廖志剛,葉德曉,游澤芳

(廣東華潤(rùn)順峰藥業(yè)有限公司,廣東 佛山 528000)

使用中穩(wěn)定性是已上市藥品在臨床使用過程中的穩(wěn)定性,包括醫(yī)院臨床用藥期間的穩(wěn)定性和患者在家使用中的穩(wěn)定性。需要進(jìn)行使用中穩(wěn)定性考察的藥物包括多劑量包裝藥物、臨床前需重新配制藥物、部分高阻隔包裝的藥物及部分需再處理的口服固體制劑等。關(guān)于使用中穩(wěn)定性試驗(yàn)的考察目的,ICH、WHO、EMEA、FDA和NMPA均有相關(guān)指南描述。其中ICH Q1A(R)《新原料藥和制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)》中的制劑章節(jié)中明確規(guī)定:在稀釋或配伍后的藥物進(jìn)行使用中穩(wěn)定性試驗(yàn),建立一個(gè)使用期限(in-use period),為說明書或標(biāo)簽提供關(guān)于制備、貯存條件、配伍后藥物的使用期限等信息[1]。WHO在2018年更新發(fā)布的《原料藥及藥品的穩(wěn)定性測(cè)試》中對(duì)藥物使用中穩(wěn)定性考察要求盡可能地模擬實(shí)際使用的過程,檢測(cè)藥品制劑使用期間的化學(xué)、微生物和物理特性等項(xiàng)目。WHO指導(dǎo)文件草案212110條款中描述對(duì)多劑量藥物在開啟包裝第一次使用后,建立一個(gè)使用期限,在該時(shí)間期限內(nèi)制劑可以在保證質(zhì)量的前提下繼續(xù)使用。EMA在2001年發(fā)布的《關(guān)于人用藥物使用期間穩(wěn)定性試驗(yàn)的指導(dǎo)文件》中明確了使用中穩(wěn)定性的概念,同時(shí)較為詳細(xì)地描述了使用中穩(wěn)定性考察的試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)參數(shù)、批次的選擇、試驗(yàn)的對(duì)象、試驗(yàn)條件、分析過程、數(shù)據(jù)描述和數(shù)據(jù)評(píng)價(jià)等。FDA明確規(guī)定對(duì)于多劑量包裝的軟膏、氣霧劑等創(chuàng)面用制劑和無菌眼用制劑,在存放和使用過程中易淚液、受創(chuàng)傷面及環(huán)境中微生物的污染,均應(yīng)進(jìn)行使用中穩(wěn)定性考察?！吨袊?guó)藥典》2020版通則9001“原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則”要求部分藥物制劑應(yīng)考察臨用時(shí)配制和使用過程中的穩(wěn)定性?！痘瘜W(xué)藥物(原料藥和制劑)穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》明確了使用中穩(wěn)定性的研究對(duì)象為臨用現(xiàn)配的制劑,或是多劑量包裝開啟后有一定使用期限的制劑;并指出長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)的放置條件及考察時(shí)間要充分考慮貯藏和使用的整個(gè)過程。同時(shí),《已上市化學(xué)藥品藥學(xué)變更研究技術(shù)指導(dǎo)原則》和《創(chuàng)新藥(化學(xué)藥)臨床試驗(yàn)期間藥學(xué)變更技術(shù)指導(dǎo)原則》等多個(gè)指導(dǎo)原則均提出部分藥物還應(yīng)進(jìn)行藥物使用中穩(wěn)定性研究,但缺少具體詳細(xì)的描述。

本次研究用藥品為陰道用克霉唑陰道乳膏,在注冊(cè)申報(bào)的使用中穩(wěn)定考察中依據(jù)原研產(chǎn)品說明書和國(guó)內(nèi)外指南要求設(shè)計(jì),全面評(píng)價(jià)了產(chǎn)品的使用中穩(wěn)定性,保證產(chǎn)品在開封后的有效性和安全性,為產(chǎn)品的開封后的使用期限提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 主要儀器

顯微鏡(DM70,德國(guó)徠卡(Leica)儀器有限公司);高效液相色譜儀(Agilent 1200,安捷倫科技有限公司);高效液相色譜儀(Agilent 1260,安捷倫科技有限公司);數(shù)顯黏度計(jì)(DV-S,廣州艾欣科學(xué)儀器有限公司);pH計(jì)(S220-B,梅特勒-托利多儀器有限公司);超聲波清洗器(KQ3200,昆山市超聲儀器有限公司);流變儀(MCR102e,安東帕);多功能透皮擴(kuò)散儀(SYT-103,延吉艾迪扼科技有限公司)。

1.2 試劑藥品

克霉唑陰道乳膏(廣東華潤(rùn)順峰藥業(yè)有限公司生產(chǎn),1%,30 g/支,20210601批和20210602批留樣12月樣品);克霉唑陰道乳膏(加拿大拜耳,1%,GP01Z3H批);鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)緩沖液(pH值4.003);磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液(pH值5.865);磷酸氫二鉀(化學(xué)純,廣州化學(xué)試劑廠);磷酸二氫鉀(化學(xué)純,廣州化學(xué)試劑廠);四丁基硫酸氫銨(化學(xué)純;上海阿拉丁生化科技股份有限公司);磷酸(化學(xué)純,廣州化學(xué)試劑廠);聚乙二醇400(化學(xué)純,上海凌峰化學(xué)試劑有限公司);乙腈(色譜純,上海星可高純?nèi)軇┯邢薰?;甲醇(色譜純,上海星可高純?nèi)軇┯邢薰?;克霉唑?qū)φ掌?中國(guó)食品藥品檢定研究院);苯甲醇對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院);克霉唑雜質(zhì)A對(duì)照品(CTAO);TSA培養(yǎng)基、SDA培養(yǎng)基、TSB培養(yǎng)基、SDB培養(yǎng)基、CAM培養(yǎng)基、MSA培養(yǎng)基。

1.3 方案設(shè)計(jì)

根據(jù)克霉唑陰道乳膏說明書中描述“(1)陰道內(nèi)給藥,每天用藥1次,每次5 g,連續(xù)治療6 d;(2)陰道外給藥,每天用藥1～2次,每次適量,連續(xù)治療不超過7 d”,并模擬產(chǎn)品在臨床中使用的實(shí)際過程,從放置條件、取樣時(shí)間點(diǎn)和考察項(xiàng)目進(jìn)行產(chǎn)品使用中穩(wěn)定性試驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)。

放置條件設(shè)計(jì):依據(jù)產(chǎn)品說明書的貯藏環(huán)境及實(shí)際使用過程中的環(huán)境進(jìn)行設(shè)置,克霉唑陰道乳膏兩批樣品的放置條件為室溫。

試驗(yàn)時(shí)間區(qū)間和取樣時(shí)間點(diǎn)設(shè)計(jì):依據(jù)產(chǎn)品說明書的使用說明和實(shí)際使用過程,為保證產(chǎn)品在該期限內(nèi)的有效性和安全性,試驗(yàn)時(shí)間區(qū)間設(shè)置為30 d,使用過程中產(chǎn)品穩(wěn)定性試驗(yàn)共包括9個(gè)取樣點(diǎn)(每次取樣每管取樣約1 g或5 g,剩余樣品擰蓋密封好,繼續(xù)于試驗(yàn)條件放樣),取樣點(diǎn)設(shè)計(jì)如表1所示。

表1 試驗(yàn)時(shí)間區(qū)間和取樣點(diǎn)設(shè)計(jì)

考察項(xiàng)目設(shè)計(jì):使用中穩(wěn)定性試驗(yàn)考察項(xiàng)目需選擇最能反映該過程變化以及產(chǎn)品使用有效性和安全性的項(xiàng)目。本產(chǎn)品的考察項(xiàng)目涉及外觀性狀、均勻性、分層現(xiàn)象、乳滴、含量、有關(guān)物質(zhì)、黏度、酸堿度、微生物、流變學(xué)性質(zhì)、體外釋放。不同取樣時(shí)間點(diǎn)所考察的項(xiàng)目有所不同,其中第0天、第6天、第30天進(jìn)行全部項(xiàng)目的檢測(cè),第15天進(jìn)行外觀性狀、均勻性、分層現(xiàn)象、乳滴、含量、有關(guān)物質(zhì)、黏度、酸堿度項(xiàng)目檢測(cè),1,2,3,4,5 d只進(jìn)行外觀性狀的檢測(cè),對(duì)于考察項(xiàng)目的限度參考內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)限度。

2 方法和結(jié)果

2.1 性狀、均勻性、分層現(xiàn)象

采用目視法對(duì)兩批0,1,2,3,4,5,6 ,15,30 d取樣點(diǎn)的樣品進(jìn)行性狀觀察,0,6,15,30 d取樣點(diǎn)樣品進(jìn)行均勻性和分層現(xiàn)象的檢測(cè)。結(jié)果顯示:性狀結(jié)果均為白色乳膏;均勻性結(jié)果為均涂布于手上觀察基質(zhì)均勻、膏體細(xì)膩,無刺激性;分層現(xiàn)象結(jié)果為膏體無油水分離的分層現(xiàn)象。性狀、均勻性、分層現(xiàn)象均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.2 乳滴

取0,6,15,30 d取樣點(diǎn)樣品的乳膏適量置于載玻片上,用蓋玻片蓋住,置于顯微鏡下觀察,觀察并統(tǒng)計(jì)乳滴粒徑分布。結(jié)果如表2所示,兩批樣品乳滴大小均勻,大多數(shù)乳滴在5 μm以內(nèi),視野中存在有極少數(shù)6～10 μm的大乳滴,符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.3 黏度

取0,6,15,30 d取樣點(diǎn)樣品適量,照黏度測(cè)定法(《中國(guó)藥典2020年版》四部通則0633第三法)測(cè)定。結(jié)果如表3所示,兩批樣品開封使用后黏度與0 d相比有上升趨勢(shì),但均符合標(biāo)準(zhǔn)要求,說明使用過程中產(chǎn)品的黏度較穩(wěn)定。

表3 克霉唑陰道乳膏黏度測(cè)定結(jié)果 單位:Pa·s

2.4 酸堿度

取0,6,15,30 d取樣點(diǎn)樣品,依法測(cè)定(《中國(guó)藥典2020 年版四部》通則0631)。結(jié)果如表4所示,兩批樣品開封使用后酸堿度與0天相比有下降趨勢(shì),但仍均符合標(biāo)準(zhǔn)要求,說明使用過程中酸堿度較穩(wěn)定。

表4 克霉唑陰道乳膏酸堿度測(cè)定結(jié)果

2.5 含量與鑒別

采用高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2020年版通則0512)測(cè)定產(chǎn)品中克霉唑和苯甲醇的含量,色譜柱(Waters XBridge Shield RP184.6 mm×150 mm 5 μm),檢測(cè)波長(zhǎng):215 nm,流速:1.0 mL/min,柱溫:30 ℃,進(jìn)樣體積10 μL,試劑為磷酸氫二鉀和乙腈。含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜圖中,供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中克霉唑和苯甲醇的含量。結(jié)果如表5所示,兩批樣品開封后克霉唑含量具有下降趨勢(shì),第30天為標(biāo)示量的99.6%,符合標(biāo)準(zhǔn)要求;苯甲醇含量在0.1～0.2 mg間波動(dòng),與0 d相比無明顯上升或降低趨勢(shì),各時(shí)間點(diǎn)均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

表5 克霉唑陰道乳膏含量測(cè)定結(jié)果

2.6 有關(guān)物質(zhì)

采用高效液相色譜法(《中國(guó)藥典2020年版四部》通則0512)測(cè)定產(chǎn)品中有關(guān)物質(zhì)。使用甲醇處理供試樣品、克霉唑?qū)φ掌贰⒖嗣惯螂s質(zhì)A對(duì)照品;色譜柱(Ultimate XB-C84.6 mm×150 mm 5μm),捕集柱(Ghost-Buster Column Ⅱ 3.0 mm×50 mm);檢測(cè)波長(zhǎng):210 nm,流速:1.0 mL/min,柱溫:40 ℃,進(jìn)樣體積10 μL,試劑為磷酸二氫鉀、四丁基硫酸氫銨和乙腈。測(cè)定結(jié)果如表6所示,兩批開封后使用樣品的有關(guān)物質(zhì)總雜與0 d相比在0.024%～0.068%之間波動(dòng),雜質(zhì)A在0.001%～0.007%波動(dòng),其他未知單雜在0.002%～0.042%波動(dòng),無明顯上升或降低趨勢(shì),符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

表6 克霉唑陰道乳膏有關(guān)物質(zhì)質(zhì)量含量測(cè)定結(jié)果 單位:%

2.7 微生物

采用微生物培養(yǎng)法測(cè)定產(chǎn)品中的微生物,對(duì)兩批樣品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、白念珠菌進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果如表7所示,兩批樣品開封使用后需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、白念珠菌與0 d相比無變化,抑菌能力穩(wěn)定,限度均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

表7 克霉唑陰道乳膏微生物測(cè)定結(jié)果

2.8 流變學(xué)特性

采用安東帕MCR102e流變儀測(cè)定產(chǎn)品中的流變學(xué)特性,測(cè)定兩批樣品的黏度曲線、3ITT觸變性、振幅掃描、屈服應(yīng)力。結(jié)果如表8所示,兩批開封前后的樣品均為假塑性流體,平均黏度與0 d相比有上升趨勢(shì),與2.3用黏度計(jì)測(cè)定的結(jié)果相似;3ITT觸變性(δ)在0.25～13.90間波動(dòng),無明顯變化趨勢(shì);振幅掃描下線性粘彈區(qū)兩批樣品的變化趨勢(shì)存在差異,但仍在變化范圍中,20210601批儲(chǔ)能模量為下降趨勢(shì),20210602批整體為上升趨勢(shì);屈服應(yīng)力兩批整體呈上升趨勢(shì),說明需要增加應(yīng)力才能發(fā)生流動(dòng),但在變化范圍內(nèi)。兩批開封前后的流變特性整體上與0 d相比較穩(wěn)定。

表8 克霉唑陰道乳膏流變學(xué)特性測(cè)定結(jié)果

2.9 體外釋放

采用Franz擴(kuò)散池法測(cè)定制劑的體外釋放情況,使用中穩(wěn)定性樣品的釋放度與參比制劑的0 d進(jìn)行平行比較。釋放透皮介質(zhì):30%聚乙二醇400-磷酸二氫鉀溶液,體外釋放擴(kuò)散體積:1.5 cm2,轉(zhuǎn)速:600 r/min,擴(kuò)散池溫度:37 ℃。色譜柱(Agilent HPH-C82.7 μm 4.6 mm×100 mm),柱溫:30 ℃,流速:1.0 mL/min,進(jìn)樣體積:10 L,檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm,試劑為磷酸二氫鉀、四丁基硫酸氫銨、乙腈。結(jié)果如表9所示,兩批樣品的體外透皮釋放速率與0 d相比均無明顯變化,與參比制劑GP01Z3H批0 d釋放速率的置信區(qū)間在75%～133.33%范圍內(nèi),說明開封前后制劑的體外釋放穩(wěn)定。

表9 克霉唑陰道乳膏體外釋放測(cè)定結(jié)果(對(duì)照樣品/參比制劑GP01Z3H批0 d)

3 討論

對(duì)國(guó)內(nèi)使用中穩(wěn)定性研究的文獻(xiàn)進(jìn)行檢索,發(fā)現(xiàn)我國(guó)目前對(duì)藥物制劑使用中的穩(wěn)定性研究較少,僅10余篇報(bào)道,且多集中于注射劑和粉劑溶解后的使用中穩(wěn)定性研究,缺少對(duì)多劑量包裝的半固體制劑的研究[2]。在臨床使用過程中,對(duì)于多劑量包裝制劑,在初次使用后會(huì)接觸到環(huán)境中的氧氣、水分、光線和微生物等,可能會(huì)影響制劑的外觀色澤、含量、有關(guān)物質(zhì)和微生物等,從而對(duì)藥物的安全性和有效性產(chǎn)生影響。為此,合理設(shè)計(jì)藥物使用中穩(wěn)定性的研究方案,開展使用中穩(wěn)定性研究,指導(dǎo)臨床用藥安全,保證使用中藥物的有效性。

1%克霉唑陰道乳膏(30 g/支)作為多劑量包裝的藥物制劑,本研究對(duì)兩批經(jīng)過12月留樣的中試規(guī)模樣品,滿足了國(guó)內(nèi)申報(bào)穩(wěn)定性樣品及EMA和FDA指導(dǎo)原則的要求。此外,WHO、EMA和ICH等均推薦貨架期末的樣品進(jìn)行試驗(yàn),但在實(shí)際注冊(cè)申報(bào)中無法得到貨架期末的數(shù)據(jù),也推薦提供12月或注冊(cè)申報(bào)時(shí)長(zhǎng)期穩(wěn)定性的最后一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的穩(wěn)定性數(shù)據(jù),該情況建議對(duì)穩(wěn)定性數(shù)據(jù)進(jìn)行分析有無下降趨勢(shì),視情況是否補(bǔ)充貨架期末的使用中穩(wěn)定性數(shù)據(jù)[3]。依據(jù)產(chǎn)品說明書模擬臨床實(shí)際使用過程在實(shí)際使用條件下每次取樣,試驗(yàn)放置條件為室溫環(huán)境,試驗(yàn)時(shí)間區(qū)間設(shè)置為30 d,共9個(gè)取樣點(diǎn),覆蓋了說明書中“陰道內(nèi)給藥,連續(xù)治療6 d”和“陰道外給藥,連續(xù)治療不超過7 d”的時(shí)間?？疾祉?xiàng)目根據(jù)乳膏劑型進(jìn)行設(shè)計(jì),限度參考產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),從而保證藥物使用中的安全性和有效性,包含了最能反映使用過程中穩(wěn)定性變化的項(xiàng)目,如有關(guān)物質(zhì)、外觀性狀;乳膏劑型的質(zhì)量特征的項(xiàng)目,如均勻性、分層現(xiàn)象、乳滴、黏度、酸堿度、流變學(xué)特性;藥品有效性的項(xiàng)目,如克霉唑含量、體外釋放;藥品安全性的項(xiàng)目,如微生物;還有使用期間抑菌劑苯甲醇含量的變化。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果顯示,1%克霉唑陰道乳膏(30 g/支)2批樣品在開封后30 d內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的質(zhì)量考察項(xiàng)目,制劑的外觀性狀、均勻性、分層現(xiàn)象、乳滴、含量、有關(guān)物質(zhì)、黏度、酸堿度、微生物均符合標(biāo)準(zhǔn)要求,6 d和30 d的流變學(xué)特性與0 d相比無明顯變化趨勢(shì),6 d和30 d的體外釋放速率與0 d和參比制劑0 d相比無明顯變化。使用中穩(wěn)定性數(shù)據(jù)表明在臨床實(shí)際使用過程中,克霉唑陰道乳膏在開封后30 d內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定,藥物具有良好的安全性和有效性。