◎ 劉 群，曹倩蕾， 馮彥勇，康宗華

（1.湖南口味王集團(tuán)有限責(zé)任公司，湖南 益陽 413000 ；2.湖南中益食品化工檢測院，湖南 益陽 413000）

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

1.1.1 儀器

高效液相色譜儀、電子天平（AR224CN、XS205）。

1.1.2 試劑

甲醇、硅油、磷酸、磷酸溶液（1 mol·L-1）、磷酸氫二銨、磷酸氫二銨溶液(1.5 g·L-1）、醬油（義豐祥生產(chǎn)）、面包（億滿香生產(chǎn)）、標(biāo)準(zhǔn)品丙酸，實(shí)驗(yàn)室用水為符合一級水（GB/T 6682）的要求。

1.2 色譜條件

①色譜柱：Purospher RP-18 endcapped 250×4.6 mm 5 μm；檢測波長：214 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。②流動(dòng)相：含有1.5 g·L-1磷酸氫二銨的溶液，該溶液通過將1 mol·L-1磷酸溶液逐漸加入并調(diào)節(jié)pH值在2.7～3.5范圍內(nèi)來配制。③在使用前，流動(dòng)相需經(jīng)過0.45 μm微孔濾膜過濾，以去除雜質(zhì)；流速：1.0 mL·min-1。

1.3 試驗(yàn)步驟

1.3.1 樣品預(yù)處理

為配制流動(dòng)相，首先將1 mol·L-1磷酸溶液逐漸加入并調(diào)節(jié)pH值在2.7～3.5范圍內(nèi)。配制完成后，流動(dòng)相需經(jīng)過0.45 μm微孔濾膜過濾，以去除雜質(zhì)。對于固體樣品，需要先將其搗碎混勻后備用。對于面包樣品，需要在鼓風(fēng)干燥箱中進(jìn)行風(fēng)干。液體樣品需要搖勻后備用。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

①標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。丙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液（10 mg·mL-1）：準(zhǔn)確稱取250 mg丙酸標(biāo)準(zhǔn)品于25 mL容量瓶中，加水至刻度，4 ℃冰箱中保存，有效期為6個(gè)月。②標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。用蒸餾法和直接浸提法提取樣品制備丙酸標(biāo)準(zhǔn)液。在制備丙酸標(biāo)準(zhǔn)液的過程中，應(yīng)注意使用高純度的溶劑和試劑，并確保所有使用的儀器、容器和試劑都是清潔和干燥的[1]。另外，應(yīng)遵循安全操作規(guī)范，避免接觸有害物質(zhì)或引發(fā)火災(zāi)或爆炸的情況。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

面包的線性回歸方程為Y=561 992x-552.423，相關(guān)系數(shù)（r2）0.999 89；醬油的線性回歸方程為Y=561 906x-741.991，相關(guān)系數(shù)（r2）0.999 92。其中，兩者的線性范圍均為0.05～0.5，檢出限均為0.006。

分別稱取醬油、面包樣品各11份，按照以上方式處理，結(jié)果見表1。

表1 回收率和重復(fù)性結(jié)果表

逐級稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用信噪比法來測定樣品中組分的檢出限，當(dāng)信噪比為3±1即為檢出限。0.569 9 μg·mL-1濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣2次，計(jì)算信噪比。

逐級稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用信噪比法來測定樣品中組分的定量限，當(dāng)信噪比為10±1即為定量限。1.900 μg·mL-1濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣2次，計(jì)算信噪比。

2 結(jié)果與討論

2.1 線性評價(jià)

根據(jù)GB/T 27417—2017《合格評定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》的規(guī)定，對于準(zhǔn)確定量的方法，線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)R應(yīng)大于等于0.99。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，直接浸提法和蒸餾法的相關(guān)系數(shù)分別為0.999 89和0.999 92，都遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于0.99的要求，說明這兩種方法的線性關(guān)系非常好。線性關(guān)系的好壞可以通過相關(guān)系數(shù)R來評價(jià)，R的取值范圍為-1～1，R越接近1，表示線性關(guān)系越好；R越接近-1，表示線性關(guān)系越差；R接近0，表示線性關(guān)系非常弱甚至不存在[2]。

本實(shí)驗(yàn)中，直接浸提法和蒸餾法的相關(guān)系數(shù)都非常接近1，分別為0.999 89和0.999 92，說明它們的線性關(guān)系非常好。這意味著在一定濃度范圍內(nèi)，樣品的濃度與測定值之間存在著線性關(guān)系，可以通過線性回歸方程進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析[3]。因此，根據(jù)線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)R的高值，可以認(rèn)為直接浸提法和蒸餾法都符合GB/T 27417—2017的要求，是準(zhǔn)確的化學(xué)分析方法。

2.2 精密度評價(jià)

根據(jù)GB 5009.120—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中丙酸鈉、丙酸鈣的測定》第一法的規(guī)定，精密度的要求為≤10%。

在本實(shí)驗(yàn)中，測定醬油中丙酸的精密度為0.1%，測定面包中丙酸的精密度為0.2%。這兩個(gè)結(jié)果都滿足精密度≤10%的要求。精密度是評價(jià)方法的重復(fù)性和穩(wěn)定性的指標(biāo)，它反映了同一實(shí)驗(yàn)條件下，重復(fù)進(jìn)行多次測定所得結(jié)果的離散程度。精密度越低，說明測定結(jié)果的離散程度越小，說明方法的重復(fù)性和穩(wěn)定性越好[4]。在本實(shí)驗(yàn)中，醬油和面包中丙酸的精密度分別為0.1%和0.2%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于10%的要求，說明測定結(jié)果的離散程度非常小，方法的重復(fù)性和穩(wěn)定性非常好。因此，根據(jù)精密度的結(jié)果分析可以認(rèn)為，該方法在測定醬油和面包中丙酸的含量時(shí)，具有較好的重復(fù)性和穩(wěn)定性，結(jié)果是可靠的。

2.3 檢出限評價(jià)

在本實(shí)驗(yàn)中，測得丙酸的檢出限為0.006 g·kg-1，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于0.03 g·kg-1的要求，符合標(biāo)準(zhǔn)的要求。檢出限是指在分析方法的測定條件下，能夠被測定方法可靠地檢出的最低濃度[5]。檢出限的低值說明方法的敏感性高，能夠準(zhǔn)確地檢測到低濃度的物質(zhì)。在本實(shí)驗(yàn)中，測得丙酸的檢出限為0.006 g·kg-1，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于0.03 g·kg-1的要求，說明該方法對丙酸的檢測具有較高的敏感性，能夠可靠地檢測到低濃度的丙酸。

2.4 定量限評價(jià)

在本實(shí)驗(yàn)中，測得的定量限為0.019 g·kg-1，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的限值，說明該方法對丙酸的測定具有較高的準(zhǔn)確性和精確性。定量限的低值，說明方法的準(zhǔn)確性高，能夠精確地測定低濃度的物質(zhì)。在本實(shí)驗(yàn)中，測得的定量限為0.019 g·kg-1，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于0.10 g·kg-1的要求，說明該方法能夠準(zhǔn)確地測定低濃度的丙酸，結(jié)果是可靠的。

3 結(jié)論

本研究通過高效液相色譜法成功測定了食品中丙酸鈉和丙酸鈣的含量。結(jié)果顯示，該方法操作簡便、靈敏度高、準(zhǔn)確性和重復(fù)性良好，適用于食品中丙酸鈉和丙酸鈣含量的測定。因此，本研究結(jié)果對于保障食品安全、合理使用食品添加劑具有一定的指導(dǎo)意義。