丁 輝 賈 倩 朱仁愿 李 堅(jiān) 吳福祥 丁愛(ài)華

蘭州市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院 國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)管食品中農(nóng)藥獸藥殘留監(jiān)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室甘肅省種植中藥材外源性污染物監(jiān)測(cè)工程研究中心，甘肅蘭州 730050

天麻熄風(fēng)膠囊是蘭州市某醫(yī)院制備的醫(yī)院制劑，處方由天麻、膽南星、川貝母、陳皮、天竺黃、僵蠶、人工牛黃、麥冬、茯苓、甘草和石菖蒲十一味藥材加工制成，具熄風(fēng)定癇、鎮(zhèn)靜安神、清熱祛痰之效；用于癲癇風(fēng)痰閉阻，癥見(jiàn)神昏抽搐、口吐白沫、小便失禁等。其處方來(lái)源于經(jīng)驗(yàn)方“天麻熄風(fēng)湯”，研究顯示，天麻熄風(fēng)湯結(jié)合尼莫地平、奧卡地平等西藥在蛛網(wǎng)膜下腔出血后遲發(fā)性腦血管痙攣、短暫性腦缺血等疾病的治療和預(yù)防中具有較好的效果[1-3]。該藥方中以天麻、膽南星為君藥，平肝潛陽(yáng)、燥濕祛痰；以天竺黃、川貝母、僵蠶為臣助君藥，清熱祛痰、熄風(fēng)止痙；以陳皮、茯苓、麥冬、石菖蒲為佐，祛痰開(kāi)竅、清心除煩；以甘草為使，調(diào)和諸藥。醫(yī)者通過(guò)總結(jié)治療心得，在對(duì)隨癥加減的基礎(chǔ)上確立了該醫(yī)院制劑，在臨床中取得良好療效。

天麻熄風(fēng)膠囊為醫(yī)院制劑，僅可在院內(nèi)應(yīng)用，目前尚無(wú)對(duì)應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為了更全面地控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，本研究通過(guò)查閱《中華人民共和國(guó)藥典》（2020年版）及相關(guān)文獻(xiàn)資料后，描述其性狀特征，觀察石菖蒲、茯苓、膽南星、僵蠶、天竺黃的顯微特征，建立天麻、石菖蒲的薄層色譜鑒別方法，并對(duì)水分、裝量差異、崩解時(shí)限等常規(guī)檢查項(xiàng)目進(jìn)行檢驗(yàn)[4-6]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Canon EOS 6D數(shù)碼照相機(jī)（日本佳能公司）；BX53+DP73正置熒光生物顯微鏡，配有cellSens Entry成像系統(tǒng)（日本奧林巴斯公司）；CAMAG Linomat 5自動(dòng)點(diǎn)樣儀，配備TLC Visualizer成像系統(tǒng)（瑞士卡瑪公司）；YP502電子天平（上海津平科學(xué)儀器有限公司）；DGG-9140B電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；MS105DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器公司）；ZB-1D智能崩解儀（天津精拓儀器科技有限公司）；SBL-10DT超聲清洗儀和SCG-4智能恒溫槽（寧波新芝生物有限公司）。

1.2 試劑試藥

天麻對(duì)照藥材（120944-201310）、天麻素對(duì)照品（110807-201608）和石菖蒲對(duì)照藥材（121098-201406），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。硅膠G薄層板（德國(guó)默克公司），水合氯醛、正丁醇、乙醇、甲醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲酸、石油醚（60℃～90℃）、環(huán)己烷、磷鉬酸、碘、大孔吸附樹(shù)脂均為分析純，水為純化水。天麻熄風(fēng)膠囊試制樣品3批，均由蘭州市某醫(yī)院制備提供，批號(hào)：TMXF-S-1、TMXF-S-2和TMXF-S-3。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀特征

利用數(shù)碼照相機(jī)拍照，記錄天麻熄風(fēng)膠囊的性狀特征。結(jié)果可見(jiàn)：本品為硬膠囊（圖1a），內(nèi)容物為灰黃色的粉末（圖1b）。取內(nèi)容物進(jìn)行口、鼻實(shí)驗(yàn)，可知其氣微香，味淡、微甜。

圖1 天麻熄風(fēng)膠囊性狀特征

2.2 顯微特征

取天麻熄風(fēng)膠囊的內(nèi)容物適量，用研缽研細(xì)，置載玻片上，緩慢滴加3～5滴水合氯醛試液，加蓋玻片，在酒精燈上加熱以除去氣泡并透化粉末，室溫放置10 min冷卻后，用生物顯微鏡及數(shù)碼成像系統(tǒng)觀察記錄其顯微特征。結(jié)果可見(jiàn)：膽南星的糊化淀粉粒團(tuán)塊基本為無(wú)色，草酸鈣針晶成束或散布存在（圖2a～b）。僵蠶的氣管壁碎片略彎曲，具棕色周邊，呈半圓弧狀的螺旋絲（圖2c）。天竺黃的不規(guī)則塊片無(wú)色透明，邊緣四周多為平角，且有棱角，遇到少量水合氯醛試液會(huì)逐漸溶化（圖2d）。石菖蒲的纖維束周圍細(xì)胞中富含大量的草酸鈣方晶，形成晶纖維；有大量球形、橢圓形、長(zhǎng)卵形的單粒淀粉粒和由2～20分粒組成的復(fù)粒淀粉類（圖2e～f）。茯苓的顆粒狀團(tuán)塊（形態(tài)不規(guī)則）及枝杈狀團(tuán)塊常為無(wú)色，遇少量水合氯醛溶液漸微微溶化（圖2g）。

圖2 天麻熄風(fēng)膠囊內(nèi)容物的顯微特征

2.3 天麻的薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備 隨機(jī)取天麻熄風(fēng)膠囊10粒，倒出內(nèi)容物，用研缽研細(xì)，全部轉(zhuǎn)移置錐形瓶中，加水飽和的正丁醇30 ml，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收提取溶劑至干，殘?jiān)? ml純化水使其溶解，加在內(nèi)徑為1 cm的 D101型大孔吸附樹(shù)脂柱（柱高為16 cm）上，先用15 ml水洗脫，棄去，再用40 ml乙醇水溶液（1∶9）洗脫，收集乙醇水溶液洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)? ml甲醇使其溶解。

2.3.2 對(duì)照藥材溶液的制備 取0.5 g天麻對(duì)照藥材，依照“2.3.1”供試品溶液所述制備方法進(jìn)行同樣操作。

2.3.3 對(duì)照品溶液的制備 取約10 mg天麻素對(duì)照品，加10 ml甲醇使溶解，配制成濃度為1 mg/ml的溶液。

用自動(dòng)點(diǎn)樣儀的微量取樣器分別吸取上述供試品溶液和對(duì)照品溶液各2 μl及對(duì)照藥材溶液5 μl，依次點(diǎn)樣于同一塊硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲酸-乙酸乙酯-甲醇（8∶0.1∶1∶3）為展開(kāi)體系展開(kāi)，至少8 cm，取出硅膠G薄層板，晾曬至干，噴以磷鉬酸-乙醇（1∶10）溶液，于105℃加熱至少5 min，直到薄層板上可見(jiàn)清晰的斑點(diǎn)。結(jié)果顯示，供試品色譜、對(duì)照藥材色譜、對(duì)照品色譜在相應(yīng)的位置上，都顯有相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖3。

圖3 天麻熄風(fēng)膠囊方中天麻的薄層色譜鑒別圖

2.4 石菖蒲的薄層色譜鑒別

2.4.1 供試品溶液的制備 隨機(jī)取天麻熄風(fēng)膠囊10粒，倒出內(nèi)容物，用研缽研細(xì)，樣品粉末全部轉(zhuǎn)移置錐形瓶中，加50 ml純化水，沸水浴上回流1 h后，取下錐形瓶，放冷，在3000 r/min離心5 min，取上清液用60～90℃的石油醚先后提取2次，每次使用石油醚20 ml，合并2次的石油醚提取液，沸水浴蒸干，殘?jiān)屑尤胍宜嵋阴? ml使其溶解。

2.4.2 對(duì)照藥材溶液的制備 取石菖蒲對(duì)照藥材1 g，研細(xì)，依照“2.4.1”供試品溶液所述制備方法進(jìn)行操作。

用自動(dòng)點(diǎn)樣儀的微量取樣器分別吸取上述供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各5 μl，依次點(diǎn)樣在同一塊硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（9∶1）為展開(kāi)體系展至8 cm，取出后，晾曬至干，置于碘蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰為止，在日光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，可見(jiàn)具有相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖4a。在通風(fēng)處放置，將薄層板上吸附的碘揮凈后，置于紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，同樣可見(jiàn)相同顏色的熒光斑點(diǎn)，見(jiàn)圖4b。

圖4 天麻熄風(fēng)膠囊方中石菖蒲的薄層色譜圖

2.5 常規(guī)檢查項(xiàng)

按《中華人民共和國(guó)藥典》（2020年版）四部制劑通則收錄的膠囊劑（通則0103）項(xiàng)下有關(guān)的規(guī)定對(duì)水分、裝量差異和崩解時(shí)限進(jìn)行檢驗(yàn)，為考察天麻熄風(fēng)膠囊樣品的均勻性以及保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，每批樣品平行進(jìn)行3組測(cè)定[7]。

2.5.1 水分 按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2020年版）四部通則0832收錄的水分測(cè)定法中烘干法進(jìn)行測(cè)定。取天麻熄風(fēng)膠囊內(nèi)容物粉末5～10 g，精密稱定，平鋪在扁形稱量瓶中，其中稱量瓶需干燥并且達(dá)到恒重的，開(kāi)啟瓶蓋在108℃干燥至5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30 min，精密稱定，再在與上述溫度同樣的條件下繼續(xù)干燥1 h，室溫下放至冷卻，精密稱重，直至連續(xù)兩次對(duì)稱量瓶與樣品的稱重差異不超過(guò)5 mg即可。根據(jù)稱重減少的量，算出天麻熄風(fēng)膠囊中的含水量，3批次天麻熄風(fēng)膠囊的水分結(jié)果均超出標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，見(jiàn)表1。

表1 水分檢查結(jié)果（%）

2.5.2 裝量差異 隨機(jī)取10粒天麻熄風(fēng)膠囊，分別精密稱定其重量，然后倒出里面的內(nèi)容物，并且用小刷把膠囊殼擦拭干凈，再分別精密稱定膠囊殼的重量，根據(jù)減失的重量計(jì)算出每粒天麻熄風(fēng)膠囊的內(nèi)容物重量，見(jiàn)表2。本品規(guī)格為0.4500 g/粒，根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》（2020年版）標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，每粒裝量與標(biāo)示裝量比較，超出藥典標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的裝量差異限度的膠囊應(yīng)不得多于2粒，并應(yīng)不得有1粒超出限度1倍，其中裝量差異限度為標(biāo)示值的±10%，即限度范圍為0.4050～0.4950 g/粒，1倍限度范圍為0.3600～0.5400 g/粒。結(jié)果顯示：TMXF-S-1的第2組裝量差異均在限度范圍內(nèi)，第1組和第3組分別有2粒和1粒樣品的裝量差異超出限度范圍，但未超出限度的1倍，故均符合規(guī)定；TMXF-S-2的第1組有2粒樣品超出限度范圍，且其中有1粒超出限度1倍，第2組和第3組分別有3粒和1粒樣品的裝量差異超出限度范圍，但未超出限度的1倍，綜合判斷，不符合規(guī)定；TMXF-S-3的第1組和第3組樣品裝量差異均在限度范圍內(nèi)，第2組有1粒樣品的裝量差異超出了標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的限度范圍，但未超出限度的1倍，故符合規(guī)定。

表2 裝量差異檢查結(jié)果（g/粒）

2.5.3 崩解時(shí)限 按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2020年版）四部通則0921所收錄崩解時(shí)限的檢查法進(jìn)行測(cè)定。取天麻熄風(fēng)膠囊6粒，分別放入崩解儀吊籃上的6根玻璃細(xì)管中，放上擋板，浸入盛有水的燒杯中，設(shè)定溫度為37℃，記錄膠囊全部崩解的時(shí)間。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定膠囊應(yīng)在30 min內(nèi)完全崩解，3批次天麻熄風(fēng)膠囊的崩解時(shí)限結(jié)果均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，見(jiàn)表3。

表3 崩解時(shí)限檢驗(yàn)結(jié)果（min）

3 討論

3.1 顯微特征

由于天麻熄風(fēng)膠囊處方藥味較多，顯微鏡下觀察到同時(shí)存在淀粉粒（單粒及復(fù)粒）、糊化淀粉粒團(tuán)塊、顆粒狀團(tuán)塊（形態(tài)不具規(guī)則）及枝杈狀團(tuán)塊，無(wú)法準(zhǔn)確地進(jìn)行定性鑒別，因此加入碘試液，碘試液可以使不同的組織顯示不同的顏色，從而進(jìn)行區(qū)分。加入碘試液后，顯微鏡下所觀察到淀粉粒顯藍(lán)色，糊化的淀粉粒團(tuán)塊顯黃棕色或淡黃色，未完全糊化淀粉粒團(tuán)塊同時(shí)會(huì)顯藍(lán)紫色、黃棕色兩個(gè)不同的顏色，而不規(guī)則顆粒狀團(tuán)塊和分枝狀團(tuán)塊則為無(wú)色[8-9]。

3.2 薄層色譜

天麻的薄層色譜鑒別中，考察了三種前處理方法，分別為：①加70%甲醇超聲處理提?。虎诩右掖颊袷幪崛?；③加水飽和的正丁醇超聲處理后在D101型大孔吸附樹(shù)脂柱上洗脫提取?？疾炝巳N展開(kāi)體系，分別為：①乙酸乙酯-甲醇-水（9∶1∶0.2）；②三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇（9∶1∶3）；③三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（8∶1∶3∶0.1）。經(jīng)對(duì)比分析，最終確定采用前處理方法③和展開(kāi)體系③的組合，其結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作性強(qiáng)，且斑點(diǎn)清晰、分離度好。本實(shí)驗(yàn)還考察了不同顯色情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，噴以磷鉬酸-乙醇（1∶10）溶液，在105～110℃，加熱至少5 min，斑點(diǎn)可達(dá)最佳清晰度。梯度點(diǎn)樣對(duì)比后，確定供試品溶液、對(duì)照品溶液和對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量分別為2、2、5 μl即可[10-11]。

石菖蒲的薄層色譜中，考察了兩種前處理方法，分別為：①加60～90℃石油醚，水浴加熱后回流提??；②加水加熱回流后上清液用石油醚（60～90℃）振搖提取。考察了兩種展開(kāi)體系，分別為：①石油醚-乙酸乙酯（4∶1）；②環(huán)己烷-乙酸乙酯（9∶1）。比較了兩種顯色后檢視條件，分別為：①噴以香草醛-硫酸（5∶95）溶液；②置碘蒸氣中熏后，然后在日光燈下、紫外光燈（365 nm）下分別檢視。結(jié)果顯示，水加熱回流之后用石油醚萃取比石油醚直接加熱回流提取效果好，展開(kāi)劑以體系②具有更好的分離效果，碘熏蒸后紫外光下檢視斑點(diǎn)更加明顯。梯度點(diǎn)樣確定供試品溶液和對(duì)照藥材的點(diǎn)樣量均為5 μl時(shí)，斑點(diǎn)即可清晰觀察[12-13]。

3.3 檢查

按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2020年版）第四部通則規(guī)定，對(duì)常規(guī)檢查項(xiàng)目檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，3批天麻熄風(fēng)膠囊的水分含量均高于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，可能是由于所使用的原料藥水分較高、藥品貯存條件不達(dá)標(biāo)或生產(chǎn)加工過(guò)程不規(guī)范等原因所致。裝量差異超出限度范圍，表明藥品生產(chǎn)工藝，尤其是灌裝過(guò)程存在風(fēng)險(xiǎn)。由此可見(jiàn)，醫(yī)院制劑的質(zhì)量問(wèn)題尚多，應(yīng)密切關(guān)注[14-15]。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了醫(yī)院制劑天麻熄風(fēng)膠囊的性狀特征、內(nèi)容物粉末的顯微特征以及個(gè)別藥味的薄層色譜鑒別方法，便于實(shí)驗(yàn)操作，具有較強(qiáng)專屬性強(qiáng)和實(shí)用性，可用于醫(yī)院制劑天麻熄風(fēng)膠囊的質(zhì)量控制，為保障藥品提供技術(shù)支持。但是目前的試驗(yàn)尚不夠全面，后續(xù)還要加強(qiáng)對(duì)該醫(yī)院制劑處方中其他尚未涉及的藥味的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及方法，進(jìn)行深入的研究。