◎ 陳文亮，李潔虹，蔣珍珍，馮海麗，熊偉華

(深圳計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院，廣東 深圳 518000)

硝酸鹽作為污染物，可能存在嬰幼兒配方食品中，GB 2762—2022《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限量》中規(guī)定了嬰幼兒配方食品中硝酸鹽（以NaNO3計(jì)）含量不得超過(guò)100 mg·kg-1。我國(guó)現(xiàn)行的測(cè)定食品中硝酸鹽的標(biāo)準(zhǔn)為GB 5009.33—2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》，該標(biāo)準(zhǔn)中的離子色譜法為測(cè)定硝酸鹽的首選方法，該方法測(cè)定非特殊醫(yī)學(xué)用途配方奶粉中硝酸鹽的含量效果良好。然而，測(cè)定特殊醫(yī)學(xué)用途配方奶粉特別是乳蛋白水解配方和氨基酸配方，現(xiàn)行的前處理方法不能凈化干擾物質(zhì)，存在色譜干擾，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度達(dá)不到檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的要求[1-2]。此外，由于干擾物質(zhì)的強(qiáng)保留性，氫氧化鉀溶液淋洗液系統(tǒng)不能有效洗脫，導(dǎo)致色譜柱的柱效下降快，縮短了色譜柱的使用壽命[3]。

為了準(zhǔn)確地測(cè)定特殊醫(yī)學(xué)用途配方奶粉中硝酸鹽的含量，研究一種合適的凈化方法和測(cè)定的色譜條件很有必要。因此，本文針對(duì)特殊醫(yī)學(xué)用途配方奶粉中的干擾物質(zhì)進(jìn)行凈化研究，選擇合適的色譜條件，旨在找到一種測(cè)定特殊醫(yī)學(xué)用途配方奶粉中硝酸鹽含量的方法[4]。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

Thermo ICS-5000+型離子色譜儀(美國(guó)戴安公司)：配KOH淋洗液自動(dòng)發(fā)生器、抑制器、電導(dǎo)檢測(cè)器、AS19分離柱（4×250 mm，5 μm）、IonPac AG19保護(hù)柱（ 4×50 mm，5 μm）。

0.22 μm微孔濾膜、SAX強(qiáng)陰離子固相萃取柱（200 mg/3 mL，艾杰爾公司）、C18小柱（200 mg/3 mL，waters公司）、銀氫柱（2.5 mL，賽默飛公司）。

水中硝酸根濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 000 mg·L-1，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院）；乙腈（色譜純，默克公司）、一級(jí)水(電導(dǎo)率<18 μS·cm-1)、2%乙酸溶液。

1.2 色譜條件

柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：50 μL、由KOH淋洗液自動(dòng)發(fā)生器生成5 mmol·L-1KOH～60 mmol·L-1KOH梯度淋洗液(梯度程序?yàn)椋? mmol·L-133 min，60 mmol·L-120 min，7 mmol·L-17 min)、流速：1. 0 mL·min-1、抑制電流為120 mA；電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)、以峰面積定量。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

用硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用一級(jí)水逐級(jí)稀釋，配成下列標(biāo)準(zhǔn)溶液：硝酸鈉（NaNO3，mg·L-1）：0、0.274、0.685、1.37、2.06、2.74。進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積Y對(duì)質(zhì)量濃度X繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)表1。

表1 硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線表

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

測(cè)定SAX SPE小柱、C18小柱和銀氫柱使用前均按說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行活化處理。

1.4.1 按GB 5009.33—2016方法測(cè)定

稱取2.50 g（精確至0.01 g）經(jīng)均質(zhì)處理的固體試樣于100 mL容量瓶中，按GB 5009.33—2016第一法進(jìn)行前處理。

1.4.2 優(yōu)化的測(cè)定方法

稱取2.50 g（精確至0.01 g）經(jīng)均質(zhì)處理的試樣于100 mL容量瓶中，加入30 mL的一級(jí)水，充分搖勻，超聲30 min。加入30 mL乙腈，搖勻，放置在5 ℃的冰箱中30 min，取出放置至室溫，加水稀釋至刻度，混勻，8 000 r·min-1離心10 min，備用。準(zhǔn)確取上述備用溶液，通過(guò)0.22 μm水性濾膜針頭濾器、C18柱，棄去前面3 mL，準(zhǔn)確收集后面洗脫液10.0 mL，通過(guò)SAX SPE小柱，速度控制在1～2 mL·min-1，棄去濾液，使用70 mmol·L-1氫氧化鈉溶液洗脫SAX SPE小柱，速度控制在8～10 mL·min-1，收集10.0 mL濾液，將濾液通過(guò)銀氫柱，棄去前面3 mL，準(zhǔn)確收集后面用于離子色譜測(cè)定。同時(shí)，按以上步驟測(cè)定空白。

2 結(jié)果與討論

2.1 按GB 5009.33—2016方法測(cè)定結(jié)果分析

選擇嬰兒乳蛋白深度水解配方奶粉和嬰兒氨基酸配方奶粉驗(yàn)證方法的精密度，結(jié)果如表2所示，精密度結(jié)果均大于10%，不符合GB 5009.33—2016第一法離子色譜法對(duì)測(cè)定的精密度要求，表明使用該方法測(cè)定嬰兒乳蛋白深度水解配方奶粉和嬰兒氨基酸配方奶粉，結(jié)果不準(zhǔn)確。

表2 精密度結(jié)果表

2.2 使用SAX SPE小柱濃縮硝酸鹽的分析

樣品溶液通過(guò)SAX SPE小柱后，硝酸鹽和強(qiáng)保留的干擾物被保留在SAX SPE小柱，溶液流速影響硝酸鹽的結(jié)果[5]。使用質(zhì)控樣品，按1.4.2進(jìn)行操作，使用不同流速通過(guò)SPE小柱，計(jì)算回收率，回收率越高，表明硝酸鹽濃縮的效果越差，反之，則濃縮效果越好，當(dāng)流速控制在1～2 mL·min-1，回收率7.3%～7.5%，濃縮的效果較好。

2.3 使用氫氧化鈉溶液洗脫濃縮后的硝酸鹽分析

樣品溶液通過(guò)SAX SPE小柱后，硝酸鹽和強(qiáng)保留的干擾物被保留在SAX SPE小柱，需要使用氫氧化鈉溶液洗脫硝酸鹽而干擾物不被洗脫。使用質(zhì)控樣品，按1.4.2進(jìn)行操作，使用了不同濃度的氫氧化鈉溶液進(jìn)行洗脫試驗(yàn)，計(jì)算回收率，氫氧化鈉洗脫液在70～90 mmol·L-1之間，回收率為103%～105%，符合要求。

2.4 方法檢出限

對(duì)空白溶液進(jìn)行平行測(cè)定11次，計(jì)算空白溶液峰面積的標(biāo)準(zhǔn)偏差，根據(jù)檢出限的計(jì)算公式LOD=3SD/b（b為工作曲線斜率），取樣量為2.5 g，定容體積為100 mL，計(jì)算方法檢出限，檢出限為0.5 mg·kg-1，能滿足日常檢出所需，見(jiàn)表3。

表3 硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線表

2.5 精密度和加標(biāo)回收率

選擇嬰兒乳蛋白深度水解配方奶粉和嬰兒氨基酸配方奶粉驗(yàn)證方法的精密度和加標(biāo)回收率，加標(biāo)量為40.0 μg硝酸鹽（以NO3-計(jì)），測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4，精密度和加標(biāo)回收率結(jié)果符合要求。

表4 精密度及回收試驗(yàn)結(jié)果表

3 結(jié)論

本文通過(guò)使用SAX強(qiáng)陰離子固相萃取柱預(yù)先濃縮硝酸鹽，再使用氫氧化鈉洗脫的方法凈化特殊醫(yī)學(xué)用途配方奶粉，確定了最佳的試驗(yàn)條件。結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確高效，對(duì)于分析特殊醫(yī)學(xué)用途配方奶粉，特別是蛋白水解配方和氨基酸配方中的硝酸鹽，具有實(shí)際意義。