張凱，郭勇飛，潘理想，李樂樂，張小軍

(中農(nóng)立華生物科技股份有限公司，北京 100052)

氟啶蟲酰胺(flonicamid)化學名稱為N-(氰甲基)-4-(三氟甲基)煙酰胺，是由日本石原產(chǎn)業(yè)株式會社發(fā)現(xiàn)并開發(fā)的一種低毒、高效的新型吡啶酰胺類昆蟲生長調(diào)節(jié)劑類殺蟲劑，其通過對蚜蟲等刺吸式口器害蟲的神經(jīng)毒性和快速拒食活性而表現(xiàn)出殺蟲活性，具有觸殺、內(nèi)吸和滲透作用，且與其他類化合物無交互抗性，可用于防治蘋果黃蚜、蔬菜蚜蟲、柑橘蚜蟲和粉虱、水稻稻飛虱等害蟲[1-4]。4-(三氟甲基)煙酰胺是氟啶蟲酰胺的主要代謝物之一，具有殺蟲活性，在1 h 時的毒力甚至高于母體[5-6]。部分農(nóng)藥企業(yè)已申請或取得了該化合物的殺蟲組合物等專利，防治對象包括蚊蟲、棉蚜、白粉虱、水稻褐飛虱等，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部認為該化合物用于預防、控制危害農(nóng)業(yè)、林業(yè)的蟲害，依據(jù)《農(nóng)藥管理條例》第2 條規(guī)定，應按照農(nóng)藥管理[7]。

目前，相關分析方法國外未見公開報道，國內(nèi)主要為采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對氟啶蟲酰胺及其代謝物的殘留量進行檢測[8-10]，分析方法較為復雜，儀器設備昂貴，不適于工業(yè)化生產(chǎn)的質(zhì)量控制和定性定量判定?；诖耍疚牟捎酶咝б合嗌V儀開展了4-(三氟甲基)煙酰胺的定量分析方法研究，旨在為該產(chǎn)品生產(chǎn)的質(zhì)量控制和標準制定提供技術支撐[11]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260 型高效液相色譜儀(二極管陣列檢測器)和色譜工作站(美國安捷倫科技有限公司)；BSA124S 型電子天平[賽多利斯科學儀器(北京)有限公司]；KQ5200DE 型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

甲醇(色譜純，賽默飛世爾科技公司)；冰乙酸(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)；超純水(實驗室自制)；4-(三氟甲基)煙酰胺標準品(質(zhì)量分數(shù)99.7%，廣州佳途科技股份有限公司)；98%4-(三氟甲基)煙酰胺樣品(上海麥克林生化科技股份有限公司)。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)；流動相：甲醇-0.5%冰乙酸水溶液(20∶80，體積比)；流量：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：266 nm；進樣體積：5.0 μL。在上述色譜操作條件下，4-(三氟甲基)煙酰胺的保留時間約為7.3 min。標樣及樣品的高效液相色譜圖見圖1。

圖1 4-(三氟甲基)煙酰胺的高效液相色譜圖

1.3 溶液的配制

1.3.1 標樣溶液的配制

稱取0.05 g 4-(三氟甲基)煙酰胺標樣(精確至0.000 2 g)于50 mL 容量瓶中，加入適量甲醇超聲溶解，冷卻至室溫后定容至刻度，搖勻，脫氣后待用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取含4-(三氟甲基)煙酰胺0.05 g (精確至0.000 2 g)的樣品于50 mL 容量瓶中，加入適量甲醇超聲溶解，冷卻至室溫后定容至刻度，搖勻，脫氣后待用。

1.4 測定

待儀器基線穩(wěn)定后，按照以上色譜條件連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直到相鄰2 針標樣響應值的相對變化小于1.5%后，方可按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的次序進行測定。

1.5 計算

試樣中4-(三氟甲基)煙酰胺的質(zhì)量分數(shù)X(%)按下式計算：

式中：A1為標樣溶液中4-(三氟甲基)煙酰胺平均峰面積值；A2為試樣溶液中4-(三氟甲基)煙酰胺平均峰面積值；m1為4-(三氟甲基)煙酰胺標樣的質(zhì)量(g)；m2為試樣的質(zhì)量(g)；P為標樣中4-(三氟甲基)煙酰胺的質(zhì)量分數(shù)(%)。

2 結果與討論

2.1 流動相的選擇

在甲醇中溶解度較好，優(yōu)先選擇甲醇為有機相。當采用甲醇-水作為流動相時，峰型對稱，且加入0.5%冰乙酸后峰型和分離度變得更好。當流動相中甲醇比例太高時，4-(三氟甲基)煙酰胺出峰時間過早，經(jīng)過反復測試，在流速1.0 mL/min，甲醇-0.5%冰乙酸水溶液的體積比為20∶80 時，4-(三氟甲基)煙酰胺的出峰時間相對適中，且峰型尖銳對稱無拖尾，分離效果好。

2.2 檢測波長的選擇

采用DAD(二極管陣列檢測器)對4-(三氟甲基)煙酰胺標準品溶液在200～400 nm 波長下進行掃描，其紫外吸收光譜圖如圖2 所示。由圖2 可知：4-(三氟甲基)煙酰胺的最大吸收波長為266 nm，且能夠得到較好的峰型同時避免雜質(zhì)的干擾。因此，最后選定本分析方法的檢測波長為266 nm。

圖2 4-(三氟甲基)煙酰胺的紫外吸收譜圖

圖3 4-(三氟甲基)煙酰胺質(zhì)量濃度與峰面積線性關系圖

2.3 分析方法的線性相關性

分別配制5 個不同質(zhì)量濃度的4-(三氟甲基)煙酰胺標準品溶液，按照1.2 節(jié)所述的液相色譜條件進行進樣測定，每個質(zhì)量濃度溶液分別測定2 次，取其平均值。以4-(三氟甲基)煙酰胺的進樣質(zhì)量濃度(x)為橫坐標、峰面積(y)為縱坐標繪制標準曲線(圖4)，得到線性方程為y=5 623.6x+53.957，相關系數(shù)為R2=0.999 9，說明該方法在測定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關系。

2.4 分析方法的精密度

從同一批98%4-(三氟甲基)煙酰胺樣品中準確連續(xù)稱取6 個試樣，在上述操作條件下進行分析測定，計算其含量平均值、標準偏差、變異系數(shù)，結果見表1。可見，4-(三氟甲基)煙酰胺樣品的標準偏差為0.25，變異系數(shù)為0.25%。說明該方法的重現(xiàn)性好、精密度高，滿足工業(yè)分析的定量要求。

表1 分析方法的精密度測定

2.5 分析方法的準確度

準確稱取5 個98%4-(三氟甲基)煙酰胺樣品，加入一定量的4-(三氟甲基)煙酰胺標準品，按上述方法進行測定，并計算回收率，結果見表2?？梢?，4-(三氟甲基)煙酰胺的回收率為98.77%～101.43%，平均回收率均為100.25%，符合分析標準。

表2 分析方法的準確度測定

3 結論

本文采用高效液相色譜儀建立了一種能夠定量測定4-(三氟甲基)煙酰胺的分析方法。該方法分離效果良好，方法的準確度和精密度均較高，且簡單高效易操作，可用于4-(三氟甲基)煙酰胺的質(zhì)量控制和定性定量判定，具有很強的可行性和實際應用價值。