高婷婷，高立明，王廣成，李婷，許艷秋

(1.成都市食品檢驗(yàn)研究院，成都 611135；2.四川省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳植物保護(hù)站，成都 610041)

苯唑草酮(topramezone)又稱苯吡唑草酮，是一種對羥基苯基丙酮酸酯雙氧化酶(HPPD)類抑制劑，具有安全性高、選擇性好等特點(diǎn)，能有效防除玉米田一年生禾本科和闊葉雜草[1]。氯氟吡氧乙酸異辛酯(fluroxypyr-meptyl)是吡啶類內(nèi)吸傳導(dǎo)型苗后除草劑，其施用后能被植物葉片和根迅速吸收和快速傳導(dǎo)，使敏感作物出現(xiàn)典型的激素類除草劑反應(yīng)，導(dǎo)致植株畸形、扭曲，最終枯死，主要用于防除闊葉類雜草，對禾本雜草無效[2]。因此，苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯混配不僅可以達(dá)到同時防除禾本科和闊葉類雜草的效果，還可提高藥效，延緩雜草抗藥性的產(chǎn)生。目前，關(guān)于苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯的檢測方法已有文獻(xiàn)報(bào)道[2-4]，但2 種藥劑混配的分析方法未見報(bào)道?；诖耍疚牟捎梅聪喔咝б合嗌V法對20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑進(jìn)行同時測定，在選定的色譜條件下2 種有效成分與雜質(zhì)可以完全分離，此方法簡便、快速、準(zhǔn)確，能同時測定2 種有效成分的含量，是一種理想的分析方法。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

Agilent 1260 型高效液相色譜儀配二極管陣列檢測器(美國安捷倫科技有限公司)；AB204-S 電子天平[梅特勒-托利多貿(mào)易(上海)有限公司]；KH-500E 超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；過濾器：濾膜孔徑0.45 μm(天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

苯唑草酮標(biāo)準(zhǔn)品(≥98.0%，Dr.Ehrenstorfer)；氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品[≥98.0%，國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心(沈陽)]；20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑；甲醇(色譜純，飛世爾科技公司)；磷酸(分析純，四川西隴化工有限公司)。

1.2 色譜條件

色譜柱：ZORBAXSB-C18不銹鋼柱(5μm，4.6mm×150 mm；流動相：甲醇+0.1%磷酸溶液；梯度洗脫條件如表1 所示；流量：1.0 mL/min；柱溫：(30±2)℃；檢測波長240 nm；進(jìn)樣體積：3.0μL。在該色譜條件下，苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯的保留時間分別約為5.7、15.1 min。典型色譜圖見圖1。此外，實(shí)驗(yàn)中可根據(jù)儀器特點(diǎn)適當(dāng)調(diào)整色譜操作條件以獲得最佳效果。

圖1 20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑樣品的高效液相色譜圖

表1 流動相梯度淋洗表

1.3 測定步驟

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制

準(zhǔn)確稱取苯唑草酮標(biāo)準(zhǔn)品0.04g(精確至0.0002 g)、氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品0.06 g(精確至0.000 2 g)，置于50 mL 容量瓶中，先用10 mL 二氯甲烷溶解，超聲5 min，加入25 mL 甲醇超聲溶解10 min，恢復(fù)至室溫后，用甲醇定容，備用。

1.3.2 樣品溶液的配制

準(zhǔn)確稱取20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑樣品0.5 g(精確至0.000 2 g)，置于50 mL 容量瓶中，先用10 mL 二氯甲烷溶解，超聲5 min，加入25 mL 甲醇超聲溶解10 min，恢復(fù)至室溫后，用甲醇定容，經(jīng)0.45μm 孔徑濾膜過濾，收集濾液備用。

1.3.3 測定

儀器于前文所述色譜條件下穩(wěn)定，待基線穩(wěn)定后，連續(xù)進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)品溶液數(shù)針至相鄰2 針峰面積變化小于1.5%，按照標(biāo)準(zhǔn)品溶液、樣品溶液、樣品溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的順序進(jìn)樣測定。

1.3.4 計(jì)算

將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸異辛酯)的峰面積帶入下式計(jì)算，試樣中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸異辛酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為ω(%)。

式中：A1為標(biāo)準(zhǔn)品溶液中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸異辛酯)峰面積的平均值；A2為樣品溶液中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸異辛酯)峰面積的平均值；m1為稱取苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸異辛酯)標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量(g)；m2為稱取樣品的質(zhì)量(g)；ω1為標(biāo)準(zhǔn)品中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸異辛酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 溶劑的選擇

苯唑草酮微溶于水，在有機(jī)溶劑中的溶解度(g/L，20 ℃)：二氯甲烷25～29，DMF 114～133，丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正庚烷、異丙醇、甲醇、正辛醇、甲苯＜10；氯氟吡氧乙酸異辛酯于27.7°C 時在水中溶解度0.9 mg/L，在丙酮中大于4%，在氯仿和二氯甲烷中大于50%。因該2 種有效成分在二氯甲烷中均具有滿足需求的溶解度，且二氯甲烷與甲醇能互溶，故選擇二氯甲烷作為有效成分的溶解溶劑，甲醇作為稀釋定容溶劑。

2.2 流動相的選擇

選擇常用的反相填料ZORBAX SB-C18不銹鋼色譜柱，依據(jù)有效成分的理化性質(zhì)選擇甲醇水體系為流動相。因2 種物質(zhì)極性差異較大，當(dāng)甲醇+水=40+60(體積比)時，苯唑草酮出峰時間約為6 min，但氯氟吡氧乙酸異辛酯的出峰時間大于40 min；當(dāng)甲醇+水=80+20(體積比)時，氯氟吡氧乙酸異辛酯出峰時間約為10 min，但苯唑草酮出峰時間小于2 min。為保證目標(biāo)物峰形對稱，出峰時間適中，最終選擇1.2 節(jié)所述的梯度洗脫條件進(jìn)行檢測。

2.3 檢測波長的確定

采用DAD 檢測器，對苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品在200～400 nm 波長下進(jìn)行掃描，紫外吸收圖見圖2。苯唑草酮的主吸收波長為200、285 nm，氯氟吡氧乙酸異辛酯的主吸收波長在200、240 nm，2 種物質(zhì)的紫外曲線最大交叉點(diǎn)為215 nm。在215 nm波長下干擾明顯，因此選擇波長240 nm 為檢測波長，在該波長條件下氯氟吡氧乙酸異辛酯有吸收平臺，苯唑草酮有較大吸收，且無雜質(zhì)干擾。

圖2 苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品的紫外掃描圖

2.4 線性關(guān)系的測定

分別稱取98%苯唑草酮標(biāo)樣(0.019 7、0.032 3、0.043 5、0.0553 1、0.075 2 g)置于50 mL 的容量瓶中，按上述方法配制成5 個不同質(zhì)量濃度的苯唑草酮標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0.386 1、0.633 1、0.852 6、1.084 1、1.473 9 mg/mL)，按上文所述條件測定，以苯唑草酮質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，得工作曲線(圖3)。苯唑草酮標(biāo)樣的質(zhì)量濃度(x)與峰面積(y)滿足線性關(guān)系y=5 518.7x-80.651，線性決定系數(shù)R2=0.999 9。

圖3 苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯質(zhì)量濃度與其響應(yīng)值之間的線性關(guān)系圖

分別稱取98%氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)樣(0.029 8、0.048 9、0.065 8、0.083 7、0.113 9 g)置于50 mL 的容量瓶中，按上述方法配制成5 個不同質(zhì)量濃度的氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0.584 1、0.958 4、1.289 7、1.640 5、2.232 4 mg/mL)，按上文所述條件測定，以氯氟吡氧乙酸異辛酯質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，得工作曲線(圖3)。氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)樣質(zhì)量濃度(x)與峰面積(y)滿足線性關(guān)系y=3 893.8x-29.951，線性決定系數(shù)R2=1.000 0。

2.5 方法精密度

對同一20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑樣品按上述方法進(jìn)行6 次平行測定，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差及變異系數(shù)。根據(jù)CIPAC 方法驗(yàn)證指南，當(dāng)精密度測定中的RSD 小于修改的Horwitz公式2(1-0.51ogC)×0.67 計(jì)算結(jié)果，表明方法精密度測定結(jié)果符合要求。精密度測定結(jié)果見表2，苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均值分別為8.05%和12.16%，方法的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.026 8 和0.061 5，變異系數(shù)(RSD)分別為0.33%和0.51%。2 者RSD 均小于修改的Horwitz 公式計(jì)算值，表明該方法精密度的測定結(jié)果符合要求。

表2 分析方法的精密度測定

2.6 方法準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確稱取98%苯唑草酮標(biāo)準(zhǔn)品0.212 9 g、98%氯氟吡氧乙酸異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品0.322 6 g(精確至0.000 2 g)于100 mL 的容量瓶中，按上述方法配制得到所設(shè)計(jì)的苯唑草酮(2.086 mg/mL)與氯氟吡氧乙酸異辛酯(3.161 mg/mL)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。平行稱取6 份20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑樣品，準(zhǔn)確加入苯唑草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0 mL，按上述方法測定其回收率，結(jié)果見表3?？梢?，苯唑草酮酯的添加回收率為99.17%～100.17%，平均回收率為99.65%；氯氟吡氧乙酸異辛酯的添加回收率為99.09%～100.56%，平均回收率為99.87%。說明該方法可滿足產(chǎn)品中苯唑草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯的檢測要求。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度測定

3 結(jié)論

本文采用反相高效液相色譜法建立了同時測定20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑有效成分的方法，表現(xiàn)出簡便、快速、準(zhǔn)確及分離效果好等優(yōu)點(diǎn)。該方法重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高、線性關(guān)系良好，是苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯混配制劑中有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測的有效方法，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制和檢測。