LEE EUNJI 劉博 袁響林

肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)主要通過經(jīng)門靜脈系統(tǒng)在肝內(nèi)進行傳播[1]。但該病表現(xiàn)出的消化道、全身癥狀特異性不明顯,且進展較快,多數(shù)患者在確診時已處于疾病晚期階段,無法進行手術(shù)治療,只能采取介入治療、靶向治療等保守治療方式[2,3]。經(jīng)導(dǎo)管肝動脈化療栓塞術(shù)(transcatheter arterial chemoembolization,TACE)能夠通過阻斷腫瘤的營養(yǎng)供應(yīng)從而消滅腫瘤細胞[4]。目前TACE是無法進行手術(shù)的HCC患者首選治療方式,能夠提高部分患者根治性概率,但遠期療效仍無法令人滿意[5]。有研究指出叉頭狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子(Forkhead/winged helix transcription factor,FOXP3)作為影響調(diào)節(jié)性T細胞功能及發(fā)育的決定因子,間接調(diào)節(jié)其在免疫系統(tǒng)對腫瘤抗原的應(yīng)答,進而促進腫瘤發(fā)生發(fā)展[6]。而高爾基體蛋白73(Golgi protein 73,GP73)在部分惡性腫瘤中被證實可通過促進血管內(nèi)皮生長因子分化從而參與疾病[7]。本研究探討血清GP73、FOXP3水平與TACE治療HCC患者療效及預(yù)后的關(guān)系。

資料與方法

一、一般資料

選取2019年5月至2021年8月在同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院接受TACE治療的HCC患者198例,年齡為(54.5±14.4)歲,男性102例,女性96例;BMI為(22.14±1.74)kg/m2;肝功能Child-Pugh分為A級的有112例,B級86例;腫瘤最大直徑≤10 cm;腫瘤數(shù)≤3個。所有患者及其家屬在術(shù)前均明確知曉本研究采用的治療方式并簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《原發(fā)性肝癌診療指南(2022年版)》相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[8];②均簽署知情同意書;③為第一次接受TACE治療;④具有完整的臨床資料及一般信息。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并先天性免疫、血液功能障礙;②合并精神系統(tǒng)類疾病;③對本研究治療方式有禁忌證;④隨訪過程中失訪者。

二、方法

(一) TACE治療方式 采用股動脈穿刺置管在DSA下根據(jù)腫瘤部位與供血動脈位置,將微導(dǎo)管置入肝兩端的動脈及遠處腫瘤供血動脈;按照順鉑80 mg、超液化碘油3～20 mL、吡柔比星20 mg的順序依次灌注栓塞腫瘤血管;至腫瘤內(nèi)碘油濃聚時,取適當(dāng)?shù)拿髂z海綿顆粒對肝端進行栓塞;DSA下復(fù)查,證實腫瘤染色消失,記錄超液化碘油的注入量;根據(jù)腫瘤直徑選用超液化碘油(最大量≤20 mL);術(shù)后給予甘美0.2 g,連續(xù)靜脈滴注6 d。

(二)血清GP73檢測 電化學(xué)發(fā)光發(fā)檢測GP73:取待測樣品放入離心機(北京時代北利離心機有限公司)中以3500 r/min,離心半徑15 cm離心5 min,用吸管吹打攪拌紅細胞,進行人為溶血處理,在繼續(xù)將溶血標(biāo)本放入離心機中以同樣的離心參數(shù)離心5 min,直至溶血標(biāo)本呈現(xiàn)淡紅色,放入電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(德國羅氏公司)中檢測GP73并取峰值。

(三)血清FOXP3檢測 采用Elisa對血清FOXP3表達進行檢測,操作步驟如下:①配置標(biāo)準(zhǔn)曲線,分別設(shè)8個不同濃度水平(124、100、62、28.3、15、8.54、2.94、1.46)PM的標(biāo)準(zhǔn)曲線外加空白樣品,體積可根據(jù)需要的比例隨時調(diào)整;②配制質(zhì)控樣品及待測樣品,并在每孔中按照版圖加入配置好的標(biāo)準(zhǔn)曲線、質(zhì)控樣品及待測樣品各25 μL;③每孔加入200 μL Enzyme Conjugate solution,封板孵育;④采用洗板液350 μL連續(xù)洗板6次,避免長時間浸泡,洗板后在潔凈紙上拍打至干;⑤每孔加入200 μL substrate TMB,室溫避光條件下反應(yīng);⑥各孔中加入50 μL 終止液并在15 min內(nèi)使用波長為450 nm的酶標(biāo)儀(湖南中瑞互信醫(yī)療科技有限公司)讀取吸光度,分析FOXP3水平。

(四)療效評估[9]術(shù)后4周,CT觀察腫瘤雙徑及病灶碘油量,按照療效標(biāo)準(zhǔn)分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR),疾病穩(wěn)定(SD),疾病進展(PD)。有效率=(CR+PR)/人數(shù)×100%。

(五)預(yù)后評估 采用電話、門診等方式隨訪,每3個月1次,末次隨訪時間為2022年8月,主要終點為總生存期(overall survival,OS),次要終點為無進展生存期(progression free survival,PFS)。

三、統(tǒng)計學(xué)處理

SPSS 25.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間采用獨立樣本t檢驗,組內(nèi)采用配對樣本t檢驗。計數(shù)資料以例數(shù)(%)表示,比較采用χ2檢驗。Spearman相關(guān)系數(shù)驗證GP73、FOXP3表達與臨床療效的相關(guān)性;多元logistic回歸模型分析影響HCC患者預(yù)后的獨立危險因素;ROC驗證GP73、FOXP3聯(lián)合檢測對HCC患者預(yù)后的評估效能。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、有效組與無效組患者GP73、FOXP3表達比較

共有122例患者治療有效,76例患者治療后無效;治療前,兩組患者GP73和FOXP3表達無顯著差異(P>0.05);治療后兩組GP73和FOXP3表達均有所降低,且相較于無效組,有效組表達明顯更低(P<0.05),見表1。

表1 有效組及無效組TACE治療前后GP73、FOXP3表達(±s)

二、GP73、FOXP3表達與臨床療效的相關(guān)性

Spearman相關(guān)檢驗結(jié)果顯示,GP73、FOXP3表達與臨床療效之間均呈顯著負相關(guān)(r=-0.662、-0.688,P<0.05)。

三、單因素分析HCC患者預(yù)后的影響因素

隨訪結(jié)果顯示,預(yù)后良好患者共104例,預(yù)后不良者94例。單因素結(jié)果顯示,預(yù)后良好組GP73、FOXP3、甲胎蛋白表達顯著低于預(yù)后不良組,且Child-Pugh分級中A級占比顯著高于預(yù)后不良組(均P<0.05),見表2。

表2 單因素分析影響HCC患者預(yù)后的相關(guān)因素

四、多因素分析HCC患者預(yù)后的影響因素

將表2中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)納入多元logistic回歸模型中進行分析,以HCC患者預(yù)后作為因變量(預(yù)后良好=0;預(yù)后不良=1),所有計量資料均以原值錄入,計數(shù)資料賦值:Child-Pugh分級(A級=0;B級=1)。結(jié)果顯示Child-Pugh分級、GP73、FOXP3是影響HCC患者預(yù)后的危險因素,見表3。

表3 多因素分析影響HCC患者預(yù)后的獨立危險因素

五、GP73、FOXP3聯(lián)合檢測對HCC患者預(yù)后的預(yù)測效能

GP73、FOXP3聯(lián)合檢測的曲線下面積顯著高于單一檢測(聯(lián)合檢測與GP73比較,Z=4.416,與FOXP3比較,Z=5.660,均P<0.01),且具有較高的敏感度、特異度,見表4。

表4 GP73、FOXP3和聯(lián)合檢測的診斷效能

討 論

HCC進展快、惡性程度高,患者5年病死率可高達30%～40%[10]。TACE主要通過阻斷腫瘤細胞的營養(yǎng)供應(yīng)從而消滅腫瘤,在一定程度上提高了HCC患者的疾病控制率與生存率[11,12]。但對于直徑較大的腫瘤,經(jīng)TACE治療后呈乏血狀態(tài),對動脈影響較大,導(dǎo)致其出現(xiàn)狹窄甚至閉塞,影響治療效果[13]。

本研究結(jié)果顯示,HCC患者經(jīng)過TACE治療后GP73、FOXP3表達均有所下降,但相比無效組,有效組GP73、FOXP3表達更低。應(yīng)用吡柔比星能夠阻礙血管內(nèi)皮細胞DNA形成,超液化碘油和明膠海綿兩種混合物注入肝血管瘤中,可促使成纖維瘤樣結(jié)構(gòu)在瘤體形成,達到硬化血管瘤的作用,從而降低血清相關(guān)標(biāo)志物的表達[14]。閆偉等[15]研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)TACE治療后,HCC患者血清免疫炎癥相關(guān)因子均得到明顯改善。

本研究發(fā)現(xiàn),GP73、FOXP3表達與臨床療效之間均呈顯著負相關(guān),即GP73表達越低,經(jīng)TACE治療的HCC患者療效越好;且GP73作為影響HCC患者遠期預(yù)后的危險因素之一,與HCC患者療效及預(yù)后均具有強關(guān)聯(lián)性。這主要是由于GP73作為Ⅱ型跨膜蛋白,在正常人體肝臟組織中無表達。Fang等[16]研究顯示,GP73表達水平與肝臟腫瘤分期、分化程度等并不具有相關(guān)性,但與血管內(nèi)皮生長因子具有強關(guān)聯(lián)性,分析原因可能是病數(shù)量差異較大,導(dǎo)致結(jié)果也呈現(xiàn)一定差異,后續(xù)仍需進一步進行相關(guān)研究。Liu等[17]指出,上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)作為腫瘤細胞運動侵襲能力的基礎(chǔ),其對GP73進行干擾后可通過影響EMT進程而阻礙HCC進程。

FOXP3與臨床療效呈負相關(guān),是HCC遠期預(yù)后的獨立危險因素,參與HCC疾病發(fā)生、發(fā)展,FOXP3是位于哺乳動物X染色體的一類轉(zhuǎn)錄因子,可作為調(diào)節(jié)性T細胞的特異性標(biāo)志物,特異性表達CD4+CD25+T細胞并在炎性介質(zhì)的刺激下發(fā)揮與調(diào)節(jié)性T細胞的相同作用[18]。Zhang等[19]研究發(fā)現(xiàn),FOXP3能夠促進調(diào)節(jié)性T細胞發(fā)育,間接紊亂腫瘤局部免疫功能,并減輕腫瘤微環(huán)境中抗腫瘤免疫功能,從而加重病情,但FOXP3在人體內(nèi)調(diào)控其他基因表達的機制尚未明確。通過對膽紅素、肝性腦病、腹水、營養(yǎng)狀況、Alb對患者的肝功能進行評估,Child-Pugh B級的HCC患者肝功能較差,預(yù)后也相對較差[20]。GP73、FOXP3單一指標(biāo)檢測的敏感度、特異度較低,但二者聯(lián)合檢測能夠大幅提升對HCC患者預(yù)后的評估效能,說明聯(lián)合GP73、FOXP3能夠作為有效的血清生物學(xué)指標(biāo)輔助評估HCC患者預(yù)后。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。