★ 宋楠楠 李蓉 西旺（江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌 330004）

衛(wèi)氣是人體中具有防護作用的氣，可以保衛(wèi)人體，避免外邪入侵，故而稱之為衛(wèi)氣。衛(wèi)氣是水谷精微中慓悍滑利部分所化，十分具有活力，能夠溫煦皮膚腠理，司汗孔開闔以及護衛(wèi)肌表［1］，提高衛(wèi)氣功能也是我們進(jìn)行氣功鍛煉的主要目標(biāo)。從現(xiàn)代生物學(xué)角度看，衛(wèi)氣的作用特點與生物學(xué)中的免疫體系十分接近，能夠完成類似機體屏障、細(xì)胞吞噬、體液免疫等系統(tǒng)的多種功能［2］。2020 年至今，新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）席卷全球，給人類帶來巨大的經(jīng)濟損失和人員傷亡。據(jù)報道，新型冠狀病毒肺炎中重癥患者的死亡率高達(dá)到61.5%，而在此次疫情中，中國采取的治療方案和預(yù)防措施十分得當(dāng)［3-4］。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為衛(wèi)氣是機體的盾牌和警戒哨，如同現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的免疫應(yīng)答，能夠第一時間與邪氣接觸，感知邪氣后向全身發(fā)出警示，同時做出防御反應(yīng)［5］。正如《素問·瘧論》中提到的“瘧氣隨經(jīng)絡(luò)，沉以內(nèi)薄，故衛(wèi)氣應(yīng)乃作”，故而衛(wèi)氣的深入研究有助于人類應(yīng)對新型冠狀病毒肺炎、非典型病毒肺炎、禽流感等重大流行性疾病的挑戰(zhàn)。因此，通過藥物或氣功鍛煉提高衛(wèi)氣的功能有助于增強人體對抗邪氣的力量［6］。

中醫(yī)可以通過氣功鍛煉和中藥提高衛(wèi)氣功能，其中玉屏風(fēng)散是用于治療衛(wèi)氣虛的常用中成藥，在中醫(yī)的臨床和實驗研究中都有廣泛使用?，F(xiàn)代研究表明衛(wèi)氣的提高可以起到抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用，能提高黏膜等組織的屏障功能［7-8］。本研究通過疲勞結(jié)合冷熱交替刺激構(gòu)建衛(wèi)氣虛大鼠模型，嘗試以物理方法太赫茲波［9］技術(shù)聯(lián)合現(xiàn)有生物檢測為橋梁，從實驗角度進(jìn)一步研究衛(wèi)氣對于肺和皮膚屏障功能的影響，進(jìn)一步印證衛(wèi)氣的生物學(xué)實質(zhì)。

1 材料

1.1 動物

無特定病原體（specific pathogen free，SPF）級健康雄性SD 大鼠30 只，白色，12 周齡，體質(zhì)量200~230 g，購于江西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物科技中心，動物許可證號：SCXK（贛）2018-0003，室溫在20~22 ℃，恒濕，12 h 光照，實驗期間自由飲水，實驗前12 h 禁食、不禁水。

1.2 藥物

補衛(wèi)氣方劑組成：黃芪20 g，白術(shù)20 g，防風(fēng)10 g，中藥飲片由江西中醫(yī)藥大學(xué)提供，以上中藥由江西中醫(yī)藥大學(xué)臨床中藥教研室鑒定均為合格藥材，飲片符合《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)；將所有中藥飲片充分浸泡后加入8 倍量水中煎煮，保持文火下沸騰30 min，過濾后提取藥液保留。加水后再次煎煮30 min 后過濾、提取藥液，將2 次煎煮得到的藥液混合，并在80 ℃、0.09 Mpa 壓力條件下減壓濃縮至100 mL，每1 mL 藥液相當(dāng)于2 g 生藥量的浸膏，于4 ℃條件下備用。按照動物質(zhì)量換算進(jìn)行灌胃。

1.3 試劑

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒、無水乙醇（廣西北侖河醫(yī)科集團）；脫毛劑（廣東省廣州市瑪貝拉化妝品有限公司）；戊巴比妥鈉、蘇木素、伊紅染液、維多利亞藍(lán)（南京化學(xué)試劑廠）；磷酸鹽（PBS）溶液（美國gibco 公司）；蘇木染色液（珠海貝索生物技術(shù)有限公司）；生理鹽水（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司）。

1.4 儀器

游泳箱（自制）；PBM-A 組織包埋機（普瑞斯星醫(yī)療器械有限公司）；PHY 病理組織漂烘儀（普瑞斯星醫(yī)療器械有限公司）；902-ULTS 型超低溫冰箱（德國賽默飛世爾科技公司）；RM2235 切片機（上海徠卡儀器有限公司）；VERT4S80V 型遠(yuǎn)紅外光譜儀（德國Brucker 公司）；顯微鏡（日本Olympus 公司）。

2 方法

2.1 動物分組與模型制備

30 只大鼠隨機分為空白組、模型組、補衛(wèi)氣組，各10 只。標(biāo)記好后在實驗條件下全營養(yǎng)飼養(yǎng)，室溫22 ℃。衛(wèi)氣虛模型采取負(fù)重疲勞訓(xùn)練聯(lián)合冷熱刺激法，首先模型組大鼠進(jìn)行負(fù)重游泳：將載有10%體質(zhì)量尾絲的大鼠放入水箱中，在深度約40 cm 水箱中游泳30 min 停止或開始出現(xiàn)身體疲憊為止（大鼠頭部沉入水中10 s 后仍無法抬起）。冷熱刺激干預(yù)：將大鼠從25 ℃室溫狀態(tài)下放入-20 ℃冰柜中15 min 進(jìn)行冷刺激，取出后再將大鼠放入40 ℃恒溫箱中15 min 進(jìn)行熱刺激，每日1 次，持續(xù)7 d。

2.2 給藥方法

造模完成后開始灌胃給藥，給藥如下：補衛(wèi)氣組給予玉屏風(fēng)散湯液，濃度為12 g/（kg·d），空白組、模型組給予等體積0.9%生理鹽水，連續(xù)給藥14 d。

2.3 檢測指標(biāo)

2.3.1 大鼠一般狀態(tài) 每天觀察各組大鼠飲食、精神、活動情況和皮毛光澤度、大便變化情況及呼吸系統(tǒng)體征，包括呼吸音、上呼吸道分泌物等。

2.3.2 組織病理形態(tài)學(xué)改變 各組大鼠肺組織固定24 h 后，常規(guī)沖洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、連續(xù)5 μm 厚切片，然后常規(guī)脫蠟、脫水、蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE） 染色、中性樹膠封片，光鏡下觀察并拍片。每張切片分別隨機選取無折疊的區(qū)域，200 倍光鏡下取3 個視野。

2.3.3 生化指標(biāo) 大鼠組織（皮膚、肺）在10%勻漿液中IL-18、5-HT 的測定：將每個實驗大鼠背部皮膚脫毛后，肺部組織切片。組織標(biāo)本在預(yù)冷生理鹽水中漂洗，去除血液及其他結(jié)締組織，用濾紙將其拭干。剪碎組織塊，將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中。用量筒量取組織塊9 倍的生理鹽水，倒入勻漿器中充分勻漿，得到10%勻漿液（勻漿過程在冰水中進(jìn)行）。將漿液放入離心機中，離心10 min，取上清液后冷凍于冰柜中。使用ELISA 試劑盒測定組織在10%勻漿液中IL-18、5-HT 含量，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒操作說明進(jìn)行。

2.3.4 太赫茲穴位檢測 將每只受測試大鼠穴位皮膚進(jìn)行剃毛，檢測時盡量保持大鼠處于安靜狀態(tài)。太赫茲波體表實驗：將各組大鼠剃毛，在衛(wèi)氣巡行軌跡的重點腧穴（參照《黃帝內(nèi)經(jīng)》）［10］進(jìn)行THz輻射測量。主要腧穴包括：肺俞、少澤、目內(nèi)眥、厲兌、至陰。對測試腧穴部位進(jìn)行太赫茲波檢測，每穴各重復(fù)測5 條太赫茲波輻射譜線。皮膚保持無毛發(fā)和破潰。取穴標(biāo)準(zhǔn)參考《實驗動物常用腧穴名稱與定位標(biāo)準(zhǔn)》，每次每穴位檢測持續(xù)2 min，軟件自動生成太赫茲輻射均值。見圖1。

圖1 腧穴氣機太赫茲檢測流程

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

所有實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示，采用GraphPad Prism 8 軟件和SPSS 26.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。采用ANOVAs 分析多組數(shù)據(jù)間的差異。兩兩比較組間方差齊性采用LSD 檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠一般癥狀、體征觀察

空白組大鼠較為活躍，反應(yīng)靈敏，毛發(fā)光亮，體重逐漸增加，食量正常，大便正常，呼吸均勻，口鼻無分泌物，呼吸音正常，未聞及痰鳴音。模型組大鼠逐漸出現(xiàn)精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，蜷伏拱背，毛發(fā)干枯、發(fā)黃并易于脫落，體重逐漸減輕，食量減少，大便稀溏，呼吸急促，口鼻有分泌物流出，呼吸音較重，耳朵及尾巴顏色變淺；熱刺激期間大鼠主要表現(xiàn)為精神煩躁、抓撓鼠籠、身上出現(xiàn)明顯汗斑、皮膚顏色加深等。補衛(wèi)氣組大鼠上述全身及呼吸道的癥狀和體征有不同程度地改善。

3.2 組織形態(tài)學(xué)變化

空白組大鼠肺泡及氣道未見明顯異常。模型組大鼠部分肺泡不規(guī)則擴大并相互融合，形成肺大泡，肺間質(zhì)內(nèi)可見不同程度的炎性細(xì)胞浸潤，支氣管黏膜上皮脫落，黏膜皺襞增多，管腔變窄，纖毛黏縮，經(jīng)過藥物治療后，補衛(wèi)氣組的上述肺部病理明顯改善。見圖2。

圖2 各組大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)比較

3.3 各組大鼠穴位太赫茲波變化

各組大鼠分別測試了與氣機關(guān)系最為密切的肺俞、少澤、目內(nèi)眥、厲兌、至陰5 個穴位，其中與空白組比較，模型組大鼠各穴位的太赫茲波輻射明顯下降（P＜0.05），提示大鼠衛(wèi)氣的強度下降。經(jīng)過玉屏風(fēng)散干預(yù)后，各穴位的太赫茲輻射強度出現(xiàn)一定回調(diào)（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠穴位太赫茲波變化比較（，n=10） Hz

表1 各組大鼠穴位太赫茲波變化比較（，n=10） Hz

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

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3.4 各組大鼠組織（皮膚、肺）IL-18、5-HT 指標(biāo)變化

治療14 d 后與空白組比較，模型組大鼠IL-18、5-HT 的含量上升，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）；與模型組比較，補衛(wèi)氣組大鼠IL-18、5-HT 的含量明顯降低（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠組織（皮膚、肺）IL-18、5-HT指標(biāo)變化比較（，n=10）

表2 各組大鼠組織（皮膚、肺）IL-18、5-HT指標(biāo)變化比較（，n=10）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

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4 討論

衛(wèi)氣是水谷精微中慓悍滑利部分所化，十分具有活力，能夠溫煦皮膚腠理，司汗孔開闔以及護衛(wèi)肌表［11］。正如《素問·痹論》記載：“其氣慓疾滑利，不能入于脈也。故循皮膚之中，分肉之間，熏于肓膜，散于胸腹?！痹缭凇饵S帝內(nèi)經(jīng)》中就有40 余篇關(guān)于衛(wèi)氣的文獻(xiàn)，很大篇幅都涉及了衛(wèi)氣抵御外邪的功能。又有《醫(yī)旨緒余·宗氣營氣衛(wèi)氣》指出：“衛(wèi)氣者，為言護衛(wèi)周身，溫分肉，肥胰理，不使外邪侵犯也?！笨梢娭嗅t(yī)學(xué)認(rèn)為“衛(wèi)外”是衛(wèi)氣最主要，也是最重要的功能之一［12］。從現(xiàn)代生物學(xué)角度看，衛(wèi)氣的作用特點與生物學(xué)中免疫體系十分接近，能夠完成類似機體屏障、細(xì)胞吞噬、體液免疫等系統(tǒng)的多種功能。因此，對于衛(wèi)氣的現(xiàn)代化研究有助于提高人體預(yù)防疾病、治療疾病的能力，加快中醫(yī)現(xiàn)代化的進(jìn)程［13］。

《素問·瘧論》有云：“瘧氣隨經(jīng)絡(luò)，沉以內(nèi)薄，故衛(wèi)氣應(yīng)乃作。”中醫(yī)學(xué)認(rèn)為衛(wèi)氣就是機體的盾牌和警戒哨，如同現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的免疫應(yīng)答，能夠第一時間與邪氣接觸，感知邪氣后向全身發(fā)出警示，同時做出防御反應(yīng)。例如黃雄杰等［14］認(rèn)為此次疫病是“衛(wèi)分”與“太陽”同時受邪，由于衛(wèi)氣損傷，防御失守，才使得疫邪直入臟腑。張榮珍等［15］也提出疫病損傷衛(wèi)陽可能是新冠肺炎核酸難以轉(zhuǎn)陰的原因，采取補益衛(wèi)氣、鼓舞衛(wèi)陽、祛風(fēng)透邪的治法可以加快核酸檢測的轉(zhuǎn)陰。

《靈樞·禁服》云：“審查衛(wèi)氣，為百病母?！辈粌H僅是疫病，大部分疾病的預(yù)防和治療也首先考慮衛(wèi)氣。尤其是老年病，據(jù)循證醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)顯示在這次肺炎的感染比例和重癥比例中，老年人都較為突出［16］。隨著中國社會老齡化，類似問題越來越受到重視。老年人最大的特點是脾胃虛弱，肺氣不足，導(dǎo)致衛(wèi)氣生化無源，衛(wèi)氣無法起到預(yù)警作用，容易引起癌癥或肺系疾?。?7］。根據(jù)中國疾病控制中心的報告，肺癌和慢性阻塞性肺炎在中國的死亡率分別排第三、第四名，而第一名卒中誘因也是因為患者行動困難，導(dǎo)致衛(wèi)氣不足，繼而引發(fā)感染并發(fā)癥［18］。此外，還有研究報道中國80 歲及以上患者的首位死因為肺部感染（57.1%）?？梢姡岣咝l(wèi)氣的功能對預(yù)防疾病，提高我國老年人生存率、生存質(zhì)量有著極其重要的意義［19］。

本研究首先采用疲勞結(jié)合冷熱刺激法復(fù)制衛(wèi)氣虛大鼠模型［20］，結(jié)果顯示模型組大鼠逐漸出現(xiàn)精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，蜷伏拱背，毛發(fā)干枯、發(fā)黃并易于脫落，體重逐漸減輕，食量減少，大便稀溏，口鼻有分泌物流出，呼吸音較重，偶可聞及咳嗽、喘息及痰鳴音，另外模型組大鼠的肺組織出現(xiàn)部分肺泡壁塌陷，肺泡不規(guī)則擴大并相互融合，形成肺大泡，肺間質(zhì)內(nèi)可見不同程度的炎性細(xì)胞浸潤、支氣管黏膜上皮脫落、黏膜皺襞增多、突入管腔、纖毛黏縮、管腔變窄等特征。而本研究中大鼠的臨床癥狀、體征及肺組織病理情況在使用玉屏風(fēng)散干預(yù)后都得到很好地緩解。

綜上所述，我們認(rèn)為提高機體的衛(wèi)氣，可以改善肺和皮膚的屏障免疫功能，從而增強機體防御外邪的能力。