許宗亮，劉 昊，楊 雁，左應(yīng)梅，黃 彬，徐慧聲，何鳳春

（1.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所，云南昆明 650200；2.云縣科技成果轉(zhuǎn)化中心，云南臨滄 675803；3.云縣信合農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司，云南臨滄 675800）

滇龍膽（Gentiana rigescensFranch.ex Hemsl.） 為龍膽科龍膽屬多年生草本植物，別稱堅(jiān)龍膽、苦草、韭藥花根，是傳統(tǒng)保肝中藥龍膽的基原植物，具有清熱燥濕、瀉肝膽火的功效[1]。其主要有效成分龍膽苦苷對(duì)于肝臟缺血、肝損傷型肝炎等肝臟疾病具有顯著療效，通過(guò)口服或靜脈給藥后可在體內(nèi)多個(gè)器官?gòu)V泛分布，具有抑制炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激、抗纖維化、抗細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖等多種藥理作用[2]。目前，滇龍膽的市場(chǎng)供應(yīng)以人工種植為主，云南省臨滄市云縣截至2021 年底滇龍膽草種植面積約為10 khm2，占全國(guó)產(chǎn)量80%以上，是滇龍膽的主要產(chǎn)區(qū)。

中藥材產(chǎn)地初加工是藥材品質(zhì)形成的關(guān)鍵因素，對(duì)中藥材、中藥飲片及制劑的質(zhì)量起著至關(guān)重要的作用[3]。通過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在關(guān)于滇龍膽的產(chǎn)地初加工大多憑農(nóng)戶主觀經(jīng)驗(yàn)操作，隨意性較大，缺乏標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的初加工規(guī)范。饒高雄等人[4]研究發(fā)現(xiàn)，酶解和水洗均會(huì)影響滇龍膽藥材中的龍膽苦苷含量，在藥材采收后應(yīng)盡快干燥以避免酶解破壞，且不宜過(guò)度清洗。曹悅等人[5]通過(guò)研究龍膽的加工方法發(fā)現(xiàn)，龍膽苦苷含量會(huì)隨著水洗時(shí)間的延長(zhǎng)而降低。吳昕怡等人[6]選擇熱燙時(shí)間、熱燙溫度、烘干溫度為考查因素，最終確定最優(yōu)的工藝參數(shù)為熱燙時(shí)間5 min，熱燙溫度40 ℃，烘干溫度60 ℃。相對(duì)于天麻、三七等著名道地藥材[7-8]，關(guān)于滇龍膽的產(chǎn)地初加工研究較少。因此，通過(guò)對(duì)當(dāng)?shù)仄毡椴捎玫那逑?、修剪、干燥方法進(jìn)行研究，以篩選出適宜加工方法，為規(guī)范加工工藝、確保藥材品質(zhì)提供數(shù)據(jù)支持。

1 儀器與材料

HPLC-10 型高效液相色譜儀（含HPLC-10ATVP泵，7725i 手動(dòng)進(jìn)樣器，SPD-M10AVP 型二級(jí)管陣列檢測(cè)器，190～800 nm），日本島津公司產(chǎn)品；SY3200-T型超聲波清洗儀，上海聲源超聲波儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)品；SHZ-82A 型振蕩搖床，金壇新瑞公司產(chǎn)品；83T106 型離心機(jī)，賽默飛公司產(chǎn)品；萬(wàn)分之一電子分析天平，美國(guó)奧豪斯公司產(chǎn)品；FW-100 型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，天津市華鑫儀器廠產(chǎn)品；CS101 型電熱鼓風(fēng)干燥箱，浙江余姚溫度儀表四廠產(chǎn)品。

對(duì)照品龍膽苦苷，中國(guó)食品藥品檢定研究院提供（批號(hào)110770-201313）；乙腈、甲醇為色譜純，美國(guó)Fisher 試劑公司提供；水為自制超純水。

試驗(yàn)樣品為人工栽種滿3 年的滇龍膽，采自云南臨滄云縣，由同一時(shí)間、同一地塊播種且水肥管理一致，于2021 年1 月10 日采收。經(jīng)云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院藥用植物所張金渝研究員鑒定為龍膽科龍膽屬植物滇龍膽。

2 試驗(yàn)方法

2.1 加工方法

結(jié)合生產(chǎn)及實(shí)際情況，設(shè)計(jì)5 種清洗條件、7 種修剪條件及7 種干燥條件，選擇同一等級(jí)[9]、大小基本一致的新鮮滇龍膽藥材，除去泥土和雜質(zhì)后混勻，隨機(jī)分組，每組設(shè)置3 次重復(fù)。

藥材加工方法見表1。

表1 藥材加工方法

2.2 含量測(cè)定

色譜條件參照2020 年版《中國(guó)藥典》 （通則0512） 并結(jié)合試驗(yàn)測(cè)定，采用C18島津液相色譜柱（Shim-pack VP-ODS，150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相A 為0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B 為乙腈，梯度洗脫（0～2.5 min，7%～10%B；2.5～20 min，10%～26% B； 20～29 min， 26% ～58.3% B； 29～30 min，58.3%～90%B），流速1.00 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)243 nm，柱溫25 ℃，進(jìn)樣量5 μL，理論板數(shù)按龍膽苦苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

龍膽苦苷HPLC 色譜圖見圖1。

2.3 水分、灰分、浸出物含量測(cè)定

參照2020 年版《中國(guó)藥典》四部（通則0832）第二法測(cè)定水分含量，（通則2302） 測(cè)定總灰分含量，（通則2201） 水溶性浸出物測(cè)定法- 熱浸法測(cè)定水溶性浸出物含量。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同清洗方法對(duì)滇龍膽藥材品質(zhì)的影響

圖2 不同清洗方法對(duì)滇龍膽藥材品質(zhì)的影響（±s，n=10）

由圖2 可知，經(jīng)水洗及不同時(shí)間浸泡后，滇龍膽樣品中的龍膽苦苷含量均高于不洗，在快洗和浸泡2 h 條件下龍膽苦苷含量達(dá)到最大值7.2%，隨著浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)，滇龍膽樣品中龍膽苦苷含量逐漸降低；水分、總灰分及浸出物含量相比不洗均有所降低，且隨著浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)均呈遞減趨勢(shì)，在浸泡6 h 處理中，其水分、總灰分含量分別達(dá)到最小值8.4%、2.3%，浸出物含量在不洗處理中達(dá)到最大值48.9%。

3.2 不同修剪方法對(duì)滇龍膽藥材品質(zhì)的影響

不同修剪方法對(duì)滇龍膽藥材品質(zhì)的影響（±s，n=10） 見圖3。

圖3 不同修剪方法對(duì)滇龍膽藥材品質(zhì)的影響（±s，n=10）

由圖3 可知，相比于不做修剪，修剪后再進(jìn)行清洗、干燥的滇龍膽樣品中龍膽苦苷的含量更高，在保留2 cm 蘆頭的處理中達(dá)到最大值10.1%；水分含量與浸出物含量均在保留1 cm 蘆頭處理達(dá)到最大值，分別達(dá)到8.6%，50.3%，且隨著蘆頭保留量的增加而降低，完全剪除地上部分的處理樣品水分與浸出物含量則略低于保留1 cm 莖段處理；總灰分的含量在保留4 cm 蘆頭處理達(dá)到最大值2.5%，在保留3 cm 蘆頭達(dá)到最小值2.2%，總灰分含量與蘆頭的保留長(zhǎng)度未表現(xiàn)出明顯的關(guān)聯(lián)。

3.3 不同干燥條件對(duì)滇龍膽藥材品質(zhì)的影響

不同干燥條件對(duì)滇龍膽藥材品質(zhì)的影響（±s，n=10） 見圖4。

圖4 不同干燥條件對(duì)滇龍膽藥材品質(zhì)的影響（±s，n=10）

不同干燥條件下，經(jīng)烘箱烘干的滇龍膽樣品中龍膽苦苷含量均高于陰干及曬干處理，其中曬干條件下干燥的樣品中龍膽苦苷含量最低，在40～60 ℃的烘干條件下龍膽苦苷含量隨烘干溫度的升高而升高，并在60 ℃達(dá)到最大值7.1%，當(dāng)烘干溫度繼續(xù)升高，滇龍膽樣品中的龍膽苦苷含量將隨溫度的升高而降低；水分含量在陰干條件下最高，為8.5%，在80 ℃烘干條件下最低，為8.0%；經(jīng)烘箱烘干的滇龍膽樣品中總灰分含量均低于陰干及曬干處理，40 ℃烘干的滇龍膽樣品總灰分含量為最小值2.9%；浸出物含量在60 ℃烘干條件下達(dá)到最大值46.7%，在曬干條件下達(dá)到最小值43.6%；在不同烘干溫度下，滇龍膽樣本水分、總灰分及浸出物含量差異不大且未表現(xiàn)出關(guān)聯(lián)性。

4 結(jié)論

我國(guó)中藥材產(chǎn)地初加工歷史悠久，由于缺乏加工技術(shù)具體指標(biāo)的規(guī)定，現(xiàn)實(shí)卻是中藥材產(chǎn)業(yè)鏈條中最薄弱的環(huán)節(jié)[10]，因此急需開展相關(guān)的研究并制定標(biāo)準(zhǔn)加以規(guī)范。試驗(yàn)中，滇龍膽樣品中龍膽苦苷、總灰分、浸出物含量隨著浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，與饒高雄等人[4]的試驗(yàn)結(jié)果相一致；試驗(yàn)證明小于2 h 的浸泡對(duì)有效成分的影響較小，且更便于藥材清潔。蘆頭一般是指藥物的根頭、根莖、殘莖、莖基、葉基等部分，古人應(yīng)認(rèn)為蘆頭屬于非藥用部位，為了達(dá)到凈制的要求而除去[11]，但關(guān)于滇龍膽的修剪尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)中，龍膽苦苷含量隨著蘆頭保留長(zhǎng)度的增加呈現(xiàn)先增長(zhǎng)后降低的變化，猜測(cè)其原因可能由于滇龍膽莖部橫截面小于根部，保留一定長(zhǎng)度的蘆頭可減小切口面積，間接減少植株內(nèi)可溶性有效成分的流失，當(dāng)保留的蘆頭過(guò)長(zhǎng)，由于莖葉部分蒸騰作用大于根部，在干燥脫水的過(guò)程中滇龍膽根部的可溶性有效成分隨植株體液向莖葉部流動(dòng)，降低了根部的龍膽苦苷含量。不同的干燥條件下，60 ℃烘箱烘干的植株樣品中龍膽苦苷含量最高，且不同干燥處理的樣品中龍膽苦苷含量為烘箱烘干＞陰干＞曬干，推測(cè)其原因，在烘箱中較高的溫度可使滇龍膽中的酶相對(duì)于陰干、曬干條件下更快失去活性，從而減弱其酶解效應(yīng)，烘箱中較快的干燥速度也可減少干燥過(guò)程中的成分損失，其結(jié)果可與徐燕等人[12]、吳昕怡等人[6]研究結(jié)果相互印證；當(dāng)溫度過(guò)高時(shí)，龍膽苦苷在高溫作用下分解變性，當(dāng)烘干溫度超過(guò)60 ℃后龍膽苦苷含量會(huì)隨著溫度的升高而降低；相對(duì)于陰干處理，曬干處理的樣本可更快地減弱其酶解效應(yīng)，長(zhǎng)時(shí)間日曬同樣會(huì)加快龍膽苦苷發(fā)生分解，因此在試驗(yàn)中表現(xiàn)出曬干條件下樣品中的龍膽苦苷含量低于陰干。試驗(yàn)比較了主產(chǎn)區(qū)應(yīng)用較為普遍的修剪、清洗、干燥技術(shù)與方法。試驗(yàn)結(jié)果顯示，浸泡2 h 清洗為最佳清洗方式，清洗干燥前保留2 cm 蘆頭為最佳修剪方式，烘箱60 ℃烘干為最佳干燥方式。結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果與滇龍膽產(chǎn)區(qū)生產(chǎn)實(shí)際情況，可考慮將修剪并保留2 cm 蘆頭、浸泡2 h 清洗擦干、烘箱60 ℃干燥的處理方法作為滇龍膽產(chǎn)地初加工的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。