP-K30）、甘露醇、殼聚糖、乳糖、山梨醇、葡萄糖、無水乙醇均購自成都市科龍化工試劑廠；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 BCN-GA配伍比例的確定

黃芩-甘草為中醫(yī)經(jīng)典藥對(duì)，在中藥復(fù)方中具有解表清里、清熱解毒功效時(shí)的配伍比例為3∶2（m/m）；再根據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》（一部）對(duì)BCN 和GA 含量的要求[6―7]，本研究最終確定BCN和GA的配伍比例為6∶1。

2.2 BCN-GA納米混懸液的制備及其工藝優(yōu)化

2.2.1 BCN-GA納米混懸液的制備

采用沉淀法結(jié)合高壓均質(zhì)法進(jìn)行制備。稱取BCN原料藥1.2 g，加無水乙醇適量，超聲（功率480 W，頻率40 kHz）使其完全溶解；然后通過勻速泵注入至含GA原料藥0.2 g 和適量穩(wěn)定劑的水（100 mL）中，以相應(yīng)轉(zhuǎn)速攪拌一定時(shí)間，揮去乙醇至無醇味，即得粗混懸液。采用高壓均質(zhì)機(jī)，在一定壓力下均質(zhì)數(shù)次，即得BCN-GA納米混懸液。

2.2.2 BCN-GA 納米混懸液平均粒徑及多分散性指數(shù)的測(cè)定

取“2.2.1”項(xiàng)下BCN-GA納米混懸液適量，用水稀釋3 倍后，采用激光粒度儀測(cè)定其粒徑及多分散性指數(shù)（polydispersity index，PDI），PDI 越小，表明粒子的大小分布均勻。重復(fù)測(cè)定3次，取平均值。

2.2.3 BCN-GA納米混懸液制備工藝的單因素考察

以平均粒徑、PDI 為評(píng)價(jià)指標(biāo)，分別對(duì)BCN-GA 納米混懸液穩(wěn)定劑的種類及用量、攪拌轉(zhuǎn)速和時(shí)間、高壓均質(zhì)壓力和次數(shù)6個(gè)工藝因素進(jìn)行單因素考察。

（1）穩(wěn)定劑種類的考察：按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備粗混懸液，穩(wěn)定劑用量為BCN原料藥的10%，以1 000 r/min攪拌15 min，進(jìn)而考察不同種類穩(wěn)定劑（SDS、P188、PEG-400、吐溫-80、PVP-K30）對(duì)BCN-GA納米混懸液制備的影響。由表1 可知，當(dāng)以SDS 為穩(wěn)定劑時(shí)，所得BCN-GA 納米混懸液的粒徑較小，且體系較為穩(wěn)定，優(yōu)于其他穩(wěn)定劑，故后續(xù)對(duì)穩(wěn)定劑SDS的用量進(jìn)行考察。

表1 不同種類的穩(wěn)定劑對(duì)BCN-GA 納米混懸液平均粒徑、PDI及穩(wěn)定性的影響（±s，n＝3）

表1 不同種類的穩(wěn)定劑對(duì)BCN-GA 納米混懸液平均粒徑、PDI及穩(wěn)定性的影響（±s，n＝3）

種類SDS P188 PEG-400吐溫-80 PVP-K30平均粒徑/nm 461.6±3.8 485.4±5.6 551.2±9.5 581.6±12.6 692.7±19.7 PDI 0.254±0.026 0.294±0.023 0.345±0.029 0.338±0.026 0.434±0.020 2 h的穩(wěn)定性細(xì)微懸浮，搖之分散較大顆粒聚集，有沉淀較大顆粒懸浮，有沉淀大顆粒，產(chǎn)生絮凝絮狀聚集，搖之不分散

（2）穩(wěn)定劑SDS 用量的考察：按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備粗混懸液，水中加入不同體積分?jǐn)?shù)（相對(duì)于BCN的用量，下同）的SDS（分別為BCN用量的5%、10%、15%、20%、25%、30%），以1 000 r/min攪拌15 min，進(jìn)而考察SDS的用量對(duì)BCN-GA 納米混懸液制備的影響。由圖1A 可知，隨著SDS用量的增加，所得納米混懸液的平均粒徑、PDI 均先減小后增大，原因可能是SDS 使用過量，超過了其臨界膠束濃度，使SDS 形成膠束與納米粒競(jìng)爭(zhēng)吸附，從而使納米混懸液的穩(wěn)定性降低，導(dǎo)致體系中粒子聚集和沉降。綜合考慮，最終確定SDS的用量為15%。

圖1 BCN-GA納米混懸液制備工藝的單因素考察結(jié)果

（3）攪拌轉(zhuǎn)速的考察：按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備粗混懸液，SDS用量為15%，以不同轉(zhuǎn)速（200、400、600、800、1 000、1 200 r/min）攪拌15 min，進(jìn)而考察攪拌轉(zhuǎn)速對(duì)BCN-GA 納米混懸液制備的影響。由圖1B 可知，當(dāng)轉(zhuǎn)速低于1 000 r/min 時(shí)，隨著轉(zhuǎn)速的增加，體系中粒子間的碰撞機(jī)會(huì)和強(qiáng)度增加，使得納米混懸液的平均粒徑和PDI均減小；當(dāng)轉(zhuǎn)速超過1 000 r/min時(shí)，攪拌過程中可能會(huì)產(chǎn)生氣泡，阻礙了體系中粒子間的碰撞，導(dǎo)致沉降，從而使得納米混懸液的平均粒徑及PDI 均增大。綜合考慮，最終確定攪拌速度為1 000 r/min。

（4）攪拌時(shí)間的考察：按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備粗混懸液，SDS 用量為15%，以1 000 r/min 攪拌不同時(shí)間（5、10、15、20、25、30 min），進(jìn)而考察攪拌時(shí)間對(duì)BCN-GA納米混懸液制備的影響。由圖1C 可知，隨著攪拌時(shí)間的增加，所得納米混懸液的平均粒徑和PDI均先減小后趨于穩(wěn)定而后增加，且當(dāng)攪拌時(shí)間為15 min 時(shí)，納米混懸液的平均粒徑和PDI均較小。綜合考慮，最終確定攪拌時(shí)間為15 min。

（5）均質(zhì)次數(shù)的考察：按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備粗混懸液，SDS 用量為15%，以1 000 r/min 攪拌15 min；將制得的粗混懸液先置于30 MPa壓力下均質(zhì)5次（由于低壓環(huán)境有利于樣品中大顆粒粒徑的減小，高壓環(huán)境可加速穩(wěn)定劑的擴(kuò)散使樣品的粒徑和PDI減小，故本實(shí)驗(yàn)采用高、低壓相結(jié)合的形式進(jìn)行優(yōu)化），再于100 MPa壓力下均質(zhì)不同次數(shù)（5、10、15、20、25、30次），進(jìn)而考察均質(zhì)次數(shù)對(duì)BCN-GA 納米混懸液制備的影響。由圖1D 可知，隨著均質(zhì)次數(shù)的增加，所得納米混懸液的平均粒徑及PDI 均逐漸減?。划?dāng)均質(zhì)次數(shù)大于20 次時(shí)，其對(duì)納米混懸液的平均粒徑和PDI影響較小。綜合考慮，最終確定均質(zhì)次數(shù)為20次。

（6）均質(zhì)壓力的考察：按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備粗混懸液，SDS 用量為15%，以1 000 r/min 攪拌15 min；將制得的粗混懸液先置于30 MPa壓力下均質(zhì)5次，再于不同壓力（40、60、80、100、120、150 MPa）下均質(zhì)20 次，進(jìn)而考察均質(zhì)壓力對(duì)BCN-GA 納米混懸液制備的影響。由圖1E可知，隨著均質(zhì)壓力的升高，所得納米混懸液的平均粒徑及PDI 均先逐漸減小；當(dāng)均質(zhì)壓力達(dá)到120 MPa時(shí)，平均粒徑和PDI 顯著增大，這可能是由于均質(zhì)過程中壓力過大導(dǎo)致混懸劑的保護(hù)層被破壞，導(dǎo)致粒子發(fā)生聚集。綜合考慮，最終確定高壓時(shí)的均質(zhì)壓力為100 MPa。

（7）驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：采用經(jīng)上述單因素實(shí)驗(yàn)考察得出的最優(yōu)處方、制備工藝條件，重復(fù)制備3 批BCN-GA 納米混懸液，并測(cè)定其粒徑及PDI。結(jié)果顯示，BCN-GA納米混懸液的平均粒徑為（394.7±4.6）nm，PDI 為0.195±0.011，RSD 值均小于5%。于室溫條件下放置2 h 后，測(cè)定其平均粒徑為（395.1±1.39）nm，PDI 為0.201±0.004，RSD 值均小于5%。這表明該制備工藝所制得的BCN-GA 納米混懸液粒徑大小均一，具有良好的穩(wěn)定性。

2.3 BCN-GA-SN的制備及凍干固化工藝優(yōu)化

2.3.1 BCN-GA-SN的制備

取按“2.2”項(xiàng)下最優(yōu)工藝所制的BCN-GA 納米混懸液10 mL，置于稱量瓶中；加入凍干保護(hù)劑適量，于-50 ℃條件下預(yù)凍12 h，再減壓冷凍干燥36 h，即得BCN-GA-SN。

2.3.2 BCN-GA-SN的再分散性評(píng)價(jià)

再分散系數(shù)（redispersibility index，RDI）是評(píng)價(jià)固化后納米制劑分散性的指標(biāo)，具體計(jì)算公式為RDI＝凍干后再分散的制劑粒徑/初始制劑粒徑；其值越趨近于1，表明其固化損傷程度越低[6]。取“2.3.1”項(xiàng)下所得BCNGA-SN適量，加水10 mL，輕輕振蕩使其復(fù)溶，采用激光粒度儀測(cè)定復(fù)溶后的平均粒徑和PDI，并計(jì)算RDI。

2.3.3 BCN-GA-SN凍干固化工藝的優(yōu)化及驗(yàn)證

以凍干固化后納米晶的外觀以及再分散后的平均粒徑、PDI、RDI 為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)凍干保護(hù)劑種類及用量進(jìn)行考察。

（1）凍干保護(hù)劑種類的考察：取按“2.2”項(xiàng)下最優(yōu)工藝所制的納米混懸液5份，分別加入常用的凍干保護(hù)劑甘露醇、殼聚糖、乳糖、山梨醇、葡萄糖（用量均為BCN的5%），各組平行3 份樣品，按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備BCN-GA-SN，以不加入凍干保護(hù)劑的樣品為空白對(duì)照，考察凍干保護(hù)劑種類對(duì)BCN-GA-SN凍干固化工藝的影響。由表2 可知，未添加凍干保護(hù)劑的BCN-GA-SN 質(zhì)地粗糙，且再分散后粒徑增加最大；經(jīng)甘露醇制備的BCN-GA-SN 凍干粉外觀形狀較為良好，復(fù)溶后粒徑最小，且RDI最接近1。綜合考慮，最終確定甘露醇為凍干保護(hù)劑。

表2 不同凍干保護(hù)劑對(duì)BCN-GA-SN 凍干固化工藝的影響（±s，n＝3）

表2 不同凍干保護(hù)劑對(duì)BCN-GA-SN 凍干固化工藝的影響（±s，n＝3）

凍干保護(hù)劑種類未添加甘露醇?xì)ぞ厶侨樘巧嚼娲计咸烟瞧骄?nm 501.5±4.1 442.2±5.7 487.6±5.3 462.7±4.7 488.8±8.3 479.3±5.9 PDI 0.284±0.022 0.225±0.015 0.273±0.025 0.241±0.029 0.266±0.028 0.244±0.021 RDI 1.206±0.009 1.055±0.013 1.136±0.012 1.079±0.011 1.125±0.019 1.089±0.013外觀疏松多孔，質(zhì)地粗糙輕微皺縮，表面平整，質(zhì)地均一輕微皺縮，較粗糙，色澤不均一輕微皺縮，表面多孔，質(zhì)地均一表面皺縮，大量結(jié)塊，黏性較大表面皺縮，少量結(jié)塊，黏性較大

（2）凍干保護(hù)劑的用量考察：取按“2.2”項(xiàng)下最優(yōu)工藝所制的納米混懸液6 份，分別加入不同用量（0、1%、3%、5%、7%、10%，相對(duì)于BCN 的用量）的甘露醇，各組平行3 份樣品，再按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備BCN-GA-SN，考察凍干保護(hù)劑的用量對(duì)BCN-GA-SN凍干固化工藝的影響。由表3 可知，隨著甘露醇用量的增加，BCN-GASN凍干粉表面逐漸平整光滑，RDI呈現(xiàn)先降低后增加的趨勢(shì)；當(dāng)甘露醇用量為5%時(shí)，凍干粉表面較為平整，無塌陷且質(zhì)地均一，復(fù)溶后平均粒徑為（442.2±5.7）nm，PDI 為0.225±0.015，RDI 為1.055±0.013，表明其再分散后仍能保持納米混懸狀態(tài)。綜合考慮，最終確定甘露醇用量為BCN用量的5%。

表3 凍干保護(hù)劑用量對(duì)BCN-GA-SN 凍干固化工藝的影響（±s，n＝3）

表3 凍干保護(hù)劑用量對(duì)BCN-GA-SN 凍干固化工藝的影響（±s，n＝3）

甘露醇用量/%0 1 3 5 7 10平均粒徑/nm 501.5±4.1 510.8±8.4 468.5±6.7 442.2±5.7 476.3±5.2 505.2±4.9 PDI 0.284±0.022 0.277±0.025 0.248±0.023 0.225±0.015 0.233±0.015 0.249±0.028 RDI 1.206±0.009 1.166±0.019 1.115±0.015 1.055±0.013 1.087±0.012 1.153±0.011外觀疏松多孔，質(zhì)地粗糙表面多孔，質(zhì)地較粗糙表面較平整，質(zhì)地較均一表面較平整，質(zhì)地均一表面平整，質(zhì)地均一表面平整

（3）驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：按上述篩選的最優(yōu)保護(hù)劑及用量進(jìn)行平行3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，BCN-GA-SN的平均粒徑為（443.1±3.8）nm，PDI 為0.221±0.011，RDI 為1.063±0.016，RSD值均小于5%，表明所制得的BCN-GA-SN粒徑大小均一，且具有良好的重現(xiàn)性。

2.4 BCN-GA-SN的表征

2.4.1 BCN-GA納米混懸液的外觀形態(tài)

取BCN-GA 納米混懸液在自然光下和激光下進(jìn)行觀察。由圖2可知，BCN-GA納米混懸液呈現(xiàn)淡黃色，顏色均一，流動(dòng)性好；在自然光下透明澄清，在激光下出現(xiàn)丁達(dá)爾現(xiàn)象，屬于混懸態(tài)液體。

圖2 BCN-GA混懸液的外觀形態(tài)觀察結(jié)果

2.4.2 BCN-GA-SN平均粒徑、PDI、RDI的測(cè)定

取適量以最優(yōu)工藝制備的BCN-GA-SN 樣品，用純水稀釋至一定濃度，待均勻分散后，于激光粒度儀中測(cè)定其平均粒徑和PDI 并計(jì)算RDI。由圖3 可知，BCNGA-SN 的平均粒徑為（442.2±5.7）nm，PDI 為0.225±0.015，RDI 為1.055±0.013，表明本研究所制備的BCNGA-SN粒徑大小均一、分布均勻。

圖3 BCN-GA-SN的粒徑分布

2.4.3 BCN-GA-SN的顯微形態(tài)觀察

取適量BCN、GA原料藥和以最優(yōu)工藝制備的BCNGA-SN 適量，對(duì)其表層作減壓噴金處理后，采用掃描電子顯微鏡進(jìn)行觀察，并拍照。由圖4可知，BCN和GA原料藥為大小不均一的塊狀，且表面粗糙；BCN-GA-SN呈現(xiàn)不規(guī)則的球棒狀，大小較為均一。

圖4 BCN、GA原料藥和BCN-GA-SN的顯微圖

2.4.4 差示掃描量熱分析

取BCN-GA-SN、空白輔料SDS 和適量BCN、GA 原料藥以及兩者的物理混合物進(jìn)行差示掃描量熱分析，檢測(cè)條件為溫度25～350 ℃，升溫速率為10 ℃/min，氣體為氮?dú)?。由圖5 可知，BCN 原料藥在234 ℃有一吸收峰，GA 原料藥在216 ℃有一吸收峰，空白輔料SDS 在188 ℃有一吸收峰；BCN-GA 物理混合物在216、234 ℃均有吸收峰，而BCN-GA-SN在這兩處的吸收峰均消失，表明BCN、GA在該納米晶體系中呈現(xiàn)無定形狀態(tài)。

圖5 差示掃描量熱分析結(jié)果

2.5 體外溶出的評(píng)價(jià)

2.5.1 色譜條件

采用高效液相色譜法測(cè)定BCN-GA-SN 中BCN 和GA 的含量。色譜柱為Agilent EP-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸溶液（37∶63，V/V），檢測(cè)波長(zhǎng)為277 nm，柱溫為30 ℃，流速為0.8 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取BCN、GA對(duì)照品各10 mg，置于同一50 mL容量瓶中，加入甲醇適量，超聲使其充分溶解并定容，即得BCN、GA 質(zhì)量濃度均為0.20 mg/mL 的混合對(duì)照品溶液。

2.5.3 供試品溶液的制備

精密稱取按“2.3”最優(yōu)工藝制備的BCN-GA-SN 適量，裝入空心膠囊殼中，按照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則（槳法）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。以水900 mL為溶出介質(zhì)，溫度為（37.0±0.5）℃，轉(zhuǎn)速為100 r/min，于60 min 時(shí)取樣5 mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.5.4 專屬性考察

取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液及空白輔料SDS樣品溶液（以甲醇溶解）適量，按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。由圖6 可知，空白輔料對(duì)樣品的測(cè)定無影響，且BCN與GA的分離度良好，表明本實(shí)驗(yàn)專屬性良好。

圖6 專屬性考察結(jié)果

2.5.5 線性范圍考察

精密吸取混合對(duì)照品溶液適量，以甲醇稀釋成不同質(zhì)量濃度的系列溶液，然后按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以待測(cè)成分峰面積為縱坐標(biāo)（Y）、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，BCN的回歸方程為Y＝39.263X-9.493（R2＝0.999 8），線性范圍為12.5～125.0 μg/mL；GA 回歸方程為Y＝42.751X+48.056（R2＝0.999 8），線性范圍為12.5～125.0 μg/mL，表明BCN和GA的含量測(cè)定方法線性關(guān)系良好。

2.5.6 載藥量的測(cè)定

稱取按“2.3”最優(yōu)工藝制備的BCN-GA-SN適量（質(zhì)量記為W），加入一定體積的甲醇（記為V），超聲使其完全溶解，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過；取濾液按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積并代入回歸方程分別計(jì)算BCN和GA的質(zhì)量濃度（C），再計(jì)算載藥量（載藥量＝CV/W）。結(jié)果顯示，BCN 的載藥量為（62.5±0.7）%，GA的載藥量為（9.4±0.2）%，由此可知，兩藥的載藥比例基本符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)比例。

2.5.7 BCN-GA-SN的體外釋放考察

按照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則（槳法）進(jìn)行體外溶出度的測(cè)定，以考察BCN-GA-SN 的體外釋放性能。精密稱取以最優(yōu)工藝制備的BCN-GA-SN 以及BCN-GA物理混合物適量，以水900 mL為溶出介質(zhì)，溫度為（37.0±0.5）℃，轉(zhuǎn)速為100 r/min，分別于5、10、20、30、40、50、60 min取樣5 mL，并同時(shí)補(bǔ)足等溫等量介質(zhì)。取樣液體經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜濾過后，按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積并代入回歸方程，分別計(jì)算BCN 和GA 的質(zhì)量濃度，再計(jì)算兩者的累積溶出度，具體公式為累積溶出度（Xn）＝（Cn×V0+C1×V1+C2×V1+…+Cn-1×V1）/M×100%（式中，Xn為第n個(gè)時(shí)間點(diǎn)的累積溶出度，Cn為BCN 或GA 的質(zhì)量濃度，V0為溶出介質(zhì)總體積，V1為每次取樣后所補(bǔ)充的介質(zhì)體積，M為樣品中BCN 或GA 的含量）。同時(shí)，繪制BCN 和GA 的累積溶出度-時(shí)間曲線。由圖7可知，在60 min時(shí)，BCN-GA-SN中BCN 的累積溶出度達(dá)91.1%，GA 的累積溶出度為98.5%；而物理混合物中BCN 的累積溶出度不超過50%，GA的累積溶出度為98.3%。這表明將BCN和GA制成BCN-GA-SN能夠有效提高BCN的體外溶出度。

圖7 BCN-GA-SN和BCN-GA物理混合物的溶出曲線

3 討論

傳統(tǒng)中藥復(fù)方遵從“君臣佐使”配伍用藥，相同藥物也會(huì)根據(jù)患者的不同證候或不同疾病按照不同配伍比例進(jìn)行組方[8―9]。黃芩和甘草的配伍比例決定了其主治和功效有所差別，根本原因在于其有效成分的比例發(fā)生了變化，因此制備符合藥對(duì)配伍比例的納米晶，為經(jīng)典藥對(duì)的中藥新型制劑研究提供了新思路。

本實(shí)驗(yàn)基于經(jīng)典藥對(duì)黃芩-甘草用于“清熱解毒”時(shí)的配伍比例，成功制備了BCN-GA 納米混懸液，進(jìn)一步將其固化為BCN-GA-SN。通過外觀、顯微形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)，該納米晶的粒徑分布均勻，且以5%甘露醇為凍干保護(hù)劑固化后，該納米晶粒徑更小、更均一，且再分散性良好，最終載藥比例也基本符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)配伍比例。進(jìn)一步進(jìn)行體外釋放考察發(fā)現(xiàn)，該納米晶改善了BCN 單體藥物的溶解性和體外釋放特性，使藥物釋放加快、釋放率提高，這也提示傳統(tǒng)復(fù)方的配伍比例轉(zhuǎn)化為有效成分比例制備中藥新劑型的合理性。

綜上所述，本研究成功制備了BCN-GA-SN，其粒徑大小均一、分布均勻，可有效提高BCN的體外溶出度。