★ 余香 龔千鋒 李群峰 梁志云 梁永廣 蔣三元（.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬新會(huì)中醫(yī)院 廣東 江門(mén) 5900；.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌 330004）

新會(huì)是廣陳皮的道地產(chǎn)區(qū)，又稱(chēng)新會(huì)陳皮［1］，為蕓香科植物橘Citrus reticulataBlanco 及其栽培變種的干燥成熟果皮［2］，具有理氣化痰、祛風(fēng)健胃的功效。研究表明新會(huì)陳皮中含有多種黃酮類(lèi)活性成分，如橙皮苷具有抗炎抗過(guò)敏性哮喘的作用［3］，川陳皮素對(duì)支氣管有舒張作用能起到平喘的治療效果［1］，橘皮素可以減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)起到抗炎和免疫調(diào)節(jié)的作用等［4-5］。江門(mén)市新會(huì)區(qū)中醫(yī)院特制新會(huì)陳皮飲片是以新會(huì)陳皮為原料制得，其炮制方法是將新會(huì)陳皮刮去橘絡(luò)后，加適量蛇膽汁、甘草汁和NaCl 浸泡，烘干即得特制新會(huì)陳皮。該飲片保留了新會(huì)陳皮的飲片形式，具有理氣健脾、化痰止咳、祛風(fēng)和胃的功效，供人含服，極具當(dāng)?shù)靥厣?，?jīng)臨床長(zhǎng)期應(yīng)用，治療咳嗽療效顯著。但目前還沒(méi)有學(xué)者對(duì)該飲片炮制前后的成分變化進(jìn)行研究，也沒(méi)有對(duì)該飲片治療咳嗽的臨床效果進(jìn)行系統(tǒng)觀察，故筆者進(jìn)行研究，以期為臨床廣泛應(yīng)用該飲片提供參考。

1 材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（日本島津，LC-20A）；超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司，KQ-400KDE）；電子分析天平（島津菲律賓工廠，AUW120D）；電熱恒溫干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司，DHG-9013A）。

1.2 試藥

新會(huì)陳皮（江門(mén)市新會(huì)區(qū)中醫(yī)院，批號(hào)：170501）；橙皮苷（成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：190802）；川陳皮素（成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：200322）；橘皮素（成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：190918）；蛇膽汁(廣州市嶺南中藥飲片有限公司，批號(hào)：1601101)；甘草汁的制備，取甘草250 g（江西宏康中藥飲片有限公司，批號(hào)：20181001），煎煮，過(guò)濾，定容至250 mL，制得甘草汁溶液（甘草汁∶甘草=1 mL∶1 g）。乙腈、甲醇、純凈水等試劑均為分析純。

1.3 臨床資料

選取廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬新會(huì)區(qū)中醫(yī)院2019 年1 月—2020 年12 月收治的咳嗽患者126 例，隨機(jī)分為觀察組和對(duì)照組，各63 例。觀察組男31 例，女32 例，平均年齡為（42.4±10.3）歲，對(duì)照組男33 例，女30 例，平均年齡為（43.7±9.9）歲，2 組患者資料比較無(wú)顯著性差異（P＜0.05），具有可比性。

2 炮制前后成分變化研究方法與結(jié)果

2.1 炮制方法

取新會(huì)陳皮150 g，潤(rùn)軟，刮去橘絡(luò)，曬干。取蛇膽汁75 g和甘草汁25 mL加NaCl 15 g制成混合液，倒入新會(huì)陳皮中，拌勻，撈起，置于烘箱中65 ℃烘干，反復(fù)浸潤(rùn)烘干數(shù)次，直至混合液被完全吸收，最后烘干即得特制新會(huì)陳皮，其外表面黑棕色，有細(xì)皺紋和凹下的點(diǎn)狀油室，內(nèi)表面黃棕色，粗糙，質(zhì)脆，氣腥香，味咸苦。見(jiàn)圖1。

圖1 特制新會(huì)陳皮

2.2 橙皮苷、川陳皮素及橘皮素的含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取橙皮苷對(duì)照品5.78 mg 加甲醇溶解制成濃度為289.0 μg/mL 的橙皮苷對(duì)照品溶液；精密稱(chēng)取川陳皮素7.84 mg 加甲醇溶解制成濃度為39.2 μg/mL 的川陳皮素對(duì)照品溶液；精密稱(chēng)取橘皮素3.36 mg 加甲醇溶解制成濃度為16.8 μg/mL 的橘皮素對(duì)照品溶液。精密量取8 mL 橙皮苷對(duì)照品溶液、1 mL 川陳皮素對(duì)照品溶液、1 mL 橘皮素對(duì)照品溶液，置量瓶中，搖勻，得混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取特制新會(huì)陳皮粉末0.108 0 g、新會(huì)陳皮0.102 8 g，分別置于10 mL容量瓶中加甲醇定容至刻度，密塞，超聲（45 Hz，240 W）處理45 min，再用甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 μm 微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，得供試品溶液。

2.2.3 色譜條件 色譜柱Inertsil ODS-SP 柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）。以乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，按下表1 中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫方法［2］，進(jìn)樣量：10 μL，流速：1.0 mL/min，柱溫：30 ℃，橙皮苷、川陳皮素、橘皮素的檢測(cè)波長(zhǎng)分別為283、330、330 nm。按此色譜條件，橙皮苷的保留時(shí)間為6.056 min，川陳皮素的保留時(shí)間為23.682 min，橘皮素的保留時(shí)間為30.485 min。見(jiàn)圖2。

表1 梯度洗脫條件

圖2 混合對(duì)照品HPLC

2.2.4 線性關(guān)系考察 混合對(duì)照品的進(jìn)樣量按1，5，10，15，20 μL 進(jìn)樣，測(cè)定峰面積與質(zhì)量濃度的關(guān)系，計(jì)算線性回歸方程，X為質(zhì)量濃度，Y為峰面積橫坐標(biāo), 橙皮苷的回歸方程為Y=1 848.3X-28 715.0，r=1.000 0，在0.23~4.62 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，川陳皮素的回歸方程為Y=3 957.3X- 13 930.0，r=0.999 9，在0.039~0.784 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，橘皮素的回歸方程為Y=5 160.5X- 22 801.0，r=0.999 7，在0.016~0.336 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 按“2.2.3”項(xiàng)色譜條件，連續(xù)測(cè)定對(duì)照品溶液6 次，計(jì)算橙皮苷、川陳皮素、橘皮素的峰面積RSD分別為0.35%、0.62%、0.88%，表明儀器有良好的精密度。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.2.2”項(xiàng)制備6 份特制新會(huì)陳皮供試品溶液，按“2.2.3”項(xiàng)條件測(cè)定橙皮苷、川陳皮素和橘皮素的含量，計(jì)算RSD分別為1.02%、0.98%、1.13%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，每隔2 h進(jìn)樣一次，計(jì)算得橙皮苷、川陳皮素、橘皮素的峰面積RSD分別為1.22%、1.33%、0.94%，表明供試品溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn)［6］精密稱(chēng)取特制新會(huì)陳皮飲片粉末約0.050 g，取同一批樣品6 份,每份分別精密加入濃度為1.156 mg/mL 橙皮苷對(duì)照品1.0 mL 0.136 mg/mL 川陳皮素對(duì)照品1.0 mL 0.089 mg/mL 橘皮素對(duì)照品1.0 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下的制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定其含量，計(jì)算回收率。見(jiàn)表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3 浸出物含量測(cè)定

取特制新會(huì)陳皮飲片粉末約5 g，置于50 mL 的錐形瓶中，精密加入50%乙醇溶液50 mL，密塞超聲40 min，用干燥濾器迅速濾過(guò)，量取續(xù)濾液20 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，干燥（105 ℃）3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱(chēng)定重量，以干燥品計(jì)算供試品中浸出物的含量（%）。

2.4 特制新會(huì)陳皮炮制前后HPLC 比較

按上述色譜條件分別得到特制新會(huì)陳皮及新會(huì)陳皮的HPLC 圖譜，特制新會(huì)陳皮比新會(huì)陳皮的3 種成分含量均降低，尤以川陳皮素下降最為顯著。見(jiàn)圖3、表3。

表3 炮制前后3種指標(biāo)性成分含量比較

圖3 特制新會(huì)陳皮及新會(huì)陳皮的HPLC疊加圖

2.5 浸出物含量測(cè)定

取特制新會(huì)陳皮及新會(huì)陳皮粉末各約5 g，加入50 mL、50%乙醇，超聲提取45 min 后，取續(xù)濾液10 mL，至恒重的蒸發(fā)皿中，蒸干，105 ℃干燥3 h，精密稱(chēng)定重量，置干燥器中冷卻30 min，迅速以干燥品計(jì)算，作3 次平行試驗(yàn)取平均值，特制新會(huì)陳皮的稀醇浸出物含量為（44.57±1.57）%，新會(huì)陳皮的稀醇浸出物含量為（37.21±1.38）%。

3 臨床療效觀察方法與結(jié)果

3.1 診斷標(biāo)準(zhǔn)

西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組于2015 年《咳嗽的診斷與治療指南》中關(guān)于普通感冒引起急性咳嗽的診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］，臨床表現(xiàn)除咳嗽外，還伴有如鼻塞和鼻后滴流感、流涕、噴嚏、咽喉刺激感或不適等其他上呼吸道相關(guān)癥狀，可伴發(fā)熱，全身癥狀少見(jiàn)。中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2012 年國(guó)家中醫(yī)藥管理局發(fā)布的《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》中風(fēng)寒襲肺證的辨證標(biāo)準(zhǔn)［8］，證候：咳嗽聲重，咳痰稀薄色白，氣急咽癢，鼻塞，流清涕，頭痛，肢體酸痛，惡寒發(fā)熱，無(wú)汗，舌苔薄白，脈浮或浮緊。

3.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

（1）符合上述中西診斷標(biāo)準(zhǔn)者；（2）年齡18~75 歲，性別不限；（3）知情同意書(shū)已簽署者；（4）發(fā)病后未使用其他止咳化痰的藥物。

3.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）伴發(fā)肺炎、急性支氣管炎、化膿性扁桃體炎、肺結(jié)核等疾病者；（2）依從性差、自行退出或資料不全者；（3）合并肺、肝、腎及心腦血管等嚴(yán)重原發(fā)性疾病者；（4）發(fā)生嚴(yán)重藥物不良反應(yīng)者；（5）劇咳引發(fā)暈厥、氣漏、胃食管反流、腹直肌破裂、疝氣等癥者。

3.4 治療方法

觀察組予特制新會(huì)陳皮（廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬新會(huì)中醫(yī)院，批號(hào)：20181018），每日3 次，每次1 g，含服，療程7 d。對(duì)照組予鹽酸溴己新片（山西立業(yè)制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H32023603），每日3 次，每次8 mg（1 片），口服，療程7 d。2 組患者均對(duì)癥予抗感染、抗過(guò)敏、抗組胺、解熱鎮(zhèn)痛、解除支氣管痙攣等西醫(yī)內(nèi)科方法基礎(chǔ)治療。

3.5 臨床試驗(yàn)流程

整個(gè)試驗(yàn)進(jìn)行3 次訪視，第1 次在患者被納入研究首次用藥前視訪，第2 次在患者用藥3 d 后視訪，最后1 次視訪在患者用藥1 個(gè)療程后。

3.6 觀察指標(biāo)

依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組于2015 年《咳嗽的診斷與治療指南》，咳嗽的觀察指標(biāo)納入視覺(jué)模擬評(píng)分（VAS 評(píng)分）、咳嗽癥狀積分及生活質(zhì)量測(cè)評(píng)（LCQ 評(píng)分），同時(shí)監(jiān)測(cè)藥物的不良反應(yīng)發(fā)生情況，更有利于對(duì)患者病情的評(píng)估及療效的觀察。

3.6.1 VAS 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 在0~10 cm 的直線刻度上標(biāo)記咳嗽的程度，0 為無(wú)咳嗽，5 為中度咳嗽，10為最嚴(yán)重咳嗽，患者根據(jù)自己的感受在相應(yīng)的刻度上表示咳嗽的程度，記錄為患者的VAS 評(píng)分［9］。

3.6.2 咳嗽癥狀積分 咳嗽癥狀積分含日間積分和夜間積分兩部分，每部分按輕重程度劃分為0~3 分。日間咳嗽積分：0 為咳嗽；1 為偶有短暫咳嗽；2 為頻繁咳嗽，輕度影響日?；顒?dòng)；3 為頻繁咳嗽，嚴(yán)重影響日?；顒?dòng)。夜間咳嗽積分：0 為無(wú)咳嗽；1 為入睡時(shí)短暫咳嗽或偶有夜間咳嗽；2 為因咳嗽輕度影響夜間睡眠；3 為因咳嗽嚴(yán)重影響夜間睡眠。根據(jù)患者情況記錄咳嗽癥狀積分［10］。

3.6.3 咳嗽生活質(zhì)量測(cè)評(píng) 本研究采用萊塞斯特咳嗽生命質(zhì)量問(wèn)卷（LCQ 評(píng)分）為專(zhuān)用量表,系統(tǒng)評(píng)價(jià)咳嗽程度和療效，記錄LCQ 評(píng)分［11］。

3.6.4 不良反應(yīng) 參照藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)辦法，觀察2 組患者在治療期間出現(xiàn)的不良反應(yīng)發(fā)生情況。

3.7 療效判定

治愈為咳、痰癥狀基本消失，伴隨體征也基本消失，或2 周以上未發(fā)作者；顯效為咳、痰癥狀明顯好轉(zhuǎn)，伴隨體征大部分消失；有效為咳、痰及體征均有部分緩解；無(wú)效為咳、痰癥狀無(wú)減輕，甚至加重，體征未見(jiàn)好轉(zhuǎn)?？傆行?（治愈例數(shù)+顯效例數(shù)+有效例數(shù)）/總例數(shù)。

3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究應(yīng)用SPSS 24.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)處理，正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以（P＜0.05）為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.9 臨床療效評(píng)定

治療后觀察組總有效率為87.30%，明顯高過(guò)對(duì)照組的73.01%（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 2組患者臨床療效結(jié)果（n=63） 例

3.10 療效觀察指標(biāo)分析

3.10.1 2 組患者用藥前后VAS 評(píng)分比較 觀察組用藥3 d 后VAS 評(píng)分與用藥前比較明顯降低，且比對(duì)照組改善明顯，用藥7 d 后VAS 評(píng)分更低，對(duì)照組用藥7 d 后VAS 評(píng)分較治療前明顯降低（P＜0.05）。見(jiàn)表5。

表5 2組患者用藥前后VAS評(píng)分比較（，n=63） 分

表5 2組患者用藥前后VAS評(píng)分比較（，n=63） 分

注：與同組用藥前比較，*P＜0.05；與對(duì)照組比較，#P＜0.05。

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3.10.2 2 組患者用藥前后咳嗽癥狀積分比較 2 組患者用藥3 d 后均較治療前咳嗽癥狀積分明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），用藥7 d 后咳嗽癥狀改善更明顯，且觀察組咳嗽癥狀積分低于對(duì)照組，具有顯著性差異（P＜0.05）。見(jiàn)表6。

表6 2組患者用藥前后咳嗽癥狀積分比較（，n=63）分

表6 2組患者用藥前后咳嗽癥狀積分比較（，n=63）分

注：與同組用藥前比較，*P＜0.05；與對(duì)照組比較，#P＜0.05。

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3.10.3 2 組患者用藥前后LCQ 評(píng)分比較 2 組患者用藥7 d 后患者咳嗽生命質(zhì)量評(píng)分明顯升高，且觀察組較對(duì)照組生活質(zhì)量改善更明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表7。

表7 2組患者用藥前后LCQ評(píng)分比較（，n=63） 分

表7 2組患者用藥前后LCQ評(píng)分比較（，n=63） 分

注：與同組用藥前比較，*P＜0.05；與對(duì)照組比較，#P＜0.05。

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3.11 2 組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況

本次試驗(yàn)對(duì)照組使用鹽酸溴己新片的患者，出現(xiàn)2 例惡心、嘔吐的不良反應(yīng)，立即停藥，并將這2 例病歷予以排除，重新再納入2 例患者進(jìn)行試驗(yàn)，使用特制新會(huì)陳皮的患者未見(jiàn)藥物不良反應(yīng)發(fā)生。

4 討論

特制新會(huì)陳皮是新會(huì)陳皮加蛇膽汁、甘草汁和Nacl 制得，氣味及性狀較新會(huì)陳皮發(fā)生了明顯變化，其性溫轉(zhuǎn)偏寒，其味由原來(lái)的氣香味苦變?yōu)闅庑认阄断炭啵獗砥び稍瓉?lái)的深棕色變?yōu)楹谧厣?。其原材料要求使用新?huì)陳皮是因?yàn)殛惼ひ孕聲?huì)產(chǎn)者為佳，且新會(huì)陳皮中生物堿辛弗林和N-甲基酪胺含量低于浙產(chǎn)陳皮、川陳皮和廣西產(chǎn)陳皮等［1］，其苦澀味較少，再加入少許NaCl 后，更有利于飲片含服。炮制過(guò)程中，加入蛇膽汁有祛風(fēng)除濕、清涼明目、解毒祛痱的功效，制約了新會(huì)陳皮的溫性，且增加了本品祛風(fēng)的作用，加入甘草汁具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調(diào)和諸藥的功效，使新會(huì)陳皮的祛痰止咳效果增強(qiáng)。本品炮制工藝中要求刮去橘絡(luò)，與歷代醫(yī)藥方書(shū)記載陳皮去白之說(shuō)相吻合，如宋朝《雷公炮炙論》中“留白則理脾健胃，去白則消痰止嗽”，清朝《本草備要》中“入補(bǔ)養(yǎng)藥則留白，入下氣消痰藥則去白”等。

為探明炮制后新會(huì)陳皮的內(nèi)在成分變化，本研究采用高效液相色譜儀，測(cè)定了特制新會(huì)陳皮及新會(huì)陳皮中橙皮苷、川陳皮素及橘皮素的含量。結(jié)果顯示炮制后川陳皮素和橘皮素的含量稍微下降，而橙皮苷的變化不大，這3 種藥效成分雖然比生品少，但兩者均符合2020 年版《中國(guó)藥典》要求，含橙皮苷不得少于2.00%，含川陳皮素和橘皮素總量不得少于0.42%的標(biāo)準(zhǔn)，藥效影響輕微。而研究特制新會(huì)陳皮的稀醇浸出物含量時(shí)，其含量明顯高于新會(huì)陳皮，其增加了蛇膽汁中膽酸類(lèi)有效成分，已被驗(yàn)證對(duì)咽喉類(lèi)炎癥有較為明顯的療效，具有清熱、止咳化痰和平喘的作用，同時(shí)還增加了甘草汁中甘草酸、甘草苷等有效成分，研究表明甘草浸膏口服后能覆蓋在發(fā)炎的咽部黏膜上，緩和炎性刺激而鎮(zhèn)咳，甘草次酸膽堿鹽對(duì)豚鼠吸入氨水和電刺激貓喉上神經(jīng)引起的咳嗽都有明顯的抑制作用，甘草還能促進(jìn)咽部和支氣管黏膜分泌，使痰易于咳出［12］，故特制新會(huì)陳皮祛風(fēng)化痰止咳作用是增強(qiáng)的。而本品是否還有新的物質(zhì)產(chǎn)生，還有待進(jìn)一步研究。

為進(jìn)一步研究特制新會(huì)陳皮治療感冒咳嗽的效果，本文以臨床常用且療效確切的鹽酸溴己新片為對(duì)照，觀察特制新會(huì)陳皮治療感冒咳嗽的臨床效果。納入了視覺(jué)模擬評(píng)分（VAS 評(píng)分）、咳嗽癥狀積分、生活質(zhì)量測(cè)評(píng)（LCQ 評(píng)分）等指標(biāo)，結(jié)果特制新會(huì)陳皮治療感冒咳嗽效果較對(duì)照組顯著，且各項(xiàng)觀察指標(biāo)均較對(duì)照組明顯改善。同時(shí)監(jiān)測(cè)藥物的不良反應(yīng)，對(duì)照組有2 例惡心、胃部不適的不良反應(yīng)病例，觀察組未見(jiàn)明顯副作用。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，廣東沿海地區(qū)常年氣溫較高，海風(fēng)、濕度較大，另一方面本地人多喜貪涼飲冷、嗜食水產(chǎn)品等，易致脾肺受傷，肺虛衛(wèi)外不固，易感風(fēng)邪，脾失健運(yùn)，痰飲內(nèi)生，內(nèi)外合邪，誘發(fā)咳喘［13］。脾為生痰之源，肺為貯痰之器，臨床采用健脾理氣、止咳化痰的方法治療。新會(huì)陳皮經(jīng)炮制后其溫性受制約，祛痰止咳效果增強(qiáng)，且增加了祛風(fēng)止痙的作用，尤其適合當(dāng)?shù)馗忻翱人曰颊呤褂谩?/p>

本項(xiàng)目通過(guò)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床觀察，對(duì)特制新會(huì)陳皮進(jìn)行了研究，比較了炮制前后成分變化，同時(shí)進(jìn)一步驗(yàn)證了特制新會(huì)陳皮化痰止咳的臨床效果。由于特制新會(huì)陳皮中蛇膽汁的檢測(cè)指標(biāo)為膽酸，且主要為?；悄懰徕c，專(zhuān)屬性較差［14］。同時(shí)，對(duì)于特制新會(huì)陳皮與普通陳皮的療效比較研究還有待進(jìn)一步完善。