★ 郭德華 吳成林 許洋 張國福（.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌 330004；.江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 南昌 330006)

隨著現(xiàn)代社會(huì)交通、工業(yè)的不斷發(fā)展，脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）的發(fā)病率正呈現(xiàn)逐年增高趨勢［1］，但目前臨床上治療SCI 主要依靠藥物和外科手術(shù)，雖可在一定程度上緩解病情，但解決不了病患的根本問題［2］。SCI 不僅嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，甚至影響社會(huì)的安定［3］。因此,尋找到有利于脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復(fù)的治療方法是當(dāng)今基礎(chǔ)和臨床研究的熱點(diǎn)之一。研究發(fā)現(xiàn)，脊髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）、神經(jīng)干細(xì)胞、臍血干細(xì)胞等干細(xì)胞移植有望成為治療SCI 的最佳方法［4］。與其他移植細(xì)胞比較，BMSCs 具有顯著的營養(yǎng)神經(jīng)、調(diào)控節(jié)免疫系統(tǒng)平衡、抗凋亡、抗氧化應(yīng)激、跨胚層分化的能力，促進(jìn)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，改善后肢運(yùn)動(dòng)功能，且體內(nèi)移植不良反應(yīng)和免疫排斥少、不存在倫理道德問題等優(yōu)點(diǎn)，這些特性使BMSCs 成為治療SCI 的理想候選細(xì)胞，被廣泛用于神經(jīng)系統(tǒng)損傷修復(fù)領(lǐng)域中［5-6］。目前治療脊髓損傷是以積極預(yù)防治療繼發(fā)性損傷為主，但該損傷是由多因子和多因素相互作用所致，單一治療某一方面的藥物都不能從整體上修復(fù)脊髓損傷。研究發(fā)現(xiàn)，中藥復(fù)方是通過多方面進(jìn)行治療，并且能為神經(jīng)生長提供適應(yīng)的環(huán)境，還因中藥毒副作用少、價(jià)格經(jīng)濟(jì)等更易被患者接受［7］。研究表明，補(bǔ)陽還五湯（Buyang Huanwu decoction，BYHWD）的有效成分比較豐富，在治療脊髓損傷方面發(fā)揮了中醫(yī)整體觀念的優(yōu)勢，能通過多路徑、多層次和多靶位的作用機(jī)制，在多方面抑制繼發(fā)性脊髓損傷的病理因素，改善SCI 后的局部微環(huán)境，促進(jìn)SCI 的修復(fù)和重建［7-8］。本研究前期研究發(fā)現(xiàn)，單純BMSCs 移植和補(bǔ)陽還五湯對(duì)脊髓損傷均具有治療作用［9-11］。但補(bǔ)陽還五湯能否促進(jìn)BMSCs 在體內(nèi)遷移，中藥聯(lián)合BMSCs 移植對(duì)脊髓損傷能否產(chǎn)生協(xié)同增效的作用，值得深入研究。近年來研究發(fā)現(xiàn)，用鼠的MSCs 用Brud 標(biāo)記注射到胎鼠側(cè)室，處死小鼠后發(fā)現(xiàn)MSCs 能遷移到海馬嗅球等神經(jīng)元分布豐富的部位；多功能細(xì)胞因子IL-6 在腦組織中表達(dá)較少，在神經(jīng)疾病腦組織中高表達(dá)，可見IL-6 可介導(dǎo)神經(jīng)系統(tǒng)疾病的神經(jīng)元修復(fù)；且gp130是IL-6 等多種細(xì)胞因子受體中的共用信號(hào)傳導(dǎo)鏈［12-14］。gp130 本身不具有酪氨酸激酶活性，其可通過介導(dǎo)IL-6 進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)；但具體作用于脊髓損傷的機(jī)制尚未明確。因此，在前期研究基礎(chǔ)上，本研究采用改良Allen 重物打擊法制備脊髓損傷模型，通過改良Tarlov 評(píng)分和斜板試驗(yàn)，評(píng)價(jià)補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合BMSCs 移植對(duì)脊髓損傷外傷性截癱后功能恢復(fù)的影響；通過HE 染色、免疫組化及蛋白免疫印跡法，觀察中藥聯(lián)用對(duì)脊髓損傷局部損傷情況、局部損傷組織中Brdu 含量及gp130、IL-6 蛋白表達(dá)的影響，探討其可能的作用機(jī)理。

1 材料

1.1 動(dòng)物

50 只8~10 周齡SPF 級(jí)大鼠和5 只6 周齡大鼠，購于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證編號(hào)：SCXK（湘）2019-0004，雌雄不限，200~250 g，飼養(yǎng)于潔凈環(huán)境中，溫度（23±2）℃，濕度40%~70%，自由飲食攝水，12 h 光暗交替，所有動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d 后開始正式試驗(yàn)。

1.2 藥物

補(bǔ)陽還五湯組成：生黃芪60 g（批號(hào)210606），當(dāng)歸10 g（批號(hào)210419），地龍10 g（批號(hào)210226），赤芍10 g（批號(hào)020410），川芎10 g（批號(hào)210722），桃仁10 g（批號(hào)210427），紅花10 g（批號(hào)210526），以上飲片均購于江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房，均為江西江中中藥飲片有限公司產(chǎn)品，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥庫李曉芳副主任中藥師鑒定，均符合2015 年版《中國藥典》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 儀器與試劑

戊巴比妥鈉麻醉劑（美國Sigma 公司）；尿嘧啶脫氧核苷（Brdu）、鼠抗人尿嘧啶脫氧核苷（Brdu）單克隆抗體、DAB 顯色試劑盒（北京中山生物技術(shù)有限公司）；山羊抗兔β-actin 多克隆抗體、gp130 抗體、IL-6 抗體（武漢博士德生物工程有限公司）；免疫組化試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）；熒光顯微鏡、倒置顯微鏡（日本OLYMPUS公司）。

2 方法

2.1 脊髓損傷模型的建立

將50只大鼠分為假手術(shù)組10只和造模組40只，采用改良Allen 重物打擊法制備脊髓損傷模型，可保持硬膜完整性，造成大鼠脊髓重度損傷，即完全性截癱。各組大鼠均以2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉（50 mg/kg），俯臥位固定大鼠，在背部以T10 為中心，縱向切一3 cm 的小口，充分暴露T10 段脊髓。在T10 脊髓的表面放置一個(gè)直徑為3 mm 的圓形薄片，用重10 g 的砝碼自由墜落12.5 cm 打擊該墊片，造成T10 段脊髓的沖擊傷，逐層縫合大鼠皮膚。當(dāng)撞擊脊髓時(shí)大鼠出現(xiàn)身體抖動(dòng)，打擊局部脊髓表面迅速呈瘀紫色，術(shù)后雙下肢出現(xiàn)完全癱瘓時(shí)視為脊髓損傷模型制備成功。手術(shù)結(jié)束后，將所有大鼠均置于25 ℃的動(dòng)物房內(nèi)統(tǒng)一飼養(yǎng)，將墊有鋸末的平板置于大鼠籠中，以防肢體或骶部壓瘡及吸收排尿，并及時(shí)更換。手術(shù)結(jié)束后人工排尿，2 次/d，各大鼠均連續(xù)排尿2 周，直至大鼠恢復(fù)自主排尿時(shí)停止。假手術(shù)組大鼠只暴露T10 段脊髓并不打擊脊髓，其余步驟和其他各組大鼠相同。

2.2 補(bǔ)陽還五湯的制備

根據(jù)《中國藥典》制定劑量范圍內(nèi)的臨床常用劑量稱取中藥材，補(bǔ)陽還五湯藥物組成：川芎10 g，芍藥10 g，生黃芪60 g，地龍10 g，桃仁10 g，當(dāng)歸10 g，紅花6 g。按照中藥煎藥規(guī)定，將藥湯濃縮至200 mL 備用，相當(dāng)于臨床等效生藥量藥物濃度為0.6 g/mL［11］。

2.3 BMSCs 制備與鑒定

以2%戊巴比妥鈉（50 mg/kg）腹腔注射麻醉6 周齡大鼠并安樂死處死，取大鼠雙側(cè)下肢脛骨骨髓，將單核細(xì)胞單獨(dú)分離，接種單核細(xì)胞于培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)箱培養(yǎng)細(xì)胞3 d，將未貼壁的細(xì)胞棄掉，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)記物。將證實(shí)的BMSCs 細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)，取第三代BMSCs 細(xì)胞用于體內(nèi)移植。移植前一天，將Brdu 標(biāo)記加入到20 μmol/L 細(xì)胞中，洗滌細(xì)胞后，在細(xì)胞中加入0.25%胰蛋白酶消化，1 000 r/min 離心4 min，將PBS 溶液加入到細(xì)胞中重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/mL 備用。

2.4 分組和給藥

將50 只大鼠隨機(jī)分為5 組，即假手術(shù)組（灌胃等量生理鹽水）、空白對(duì)照組（灌胃等量生理鹽水）、補(bǔ)陽還五湯組［分上、下午2 次灌胃25 g/kg 補(bǔ)陽還五湯［11］（課題組前期實(shí)驗(yàn)得出的最佳實(shí)驗(yàn)濃度）］、BMSCs 移植組（尾靜脈注射1 mL 1×106BMSCs）、補(bǔ)陽還五湯+BMSCs 組（灌胃25 g/kg 補(bǔ)陽還五湯，同時(shí)尾靜脈注射1 mL 1×106BMSCs），每組10 只。

2.5 行為學(xué)評(píng)估

采用雙盲、雙人獨(dú)立觀察記錄，在術(shù)后1、3、5 周進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分觀察，采用改良Tarlov 評(píng)分和斜板試驗(yàn)。

2.5.1 改良Tarlov 評(píng)分 0 和1 分：沒有自主性的運(yùn)動(dòng)，只限于非反射性的髖、膝關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)；2 分：髖、膝、踝3 個(gè)關(guān)節(jié)的肢體運(yùn)動(dòng)；3 分：行走時(shí)可主動(dòng)支撐體重和不協(xié)調(diào)步態(tài)或偶爾出現(xiàn)協(xié)調(diào)步態(tài)；4 分：活動(dòng)時(shí)呈現(xiàn)前后肢協(xié)調(diào)步態(tài)，行動(dòng)時(shí)有趾間關(guān)節(jié)的肢體運(yùn)動(dòng)；5 分：正常步態(tài)。

2.5.2 斜板試驗(yàn) 取一塊長方形木板，將2 mm 的橡膠墊墊于木板上，將大鼠頭向前，身體縱軸與斜面板縱軸垂直放置，將木板與水平面之間的角度逐漸增大，直至大鼠在原定位置上剛好可以維持 5 s，將這一個(gè)角度稱為傾斜平面臨界角度。

2.6 HE 染色

將各組大鼠分別于造模干預(yù)后1、3、5周，以2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉（50 mg/kg）并開胸，大鼠心臟用4%多聚甲醛灌注固定，將損傷區(qū)的脊髓組織切取2~3 mm，用中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋后制成3 μm 的切片，將切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水，然后浸入焦油紫染液中。將染色缸放入56 ℃烤箱中1 h，蒸餾水沖洗2 min，用分化液分化約2 min，直至背景接近于無色為止。依次脫水、透明、中性樹膠封片。取各組大鼠5 周后的樣本切片置于顯微鏡下觀察脊髓損傷的情況。

2.7 免疫組化分析

取BMSCs 組、補(bǔ)陽還五湯+BMSCs 組，分別于造模干預(yù)后1、3、5 周，以2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉（50 mg/kg）大鼠并開胸，大鼠心臟用4%多聚甲醛灌注固定，將損傷區(qū)的脊髓組織切取1.5 cm，用中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋后制成3 μm 的切片，用免疫組化法檢測Brdu 陽性標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)量。取各BMSCs 移植組大鼠5 周后的樣本，觀察Brdu的陽性細(xì)胞數(shù)量。用“ImageJ”軟件進(jìn)行免疫組化半定量分析。

2.8 Western blot 法檢測

處死各組大鼠，取20 mg 脊髓組織，在冰上研磨組織呈粉末狀，將裂解液加入到組織中，制成組織懸液后離心，對(duì)蛋白樣本總濃度進(jìn)行測定。轉(zhuǎn)移蛋白樣品至PVDF 膜，加入5%脫脂奶粉，封閉樣品2 h。蛋白樣品中分別加入一抗gp130、IL-6 和內(nèi)參β-actin 蛋白，孵育后洗滌蛋白樣品，將二抗（1∶2 000）加入到蛋白樣品中，室溫孵育1 h。用ECL 液顯色，Image J 軟件觀察條帶灰度值并計(jì)算蛋白表達(dá)。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。2 組定量數(shù)值采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組定量數(shù)值采用單因素方差分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 BMSCs 的培養(yǎng)和鑒定

顯微鏡下可見，BMSCs 原代細(xì)胞多呈星形和多角形，細(xì)胞集落樣生長。后繼續(xù)生長，直至細(xì)胞融合率為80%，姬姆薩染色顯示，第3 代BMSCs細(xì)胞呈短梭形，以旋渦狀或放射狀排列分布。見圖1。

圖1 大鼠原代BMSCs形態(tài)（×40）

3.2 流式細(xì)胞儀鑒定BMSCs 表面標(biāo)志物

取生長良好的第3 代BMSCs 進(jìn)行表面標(biāo)志物鑒定，結(jié)果顯示，BMSCs 表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志CD90、CD105，不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志CD14，具有BMSCs 特性。見圖2。

圖2 流式細(xì)胞儀鑒定BMSCs表面標(biāo)志物

3.3 行為學(xué)結(jié)果

3.3.1 改良Tarlov 評(píng)分結(jié)果 與模型組比較，各治療組大鼠的改良Tarlov 評(píng)分均明顯上升；與BMSCs組比較，補(bǔ)陽還五湯+BMSCs 組大鼠的Tarlov 評(píng)分顯著上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 各組大鼠損傷后改良Tarlov評(píng)分結(jié)果（，n=10）

表1 各組大鼠損傷后改良Tarlov評(píng)分結(jié)果（，n=10）

注：與模型組比較，*P＜0.05；與BMSCs組比較，#P＜0.05。

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3.3.2 斜板試驗(yàn)結(jié)果 通過斜板實(shí)驗(yàn)觀察脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復(fù)情況，與模型組比較，各治療組大鼠的斜板實(shí)驗(yàn)傾斜角度均明顯增大；與BMSCs組相比，補(bǔ)陽還五湯+BMSCs 組大鼠的斜板實(shí)驗(yàn)角度顯著增大（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠損傷后斜板試驗(yàn)結(jié)果（，n=10） °

表2 各組大鼠損傷后斜板試驗(yàn)結(jié)果（，n=10） °

注：與模型組比較，*P＜0.05；與BMSCs組比較，#P＜0.05。

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3.4 免疫組化觀察BMSCs 的遷移情況

假手術(shù)組、模型組、補(bǔ)陽還五湯組中脊髓組織無Brdu 標(biāo)記的陽性細(xì)胞；各BMSCs 移植組脊髓組織中均可見棕黃色Brdu 標(biāo)記的陽性細(xì)胞；在BMSCs 移植1 周后遷移細(xì)胞數(shù)量大量成活，移植3~5 周時(shí)脊髓組織中仍有較多BMSCs 存活。移植5 周時(shí)，補(bǔ)陽還五湯+BMSCs 組Brdu 標(biāo)記陽性細(xì)胞數(shù)為（8.64±0.92）個(gè)，明顯多于BMSCs 組的（9.87±0.25）個(gè)（P＜0.05）。見圖3。

圖3 免疫組化檢測各組大鼠中脊髓組織Brdu水平（倒置顯微鏡，×200）

3.5 HE 染色觀察脊髓損傷的情況

在5 周時(shí)，假手術(shù)組見脊髓組織結(jié)構(gòu)清晰，未見明顯細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞；模型組灰質(zhì)破壞溶解，膠質(zhì)疤痕形成，少見完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，灰、白質(zhì)較難區(qū)分；各治療組脊髓組織結(jié)構(gòu)較清晰，灰質(zhì)中壞死區(qū)較小，白質(zhì)有存留，膠質(zhì)疤痕少。見圖4。

圖4 HE染色觀察脊髓損傷的情況（×100）

3.6 補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合BMSCs 移植對(duì)脊髓損傷大鼠影響的相關(guān)機(jī)制研究

與模型組比較，各治療組中的gp130、IL-6 的蛋白表達(dá)水平均顯著下調(diào)；與BMSCs 組比較，補(bǔ)陽還五湯+BMSCs 組中的gp130、IL-6 的蛋白表達(dá)水平均顯著下調(diào)（P＜0.05）。見表4、圖5。

表4 Western blot檢測各組大鼠脊髓損傷組織中g(shù)p130、IL-6蛋白表達(dá)（，n=10）

表4 Western blot檢測各組大鼠脊髓損傷組織中g(shù)p130、IL-6蛋白表達(dá)（，n=10）

注：與模型組比較，*P＜0.05；與BMSCs組比較，#P＜0.05。

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圖5 各組大鼠脊髓損傷組織中g(shù)p130、IL-6蛋白表達(dá)

4 討論

據(jù)世衛(wèi)組織的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年由于跌倒、暴力或交通事故等外傷導(dǎo)致的脊髓損傷患者大約有25~50 萬人［15］。目前，臨床常以手術(shù)治療脊髓損傷，但治療效果并不是十分理想，且治療費(fèi)用相對(duì)較高，導(dǎo)致患者及家庭難以接受。對(duì)于治療脊髓損傷尚未形成系統(tǒng)的方案，因此亟需研究一種更安全、可靠和有效的治療方法。

中藥復(fù)方體現(xiàn)了中醫(yī)藥治病辨證施治和整體觀念的特點(diǎn)，其作用效果往往是多途徑、多靶點(diǎn)的，配伍有效的中藥復(fù)方在治療脊髓損傷時(shí)，可能會(huì)提供更有利于脊髓恢復(fù)的環(huán)境。中醫(yī)藥治療脊髓損傷已有數(shù)千年的歷史，其中補(bǔ)陽還五湯是促進(jìn)血液循環(huán)、通經(jīng)活絡(luò)的代表方，用于修復(fù)脊髓損傷神經(jīng)功能有著數(shù)百年的歷史［16-17］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，補(bǔ)陽還五湯與模型組比較，改良Tarlov 評(píng)分、斜板試驗(yàn)傾斜角度均明顯上升，HE 染色見脊髓組織結(jié)構(gòu)較清晰灰質(zhì)中壞死區(qū)較小，白質(zhì)有存留，膠質(zhì)疤痕少，且抑制了gp130 及IL-6 的蛋白表達(dá)，充分說明其促進(jìn)了大鼠脊髓損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)，其機(jī)制可能是改善損傷后組織的炎癥反應(yīng)、抑制細(xì)胞的死亡并保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞。相關(guān)研究證實(shí)，對(duì)脊髓損傷患者給予補(bǔ)陽還五湯治療后發(fā)現(xiàn)，患者的臨床療效顯著升高［18-19］。通過前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)陽還五湯可以促進(jìn)移植的BMSCs 遷移，進(jìn)而有效地恢復(fù)脊髓功能，但目前關(guān)于其遷移的具體機(jī)制尚不清楚［11］。

BMSCs 能對(duì)脊髓損傷區(qū)的微環(huán)境進(jìn)行改變，可刺激神經(jīng)生長，促進(jìn)神經(jīng)再生，并可通過對(duì)神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行分化，進(jìn)而補(bǔ)充細(xì)胞結(jié)構(gòu)，起到促進(jìn)血管新生和抑制炎癥等生物學(xué)作用［20］。有研究顯示，BMSCs 經(jīng)靜脈注射通過自行特異性遷移而植入受損部位［21］。其中體外培育擴(kuò)增的BMSCs移植后，能夠抑制脊髓損傷局部的炎癥反應(yīng)，減輕脊髓神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，顯著改善脊髓損傷后局部的病理表現(xiàn)和下肢功能［22］。本研究通過建立SCI大鼠模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)BMSCs 移植能增加SCI 大鼠Tralov 評(píng)分和傾斜平面臨界角度，且中藥聯(lián)用比單純BMSCs 移植使用效果更顯著。聶穎等［23］研究證實(shí)，補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)保護(hù)SCI 氣虛血瘀證脊髓局部軸突、改善前肢運(yùn)動(dòng)功能可產(chǎn)生協(xié)同增效作用。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)中細(xì)胞需經(jīng)過遷移才能到達(dá)損傷部分，進(jìn)而發(fā)揮生物學(xué)作用，如不能正常進(jìn)行遷移，就可導(dǎo)致神經(jīng)發(fā)育的異常，出現(xiàn)多種疾病。目前神經(jīng)細(xì)胞可通過膠質(zhì)細(xì)胞的纖維輻射狀遷移和不依賴膠質(zhì)細(xì)胞而作正切方向遷移，遷移方向是由導(dǎo)向因子所引導(dǎo)。有研究發(fā)現(xiàn)，用鼠的MSCs用Brud 標(biāo)記注射到胎鼠側(cè)室，處死小鼠后發(fā)現(xiàn)MSCs 能遷移到海馬嗅球等神經(jīng)元分布豐富的部位［12］。本研究將Brud 標(biāo)記的BMSCs 通過尾靜脈注射到SCI 大鼠體內(nèi)，結(jié)果表明帶Brud 標(biāo)記移植的BMSCs 在術(shù)后1 周可通過血液循環(huán)在宿主體內(nèi)遷移至脊髓損傷部位，5 周后補(bǔ)陽還五湯可明顯促進(jìn)移植的BMSCs 遷移成活，說明補(bǔ)陽還五湯促進(jìn)BMSCs 向脊髓損傷局部遷移。但本實(shí)驗(yàn)中假手術(shù)組未能檢測到BMSCs，說明移植的BMSCs 不向正常的脊髓組織遷移，而各細(xì)胞移植組中就能檢測到BMSCs，說明BMSCs 能向損傷后的脊髓組織遷移，猜測這與創(chuàng)傷部位的炎癥或修復(fù)等因素相關(guān)。

目前BMSCs 體外遷移的導(dǎo)向因子有多種，其中g(shù)p130 及IL-6 均介導(dǎo)脊髓損傷的發(fā)生發(fā)展。相關(guān)研究表明，IL-6 作為炎癥細(xì)胞分化的重要影響因子，而gp130 作為IL-6 等多種細(xì)胞因子的信號(hào)傳導(dǎo)鏈，均參與了神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)過程及急性SCI 的繼發(fā)性損害［24-25］。本研究結(jié)果顯示，補(bǔ)陽還五湯和BMSCs 移植均能抑制SCI 大鼠脊髓組織中g(shù)p130、IL-6 蛋白表達(dá)，且中藥聯(lián)合細(xì)胞移植更顯著地抑制gp130、IL-6蛋白表達(dá)。因此，我們猜測補(bǔ)陽還五湯促進(jìn)BMSCs遷移，進(jìn)而恢復(fù)大鼠后肢功能，改善脊髓損傷是通過減低脊髓損傷局部的gp130 及IL-6 實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述，補(bǔ)陽還五湯促進(jìn)BMSCs 遷移，補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合BMSCs 移植提高了脊髓損傷大鼠的改良Tarlov 評(píng)分、斜板實(shí)驗(yàn)傾斜角度，同時(shí)抑制了IL-6及gp130 蛋白的表達(dá)，改善脊髓損傷，促進(jìn)了大鼠脊髓外傷性截癱后運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)，明確了補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合BMSCs 移植具有治療脊髓損傷的作用，并證明其作用機(jī)制可能與促進(jìn)BMSCs 遷移、抑制脊髓損傷局部IL-6 及gp130 的表達(dá)相關(guān)。然而補(bǔ)陽還五湯是通過調(diào)控哪些導(dǎo)向因子及信號(hào)通路促進(jìn)BMSCs遷移和抑制IL-6、gp130 表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)大鼠脊髓外傷性截癱后運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)，達(dá)到修復(fù)脊髓損傷的作用，其詳細(xì)作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。