巴良杰，孫雁征，羅冬蘭，陳建業(yè)

（1.貴陽(yáng)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550005；2.貴陽(yáng)學(xué)院生物與環(huán)境工程學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550005；3.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，廣東 廣州 510642）

西番蓮（Passiflora caeruleaL.）又名百香果，為西番蓮科西番蓮屬草質(zhì)藤本植物的果實(shí)[1]。西番蓮果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，富含多種必需氨基酸和維生素[2]，具有抗炎和抗癌的特性，并且可以降低心血管疾病、癌癥和代謝性疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[3-4]，深受人們的喜愛。然而，西番蓮是典型的呼吸躍變型水果，細(xì)胞呼吸作用強(qiáng)，其采后生理品質(zhì)下降迅速，特別容易萎縮、腐爛，極大地影響其果質(zhì)和口感，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[5-8]。因此，研究西番蓮采后貯藏保鮮技術(shù)，保持西番蓮采后貯藏品質(zhì)，對(duì)今后西番蓮產(chǎn)業(yè)發(fā)展有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。

丁香酚作為一種天然防腐劑，具有高效的抑菌保鮮作用，在農(nóng)產(chǎn)品采后貯藏方面越來(lái)越受認(rèn)可，且美國(guó)食品和藥物管理局將丁香酚認(rèn)定為“公認(rèn)安全使用物質(zhì)”，允許其在食品中使用[9]。丁香酚能夠抑制采后蘋果病害發(fā)生，降低貯藏期蘋果的腐爛率、呼吸速率和褐變指數(shù)的上升，以及抑制可溶性固性物含量、可滴定酸和硬度的下降，延緩采后蘋果的生理衰老，有利于保持蘋果的品質(zhì)和風(fēng)味[10]。黃琦輝等研究發(fā)現(xiàn)25 μL/L丁香酚處理可顯著延緩青茄果實(shí)冷害的發(fā)生，降低冷害指數(shù)和質(zhì)量損失率，抑制丙二醛含量的上升，保持較高的可溶性糖、總酚含量，研究結(jié)果表明丁香酚熏蒸處理對(duì)青茄采后冷害的調(diào)控具有潛在的應(yīng)用價(jià)值[11]。鐘業(yè)俊等的研究表明茶樹油、丁香酚和檸檬醛可抑制荔枝果實(shí)腐敗，延緩果皮衰老和果肉VC含量的降低，對(duì)保持荔枝果實(shí)的感官品質(zhì)也具有積極作用[12]。趙治兵等發(fā)現(xiàn)褪黑素結(jié)合丁香酚處理（0.5 mmol/L的褪黑素＋50 μL/L的丁香酚）能有效降低鎮(zhèn)遠(yuǎn)紅桃腐爛率和呼吸速率，延緩硬度、可溶性固形物含量、可滴定酸含量和總酚含量的下降，有效維持超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性、抗壞血酸過(guò)氧化物酶（ascorbate peroxidase，APX）活性和多酚氧化酶活性[13]。此外，還有研究表明丁香酚處理可以有效降低藍(lán)莓貯藏期果實(shí)表面的微生物的數(shù)量，推遲果實(shí)腐爛的發(fā)生時(shí)間，提高過(guò)氧化相關(guān)酶活性，延緩果實(shí)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的降解與消耗，保持較好的果實(shí)貯藏品質(zhì)，對(duì)藍(lán)莓具有一定的防腐保鮮效果[14-15]。但目前尚鮮見丁香酚對(duì)西番蓮貯藏特性影響的報(bào)道。

因此，本研究以西番蓮為試材，從活性氧代謝的角度分析丁香酚浸泡處理對(duì)西番蓮采后貯藏品質(zhì)、呼吸速率、內(nèi)源抗氧化物質(zhì)含量的影響，以期為西番蓮的采后化學(xué)保鮮應(yīng)用提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮西番蓮（果實(shí)八成熟時(shí)采摘）購(gòu)自貴州省安龍縣萬(wàn)峰湖鎮(zhèn)西番蓮種植基地，采后立刻運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室。挑選大小均勻、無(wú)明顯機(jī)械損傷的西番蓮作為實(shí)驗(yàn)材料。

丁香酚、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、鄰苯二酚、過(guò)氧化氫、硼砂、聚乙烯吡咯烷酮、乙二胺四乙酸二鈉、抗壞血酸 上海源葉生物科技有限公司；蔗糖、蒽酮、三氯乙酸、硫代巴比妥酸、氫氧化鈉 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司；無(wú)水乙醇 天津市富余精細(xì)化工公司。

1.2 儀器與設(shè)備

TA.XT Plus物性測(cè)定儀 英國(guó)SMS公司；TGL-16A臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司；PAL-1型迷你數(shù)顯折射計(jì) 日本Atago公司；UV-2550紫外分光光度計(jì) 日本Shimadzu公司。

1.3 方法

1.3.1 西番蓮果實(shí)的前處理

新鮮健康西番蓮果實(shí)隨機(jī)分成兩組，每組690 個(gè)果實(shí)，用于隨后的處理。

丁香酚浸泡處理：根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，選用0.30 mg/mL質(zhì)量濃度的丁香酚對(duì)西番蓮進(jìn)行浸泡處理[16]。將挑選、清洗的西番蓮果實(shí)隨機(jī)分為丁香酚處理組和對(duì)照組，丁香酚處理組浸泡在0.30 mg/mL質(zhì)量濃度的丁香酚溶液中10 min；對(duì)照組浸泡在蒸餾水中10 min。取出處理好的西番蓮，風(fēng)干表面水分，用0.015 mm厚的聚乙烯薄膜袋密封包裝。在（20±1）℃、相對(duì)濕度80%下貯藏25 d，從貯藏0 d開始每5 d每組取樣3 袋，每袋30 個(gè)果實(shí)，用于測(cè)定西番蓮果實(shí)的色澤、呼吸速率、硬度等指標(biāo)；另外，每組取樣3 袋，每袋50 個(gè)果實(shí)，用于測(cè)定西番蓮果實(shí)好果率和皺縮指數(shù)，剩余果實(shí)用液氮速凍，－80 ℃保存，供后續(xù)相關(guān)指標(biāo)使用，每個(gè)處理3 次重復(fù)。

1.3.2 好果率、皺縮指數(shù)、質(zhì)量損失率的測(cè)定

參照羅冬蘭等[17]的方法，每5 d記錄沒有腐爛和病斑的果實(shí)數(shù)量，記為S，按公式（1）計(jì)算好果率。

果實(shí)皺縮指數(shù)參照徐雪瑩等[18]的方法測(cè)定，其中，皺縮度按等級(jí)可分為5 個(gè)等級(jí)：0級(jí)：無(wú)皺縮；1級(jí)：0%～25%皺縮；2級(jí)：25%～50%皺縮；3級(jí)：50%～75%皺縮；4級(jí)：75%～100%皺縮，按公式（2）計(jì)算。

果實(shí)質(zhì)量損失率測(cè)定參照J(rèn)iang Xuanjing等[19]的方法，按公式（3）計(jì)算。

式中：m0、m1分別為西番蓮貯藏前、后的質(zhì)量/g。

1.3.3 色澤的測(cè)定

外果皮色澤的測(cè)定按照Pongener等[8]的方法測(cè)定。

1.3.4 呼吸速率、硬度的測(cè)定

果實(shí)呼吸速率的測(cè)定參照陳亞婷等[20]的方法并略作改動(dòng)。將西番蓮置于干燥器中，靜置于室溫下2 h，使用便攜式分析儀記錄干燥器內(nèi)CO2的體積分?jǐn)?shù)，將樣品稱量后記錄質(zhì)量（m/g），按公式（4）計(jì)算呼吸速率。

式中：V1表示密閉干燥器總體積/L；V2表示西番蓮果實(shí)體積/L；φ表示便攜式分析儀記錄干燥器內(nèi)CO2的體積分?jǐn)?shù)/%；m表示西番蓮果實(shí)質(zhì)量/g；t表示測(cè)定時(shí)間/h。

果實(shí)硬度的測(cè)定參照吳萌萌等[21]的方法，并略作改動(dòng)，采用英國(guó)TA.XT Plus物性測(cè)定儀測(cè)定，利用P/2柱頭對(duì)果實(shí)進(jìn)行穿刺測(cè)試，測(cè)試參數(shù)：穿刺深度為6 mm，測(cè)前速率和測(cè)后速率均為1 mm/s，測(cè)中速率為3 mm/s。

1.3.5 西番蓮果皮細(xì)胞膜透性和果實(shí)MDA含量的測(cè)定

果皮細(xì)胞膜透性的測(cè)定參照袁芳等[22]的方法，以相對(duì)電導(dǎo)率表征細(xì)胞膜透性，相對(duì)電導(dǎo)率是衡量細(xì)胞膜透性的重要指標(biāo)，其值越大，表示電解質(zhì)的滲漏量越多，細(xì)胞膜受害程度越嚴(yán)重。

參照Wei Meilin等[23]的方法進(jìn)行MDA含量的測(cè)定。MDA含量的計(jì)算如式（5）所示。

式中：OD450nm、OD532nm、OD600nm分別為反應(yīng)混合物在450、532、600 nm波長(zhǎng)處的光密度值；V為樣品提取液總體積/mL；Vs為測(cè)定時(shí)所取樣品提取液體積/mL；m為樣品質(zhì)量/g。

1.3.6 可溶性糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)、固酸比、可溶性蛋白含量的測(cè)定

運(yùn)用蒽酮比色法測(cè)定可溶性糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

固酸比是可溶性固形物與可滴定酸的比值。其中，可溶性固形物使用PAL-1迷你數(shù)顯折射儀測(cè)定；可滴定酸含量采用氫氧化鈉滴定法[24]測(cè)定。

可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)法[25]測(cè)定。

1.3.7 總酚、類黃酮、抗壞血酸和還原型谷胱甘肽的測(cè)定

總酚含量采用福林-酚法[26]測(cè)定。

類黃酮含量采用Wang Hui等[27]的方法測(cè)定。

抗壞血酸含量測(cè)定參照考陳蓮等[28]的方法。

還原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）含量測(cè)定參照Qian Chunlu等[29]的方法。

1.3.8 抗氧化能力的測(cè)定

果肉中1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除能力參照J(rèn)iang Wen等[30]的方法測(cè)定。

羥自由基清除能力參考Tai Linyu等[31]的方法測(cè)定。

2,2’-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)，ABTS）陽(yáng)離子自由基清除能力參照羅堾子等[32]的方法測(cè)定。

鐵離子還原能力的測(cè)定參照J(rèn)ing Pu等[33]方法。

超氧陰離子自由基（O2－·）產(chǎn)生速率和過(guò)氧化氫（H2O2）含量的測(cè)定參照呂靜祎等[34]的方法。

1.3.9 抗氧化酶活力的測(cè)定

過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）活力的測(cè)定參照Cakmak等[35]的方法，以每分鐘反應(yīng)體系在240 nm波長(zhǎng)處吸光度減少0.01為1 個(gè)酶活力單位（U）。

SOD活力的測(cè)定參照萬(wàn)軍等[36]的方法，在325 nm波長(zhǎng)條件下，以每分鐘抑制鄰苯三酚自氧化率達(dá)50%的酶量為1 個(gè)酶活力單位（U）。

APX活力的測(cè)定參照Nakano等[37]的方法，以每分鐘反應(yīng)體系在290 nm波長(zhǎng)處吸光度減少0.01為1 個(gè)酶活力單位（U）。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS 26.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，以P＜0.05表示差異顯著，并用Origin 2021軟件制圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 丁香酚處理對(duì)西番蓮果實(shí)品質(zhì)的影響

如圖1A所示，貯藏初期，對(duì)照組和丁香酚處理組西番蓮果實(shí)均呈現(xiàn)青綠色，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，兩組果實(shí)逐漸成熟，果皮顏色發(fā)生變化，轉(zhuǎn)變?yōu)樯罴t色。貯藏至15 d時(shí)，對(duì)照組西番蓮果實(shí)表面出現(xiàn)褐斑，且逐漸擴(kuò)大，而丁香酚處理組果實(shí)表面光滑，未出現(xiàn)褐斑現(xiàn)象。由圖1B可知，貯藏至25 d時(shí)，丁香酚處理組果實(shí)相對(duì)完好，好果率為83.33%，而對(duì)照組西番蓮果實(shí)好果率僅為62.67%，且貯藏15、20、25 d時(shí)，丁香酚處理組與對(duì)照組差異極顯著（P＜0.01）。由圖1C可知，貯藏20 d時(shí)，對(duì)照組的皺縮指數(shù)為0.83，是丁香酚處理組1.56 倍，丁香酚處理組的果實(shí)皺縮指數(shù)顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）。如圖1D所示，對(duì)照組果實(shí)的質(zhì)量損失率在貯藏10 d時(shí)為0.78%，丁香酚處理組果實(shí)的質(zhì)量損失率在貯藏10 d時(shí)為0.63%，對(duì)照組果實(shí)的質(zhì)量損失率是丁香酚處理組的1.23 倍；與對(duì)照組相比，丁香酚處理降低了西番蓮的質(zhì)量損失率。綜上，丁香酚處理較好地維持了西番蓮貯藏期果實(shí)的感官品質(zhì)。

圖1 丁香酚處理對(duì)西番蓮果實(shí)品質(zhì)（A）、好果率（B）、皺縮指數(shù)（C）、質(zhì)量損失率（D）的影響Fig. 1 Effect of eugenol treatment on the quality (A), marketable fruit rate (B), shrinkage index (C), and mass loss rate (D) of passion fruit

2.2 丁香酚處理對(duì)西番蓮果實(shí)色差的影響

如圖2A所示，兩組西番蓮果實(shí)的L*值呈下降的趨勢(shì)，在貯藏15 d時(shí)，丁香酚處理的西番蓮果實(shí)L*值為65.58，而對(duì)照組的西番蓮果實(shí)L*值為58.71，此時(shí)，兩組西番蓮果實(shí)L*值之間有極顯著差異（P＜0.01）。如圖2B所示，貯藏15 d時(shí)，對(duì)照組的a*值為16.68，丁香酚處理組a*值為12.13，對(duì)照組的a*值是丁香酚處理組1.37 倍。如圖2C所示，在貯藏5～25 d內(nèi)，對(duì)照組果實(shí)b*值顯著低于丁香酚處理組（P＜0.05，P＜0.01）。

圖2 丁香酚處理對(duì)西番蓮果實(shí)L*值（A）、a*值（B）和b*值（C）的影響Fig. 2 Effect of eugenol treatment on L* (A), a* (B) and b* (C) values of passion fruit

2.3 丁香酚處理對(duì)西番蓮果實(shí)呼吸速率與硬度的影響

如圖3A所示，對(duì)照組和丁香酚處理組果實(shí)的呼吸速率總體均呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，對(duì)照組在貯藏5 d時(shí)出現(xiàn)呼吸高峰，而丁香酚處理組果實(shí)的呼吸高峰出現(xiàn)較對(duì)照組晚，推遲至第10天。在貯藏至15 d時(shí)，丁香酚處理組果實(shí)的呼吸速率為8.428 mg/（kg·h），對(duì)照組呼吸速率為10.214 mg/（kg·h）。如圖3B所示，貯藏5 d時(shí)，對(duì)照組果實(shí)的硬度為18.57 kg/cm2，而丁香酚處理組果實(shí)的硬度為20.71 kg/cm2，丁香酚處理與對(duì)照組存在極顯著差異（P＜0.01）；貯藏15 d時(shí)，丁香酚處理組果實(shí)硬度為14.49 kg/cm2，是對(duì)照組的1.08 倍。綜上，丁香酚處理組可保持貯藏期西番蓮果實(shí)的硬度。

圖3 丁香酚處理對(duì)西番蓮果實(shí)呼吸速率（A）和硬度（B）的影響Fig. 3 Effects of eugenol treatment on respiratory intensity (A) and firmness (B) of passion fruit

2.4 丁香酚處理對(duì)西番蓮果皮相對(duì)電導(dǎo)率和果肉丙二醛含量的影響

如圖4A所示，在10～20 d內(nèi)，對(duì)照組的相對(duì)電導(dǎo)率急速上升，在20 d時(shí)其相對(duì)電導(dǎo)率達(dá)到49.88%，是丁香酚處理組的1.17 倍，組間差異極顯著（P＜0.01）。如圖4B所示，在15～25 d內(nèi)，對(duì)照組果肉MDA含量急速上升，貯藏至15 d時(shí)，其果肉MDA含量比貯藏0 d時(shí)增加了66.67%。進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，在貯藏20～25 d內(nèi)，丁香酚處理的西番蓮果肉MDA含量極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）。

圖4 丁香酚處理對(duì)西番蓮果皮相對(duì)電導(dǎo)率（A）、果肉丙二醛含量（B）的影響Fig. 4 Effect of eugenol treatment on relative electrical conductivity (A)in passion fruit peel and MDA content (B) in passion fruit pulp

2.5 丁香酚處理對(duì)西番蓮可溶性糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)、固酸比和可溶性蛋白含量的影響

由圖5A可知，貯藏10 d時(shí)，丁香酚處理組果實(shí)的可溶性糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為22.77%，是對(duì)照組的1.10 倍，此時(shí)丁香酚處理組與對(duì)照組之間存在極顯著差異（P＜0.01）。由圖5B可知，貯藏20 d時(shí)，丁香酚處理組西番蓮的固酸比為5.40，是對(duì)照組的1.05 倍。在貯藏5 d和15 d時(shí)，丁香酚處理組與對(duì)照組之間均存在極顯著差異（P＜0.01）。由圖5C可知，貯藏10 d后，對(duì)照組和丁香酚處理組果實(shí)可溶性蛋白含量均開始下降，但丁香酚處理組果實(shí)可溶性蛋白含量始終高于對(duì)照組。綜上，采后丁香酚處理可以有效降低西番蓮采后代謝活動(dòng)，從而延緩果實(shí)的衰老進(jìn)程。

圖5 丁香酚處理對(duì)西番蓮果實(shí)可溶性糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)（A）、固酸比（B）和可溶性蛋白含量（C）的影響Fig. 5 Effect of eugenol treatment on soluble sugar content (A),solid/acid ratio (B) and soluble protein content (C) of passion fruit

2.6 丁香酚處理對(duì)西番蓮總酚、類黃酮、抗壞血酸和GSH含量的影響

由圖6A可以看出，在貯藏前期，西番蓮果實(shí)的總酚不斷累積，在10 d時(shí)出現(xiàn)峰值，此時(shí)，丁香酚處理組總酚含量為184.48 μg/g，而對(duì)照組總酚含量為117.17 μg/g，組間差異極顯著（P＜0.01）；貯藏15 d后，丁香酚處理組和對(duì)照組總酚含量均開始下降，貯藏至25 d時(shí)，丁香酚處理組總酚含量為52.25 μg/g，對(duì)照組總酚含量為25.35 μg/g，丁香酚處理組總酚含量是對(duì)照組的2.06 倍。由此可知，丁香酚浸泡處理使西番蓮果實(shí)總酚含量保持較高的水平。由圖6B可以看出，貯藏期間，類黃酮相對(duì)含量隨貯藏時(shí)間延長(zhǎng)呈先上升后下降的趨勢(shì)。在貯藏15 d時(shí)，丁香酚處理和對(duì)照組的類黃酮含量均達(dá)到峰值，分別為0.73 mg/g和0.48 mg/g，此時(shí)，丁香酚處理和對(duì)照組總酚含量有極顯著差異（P＜0.01）；在貯藏15 d后，丁香酚處理和對(duì)照組的類黃酮含量均開始下降，貯藏至25 d時(shí)，丁香酚處理組的類黃酮含量為0.41 mg/g，對(duì)照組類黃酮含量為0.28 mg/g，丁香酚處理組類黃酮含量是對(duì)照組的1.46 倍。上述結(jié)果說(shuō)明丁香酚浸泡處理使西番蓮果實(shí)類黃酮含量保持較高的水平。由圖6C可知，貯藏至15 d時(shí)，對(duì)照組果實(shí)抗壞血酸含量為18.60 mg/100 g，而丁香酚處理組為20.70 mg/100 g，兩組果實(shí)抗壞血酸含量有極顯著差異（P＜0.01）。由圖6D可知，貯藏至5 d時(shí)，對(duì)照組GSH含量為0.29 mmol/g，而丁香酚處理組GSH含量為0.32 mmol/g，丁香酚處理組GSH含量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。貯藏15 d后對(duì)照組和丁香酚處理組西番蓮果實(shí)的GSH含量開始下降，但丁香酚處理組西番蓮果實(shí)的GSH含量始終高于對(duì)照組。

圖6 丁香酚處理對(duì)西番蓮果實(shí)總酚（A）、類黃酮（B）、抗壞血酸（C）、GSH（D）含量的影響Fig. 6 Effect of eugenol treatment on the contents of total phenols (A),flavonoids (B), ascorbic acid (C), and reduced glutathione (D) in passion fruit

2.7 丁香酚處理對(duì)西番蓮抗氧化能力的影響

由圖7A可知，丁香酚處理組的西番蓮果實(shí)DPPH自由基清除能力在5 d時(shí)是對(duì)照組的1.10 倍；進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，在貯藏5、15 d時(shí)，兩組果實(shí)DPPH自由基清除能力有極顯著差異（P＜0.01）。由圖7B可知，貯藏期間丁香酚處理組與對(duì)照組西番蓮果實(shí)的羥自由基清除能力整體呈先上升后下降的趨勢(shì)，西番蓮果實(shí)羥自由基清除能力在貯藏5 d時(shí)出現(xiàn)峰值，此后，羥自由基清除能力開始下降。丁香酚處理能較好維持西番蓮果實(shí)羥自由基清除能力；在貯藏20 d、25 d時(shí)丁香酚處理組羥自由基清除能力極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。由圖7C可以看出，在貯藏10 d時(shí)，丁香酚處理組的西番蓮果實(shí)ABTS陽(yáng)離子自由基的清除能力為50.07%，是對(duì)照組的1.07 倍。進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，在貯藏10、15、20 d時(shí)，兩組ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力有極顯著差異（P＜0.01）。

圖7 丁香酚處理對(duì)西番蓮DPPH自由基清除能力（A）、羥自由基清除能力（B）、ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力（C）、鐵離子還原能力（D）、O－2·產(chǎn)生速率（E）、H2O2含量（F）的影響Fig. 7 Effect of eugenol treatment on DPPH (A), hydroxyl (B) and ABTS radical cation (C) scavenging capacity, ferric reducing power (D),superoxide anion generation rate (E), and hydrogen peroxide content (F)of passion fruit

由圖7D可知，在貯藏15 d和25 d時(shí)，丁香酚處理組的西番蓮果實(shí)鐵離子還原能力分別為424.79 μmol/L和263.98 μmol/L，均極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。由圖7E可知，丁香酚處理組的果實(shí)O－2·產(chǎn)生速率在貯藏10、15、20 d時(shí)極顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）。由圖7F可知，在整個(gè)貯藏期間，丁香酚處理組西番蓮果實(shí)中H2O2的含量比對(duì)照組低。貯藏10 d時(shí)，丁香酚處理組的西番蓮果實(shí)中H2O2含量為0.48 mmol/g，是對(duì)照組西番蓮果實(shí)的62.33%。第20天時(shí)，丁香酚處理組西番蓮果實(shí)中H2O2的含量為1.24 μmol/g，是對(duì)照組西番蓮果實(shí)的68.50%。貯藏25 d時(shí)，丁香酚處理組西番蓮果實(shí)中H2O2的含量為0.57 μmol/g，是對(duì)照組西番蓮果實(shí)的71.5%。以上結(jié)果表明，丁香酚處理可以有效抑制西番蓮果實(shí)中H2O2的累積。

2.8 丁香酚處理對(duì)西番蓮抗氧化酶活性的影響

如圖8A所示，貯藏10 d時(shí)，丁香酚處理組西番蓮果實(shí)CAT活力為339.12 U/g，是對(duì)照組的2.58 倍。在貯藏10～25 d期間，丁香酚處理組西番蓮果實(shí)CAT活力極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。如圖8B所示，兩組西番蓮果實(shí)的SOD活力在貯藏10～25 d時(shí)存在差異極顯著（P＜0.01），其中，在貯藏10 d時(shí)，丁香酚處理組西番蓮果實(shí)SOD活力為24.28 U/g，是對(duì)照組的1.51 倍。如圖8C所示，整個(gè)貯藏期間，對(duì)照組西番蓮果實(shí)的APX活力始終低于丁香酚處理組，并且在貯藏10、20 d和25 d時(shí)差異極顯著（P＜0.01）。

2.9 相關(guān)性分析

如圖9A所示，對(duì)照組中，皺縮指數(shù)與質(zhì)量損失、a*值、相對(duì)電導(dǎo)率、丙二醛含量、ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01），與好果率、硬度、L*值、b*值、鐵離子還原能力呈極顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.01）。

圖9 對(duì)照組（A）與丁香酚處理組（B）各項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性分析Fig. 9 Correlation analysis among various indicators in control (A)and eugenol treatment (B) groups

如圖9B所示，在丁香酚處理組中，西番蓮好果率與L*值、硬度和抗壞血酸含量呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01），與皺縮指數(shù)、質(zhì)量損失率、a*值和O2－·產(chǎn)生速率呈極顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.01）；抗壞血酸含量與好果率、L*值、硬度、鐵離子還原能力呈極顯著正相關(guān)P＜0.01），與皺縮指數(shù)、質(zhì)量損失率、a*值、相對(duì)電導(dǎo)率、ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力和O2－·產(chǎn)生速率呈極顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.01）。

3 討 論

西番蓮采摘后會(huì)出現(xiàn)強(qiáng)烈的呼吸作用，導(dǎo)致其迅速變褐和腐爛，這也是其貨架期短的主要原因。本研究結(jié)果顯示，使用0.30 mg/mL的丁香酚處理可以抑制采后西番蓮的呼吸作用，延緩其變褐的過(guò)程，同時(shí)保持其營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)，從而延長(zhǎng)其貨架期。這與張莉會(huì)等[38]所進(jìn)行的研究結(jié)果相一致，他們使用丁香酚處理抑制桑葚的腐敗變質(zhì)，提高了桑葚的貯藏穩(wěn)定性。

丁香酚具有較好的殺菌和抗氧化作用，在果蔬保鮮中已成為研究熱點(diǎn)。付振喜[39]使用0.3%的丁香精油處理草莓，發(fā)現(xiàn)其可以保持草莓果實(shí)的品質(zhì)并延緩其衰老，可能的原因是，丁香精油處理一定程度上能夠減少草莓果實(shí)中VC含量的損失、減緩可溶性固形物含量和總酸含量的降低速度、降低草莓呼吸速率，從而達(dá)到延長(zhǎng)保鮮期的目的；曾慧[40]的研究結(jié)果表明，丁香提取液可以有效降低臍橙的質(zhì)量損失率和腐爛率，延緩臍橙果實(shí)總酸的消耗，保持較高的過(guò)氧化物酶活性，減少M(fèi)DA的積累，說(shuō)明丁香提取液可作為天然保鮮劑應(yīng)用于臍橙采后貯藏保鮮；宋義忠等[41]研究表明，丁香提取物能有效抑制花椰菜貯藏中的變褐現(xiàn)象、減少花椰菜的質(zhì)量損失，使花椰菜保鮮后仍具有很好的商品價(jià)值；孔秋蓮等[42]的研究表明，丁香提取物處理能有效降低甜椒果實(shí)的質(zhì)量損失率和腐爛率，更好地保持果實(shí)中還原糖和總可溶性固形物含量；綜上，丁香提取物能夠延緩采后花椰菜和甜椒的衰老過(guò)程。賴毅東[43]發(fā)現(xiàn)，丁香提取液可抑制霜疫霉菌在荔枝果皮上的生長(zhǎng)，且丁香提取液能顯著抑制采后青梨的硬度變化和失水率，有助于維持采后青梨的品質(zhì)；潘磊慶等[44]發(fā)現(xiàn)丁香精油可有效抑制根霉、灰霉的生長(zhǎng)，降低櫻桃番茄果實(shí)的腐爛指數(shù)，并可誘導(dǎo)櫻桃番茄防御活性升高；李鵬霞等[10]發(fā)現(xiàn)丁香酚能夠抑制采后蘋果主要病害，抑制貯藏期果實(shí)的腐爛率、呼吸速率和褐變指數(shù)的上升，以及可溶性固性物含量、可滴定酸和硬度的下降，延緩采后蘋果的衰老，有利于保持蘋果的品質(zhì)和風(fēng)味；關(guān)文強(qiáng)等[45]發(fā)現(xiàn)，葡萄、桃等果蔬采收后的主要病原菌可以被丁香精油顯著抑制。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，0.30 mg/mL丁香酚處理可提高西番蓮果實(shí)抗氧化酶活性，并對(duì)西番蓮保鮮具有一定的增效作用。丁香酚能夠抑制采后西番蓮質(zhì)量損失率的上升，可滴定酸及VC含量的下降，維持采后西番蓮果實(shí)的硬度及顏色，有利于保持西番蓮果實(shí)的品質(zhì)。

MDA作為膜脂過(guò)氧化的最終產(chǎn)物，其含量能夠直接反映膜脂損傷的程度[46]。本研究中，西番蓮果實(shí)皺縮指數(shù)、細(xì)胞膜透性和MDA含量在貯藏過(guò)程中都隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而升高；相關(guān)性分析結(jié)果表明，MDA含量與皺縮指數(shù)和細(xì)胞膜透性在整個(gè)貯藏期間呈顯著正相關(guān)；在貯藏中后期，0.30 mg/mL丁香酚處理顯著抑制了西番蓮MDA含量的生成，同時(shí)延緩O2－·產(chǎn)生速率（圖7），說(shuō)明丁香酚處理可以通過(guò)延緩活性氧的積累，減少果實(shí)組織中MDA的產(chǎn)生，減輕細(xì)胞膜脂過(guò)氧化反應(yīng)，保持較好的細(xì)胞膜完整性，這與李磊[47]對(duì)葡萄果實(shí)的研究結(jié)果相似。

在植物系統(tǒng)中，SOD、CAT和APX等抗氧化酶能夠清除O2－·、促進(jìn)H2O2的酶解[48-49]。本研究結(jié)果表明，丁香酚處理能夠提高采后西番蓮CAT、APX、SOD活性，延緩西番蓮果肉中活性氧自由基含量的升高，同時(shí)抑制西番蓮果肉中抗壞血酸含量的下降。賴毅東[43]的研究表明，丁香提取物能夠抑制采后青梨果肉中VC含量的降解；趙治兵等[13]研究發(fā)現(xiàn)丁香酚處理可提高采后紅桃果實(shí)抗氧化相關(guān)酶的活性；孟祥軒[50]的研究表明，21.5%丁香酚處理能提高葡萄抗氧化酶活性。本研究結(jié)論與上述研究結(jié)論相似。

4 結(jié) 論

丁香酚浸泡處理降低了西番蓮果實(shí)采后呼吸速率、質(zhì)量損失率、皺縮指數(shù)、細(xì)胞膜透性，抑制了丙二醛、O2－·和過(guò)氧化氫的積累，減緩了西番蓮組織內(nèi)可溶性糖、可溶性蛋白、總酚和類黃酮含量的下降，維持了較高的抗壞血酸和GSH等內(nèi)源抗氧化物質(zhì)含量以及DPPH自由基、羥自由基、ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力和鐵離子還原能力，提高了CAT、SOD、APX等抗氧化酶活性。綜上，丁香酚處理可以維持采后西番蓮較高的品質(zhì)及抗氧化活性，從而延緩果實(shí)的衰老，延長(zhǎng)貯藏期。

丁香酚可從天然植物中提取，方法簡(jiǎn)單易行，成本較低，其防腐保鮮效果顯著，用于西番蓮貯藏切實(shí)可行。本研究可為將丁香酚開發(fā)成為商業(yè)化應(yīng)用的天然保鮮劑提供參考，以期實(shí)現(xiàn)取代化學(xué)殺菌劑、解決食品安全問(wèn)題、提升西番蓮市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。